丹参酮ⅡA对腹膜透析液诱导的大鼠腹膜组织学变化及TGF-β1表达的影响

目的：了解丹参酮ⅡA对腹腔注射腹膜透析液（PDS）大鼠腹膜组织学变化以及转化生长因子-β1（TGF-β1）表达的影响。方法：50只SD雄性大鼠随机分为5组：对照组,每日用生理盐水腹腔注射20ml;PDS组,每日用4.25%的PDS腹腔注射20ml;丹参酮低、中、高浓度组,每日分别用含丹参酮ⅡA浓度为50、100、200mg·L-1的4.25%的PDS腹腔注射20ml。于实验第30天,取壁层腹膜行光镜检查,并用免疫组织化学的方法检测壁层腹膜TGF-β1的表达情况。结果：HE、Masson染色显示,在PDS干预下腹膜厚度显著增厚,胶原沉积显著增多。与PDS组比较,丹参酮各组有不同程度腹膜厚度减少,胶原沉积减少。腹膜间皮细胞在PDS干预下分泌TGF-β1较对照组显著增加,丹参酮各组TGF-β1分泌与PDS组比较均有显著下降。结论：丹参酮ⅡA具有抑制葡萄糖PDS导致的实验大鼠腹膜纤维化及TGF-β1表达增加的作用。     

腹膜透析液中添加丹参酮对大鼠氧化应激状态的影响

目的探讨在腹膜透析液中添加丹参酮注射液对大鼠腹膜局部保护作用及全身氧化应激状态的影响。方法40只SD雄性大鼠（180－200g）随机分为A、B、C、D四组,每组10只。A组为正常对照组。每日用生理盐水腹腔注射20ml;B组为腹膜透析组,每日用4．25％的腹膜透析液腹腔注射20ml;C、D组为丹参酮低、高浓度组,每日分别用含丹参酮浓度为50mg／L和100mg／L的4．25％腹膜透析液,腹腔注射20ml。于实验第30天在腹腔注射用药2小时后杀检动物。取腹主动脉血2m1和透出液1ml。测定并比较四组大鼠其透出液及血清氧化应激指标：谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）含量及总超氧化物岐化酶（T．SOD）活性。同时取壁层腹膜组织行光镜检查。结果与A组比较,B组大鼠透出液及血清GSH、T—SOD明显降低（P〈0．05）、MDA明显升高（P〈0．05）。C、D组大鼠血清及透出液GSH、T-SOD均较B组显著升高（P〈0．05）,透出液MDA在用药后显著降低（P〈0．05）,D组表现最为显著。即丹参酮治疗组大鼠血清及透出液氧化应激指标与透析液中加入丹参酮浓度呈负相关（P〈0．05）。壁层腹膜HE染色显示,与A组比较。30天时各组壁层腹膜组织均明显增厚,有大量胶原沉积,其中B组最为显著。结论高浓度葡萄糖透析液可出现透析大鼠腹腔液及全身高氧化应激状态,可导致透析大鼠腹膜纤维化。在透析液中添加丹参酮对体外腹膜透析液中糖基化终产物形成和腹膜纤维化有明显抑制作用,且丹参酮IIA的这种抑制作用呈现剂量依赖性。提示丹参酮IIA具有潜在延缓腹膜透析伴发腹膜纤维化发生的作用。     

丹参酮ⅡA对腹膜透析大鼠模型伴发腹膜纤维化的预防干预作用

目的:探讨丹参酮ⅡA对腹膜透析动物模型发生腹膜纤维化的影响。方法:将40只大鼠随机分为对照组、4.25%腹膜透析液(peritoneal dialysis fluid,PDF)组、低剂量丹参酮ⅡA(丹参酮ⅡA终浓度为50 mg.L-1)组、高剂量丹参酮ⅡA(丹参酮ⅡA终浓度为100 mg.L-1)组4组(每组各10例)进行干预。8周后处死大鼠,并将其腹膜组织样本收集后进行观察分析。运用免疫组织化学检测转化生长因子-β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF)在壁层腹膜中的表达。同时通过逆转录聚合酶链反应、免疫印迹法对大网膜上TGF-β1和CTGF mRNA及蛋白的表达进行检测。结果:丹参酮ⅡA明显抑制了含4.25%葡萄糖的PDF引起的腹膜致密层的增厚和胶原沉积,减少了壁层腹膜和网膜中剂量依赖性的TGF-β1和CTGF的表达。结论:丹参酮ⅡA能减轻腹膜透析大鼠伴发的腹膜纤维化改变。     

