NF-κBp65、p-NF-κBp65在宫颈病变组织中的表达及意义

目的:探讨宫颈病变组织中核因子NF-κBp65、磷酸化型NF-κBp65(p-NF-κBp65)的表达及临床意义,以及高危型人乳头状瘤病毒(hsHPV)对其表达的影响.方法:采用免疫组化SP法检测NF-κBp65、p-NF-κBp65在67例宫颈癌、149例宫颈上皮内瘤样病变(GIN Ⅰ-Ⅲ)、15例正常宫颈组织中的表达.结果:NF-κBp65、p-NF-κBp65的表达随宫颈病变级别升高而升高,并与宫颈病变级别呈正相关(P＜0.05);NF-κBp65、p-NF-κBp65在hs-HPV阳性组的表达高于hs-HPV阴性组(P＜0.05);NF-κBp65、p-NF-κBp65在癌细胞高分化、肿瘤直径≤4 cm、临床Ⅰ-Ⅱ期组的表达低于癌细胞中低分化、肿瘤直径＞4 cm、临床Ⅲ-Ⅳ期组(P＜0.05).结论:hs-HPV能促进NF-κBp65的表达和激活,NF-κBp65的表达和激活可能与宫颈癌的发生、发展密切相关.     

米非司酮对人宫颈癌Hela细胞及其NF-κBp65蛋白表达的影响

目的:探讨米非司酮(MIF)对人子宫颈癌Hela细胞的凋亡诱导作用。方法:体外培养人子宫颈癌Hela细胞,采用流式细胞术分析不同浓度MIF对Hela细胞的凋亡率及细胞周期分布的影响;采用Westernblot法检测MIF对Hela细胞中NF-κBp65蛋白表达的影响。结果:3个浓度的MIF均能使Hela细胞凋亡率明显增加,使S期、G2/M期细胞比例减少,G0/G1期细胞比例显著增加,且作用呈剂量依赖性;随着MIF浓度的增加,Hela细胞中NF-κBp65蛋白表达水平逐渐下降。结论:MIF可能通过NF-κB信号通路降调NF-κBp65蛋白表达,从而调节细胞周期、诱导Hela细胞凋亡。     

NF-κBp65对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡及炎性因子表达的影响

目的 探讨核因子-κB p65(nuclear factor-κB p65, NF-κB p65)对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡及炎性因子的表达影响。 方法 将肺泡上皮细胞分为4组,依次为对照组、感染组、干扰组、阴性对照组(NC组),其中感染组、干扰组和NC组用肺炎链球菌处理细胞,干扰组和NC组分别为转染NF-κB p65小干扰RNA(siRNA NF-κB p65)和阴性对照序列(siRNA control)后的细胞,对照组不做处理。ELISA法检测细胞培养液上清中的白细胞介素-10(IL-10)和白细胞介素-6(IL-6)含量,流式细胞术检测细胞凋亡,RT-PCR检测细胞中NF-κB p65水平,Western blot检测细胞中活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)水平。 结果 感染组和NC组NF-κB p65水平、IL-6含量、细胞凋亡率及Cleaved Caspase-3、Bax水平均明显高于对照组,而IL-10水平明显低于对照组(P<0.01)。干扰组细胞中NF-κB p65水平、IL-6含量、细胞凋亡率及Cleaved Caspase-3、Bax水平均明显低于感染组(P<0.01),而IL-10水平明显高于感染组(P<0.01)。 结论 NF-κB p65能够抑制肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡及炎性因子的表达,作用机制可能与Cleaved Caspase-3、Bax水平有关。     

