幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A的分离纯化

在对Ｈｐ毒力因子进行的研究中 ,发现ＣａｇＡ基因是Ｈｐ高毒力株的标志基因。其编码产物 细胞毒素相关蛋白Ａ(ＣａｇＡ)是引起人类严重胃部疾患的主要因素之一 ,ＣａｇＡ基因并不存在于所有的Ｈｐ菌株中 ,在中国人中约有 90 %感染者含有此基因。该基因已被克隆和测序 ,含有ＣａｇＡ基因与不含ＣａｇＡ基因的菌株在致病能力上存在显著的差异。目前一致认为含ＣａｇＡ基因的Ｈｐ菌株为高毒株 ,与消化性溃疡 ,萎缩性胃炎及胃癌的发生密切相关。ＣａｇＡ蛋白位于细胞表面 ,是一种亲水性免疫显性蛋白 ,可刺激患者机体产生相应的ＩｇＧ和ＩｇＡ抗…     

原位PCR检测人胃粘膜中幽门螺杆菌cagA

具有细胞毒素相关基因Ａ（ｃｙｔｏｔｏｘｉｎａｓｓｏｃｉａｔｅｄｇｅｎｅＡ,ｃａｇＡ）的幽门螺杆菌（Ｈｐ）感染可引发慢性萎缩性胃炎及胃癌等严重胃部疾病。因此,ＨｐｃａｇＡ的检测倍受临床重视。我们建立了检测ＨｐｃａｇＡ的原位ＰＣＲ技术,并对胃粘膜ＨｐｃａｇＡ进行了定位观察。临床标本１００份均为病理诊断明确的胃粘膜石蜡切片,其中慢性浅表性胃炎３０例、慢性萎缩性胃炎３０例、胃癌４０作者单位：４３００６０武汉,武汉市第三医院例。根据ＨｐｃａｇＡ的ＤＮＡ序列设计合成１对引物,分别采用原位ＰＣＲ和常…     

CagA和机体免疫反应在幽门螺杆菌致病中的作用及 …

目的 探讨幽门螺杆菌（Ｈｅｌｉｃｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ,Ｈｐ）菌型差异和机体免疫反应在Ｈｐ致病听作用及其相互关系。方法 采用间接ＥＬＩＳＡ法检测了１７５例血清抗Ｈｐ ＣａｇＡ－ＩｇＧ和抗Ｈｐ ＩｇＥ。结果 ①Ｈｐ感染者抗Ｈｐ ＣａｇＡ－ＩｇＧ的阳性率（８０％）明显高于抗Ｈｐ ＩｇＥ（５８．２９％,Ｐ〈０．０１）。②血清抗Ｈｐ ＣａｇＡ－ＩｇＧ在慢性活动性胃炎（ＡＣＧ）和十二指肠球部溃疡（ＤＵ）     

北京人群感染幽门螺杆菌cagA分布特征

幽门螺杆菌 (Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ,Ｈｐ)是慢性胃炎与消化性溃疡的主要病因 ,ｃａｇＡ被认为是Ｈｐ致病程度相关菌株的一种标志 ,ｃａｇＡ并非存在于所有的菌株中 ,它在Ｈｐ菌株中的存在状态有地区差异。为了解我国ｃａｇＡ存在情况以及与疾病的关系 ,本研究采用ＰＣＲ方法 ,检测了从北京地区分离的Ｈｐ菌株ｃａｇＡ基因存在情况 ,并与国际上这方面的研究作了比较。对 6 4株Ｈｐ(由本实验室中国幽门螺杆菌科研协作组菌株库提供 ,其中胃癌来源 2株 ,胃及十二指肠炎 34株 ,胃基金项目 :国家自然科学基金资助项目(39870 0 32 …     

浙江地区幽门螺杆菌cagA、vacA、iceA基因型别分析

据初步统计 ,全世界超过 5 0 %的人群有幽门螺杆菌 (Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ,Ｈｐ)感染。其中西方国家的感染率为 2 5 %～ 5 0 % ,发展中国家有的高达 90 % 〔1〕。然而 ,只有少数感染者发展成消化性溃疡或胃癌 ,其中的原因尚不清楚。有研究表明 ,Ｈｐ的ｃａｇＡ、ｖａｃＡ、ｉｃｅＡ基因可能与疾病的发生有关。有关ｃａｇＡ、ｖａｃＡ与疾病的关系我国也有报道〔2〕。本文研究了浙江地区Ｈｐ菌株的ｃａｇＡ、ｖａｃＡ、ｉｃｅＡ基因型别并分析了与疾病的关系。材料和方法Ｈｐ菌株的来源 :Ｈｐ菌株分离自 60例胃、十二指肠疾…     