全反式维甲酸对腹膜透析相关性腹膜纤维化大鼠转化生长因子β1、结缔组织生长因子、α平滑肌肌动蛋白表达的影响

目的：探讨全反式维甲酸(ATRA)在腹膜透析中的抗腹膜纤维化作用。方法选择40只雄性SD大鼠,编号后随机分为对照组(腹腔注射生理盐水10 mL/d+与药物等体积的磷酸盐缓冲液稀释的二甲亚砜)、模型组(腹腔注射4.25%的腹透液10 mL/d+与药物等体积的磷酸盐缓冲液稀释的二甲亚砜)、实验1组(腹腔注射4.25%的腹透液10 mL/d+ATRA 2 mg/kg)、实验2组(腹腔注射4.25%的腹透液10 mL/d+ATRA 5 mg/kg),每组各10只;四组大鼠正常喂养4周后检测腹膜功能,并采用免疫组化法检测大鼠腹膜纤维化相关细胞因子的变化情况。结果实验第4周,模型组和实验1组的腹膜功能指标超滤量、透析液尿素浓度/血浆尿素浓度、初始腹透液葡萄糖浓度/透出液葡萄糖浓度测定值较对照组均有不同程度的下降(P<0.05),实验2组与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,模型组、实验1组、实验2组的脏层腹膜组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫组化检测结果均发生显著的变化(P<0.05),实验1组、实验2组较模型组的表达水平更低(P<0.05)。模型组、实验1组、实验2组肝细胞生长因子(HGF)、骨形态发生蛋白-7(BMP-7)、白细胞介素-6(IL-6)、血管内皮生长因子(VEGF)表达水平较对照组均显著升高(P<0.05);实验1组、实验2组的HGF、BMP-7、IL-6、VEGF表达水平显著低于模型组(P<0.05)。结论 ATRA在腹膜透析中可以通过调节TGF-β1、CTGF、α-SMA等细胞因子的表达达到抗腹膜纤维化的目的。     

TGF-β1及其信号蛋白在大鼠腹膜纤维化模型腹膜组织中的表达及可能作用

目的了解TGFβ1/Smads信号蛋白在高浓度葡萄糖透析液及炎症所致大鼠腹膜纤维化模型腹膜组织中的表达及在腹膜纤维化发生中的可能作用。方法24只SD雄性大鼠(180～200g)随机分为4组,每组6只。正常对照组,大鼠不做任何处理;LPS组,LPS用生理盐水稀释为0.6mg/100ml,在第1、3、5、7日按0.6mg/kg体重腹腔注射;4.25%透析液组,大鼠给予每日腹腔注射100ml/kg体重高糖透析液;LPS+4.25%透析液组,除每日腹腔注射100ml/kg体重高糖透析液外,LPS用4.25%透析液稀释为0.6mg/100ml,在第1、3、5、7日按0.6mg/kg体重腹腔注射;于实验第28天杀检动物,取壁层和脏层腹膜组织行光镜及电镜检查。用RTPCR及间接免疫荧光、Western杂交的方法检测αSMA、TGFβ1、Smad3、Smad7、pSmad2/3、ColⅠmRNA和蛋白的表达水平。结果Masson染色显示,与正常对照组比较,4W时各组壁层腹膜组织明显增厚,有大量胶原沉积,其中LPS+4.25%透析液组厚度最为显著(vsLPS组:42μm±3μmvs35μm±4μm,P=0.007,vs4.25%透析液组,42μm±3μmvs20μm±4μm,P=0.000);与正常对照组比较,三组αSMA、ColⅠ和TGFβ1、Smad3、pSmad2/3在脏层腹膜组织中的表达水平显著上调,上述变化以LPS+4.25%透析液组改变最为显著,TGFβ1mRNA为正常对照组的2倍,Smad3mRNA为正常对照组的1.8倍;与正常对照组比较,抑制性信号蛋白Smad7mRNA和蛋白表达水平在其他三组也有不同程度的上调,但Western杂交结果显示,pSmad/Smad7蛋白比值仍明显升高;电镜结果显示,除正常对照组外,各组间皮细胞均有损伤,LPS+4.25%透析液组的间皮细胞损伤最为明显,而且胞浆中出现明显的肌丝和密体。结论TGFβ1/Smads信号蛋白的活化是高浓度葡萄糖透析液和LPS导致大鼠腹膜发生纤维化的共同作用途径。高浓度葡萄糖透析液和LPS可能协同作用通过TGFβ1/Smads通路刺激腹膜间皮细胞转分化,介导腹膜纤维化的发生。     