NF-κB抑制剂对于人卵巢癌裸鼠移植瘤及其血管生成的影响

目的:初步探讨IκBα磷酸化抑制剂BAY 11-7082对人卵巢癌裸鼠移植瘤生长及血管生成的影响。方法:选用人卵巢癌细胞系COC 1建立裸鼠皮下移植瘤模型,腹腔注射BAY 11-7082,测量移植瘤的重量、体积,并用TUNEL法检测移植瘤细胞凋亡情况。同时应用免疫组化染色,检测瘤组织内的NF-κB p 65、血管内皮生长因子(VEGF)和FⅧ蛋白表达,并计数微血管密度(MVD)。结果:BAY 11-7082组移植瘤重量显著低于阴性对照组(P<0.05),抑制率为47.60%;BAY 11-7082组AI值高于对照组(P<0.05);PI值小于对照组(P<0.05),BAY 11-7082组NF-κB p 65、VEGF与MVD均显著低于对照组(P<0.05)。结论:BAY 11-7082能明显抑制人卵巢癌细胞系COC 1裸鼠移植瘤的生长,通过影响VEGF表达对抗化疗药物。     

siRNA对人支气管上皮细胞(16HBE)NF-κ Bp65表达的抑制作用

[目的]探索RNA干扰(RNA interference RNAi)技术在抑制人支气管上皮(16HBE)NF-κBp65表达的抑制效应,为后续研究NF-κBp65在环境化学污染物诱导DNA损伤修复中的作用提供实验模型。[方法]设计针对NF-κBp65的siRNA,构建NF-κBp65-shRNA的表达载体,采用阳离子脂载体Lipofectamine2000TM和siPORTTMXP-1两种转染系统比较其抑制率,选择抑制效果较高的转染系统,优化转染条件,从而达到最优的NF-κBp65的抑制模型。[结果]阳离子脂载体Lipofectamine2000TM和siPORTTMXP-1两种转染系统进行比较,siPORTTMXP-1转染系统NF-κBp65的抑制效率更高,约为40%。优化质粒的浓度和转染时间,荧光定量PCR结果质粒浓度为0.4μg,转染48h时NF-κBp65的mRNA抑制率较高,为62.9%。Westernblot检测蛋白质表达水平降低约为60.2%。[结论]RNAi技术可以有效地抑制16HBE细胞中的NF-κBp65表达,该模型的建立有利于后续实验的进行。     

妊娠期糖尿病与核转录因子NF-κBp65相关性研究

目的探讨妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)与孕妇血清、脐血和胎盘组织中核转录因子NF-κBp65的相关性。方法收集2011年11月至2013年3月天津市中心妇产科医院157名足月妊娠孕妇及正常未孕女性的临床资料,其中GDM孕妇38例(Ⅰ组)、正常孕妇56名(Ⅱ组)、正常未孕女性63名(Ⅲ组)。采用酶联免疫吸附测定3组研究对象血清、脐血中NF-κBp65的表达,采用免疫组化法检测孕妇胎盘组织中NF-κBp65的表达,并进行比较分析。结果Ⅰ组母体血清和脐血中NF-κBp65水平均高于Ⅱ组(均P0.05);Ⅱ组、Ⅲ组母体血清中NF-κBp65水平比较差异无统计学意义(P0.05);Ⅰ组胎盘组织中的NF-κBp65表达阳性率100.0%(38/38)高于Ⅱ组的12.5%(7/56)(P0.05)。结论 NFKBp65可能在GDM的病理生理过程中发挥了一定作用。     

妊娠期糖尿病孕妇血清及胎盘组织中TNF-α、NF-κBp65及PAI-1的表达及临床意义

目的探讨妊娠期糖尿病孕妇血清及胎盘组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、核转录因子p65(NF-κBp65)以及纤溶酶原激活物抑制因子-1(PAI-1)的表达情况及其临床意义,为揭示妊娠期糖尿病的发病机制提供实验室依据。方法收集2015年1-12月该院收治的281例妊娠期糖尿病孕妇为病例组,并同期收集200例健康孕妇为对照组。采用酶联免疫吸附法测定两组产前血清TNF-α、NF-κBp65及PAI-1水平,采用免疫组化法测定产后胎盘组织TNF-α、NF-κBp65及PAI-1的表达水平。结果病例组血清TNF-α、NF-κBp65及PAI-1水平均高于对照组(P=0.000)。病例组孕妇血清TNF-α与NF-κBp65、PAI-1,NF-κBp65与PAI-1均呈正相关(r=0.683、0.839、0.615;P=0.002、0.011、0.006)。病例组胎盘组织中TNF-α、NF-κBp65、PAI-1的阳性表达率(91.10%、99.64%、94.66%)分别显著高于对照组(8.50%、12.50%、19.00%),且病例组的阳性表达强度均高于对照组(P=0.000)。结论妊娠期糖尿病孕妇血清及胎盘组织中TNF-α、NF-κBp65及PAI-1呈高表达状态,三者对妊娠期糖尿病的发生及发展具有协同促进作用。     