幽门螺杆菌VacA毒素的初步纯化

早期发现幽门螺杆菌 (Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ,Ｈｐ)液体培养上清中含有导致哺乳动物上皮细胞产生空泡的物质 ,后来证实是由一种相对分子质量 (Ｍｒ)约为870 0 0或 95 0 0 0的Ｈｐ分泌蛋白引起 ,因而命名为致空泡变性细胞毒素 (ＶａｃＡ)。本研究采用多种液相层析方法的组合 ,对ＨｐＭｒ 为 95 0 0 0的ＶａｃＡ蛋白进行分离纯化 ,为进一步研究ＶａｃＡ的作用机制奠定基础。采用经硫酸铵沉淀及透析后得到的ＨｐＣＣＵＧ 17874菌株液体培养浓缩上清 ,应用吸附层析、疏水层析、阴离子交换层析及凝胶过滤等液相层析方法进行Ｖａｃ…     

机体免疫反应和CagA对幽门螺杆菌长期感染转归的影响

10年前在我院行胃镜、病理和Ｈｐ检测确诊为Ｈｐ阳性者 6 3例 ,10年后到我院复查再次行上述检查 ,其中 16例转阴 ,47例仍为阳性。采用细菌培养和Ｇｉｅｍｓａ染色检测胃粘膜内Ｈｐ ,用间接ＥＬＩＳＡ法检测了 47例Ｈｐ持续感染 10年患者血清抗ＨｐＣａｇＡ ＩｇＧ和抗ＨｐＩｇＥ ,并检测了这些患者 10年前后胃镜和病理组织学变化。47例Ｈｐ持续阳性患者 10年前后消化性溃疡 (ＰＵ)的发生率由 14例(2 9 78% )发展至 2 5例 (5 3 19% ) (Ｐ <0 .0 5 ) ;胃粘膜糜烂由 8例 (17 0 2 % )发展至 18例 (38 2 9% ) (Ｐ <0 .0 5 ) ;肠上皮化生 (ＩＭ)由…     

抗幽门螺杆菌血清IgE和胃粘膜肥大细胞在Hp致病中的作用

目的探讨机体免疫反应在幽门螺杆菌（Ｈｐ）致病中的作用。方法采用间接ＥＬＩＳＡ法检测了１４９例患者血清中抗ＨｐＩｇＥ,并用改良甲苯胺蓝染色法检测其胃粘膜中肥大细胞（ＭＣ）。结果①Ｈｐ阳性者血清抗ＨｐＩｇＥ含量、阳性率和胃粘膜中ＭＣ总数及脱颗粒比均显著高于Ｈｐ阴性者（Ｐ＜０．０１）;②不同胃部疾病之间血清抗ＨｐＩｇＥ含量、阳性率和胃粘膜中ＭＣ总数及脱颗粒比有显著差异,活动性胃炎显著高于非活动性胃炎和消化性溃疡（Ｐ＜０．０１）,中重度胃炎显著高于轻度胃炎（Ｐ＜０．００１）;③血清抗ＨｐＩｇＥ阳性者胃粘膜内ＭＣ总数及脱颗粒比均显著高于抗ＨｐＩｇＥ阴性者（Ｐ＜０．０１）,且血清抗ＨｐＩｇＥ含量与胃粘膜内ＭＣ脱颗粒比呈正相关（ｒ＝０．６０,Ｐ＜０．００１）。结论血清抗ＨｐＩｇＥ参与了Ｈｐ的致病过程,其机制可能为刺激ＭＣ脱颗粒,而致胃粘膜损伤。     

杭幽门螺杆菌血清IgE和胃粘膜肥大细胞在Hp致病中的 …

目的 探讨机体免疫反应在幽门螺杆菌（Ｈｐ）致病中的作用。方法 采用间接ＥＬＩＳＡ法检测了１４９例患者血清中抗ＨｐＩｐＥ,并用改良甲苯胺蓝染色法检测其胃粘膜中肥大 细胞（ＭＣ）。结果 ①Ｈｐ阳性者血清抗ＨｐＩｇＥ含量、阳性率和胃粘膜中ＭＣ总数及脱颗粒比显著高于Ｈｐ阴性者（Ｐ〈０．０１）;②不同胃部疾病之间血清抗ＨｐＩｇＥ含量、阳性率和胃粘膜中ＭＣ总数及脱颗粒比有显著差异,活动性胃炎显著高于非活支性胃炎     