川芎嗪对大鼠腹膜纤维化模型腹膜形态及TGF-β1表达的影响

目的观察不同剂量川芎嗪对腹膜透析腹膜纤维化大鼠模型腹膜形态的影响。方法50只大鼠随机分为5组,每组10只,1）空白对照组（大鼠不做任何处理）;2）模型组（HGC大鼠给于每天腹腔注射4.25%的透析液25ml）;3）川芎嗪给药组（HGL）：高剂量组每只大鼠腹腔注射含60mg/L川芎嗪的腹透液25ml;中剂量组每只大鼠腹腔注射含40mg/L川芎嗪的腹透液25ml;低剂量组每只大鼠腹腔注射含20mg/L川芎嗪的腹透液25ml。上述动物连续给药35d,HE染色观察腹膜形态,免疫组化的方法检测腹膜TGF-β1的表达。结果模型组腹膜组织厚度明显增加,壁层腹膜有大量纤维组织积聚,间皮细胞脱落,纤维裸露,间质有炎性细胞浸润。不同剂量川芎嗪对上述病变均有一定的改善作用,其中以中剂量组的作用最明显。正常大鼠腹膜组织的TGF-β1表达极少。而透析5周后腹膜组织TGF-β1表达明显增加,不同剂量川芎嗪均可抑制TGF-β1的组织表达量,低、中剂量抑制作用明显。结论川芎嗪能可抑制长期腹膜透析所致的腹膜纤维化,改善腹膜结构,而抑制腹膜组织TGF-β1表达可能是其抑制腹膜纤维化的机制之一。     

甘草酸二铵对腹膜透析大鼠腹膜纤维化及结缔组织生长因子的影响

目的:探讨甘草酸二铵对腹膜透析的腹膜纤维化大鼠腹膜结缔组织生长因子(CTGF)的影响.方法:将50只SD大鼠随机分成空白对照组、0.9%氯化钠注射液组、模型组、已酮可可碱治疗组、甘草酸二铵治疗组,各10只,建立大鼠腹膜透析模型,己酮可可碱治疗组同时给予己酮可可碱,甘草酸二铵治疗组同时给予甘草酸二铵进行干预,连续28 d,于第30天行4 h腹膜平衡实验测定腹膜功能,并留取壁层腹膜,观察病理形态,测量腹膜厚度,检测腹膜组织CTGF的表达.结果:光镜下,HE染色可见空白对照组和0.9%氯化钠注射液组腹膜表面覆盖着一层扁平间皮细胞,模型组、已酮可可碱治疗组和甘草酸二铵治疗组显示腹膜间皮细胞变形成为柱状、圆形,间皮细胞可见部分脱落,基质增厚,发现大量成纤维样细胞及巨噬、单核细胞浸润,且有纤维素样物质沉积.Masson染色显示有明显的胶原沉积,模型组比已酮可可碱治疗组和甘草酸二铵治疗组胶原沉积更明显.各组大鼠腹膜厚度为:模型组>已酮可可碱治疗组、甘草酸二铵治疗组>空白对照组、0.9%氯化钠注射液组(P<0.01);各组腹膜超滤量和D4/D0为:空白对照组、0.9%氯化钠注射液组>已酮可可碱治疗组、甘草酸二铵治疗组>模型组(P<0.01);各组腹膜Durea/Purea值和CTGF表达水平为:模型组>已酮可可碱治疗组、甘草酸二铵治疗组>空白对照组、0.9%氯化钠注射液组(P<0.01).结论:4.25%腹膜透析液会使大鼠腹膜纤维化,甘草酸二铵可以减轻腹膜纤维化及腹膜功能恶化.     