HPV16/18阳性的宫颈尖锐湿疣及癌前病变组织中NF-κ Bp50和P16 INK4A蛋白表达分析

[目的]探讨NF-κBp50和P16INK4A 在HPV16/18型宫颈尖锐湿疣 (condylomata acuminate CA) 和官颈上皮内瘤变 (cervical intraepithelinal neoplasin CIN) 组织中表达及意义. [方法]应用免疫组织化学LDP法对21例宫颈CA、34例官颈CIN进行NF-κBp50和P16INK4A 表达分析. [结果]NF-κBp50在CA组织中阳性表达于细胞浆,在CIN组织中阳性表达于细胞核,NF-κBp50在CA、CIN Ⅰ、CIN Ⅱ 3组间阳性表达强度有统计学意义(P＜0.05),P16INK4A在CA组织中阳性表达于细胞核,在CIN阳性表达于细胞核与细胞浆,P16INK4A在CA、CIN Ⅰ、CIN Ⅱ 3组间阳性表达强度有统计学意义(P＜0.05). [结论]HPV16/18阳性CA向CIN转化可能与P16INK4A和NF-κB p50蛋白过渡表达有关:其联合检测可作为辅助诊断CIN标志物.     

盐酸小檗碱及其联合应用顺铂诱导宫颈癌细胞株凋亡研究

目的:研究不同浓度盐酸小檗碱(Ber)单用及联合应用顺铂(DDP)对宫颈癌Hela细胞凋亡的影响,并探讨其抗癌机制。方法:将不同浓度的盐酸Ber、DDP分别或联合作用于宫颈癌Hela细胞,采用MTT比色法检测细胞体外增殖的抑制作用;原位末端标记法(TUNEL法)检测细胞凋亡率;免疫组化SABC法检测Hela细胞中NF-κBp65的表达。结果:MTT比色法表明盐酸Ber能抑制宫颈癌Hela细胞的体外增殖,并具有剂量、时间的依赖性(P<0.05);TUNEL法可检测到凋亡细胞,其凋亡率显示盐酸Ber诱导宫颈癌Hela细胞凋亡表现出剂量和时间的依赖性(P<0.05);免疫组化SABC法结果显示,盐酸Ber能引起细胞内NF-κBp65表达下调,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01);盐酸Ber与DDP联合用药表现出明显的协同作用,且高剂量的盐酸Ber可增加DDP的疗效。结论:盐酸Ber对宫颈癌Hela细胞体外增殖具有明显的抑制作用,且能增强DDP对宫颈癌Hela细胞的抑制作用,并增加其诱导宫颈癌Hela细胞的凋亡,其作用机制可能与降低NF-κBp65的表达有关。     

