包裹脑源性神经营养因子壳聚糖/海藻酸钠微囊对大鼠视神经损伤保护作用

目的 观察包裹脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)的壳聚糖/海藻酸钠微囊对大鼠视神经损伤的保护作用.方法 在视神经损伤模型的大鼠玻璃体腔内注入包裹BDNF的壳聚糖/海藻酸钠微囊.第一组中对视神经作单次损伤,第二组中两次损伤视神经.通过视网膜神经节细胞(ret...     

ACA微囊的处方和工艺因素对囊膜通透性及强度的影响

目的 通过考察不同处方和工艺制备的吲哚美辛海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸钠(ACA)微囊的体外释放,研究影响囊膜通透性及膜强度的因素.方法 以吲哚美辛为模型药物,采用不同的交联剂氯化钙、氯化钡,改变海藻酸钠、壳聚糖、柠檬酸钠浓度及制备工艺来制备微囊,以药物的体外释放曲线来评价囊膜的通透性,通过超声破碎评价微囊的强度.结果 影响微囊中药物释放的主要因素为处方中的交联剂,提高海藻酸钠、壳聚糖浓度、降低液化囊心时间,微囊通透性下降;氯化钙为交联剂制备的微囊强度较小.结论 通过处方和工艺调节有望得到通透性和膜强度适宜的ACA微囊.     

灯盏花素壳聚糖-海藻酸钠微囊的制备

目的考察灯盏花素壳聚糖-海藻酸钠微囊的制备工艺和最优处方。方法采用凝聚法制备了灯盏花素壳聚糖-海藻酸钠微囊。以药物的包封率和载药量作为制备工艺优化指标,通过正交试验得出微囊的最优处方。结果最优处方为海藻酸钠质量浓度为25mg/mL,壳聚糖质量浓度为2mg/mL,氯化钙浓度为0.2mol/L,海藻酸钠与药物的比例为1∶1。结论本法工艺简单可行,稳定,重现性好。     

壳聚糖/海藻酸钠微胶囊包埋大鼠胰岛异种腹腔移植的实验研究

目的 探讨用壳聚糖代替聚赖氨酸,制备包埋大鼠胰岛的壳聚糖/海藻酸钠(ACA)微胶囊进行异种胰岛移植的可行性.方法 SD大鼠胰腺原位消化法分离纯化胰岛,气流吹喷制作海藻酸钠/壳聚糖/海藻酸钠(ACA)微囊化大鼠胰岛,比较微囊化与未微囊化胰岛的胰岛素释放情况、在异种受体腹腔内存活情况及糖尿病小鼠模型血糖逆转情况.结果 实验组与对照组的胰岛素释放试验差异无显著性(P＞0.05);实验组糖尿病小鼠模型血糖正常持续时间为23～65 d(平均48 d),对照组为3～6 d(平均5 d),两组差异有显著性(P＜0.05);小鼠腹腔灌洗分离ACA微囊化大鼠胰岛,发现微囊膜完整,囊壁无纤维化,胰岛存活良好.结论 ACA微胶囊具有良好的免疫隔离作用,胰岛素释放正常并可使异种胰岛移植物存活时间明显延长.     

芦丁壳聚糖-海藻酸钠漂浮微囊的制备研究

目的 以芦丁为模型药物,研究其壳聚糖-海藻酸钠漂浮型微囊的脉冲释药性能.方法 采用复凝聚法制备壳聚糖-海藻酸钠微囊,通过添加起泡剂将其制成胃内漂浮型微囊,考察微囊的脉冲释药性能,并研究起泡剂用量对释放时滞的影响.结果 该微囊具有pH值响应性,体外释放呈现S型脉冲释放特征,随着起泡剂用量的增加,释放时滞可由3 h延长为6 h.结论 芦丁壳聚糖-海藻酸钠漂浮型微囊具有理想的包封率和脉冲释放性能,适用于中药制剂领域.     