鳖甲煎丸对腹膜透析相关腹膜纤维化的影响及机制探讨

目的探讨鳖甲煎丸对腹膜透析(PD)小鼠腹膜纤维化的抑制作用及可能机制。方法采用ICR小鼠4.25%腹透液2.0 mL每日腹腔注射一次,并于第3、5、7天联合脂多糖0.8 mg/kg腹腔注射造模;鳖甲煎丸1.2 g/kg每日灌胃一次,干预6周后,测腹透超滤量,HE染色和Masson染色观察壁层腹膜形态改变及腹膜厚度;Western blot检测脏层腹膜组织N-cadherin、ZO-1的蛋白表达水平,及pAkt、总Akt的蛋白表达水平。结果腹膜透析(PD)组、鳖甲煎丸(BJJW)组与对照(Control)组比较,超滤量均显著下降(P0.05);壁层腹膜均显著增厚(P0.01)。脏层腹膜ZO-1蛋白表达降低,N-cadherin蛋白表达升高,pAkt也明显升高(均P0.01)。BJJW组与PD组比较,超滤量明显改善(P0.05),壁层腹膜厚度降低(P0.01);脏层腹膜ZO-1蛋白表达增加,N-cadherin蛋白表达下降,pAkt也明显下降(均P0.01)。结论鳖甲煎丸抑制腹膜纤维化,PI3K/Akt信号调节腹膜间皮细胞上皮-间质细胞转分化(EMT)是其机制之一。     

川芎嗪对高糖致大鼠腹膜间皮细胞MCP-1与NF-κB p65表达的影响

目的 观察川芎嗪对高糖致大鼠腹膜间皮细胞MCP-1与NF-κB p65表达的影响,探讨其在持续性不卧床腹膜透析(continuous ambulatory peritoneal dialysis,CAPD)时腹膜慢性炎症发病机制中的可能作用.方法 60只健康雄性SD大鼠按随机数字表法分成3组:对照组(n=20):腹腔每天注射生理盐水25 mL;模型组(n=20,HGC组):腹腔每天注射4.25％葡萄糖腹透液25 mL+每周1次腹腔注射红霉素6.25万单位;治疗组(n=20,HGM组):腹腔每天注射4.25％葡萄糖腹透液25 mL+ 2％川芎嗪溶液(40 mg/L)+每周1次腹腔注射红霉素6.25万单位.8周后分别处死各组大鼠,取腹膜组织以SABC免疫组织化学法检测壁腹膜间皮细胞MCP-1、NF-κB p65的表达,并行腹膜组织HE及Masson染色病理学检查.结果 与对照组比较,HGC组和HGM组腹膜间皮细胞MCP-1[(109.69±5.33),(122.46 ±5.00)与NF-κB p65(104.83±2.31),(116.44±5.55)表达上调(P＜0.05)],且HGC组显著高于HGM组(P＜0.05).大鼠腹膜间皮细胞MCP-1与NF-κB p65表达水平成正相关(r=0.81,P＜0.05).HE染色后光镜下HGC组和HGM组可见腹膜间皮细胞由扁平变为圆形、柱形,间皮细胞肥大脱落,间皮下结缔组织明显增厚,可见血管生成以及纤维素样物质沉积,还可见成纤维细胞及单核巨噬细胞浸润,HGC组表现尤为明显.结论 川芎嗪可能拮抗高糖引起的腹膜间皮细胞MCP-1与NF-κBp65表达,从而减轻腹膜慢性炎症,延缓腹膜纤维化的发生.     