IEX-1、HIF-1α和NF-κB蛋白在宫颈癌组织中的表达及临床意义

目的:通过检测IEX-1、HIF-1α和NF-κB蛋白在宫颈癌组织和细胞中的表达情况,初步探讨其与宫颈癌发病的关系。方法:选取2009年1月~2011年10月该院病理科手术存档的蜡块标本116份,根据病变程度分为宫颈癌患者标本50份(A组)、宫颈上皮内瘤变(CIN)患者标本40份(B组)和正常宫颈标本26份(C组)。采用免疫组化法检测3组宫颈组织中IEX-1、HIF-1α和NF-κB蛋白的表达,并分析3者的相关性。结果:IEX-1在A组的阳性表达率明显低于B组和C组,差异有统计学意义(P<0.05),HIF-1α和NF-κB在A组的阳性表达率均明显高于B组和C组,差异有统计学意义(P<0.05);A组IEX-1、HIF-1α和NF-κB的表达均与组织学分级及有无淋巴结转移相关(P<0.05),与患者年龄、肿瘤的组织学类型和FIGO分期无关(P>0.05);A组HIF-1α和NF-κB的表达呈正相关(r=0.398,P<0.05),两者与IEX-1的表达呈负相关(r=-0.322、-0.517,P均<0.05)。结论:IEX-1、HIF-1α和NF-κB蛋白的表达变化与宫颈癌的发生发展有关。     

亚砷酸钠对HaCaT细胞NF-κB蛋白表达的影响

目的 研究不同浓度亚砷酸钠（NaAsO2）对人角质形成细胞株（HaCaT）核转录因子（NF-κB）蛋白表达的影响及其与活性氧（ROS）及过氧化物酶（CAT）的关系。方法 用流式细胞仪检测细胞内ROS水平，用紫外速率直接法测定CAT活性，用蛋白印迹（western blot）方法检测NF-κB蛋白表达。结果 从2．5μmol／L组开始。细胞内ROS水平增高，且呈剂量一反应关系；5μmol／L以上组CAT活性明显下降，5μmol／L以上组NF-κB表达减弱（P〈0．05）。结论 砷诱导HaCaT细胞氧化应激，抑制NF-κB蛋白的表达。     

复发性流产患者TLR4、NF-κB p65的表达及意义

目的:研究复发性流产患者和正常人工流产妇女绒毛组织中TLR4和NF-κB p65的表达差异及二者是否存在相关性.方法:选择2011年5～1l月在解放军第202医院妇产科门诊、年龄25～35周岁、孕龄＜12周、≥3次自然流产的RSA患者30例作为实验组,有过正常生育史、要求人工流产终止妊娠的健康早孕妇女30例作为对照组.应用免疫组织化学法检测两组绒毛中TLR4和NF-κB p65的表达,采用RT-PCR法检测两组绒毛组织中TLR4和NF-κB p65 mRNA的表达.结果:与对照组比较,实验组HE染色的病理观察绒毛组织结构不清晰,可见结构缺损、水肿、变性以及炎性细胞浸润,滋养细胞亦见变性、坏死及明显增生;TLR4和NF-κBp65的蛋白及mRNA的表达均明显升高,差异有统计学意义(P＜0.01).结论:TLR4、NF-κBp65在妊娠的绒毛组织中蛋白和mRNA表达水平显著升高,可能预示TLR4-NF-κB信号传导通路与RSA发生密切相关,其机制有待于进一步研究.     

AG490单用或联合顺铂对人宫颈癌裸鼠移植瘤STAT3/Survivin信号转导通路的影响

目的:探讨STAT3信号转导通路对人宫颈癌裸鼠移植瘤生长、凋亡的影响以及与Survivin表达之间的关系。方法:建立宫颈癌裸鼠移植瘤模型并分组,AG490单用或联合顺铂(DDP)处理各组裸鼠,治疗期间观察并记录各组裸鼠皮下移植瘤的生长情况,计算肿瘤体积、肿瘤生长抑制率,绘制肿瘤生长曲线,观察用药后裸鼠体重变化;免疫组化、Western blot分别检测移植瘤P-STAT3、Survivin表达,流式细胞技术检测细胞凋亡。结果:AG490与DDP可以抑制宫颈癌移植瘤生长,促进宫颈癌细胞凋亡,同时使宫颈癌细胞P-STAT3、Survivin表达与活性明显下降;联合应用AG490与DDP,可以起协同作用,AG490可以增强DDP的药物敏感性并且减轻药物副作用。结论:JAK激酶抑制剂AG490与DDP联合应用可能为治疗宫颈癌提供了新的理论基础。     