微囊化牛视网膜色素上皮细胞体外BDNF及GDNF分泌特性的研究

目的检测体外培养的牛视网膜色素上皮细胞（retinal pigment epithelium，RPE）脑源性神经营养因子（brain derived neurotrophic factor，BDNF）及胶质源性神经营养因子（glial cell line-derived neurotrophic factor，GDNF）分泌特点，并观察微囊包裹对细胞存活率及BDNF和GDNF分泌的影响。方法原代培养牛RPE，用高压静电成囊装置制备海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊化细胞，台盼兰染色法检测囊内细胞活性，ELISA法检测BDNF及GDNF分泌量。结果原代及传代后RPE上清液中在基础状态下就能够检测到BDNF和GDNF，传代后两者的分泌量较原代无显著差异。微囊化细胞BDNF和GDNF分泌量在1-5 d与未微囊化细胞相比显著降低（P〈0.01），而6-8 d两组无显著差异。囊内活细胞数及BDNF和GDNF分泌量在体外培养的第14天至第21天趋于稳定。结论RPE基础状态下就能够分泌少量BDNF和GDNF，且不受传代及微囊包裹的影响。体外培养21 d后仍检测到囊内细胞的存活及BDNF和GDNF的分泌。牛RPE是一种具有一定前景的帕金森病细胞移植的供体。     

乳化外凝聚法制备姜油树脂海藻酸钠-壳聚糖微囊的工艺优化研究

目的:优化姜油树脂海藻酸钠-壳聚糖微囊的制备工艺,并对其稳定性进行考察。方法:采用乳化外凝聚法制备微囊,以微囊粒径和包封率为测定指标,用均匀设计表U11(116)优选处方工艺;影响因素实验考察微囊的稳定性。结果:优化后的工艺条件为:海藻酸钠浓度2.0%、海藻酸钠与姜油树脂的质量比3∶1、CaCl2浓度1.0%、壳聚糖浓度1.2%,所得微囊外观形态良好,平均粒径为842μm、跨距为0.14,包封率为(69.82±1.05)%。微囊在高温、高湿和强光实验条件下,载药量与外观形态稳定。结论:在均匀设计所得优化条件下,姜油树脂海藻酸钠-壳聚糖微囊的制备工艺重现性好,微囊化是提高姜油树脂稳定性的有效方法之一。     

海藻酸-壳聚糖-磷酰胆碱微囊生物相容性的研究

目的探讨磷酰胆碱修饰的新型海藻酸-壳聚糖微囊包裹胰岛对微囊生物相容性的影响。方法应用静电微囊发生技术获得磷酰胆碱修饰的海藻酸-壳聚糖微囊;利用考马斯亮蓝法分别测定单纯壳聚糖和磷酰胆碱修饰的壳聚糖对牛血清白蛋白的吸附量;将海藻酸．壳聚糖-磷酰胆碱微囊（实验组）和海藻酸一壳聚糖微囊（对照组）分别植入小鼠腹腔,4周后回收微囊,HE染色评价囊周纤维化情况;采用葡萄糖刺激试验评价微囊胰岛和单纯胰岛的胰岛素释放功能。结果单位质量的壳聚糖及磷酰胆碱修饰物所吸附的蛋白质量分别为189．4μg/mg和90．5μg/mg（t=5．549,P〈0．05）,差异有统计学意义;微囊植入腹腔后,实验组囊表面细胞反应较对照组轻微,未见明显的纤维化形成;实验组微囊包裹胰岛与单纯胰岛在低糖溶液中,胰岛素浓度分别是（3．298±1．680）μIU／ml和（4．299±1．159）μIU／ml（t=1．096,P〉0．05）,而在高糖溶液中分别是（11．783±4．175）μIU／ml和（12．875±2．268）μIU／ml（t=0．514,P〉0．05）,差异均无统计学意义。结论磷酰胆碱修饰可提高海藻酸一壳聚糖微囊的生物相容性,同时不影响微囊胰岛生物学功能,更适用于微囊胰岛移植治疗糖尿病。     