参芎注射液对大鼠腹膜透析相关性腹膜纤维化中凋亡因子的影响

目的:探讨参芎注射液对大鼠腹膜透析相关性腹膜纤维化影响及其作用机制.方法:4.25%高糖腹膜透析液和脂多糖(LPS)腹腔注射建立大鼠腹膜纤维化模型.32只SD雄性大鼠随机分为4组:正常对照组(N):大鼠不做任何处理;模型组(M):每日1次腹腔注射15 ml腹透液;参芎低剂量组(D):每日1次腹腔注射15 ml腹透液+参...     

丹参注射液减轻腹透液致大鼠腹膜结构和功能损伤

目的：研究丹参注射液对腹透液（peritoneal dialysis solution,PDS）致大鼠腹膜组织结构和功能损伤的影响及与水通道蛋白1（aquaporin-1,AQP-1）和紧密连接相关蛋白1（zonula occluden-1,ZO-1）的关系。方法：56只SD大鼠分为正常对照组、1.5%PDS组、4.25%PDS组、1.5%PDS＋1%丹参组、4.25%PDS＋1%丹参组、1.5%PDS＋2%丹参组和4.25%PDS＋2%丹参组。腹膜透析液大鼠腹腔注射8周后,检测腹膜透析超滤量、腹膜对物质的清除率和腹透液漏出蛋白含量;光镜和电镜下观察腹膜结构变化;免疫印迹法检测腹膜AQP-1蛋白表达,免疫组织化学法检测腹膜间皮细胞ZO-1和AQP-1蛋白表达。结果：与正常对照组比较,1.5%PDS组和4.25%PDS组大鼠腹膜结构和功能发生改变,包括腹膜病理的改变明显,超滤量减少（P〈0.05）,对肌酐和葡萄糖清除能力下降（P〈0.01）,AQP-1蛋白表达增加（P〈0.05）;1.5%PDS＋2%丹参组和4.25%PDS＋2%丹参组大鼠腹膜结构和功能较单纯腹透液组改善,表现为病理改变缓解,腹膜超滤量以及肌酐和葡萄糖清除率提高。与1.5%PDS组比较,1.5%PDS＋2%丹参组腹膜AQP-1蛋白表达量减少（P〈0.05）。结论：丹参注射液可能通过下调AQP-1蛋白表达拮抗腹透液对腹膜组织结构和功能的损伤。     

Galectin-1 在高糖腹透液诱导人腹膜间皮细胞转分化中的作用

目的：研究人腹膜间皮细胞(human peritoneal mesothelial cells,HPMCs) 中galectin-1 的表达和在高糖腹透液(peritoneal dialysate solution, PDS) 刺激下galectin-1 表达的变化及其与上皮细胞- 间充质细胞转分化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT) 的关系。方法：以HPMCs 为研究对象,实验分为：正常对照组(5.5 mmol/L 葡萄糖),含1.5% 葡萄糖的PDS(1.5% PDS) 组,2.5%PDS 组及4.25% PDS 组。培养48 h 后,采用实时定量PCR 和Western 印迹检测galectin-1,vimentin 和zo-1 mRNA 和蛋白的表达水平,分析galectin-1 与vimentin 和zo-1 表达的相关性。使用阳离子脂质体转染galectin-1 siRNA 至HPMCs 内,实验分为：正常对照组(5.5mmol/L 葡萄糖),高糖组(4.25% PDS) 和转染组(galectin-1 siRNA +4.25% PDS)。观察galectin siRNA 干预后vimentin 和zo-1 mRNA 和蛋白的表达水平。结果：不同浓度PDS 刺激HPMCs 48 h 后,与对照组比,galectin-1mRNA 表达上调,尤以4.25%PDS 组明显(P<0.05),其蛋白水平的表达均明显上调(P<0.05),且具有浓度依赖性;同时 vimentin mRNA 表达上调,以2.5%PDS 组和4.25%PDS 组更明显(P<0.05),其蛋白水平的表达均明显上调(P<0.05);而zo-1 mRNA 和蛋白水平的表达均明显下调(P<0.05)。不同浓度高糖PDS 刺激下galectin-1 mRNA 和蛋白表达水平与vimentin mRNA 和蛋白表达水平呈正相关(P<0.05);与zo-1 mRNA 和蛋白表达水平呈负相关(P<0.05)。Galectin-1 siRNA 干预后vimentin mRNA 和蛋白水平的表达较高糖组明显下调(P<0.05),而zo-1 mRNA 和蛋白水平的表达较高糖组明显上调(P<0.05)。结论：Galectin-1 与高糖PDS诱导的HPMCs EMT 相关,galectin-1 siRNA 能够抑制高糖PDS 诱导的HPMCs 转分化。 Galectin-1 可能参与腹膜纤维化的发生环节,成为防治腹膜纤维化的新靶点。     