铅抑制NF-κB、Bcl-2蛋白表达诱导人肾小管上皮细胞凋亡

目的研究醋酸铅对人肾小管上皮细胞系HK-2细胞NFκB、Bcl-2表达的影响及与细胞凋亡的关系。方法体外培养HK-2细胞分为0、2.5、5、10、20μmol/L醋酸铅组,分别染毒72h,应用间接免疫荧光-流式细胞术检测HK-2细胞NF-κB、Bcl-2蛋白表达的改变,用Annexin-V/PI双染法检测细胞凋亡。结果随着染铅剂量增加HK-2细胞NF-κB、Bcl-2蛋白表达逐步降低,NF-κB与Bcl-2降低显著相关(r=0.71,P<0.01);细胞凋亡率随着铅剂量增加而增加,在5、10、20μmol/L铅组与对照组比较差别有统计学意义(P<0.01);细胞凋亡率与NF-κB、Bcl-2蛋白表达呈明显负相关(r=-0.625,P<0.01;r=-0.709,P<0.01)。结论醋酸铅能下调HK-2细胞NF-κB、Bcl-2基因的表达,这可能是其诱导HK-2细胞凋亡的途径之一。     

1,25-(OH)_2D_3通过NF-κB通路对小鼠溃疡性结肠炎的影响

目的研究1,25-(OH)2D3对小鼠溃疡性结肠炎中核转录因子κB(nulear factor-κB,NF-κB)家族的影响,探讨其在小鼠溃疡性结肠炎中的作用。方法 6w龄雌性C57BL/6小鼠36只,随机分为正常对照组,溃疡性结肠炎模型组,1,25-(OH)2D3低、高剂量干预4组,除对照组外其余三组分别用葡聚糖硫酸钠(DSS)对小鼠进行溃疡性结肠炎造模,9d后处死小鼠,取血清和结肠组织。根据小鼠一般情况进行疾病活动指数(disease activity index,DAI)评分,观察小鼠结肠大体形态和病理学损伤情况,对其进行组织病理学评分。酶联免疫吸附法(ELISA)法检测小鼠血清TNF-α、IL-6含量,免疫组化测定结肠组织磷酸化IκB激酶β(phosphorylated inhibitor of nuclear factor kappa-B kinaseβ,p-IKKβ)、磷酸化核转录因子κB抑制蛋白α(phosphorylated inhibitor of NF-κB,p-IκB)、NF-κBp65蛋白表达情况。结果与DSS模型组比较,1,25-(OH)2D3干预组结肠组织IKKβ磷酸化减少,IκBα降解明显降低,NF-κB活化减少,小鼠血清TNF-α、IL-6含量下降,小鼠溃疡性结肠炎大体形态改善,组织学损伤较轻。结论 1,25-(OH)2D3可以通过抑制NF-κB通路,对小鼠溃疡性结肠炎起保护作用。     

氟对大鼠肾脏NF-κB相关蛋白及mRNA表达影响

目的探讨细胞核转录因子-κB(NF-κB)在慢性氟中毒大鼠肾脏损伤机制中意义。方法原位末端转移酶标记法(TUNEL)及流式细胞学检测肾组织细胞凋亡率;免疫组化和实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测肾组织p50、p65、IκBα和Bcl-2、Bax蛋白及mRNA表达。结果肾小管上皮细胞中p50和p65阳性表达强度分别为(134.65±9.71)、(113.62±10.49)、(105.30±8.00)和(119.74±5.17)、(111.90±6.90)、(101.71±9.31),核阳性细胞数随染氟增加而逐渐减少;IκBα表达[(152.67±3.36)、(155.75±3.37)、(156.29±3.78)]则呈逐渐增加趋势,差异均有统计学意义(P<0.05));与对照组比较,Bcl-2蛋白表达强度逐渐降低,Bax蛋白则逐渐升高(P<0.05);肾组织中mRNA表达与蛋白表达水平一致;凋亡细胞数随染氟增加逐渐增加(P<0.05);p65、p50及IκBα与Bcl-2/Bax比值呈相关性(r=0.696、0.720、-0.435,P<0.05)。结论 NF-κB相关基因表达减少引起的肾小管上皮细胞凋亡是慢...     