微囊化成人胰岛细胞治疗大鼠糖尿病

1 临床资料成人胰岛采用传统的胰腺导管内注射胶原酶消化方法,应用新型胶原酶-Liberase酶分离胰岛,Ficoll纯化胰岛. 用静电微囊发生器进行海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠(APA)微囊成囊,并用APA微囊包裹成人胰岛细胞. 健康SD大鼠按65 mg/kg剂量肌肉注射链脲菌素(美国Sigma公司),以尿糖强阳性、非禁食血糖>16.5 mmol/L且病程>14 d者作为糖尿病动物模型. 将合格糖尿病大鼠模型27只随机分成3组(空囊组、游离胰岛组、微囊组),每组各9只,以体质量及血糖作为观察指标.     

双歧杆菌的微囊化研究

本研究分别以壳聚糖／对苯二酰氯，邻苯二甲酸醋酸纤维素（ＣＡＰ），聚－Ｌ－赖氨酸（ＰＬＬ）／海藻酸钠，壳聚糖／海藻酸钠为囊材，采用表面交联技术，将活性双歧杆菌微囊化，四种方法制备的微囊对双歧杆菌均有保护作用，有效地提高了菌体的耐酸性能，其中愉壳聚糖／海藻酸钠主囊材制备的微囊效果最佳，微囊中菌体仍然保持较高的活性，且能在微囊中继续增殖，该耐酸微囊化技术有希望应用于新型微生态制剂。     

载VEGF/VAN多层海藻酸盐-壳聚糖缓释微球的制备

目的：制备载有血管内皮生长因子（VEGF）和万古霉素（VAN）的多层海藻酸盐-壳聚糖缓释微球,探讨其体外释放特性。方法：采用乳化交联和层层自组装技术制备微球;正交实验设计考察海藻酸钠浓度、氯化钙（CaCl₂）浓度、油水比及span80浓度对VEGF和VAN包封率（EE）和载药量（DL）的影响,以优化制备工艺;扫描电子显微镜（SEM）观察多层微球的表面形貌和粒径;傅里叶变换红外光谱仪（FTIR）检测海藻酸与壳聚糖的自组装情况;分别采用ELISA双抗体夹心法和紫外分光光度法检测VEGF和VAN的EE、DL和体外释放量并绘制累积释放曲线。结果：所制备微球呈黄褐色粉末状;SEM观察,微球呈圆球形,表面光滑,分散性较好,平均粒径约为50μm。制备缓释微球时,海藻酸钠浓度为1.0 g·mL^-1、CaCl₂浓度为8 g·mL^-1、油水比为3：1及span80浓度为2%时为最佳配方,VEGF和VAN的EE分别达49.63%和16.67%,体外累计释放时间分别为16.5和12.5d,释放量可达95%。结论：本研究通过优化制备工艺,制备了粒径较小、EE较高、缓释效果较好的载VEGF/VAN多层海藻酸盐-壳聚糖缓释微球。     

溴吡斯的明12h缓释片的体外释放行为相关性研究

目的测定溴吡斯的明缓释片的体外释放和体内药代动力学,并研究其体内外相关性。方法按《中国药典》2010版二部附录XD释放度测定第二法,以磷酸缓冲液为释放介质,采用紫外分光光度法测定溴吡斯的明的累积释放百分率。6只新西兰兔采用自身交叉给药方案,单剂量口服溴吡斯的明缓释片和普通片后,采用HPLC-紫外色谱法测定不同时间点的体内血药浓度。结果溴吡斯的明缓释片12 h体外累积释放率达98.6%,其体内药动学参数如下:tmax为(4.001±0.004)h;Cmax为(15.442±0.215)mg/L;AUC0-∞为200.557±3.357。Loo-Riegelman法计算溴吡斯的明缓释片体内外的相关性,其体内累积吸收百分率与体外累积释放百分数X建立的线性回归方程为:fa=0.485 1 fr+3.837 7,r=0.986 5,大于临界值r6,0.01(P<0.01)。结论溴吡斯的明缓释片释放行为的体内外相关性显著,通过体外释放行为可预测其体内释放动力学。     