丙酮酸盐腹透液保护中性粒细胞一氧化氮的生成

目的　研究以丙酮酸盐替代乳酸盐作缓冲碱的酸性高糖腹透液 (PDS)对人外周血中性粒细胞(PMN)功能的影响 ,探讨丙酮酸盐腹透液 (P PDS)优良生物相容性的作用机制。方法　将PDS的缓冲碱分为乳酸盐和丙酮酸盐 2种 ,分别配制成酸碱度 (pH)为 5 .2和7.4及葡萄糖浓度为 1.5 %和 4.2 5 %等 8种 ,并以Han ks’平衡盐溶液 (HBSS ,pH 7.4)为对照 ,采用紫外分光法 ,分别测定各种不同 pH、不同葡萄糖浓度和不同缓冲碱的PDS对PMN产生一氧化氮 (NO)功能的影响。结果　酸性和高糖对PMN产生NO的功能有明显的抑制 ;而且葡萄糖浓度愈高对PMN功能的抑制愈明显。但是在相同葡萄糖浓度 ,不论 pH为 5 .2或 7.4,P PDS均较乳酸盐腹透液 (L PDS)显著改善PMN产生NO的功能。同时 pH 7.4的P PDS较HBSS明显减轻高糖抑制PMN产生NO的功能。结论　丙酮酸盐作缓冲碱能显著减轻非生理性PDS对细胞的毒性作用 ,保护细胞的功能 ,提高PDS的生物相容性。     

腹透液对大鼠腹膜间皮细胞凋亡和增殖的影响

目的探讨腹透液对腹膜间皮细胞凋亡和增殖的影响。方法采用MTT比色法测定腹透液对体外培养的大鼠腹膜间皮细胞增殖的影响．同时应用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率。结果腹透液刺激1h后，体外培养的大鼠腹膜问皮细胞增殖抑制率、G0/G1期细胞比例、早期凋亡率均增高；腹透液中糖浓度越高，刺激时间越长，以上3个指标增高越明显。含4．25％葡萄糖的腹透液刺激3h后，细胞增殖抑制率达44．12％，G0/G1期细胞占71．95％，早期凋亡率达23．59％，远远高于不含糖的阴性对照组和含1．5％糖腹透液组（P〈0．001），也高于4．25％甘露醇组（P〈0．05）。结论高糖腹透液诱导体外培养的腹膜间皮细胞凋亡．抑制其增殖。     