COX-2及Fas蛋白表达与宫颈癌放疗敏感性的关系

目的:探讨环氧合酶-2(COX-2)及Fas蛋白的表达与宫颈癌放疗敏感性的关系。方法:60例患者随机分成2组,单纯放疗(Radiotherapy,RT)组30例给予10Gy放疗,放化疗(Synchronal radiochemotherapy,CRT)组30例先行一次化疗后再给予10Gy放疗,采用免疫组织化学法分别检测30例单纯放疗和30例放化疗联合治疗宫颈癌患者治疗前后肿瘤细胞中COX-2及Fas蛋白的表达情况。结果:RT组和CRT组完全缓解率分别为50%和90%。Fas蛋白的表达在RT组治疗前后分别为33.33%和70.00%;在CRT组治疗前后分别为26.67%和76.67%,两组治疗前后比较均有显著性差异(P<0.01),阳性率组间比较均无显著性差异(P>0.05)。COX-2蛋白的表达在RT组治疗前后分别为50.00%和30.00%;在CRT组治疗前后分别为53.33%和23.33%,表达阳性率治疗后较治疗前明显降低,但RT组治疗前后阳性率比较无显著性差异(P>0.05),而CRT组治疗前后阳性率有显著性差异(P<0.05),治疗前后组间阳性率比较均无显著性差异(P>0.05)。经相关分析表明肿瘤细胞治疗前后Fas蛋白与COX-2表达均具有显著的等级负相关性。结论:COX-2可能通过下调或抑制Fas蛋白表达,从而促使肿瘤细胞逃避Fas系统介导的宿主免疫检测;放疗及化疗可下调COX-2的表达,两者结合检测治疗前后Fas和COX-2蛋白的表达,可作为较好的放疗敏感性的预测指标。     

宫颈鳞癌组织中圆柱瘤基因及核因子κB蛋白的表达及其临床意义

目的:研究圆柱瘤基因(CYLD)、核因子κB(NF-κB)在宫颈鳞癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系,探讨其临床意义。方法:选择正常宫颈组织20例,宫颈上皮内瘤变(CIN)64例(CINⅠ级26例,CINⅡ/Ⅲ级38例),宫颈鳞癌45例,分别采用原位杂交技术和免疫组化SP技术检测各组宫颈组织中CYLDmRNA及NF-κBp65蛋白的表达。结果:CYLDmRNA在宫颈鳞癌、CINⅡ/Ⅲ、CINⅠ、正常宫颈组织中的阳性表达率分别为42.2%、52.6%、73.1%、80.0%,NF-κBp65蛋白的表达率为66.7%、47.4%、34.6%、15.0%。宫颈鳞癌组、CINⅡ/Ⅲ组中CYLDmRNA及NF-κBp65蛋白的阳性表达率与正常宫颈组织组相比差异均有统计学意义(P<0.05),且宫颈鳞癌组织中CYLDmRNA及NF-κBp65蛋白的表达均与临床分期及淋巴结转移密切相关(P<0.05)。结论:宫颈癌组织中CYLDmRNA的低表达及NF-κBp65蛋白的高表达可能与宫颈癌的发生、发展及转移有关。     

纳米硫化镉对人肾小球系膜细胞氧化损伤及NF-κB蛋白表达的影响

目的探讨纳米硫化镉(nano-CdS)对人肾小球系膜细胞(HMC)的氧化损伤及其机制。方法将对数生长期的HMC细胞分为对照组(0μg/ml)和nano-CdS组(5~80μg/ml),用MTT实验观察nano-CdS对细胞存活率的影响,采用荧光探针技术检测细胞内的活性氧(ROS),采用蛋白质印迹法观察NF-κB蛋白的表达。结果与对照组比较,nano-CdS组细胞存活率降低,ROS含量升高,NF-κB的蛋白表达增加,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 nano-CdS可导致HMC细胞氧化损伤。