幽门螺杆菌诱导大鼠胃粘膜细胞分泌胃蛋白酶原

为研究幽门螺杆菌 (Ｈｐ)超声提取物对大鼠胃粘膜细胞系合成与分泌胃蛋白酶原的影响 ,大鼠胃粘膜细胞ＯＵＭＳ 37(34代 )在ＤＭＥＭ培养基中培养 3ｄ后细胞生长到紧密状态时 ,换以新鲜的培养基 ,加入Ｈｐ超声提取物或试剂后 ,采用酸变性法 ,按指定时间取培养上清及细胞裂解液测定胃蛋白酶原活力。结果显示 ,不同浓度的Ｈｐ超声提取物(10 0ｍｇ/Ｌ ,2 0 0ｍｇ/Ｌ ,40 0ｍｇ/Ｌ)对细胞存活无影响。Ｈｐ超声提取物可在 30ｍｉｎ～ 180ｍｉｎ内呈剂量依赖性地诱导大鼠胃细胞分泌胃蛋白酶原。ＤｉｂｕｔｙｒｙｌｃＡＭＰ显著诱导胃粘膜细胞分泌胃…     

幽门螺杆菌空泡毒与致病性的关系

幽门螺杆菌（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ，Ｈｐ）与消化性溃疡、胃炎、胃癌的关系已被证实；本文通过临床分离Ｈｐ的培养滤液，对体外培养Ｖｅｒｏ细胞是否产生空泡毒作用，探讨Ｈｐ的致病机理。选择接受胃镜检查的病人，内镜下分离培养６２株Ｈｐ，按Ｓｃｈｍ...     

化学致癌剂MNNG对人胃粘膜上皮细胞骨架作用的研究

使用与胃癌相关的化学致癌剂Ｎ－甲基－Ｎ＇硝基－Ｎ－亚硝基胍（ＭＮＮＧ）对人类胃粘膜上皮细胞系ＧＥＳ－１进行恶性转化实验，得到转化后细胞ＭＣ。比较观察了ＧＥＳ－１和ＭＣ细胞的骨架形态。结果表明ＧＥＳ－１及ＭＣ，角蛋白在二细胞均为阳性，微管形态和分布无差异，而微丝肌动蛋白在ＧＥＳ－１细胞呈正常排列，ＭＣ细胞微丝出现明显的异常，显示了化学致癌剂ＭＮＮＧ对人胃粘膜细胞骨架的选择性作用的特点。本工作对深入研究亚硝酰胺类化学物质与胃癌发生的关系提供了一个细胞水平的线索。     

幽门螺杆菌在胃癌发生机制中的作用

幽门螺杆菌（ＨＰ）在胃癌发生的病理生理过程中起重要作用。ＨＰ感染能引起胃内环境改变、细胞过度增殖、使胃内自由基增加、导致胃粘膜细胞ＤＮＡ损伤、引起癌基因表达增加、ＨＰ毒素作用于胃粘膜以及ＨＰ本身的基因改变等     

蛋白激酶C活性的阻抑对人胃癌细胞BGC－823恶性表型的影响

以人胃癌细胞ＢＧＣ－８２３为模型，在佛波酯（ｐｈｏｒｂｏｌ１２－ｍｙｒｉｓｔａｔｅ１３－ａｃｅｔａｔｅ，ＰＭＡ）导致蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）负效应条件下，探讨了ＰＫＣ活性的阻抑与细胞恶性表型变化的相关性及其可能作用机理。ＰＭＡ（１００μｇ／Ｌ）处理ＢＧＣ－８２３细胞７２ｈ，细胞质、膜和核中ＰＫＣ活性分别下降３５．６％和７２．３％。经电泳分析，观察到细胞核蛋白质磷酸化水平也明显下降。在ＰＫＣ活性被阻抑的同时，人胃癌细胞形态发生变化，细胞呈单层生长，出现接触抑制，在软琼脂中不能形成集落。表现出部分恶性表型丢失，并且与人胃癌细胞恶化密切相关的癌基因Ｈａ－ｒａｓ基因表达也明显被阻抑。这可能是ＰＫＣ活性被阻抑引起人胃癌细胞部分恶性表型丢失的分子机理之一。     