丹参酮IIA通过介导PI3K/Akt-eNOS信号通路改善野百合碱所致大鼠肺动脉高压

目的 探究丹参酮IIA治疗野百合碱所致大鼠肺动脉高压（PAH）的作用机制。方法 选取100只SD雄性大鼠,按随机数字表法分为5组（20只/组）：模型组（MCT）、丹参酮IIA组（TIIA）、丹参酮IIA+PI3K抑制剂组（TP）、PI3K抑制剂组（PI）、对照组。除对照组颈背部注射等体积生理盐水外,剩余大鼠均颈背部注射野百合碱（MCT）诱导肺动脉高压模型。2周后,丹参酮IIA组腹腔注射丹参酮IIA10 mg/kg进行治疗,丹参酮IIA+PI3K抑制剂组注射丹参酮IIA10 mg/kg+PI3K抑制剂1 mg/kg,PI3K抑制剂组注射PI3K抑制剂1 mg/kg,对照组和模型组均腹腔注射等体积生理盐水。治疗2周后,采用苏木精-伊红（HE）染色实验和α-SMA免疫荧光染色实验评估大鼠肺血管形态;Western blot实验评估大鼠肺组织中磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）、蛋白激酶B（PKB/Akt）、内皮型一氧化氮合酶（eNOS）的磷酸化水平;ELISA法测定eNOS、NO水平。结果 HE染色实验和α-SMA免疫荧光染色证实丹参酮IIA能有效抑制PAH大鼠肺血管中膜厚度和血管肌化水平（P<0.01）;Western blot实验结果显示丹参酮IIA能够显著提高PAH大鼠肺组织中PI3K、Akt和eNOS蛋白的磷酸化水平;ELISA 实验结果显示模型组eNOS、NO水平降低（P<0.01）。结论 丹参酮IIA能够通过介导PI3K/Akt-eNOS信号通路改善野百合碱所致大鼠肺动脉高压。     

葡萄糖PDS对单层人腹膜间皮跨细胞电阻及迁移修复能力的影响

目的：观察不同浓度葡萄糖PDS（PDS）对单层人腹膜间皮细胞（HPMCs）跨细胞电阻（TER）以及迁移修复能力的影响。方法：用不同葡萄糖浓度PDS(1.5%,2.5%,4.25%)分别与DMEM以1∶1比例混合后体外培养HPMCs。四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法测定细胞增殖。使用双池培养皿(transwell)构建HPMCs单层细胞模型。采用TER技术测定PDS对HPMCs通透性的影响。划痕损伤实验观察葡萄糖对HPMCs修复再生能力的影响。结果：不同浓度葡萄糖PDS(1.5%,2.5%,4.25%)干预均可明显地抑制HPMCs的增殖(P＜0.05)。TER值随PDS干预时间的延长而逐渐下降,且与葡萄糖浓度呈负相关(P＜0.01)。葡萄糖PDS可明显抑制HPMCs迁移修复能力,且与葡萄糖浓度相关。结论：高糖PDS液抑制细胞增殖,降低单层HPMCs的TER值,并抑制HPMCs损伤后迁移修复能力。提示PDS中高糖成分是导致腹透患者腹膜高通透性和超滤衰竭的重要因素。     

高糖腹膜透析液对腹膜间皮细胞PGC-1α蛋白表达以及线粒体相关氧化凋亡的影响

目的：研究腹膜透析患者腹膜间皮细胞（human peritoneal mesothelial cells,HPMC）中高葡萄糖腹透液（peritonealdialysis solution,PDS）对细胞线粒体结构与功能、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助激活因子（peroxisome proliferatoractivatedreceptor gamma coactivator 1-alpha,PGC-1α）表达、活性氧（reactive oxygen species,ROS）产生的影响,深入探讨高糖PDS环境下HPMC线粒体氧化损伤中的分子机制。方法：体外培养HPMC,用不同葡萄糖浓度PDS（1.5%,2.5%,4.25%）干预。MitoSox荧光染色检测线粒体ROS生成。线粒体呼吸链以及抗氧化物酶活性试验检测线粒体功能。Western印迹检测PGC-1α蛋白的表达。结果：高糖PDS抑制线粒体呼吸链复合物Ⅲ,抗氧化物酶活性明显下降,并呈浓度依赖性。同时线粒体ROS明显升高,细胞凋亡增多。PGC-1α蛋白的表达随高糖PDS浓度升高而下降。结论：高糖PDS可能通过抑制PGC-1α蛋白的表达,抑制线粒体呼吸链活性以及抗氧化物酶活性,促进ROS积聚,诱导细胞凋亡。     