庆大霉素-壳聚糖纳米涂层钛板的制备及系列研究

目的:制备负载庆大霉素-壳聚糖纳米粒的涂层钛板并对其表面形态?体外释药行为及抗金黄色葡萄球菌的性能进行评价?方法:采用溶剂铸膜(solvent casting)法制备庆大霉素-壳聚糖纳米涂层钛板,扫描电镜观察其表面形态,磷酸盐缓冲液中研究其体外释药行为,将庆大霉素-壳聚糖纳米涂层钛板置于均匀涂有1 × 108 CFU/ml金黄色葡萄球菌的Mueller-Hinton(MH)平板上连续培养直至抑菌环消失,以抑菌环直径为主要观察指标评价其在体外对金黄色葡萄球菌的抑制作用?结果:扫描电镜示庆大霉素-壳聚糖纳米粒较均匀地分布于钛板表面;体外释药行为显示庆大霉素-壳聚糖纳米涂层钛板中庆大霉素的释放可达到14 d,维持在52%左右;体外抑制金黄色葡萄球菌作用可维持9 d,抑菌环最大直径为(3.82 ± 0.03) cm?结论:制备的庆大霉素-壳聚糖纳米涂层钛板表面形态良好,体外释药稳定,对金黄色葡萄球菌有良好的抑制作用?     

左金丸总生物碱胃黏附缓释微球研究

[目的] 制备载左金丸总生物碱的壳聚糖包裹明胶海藻酸钠载药微球,并考察其释放和胃黏附特性。[方法] 制备胃黏附微球,通过高效液相色谱(HPLC)法测定微球载药量与包封率,通过转篮法测定微球体外释药性能,将微球黏附于大鼠胃黏膜上测其体外生物黏附性。[结果] 微球载药量测定结果:盐酸药根碱2.768 mg/g,盐酸巴马汀3.986 mg/g,盐酸小檗碱21.920 mg/g,吴茱萸碱1.449 mg/g,吴茱萸次碱0.954 mg/g。5种生物碱在8 h内持续释放,微球的胃黏附百分率为89.33%。 [结论] 壳聚糖交联的载左金丸总生物碱微球具有较好的释药性及胃黏附特性。     

HSV携带BDNF基因重组体促进大鼠脊髓损伤修复的实验研究

目的探讨人单纯疱疹病毒(HSV)携带脑源性神经营养因子(BDNF)基因重组体对脊髓损伤(SCI)的治疗效果。方法构建绿色荧光蛋白(GFP)标记的HSV-BDNF转基因重组体,通过坐骨神经注射使其转运入损伤脊髓运动神经元。用BBB评分观察大鼠后肢运动功能变化,探讨BDNF对损伤脊髓运动神经元的保护作用。结果 GFP标记的HSV-BDNF注入坐骨神经后5d能运输到脊髓腹角运动神经元。BDNF转基因治疗可减轻SCI带来的神经元损害,增加神经元存活数量并阻止胞体萎缩,同时改善大鼠后肢运动行为(P<0.05)。结论 HSV携带BDNF基因是一种有效治疗脊髓损伤的备选方法。     

聚乙二醇化壳聚糖纳米粒的制备及局部滴眼给药性能评价

目的 制备一种聚乙二醇修饰的壳聚糖纳米粒,评价其局部滴眼给药性能.方法 以伏立康唑为模型药物,采用离子交联法制备载药的聚乙二醇化壳聚糖纳米粒,对其进行表征后,分别考察纳米粒的药物缓释能力、对眼表药物代谢动力学的影响及其角膜渗透性.结果 聚乙二醇化壳聚糖纳米粒粒径为(235±23)nm,Zeta电位为(+23.1±0.6) mV,载药量为11.16％,包封率为61.35％.纳米粒体外释放药物非常缓慢,可持续释药48 h;相比于伏立康唑水溶液,纳米粒的药物浓度-时间曲线下面积明显增加,药物半衰期延长,清除率减少,眼表药物平均滞留时间延长(P＜0.05).荧光标记的聚乙二醇化壳聚糖纳米粒可穿透角膜上皮逐渐向角膜基质渗透.结论 与药物水溶液相比,聚乙二醇化壳聚糖纳米粒能够有效减少眼表药物的流失,改善药物的生物利用度.     