硒对大鼠胃癌形成的作用及其与5-HT的关系

目的　探讨硒对MNNG(N甲基 N 硝基 N亚硝胍)诱导Wistar大鼠胃癌形成的作用及其与5 羟 色胺(5 HT)的关系。方法　用MNNG(20mg·kg-1)给大鼠灌胃,以诱导大鼠胃癌模型形成。用HE染色、显 微镜观察和AB PAS反应方法比较硒在MNNG诱导Wistar大鼠胃癌形成过程中的作用,用免疫组织化学SP 法和显微图像分析胃粘膜5 HT细胞的变化。结果　饮水中补充2mg·L-1和4mg·L-1的亚硒酸钠可以加 重胃粘膜的糜烂、出血,促进胃粘膜的肠上皮化生;在MNNG诱癌过程中发生了浆膜下平滑肌瘤,且亚硒酸钠 可以增加平滑肌瘤的发生率(P<0.05)。5 HT内分泌细胞的面数密度(NA)实验各组之间无显著差异,但是 低硒组平均光密度(MOD)明显高于正常对照组(P<0.01)。结论　在MNNG所致胃癌形成过程中亚硒酸钠 并不能降低大鼠胃癌的发生,其机制可能与胃粘膜5 HT的分泌成正相关。     

表皮生长因子

生长因子在体内、体外能刺激正常细胞增殖成长,癌基因的转化蛋白与细胞恶性转化密切相关,而某些多肽类生长因子或其受体又与癌基因的转化蛋白在结构上存在同源性,因此,研究生长因子的作用将有助于了解生长因子影响细胞正常生长及恶性转化的作用机制。 表皮生长因子(Epidermal growlh factor EGF)是1962年首先从雄性小鼠颌下腺     

嗜肺军团菌培养物滤液对正常人T细胞的影响

正常人ＰＢＭ经ＬｐＶ滤液作用，ＣＤ３，ＣＤ４细胞百分率及ＣＤ４／ＣＤ８比值低于对照。ＬｐＡ滤液仅在高浓度时使ＣＤ３降低。ＬｐＶ滤液并能抑制ＰＨＡ刺激的淋巴细胞转化作用，结果提示Ｌｐ胞外产物中可能含有免疫抑制性成分。     

抗凋亡基因bcl—2在胃癌和癌旁组织中的表达及其临床意义

通过抗凋亡蛋白bcl-2在胃癌、癌旁组织中的表达与分布，探讨bcl-2基因在胃癌恶性转化过程中的作用机制和临床意义。应用S－P免疫组化法检测33例胃癌、17例癌旁和13例正常胃粘膜中bcl-2蛋白的表达。正常胃粘膜中bcl-2仅一例弱表达。在胃癌和癌旁bcl-2表达均高于正常胃粘膜（P＜0．05－0．01），但胃癌与癌旁间无差异。bcl-2表达与胃癌的分化程度，病理分期，淋巴结转移等病理特征无统计学差异。结果表明bcl-2基因参与了胃癌的发生。bcl-2蛋白在胃良性病变过度表达，一旦癌变，细胞的阳性表达不再升高，这可能与bcl-2抑制细胞凋亡的强度不再增加有关。     

幽门螺旋杆菌对大鼠和人胃粘膜细胞株增殖的影响

本工作观察了幽门螺旋杆菌菌体超声粉碎提取物对大鼠胃粘膜细胞株ＲＧＭ１和人胃腺癌细胞株ＢＧＣ－８２３增殖的影响。结果显示Ｈｐ提取物对两种细胞增殖的影响不一：在ＲＧＭ１细胞,Ｈｐ提取物作用使ＭＴＴ比色法ＯＤ值和＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入值明显降低,在ＢＧＣ－８２３细胞,Ｈｐ提取物作用使ＭＴＴ比色法ＯＤ值和＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入值明显增高。表明Ｈｐ提取物抑制大鼠胃粘膜细胞株增殖而促进人胃腺癌细胞株增殖。提示细胞的状     

cagA和cagM在中国人群感染幽门螺杆菌中的检测

ｃａｇ致病岛(ｃａｇｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙｉｓｌａｎｄ)为新近在ｃａｇＡ表达阳性的幽门螺杆菌(Ｈｐ)菌株中发现的又一致病相关的基因群,其编码蛋白被认为是毒素及毒素转运机能相关的分泌系统。ｃａｇ致病岛被认为是由水平转移的方式来源于质粒或噬菌体,具有部分或全部丢失等不稳定性表现。通常ｃａｇ致病岛在Ｈｐ中呈连续状态存在,少部分被插入序列分割基金项目:国家自然科学基金资助项目(Ｎｏ.39670648);欧共体委员会科学基金资助项目(ＩＣ18ＣＴ950024)作者单位:第二军医大学长海医院消化内科通信作者:刘炯,200433上海,第二军医大…