丹参酮ⅡA抑制HepG2细胞生长及诱导其凋亡的实验研究

目的:研究丹参酮ⅡA对人肝癌细胞HepG2的生长抑制作用和凋亡诱导作用.方法:以0μg/mL丹参酮ⅡA作阴性对照,MTT法检测0.5～10.0 μg/mL丹参酮ⅡA作用人肝癌细胞HepG2 24,48,72 h的生长抑制率;HT33258荧光染色、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪检测不同浓度丹参酮ⅡA作用HepG2细胞72 h后的细胞凋亡.结果:0.5～10.0 μg/mL丹参酮ⅡA均能抑制人肝癌细胞HepG2生长,并有明显的时间和剂量依赖性;在24,48,72 h的半数抑制浓度分别为14.7,7.4,3.9 μg/mL;经丹参酮ⅡA作用后,荧光染色可以观察到典型的凋亡细胞形态特征;琼脂糖凝胶电泳结果显示除1.0 μg/mL组外均可见明显的凋亡细胞形成的梯状条带;流式细胞仪检测不同浓度丹参酮ⅡA作用72 h后的细胞凋亡率分别为20.32%±2.16%,28.01%±2.35%,33.87%±3.43%,46.73%±4.08%和57.85%±3.74%,与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:丹参酮ⅡA在体外能明显抑制人肝癌细胞HepG2生长,抑制其生长的机制可能是诱导细胞凋亡.     

不同腹膜纤维化大鼠模型之比较

目的:采用几种不同方法构建腹膜透析腹膜纤维化大鼠模型，为腹膜透析腹膜纤维化的防治提供可研究的动物模型。方法:34只SD雄性大鼠(200～250g)，随机分为5组，分别是空白对照组(n=7，未予任何处理)、生理盐水组(n=7，每日腹腔内直接注射0.9%生理盐水20ml)、高糖组(n=7，每日腹腔内直接注射4.25%含糖透析液即PDF 20ml)、高糖＋脂多糖(LPS)组(n=6，每日腹腔内直接注射4.25% PDF 20ml，并在第8,10,12天加入LPS 75μg)、高糖＋红霉素组(n=7,每日腹腔内直接注射4.25% PDF 20ml，并在第7,14,21,28天加入乳糖酸红霉素6.25万U)，观察5周。分别于第0，7，14，21，28，35天清晨，空腹状态时测量大鼠体重。5周后行2h腹膜平衡试验(PET)，处死大鼠，准确测量超滤量，检测腹膜功能；观察腹膜厚度、血管数及其他组织学改变；用免疫组织化学法测定腹膜组织及肠管腹腔侧组织纤维连接蛋白(FN)表达率。结果:高糖组、高糖+脂多糖组和高糖+红霉素组皆可见腹膜间皮细胞脱落，间皮下基质及肠外纵肌层明显增厚，可见大量成纤维样细胞及单核、巨噬细胞浸润，且有纤维素样物质沉积等现象，尤以高糖+红霉素组明显；与空白对照组及生理盐水组分别比较，高糖、高糖+脂多糖及高糖+红霉素组大鼠超滤量及2h透出液葡萄糖浓度/０h透析液葡萄糖浓度(D2/D0)比值均有明显减少(P<0.05)，而透析液尿素浓度/血浆尿素浓度(D/Purea)比值、大鼠腹膜组织及肠管腹腔侧组织FN表达率均有明显增加(P<0.05)；与高糖组比较，高糖+红霉素组D/Purea比值、大鼠腹膜组织及肠管腹腔侧组织FN表达率均有明显增加(P<0.05)；与高糖组比较，高糖+脂多糖组D/Purea比值及肠管腹腔侧组织FN表达率皆明显增加(P<0.05)；而在大鼠每周体重变化、透出液中白细胞计数、超滤量、D2/D0比值等方面，高糖、高糖+红霉素和高糖+脂多糖组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:采用高糖、高糖+脂多糖和高糖+红霉素刺激均能充分复制腹膜透析腹膜纤维化特征，而以高糖+红霉素效果为最佳。