大鼠BDNF基因复制缺陷型重组腺病毒的构建与鉴定

 【目的】构建携带大鼠脑源性神经营养因子（brain derived neurotrophic factor，BDNF）目的基因的复制缺陷型重组腺病毒，并初步检测其体外表达目的基因的能力。【方法】提取大鼠脑组织总RNA，使用RT—PCR方法扩增BDNF目的基因并将其克隆入pMD18-T Simple载体测序，将测序完全正确的BDNF目的基因克隆入pShuttle2中，然后利用体外连接法将BDNF目的基因克隆入Adeno—X^TM腺病毒骨架中。Lipofectamine^TM 2000法转染HEK293细胞包装携带BDNF目的基因的重组腺病毒，少量提取重组腺病毒DNA检测证实为复制缺陷型BDNF基因重组腺病毒后大量扩增。蛋白电泳及Western blot法初步检测BDNF目的基因在HEK293细胞中的表达。【结果】成功构建了携带大鼠BDNF目的基因的复制缺陷型重组腺病毒。并证实其在HEK293细胞中可高水平表达BDNF目的基因。【结论】利用体外连接法可方便、快捷地构建携带BDNF目的基因的复制缺陷型重组腺病毒，并可在体外高水平表达表达其所携带的目的基因。     

BDNF基因逆转录表达载体的构建和在淋巴细胞中的表达

【目的】构建含脑源性神经营养因子基因(brain-derivedneurotrophicfactor,BDNFgene)逆转录表达载体并了解其在淋巴细胞中的表达,探讨治疗基因的非损伤性脑内转移的新途径。【方法】用RT-PCR方法从大鼠海马组织总RNA中扩增(cDNA)BDNF片段,应用基因重组技术将大鼠(cDNA)BDNF克隆到逆转录病毒载体pLXSN中,用限制性内切酶酶切分析和DNA测序对重组质粒进行鉴定,采用LipofectAMINE将重组大鼠(cDNA)BDNF导入PA317细胞,获取高滴度的病毒上清转染大鼠淋巴细胞,应用流式细胞仪(FCM)检测大鼠淋巴细胞BDNF的表达,噻唑蓝(MTT)法检测淋巴细胞培养上清对PC12细胞增殖的影响。【结果】扩增出大鼠(cDNA)BDNF片段,限制性内切酶酶切和DNA测序证实获得正确的重组质粒pLXSN-BDNF,BDNF基因修饰的大鼠淋巴细胞能高表达BDNF蛋白,其培养上清能促进PC12细胞增殖。【结论】成功构建了BDNF基因逆转录表达载体,BDNF基因修饰的大鼠淋巴细胞能高表达和分泌具有生物活性的BDNF蛋白,为治疗基因的非损伤性脑内转移奠定了一定基础。     

吗啡缓释栓的研制及其体内外释药相关性研究

目的：制备吗啡缓释栓。经家兔直肠给药,考察缓释栓剂释药的体内外相关性。方法：以聚乙二醇为基质,添加阻滞剂卡波姆,氮酮为促渗透剂制备吗啡缓控释栓;采用自行设计的体外溶出装置进行体外筛选;以大白兔为动物模型进行体内筛选;采用3p87程序计算药代动力学参数。结果：制备的吗啡缓释栓的体外释药性能良好,缓释时限〉7h。当体外释药符合零级模式,且R^2〉0．9时,体内药物释放出现平台,显示了良好的体内外相关性;体内释药过程为二室模型,MRT=8．221h,Tpeak=2．857h,Cmax=12．944μg/ml,AUC=127．275（μg／ml）·h。结论：所制备的吗啡栓剂具有良好的缓释特征。