非小细胞肺癌呼出气冷凝液中p16基因突变及表达分析

目的探讨在呼出气冷凝液(EBC)中检测p16基因突变对于非小细胞肺癌(NSCLC)诊断的可行性及临床意义。方法选取自2010年3月至2012年4月就诊于南通大学第二附属医院的58例NSCLC患者及同期于本院进行体检的健康体检者30例为研究对象。应用聚合酶链反应(PCR)扩增及基因测序方法检测两组研究对象EBC中p16基因1-2号外显子的变异情况。分析p16基因突变与肺癌患者临床病理特征的关系。结果 58例NSCLC患者EBC标本中,成功检测54例EBC标本,其中,8例发生突变,1号外显子突变3例,2号外显子突变5例,总突变率为14.8%(8/54)。健康体检者EBC中均未检测到p16基因突变。EBC中p16基因突变在性别、吸烟史、组织类型、分化程度、有无淋巴结转移等分组中比较,差异均无统计学意义(P>0.05);EBC中p16基因突变在不同肿瘤分期间比较,差异有统计学意义(P<0.05),提示p16基因突变率与肿瘤分期具有相关性。结论在NSCLC患者EBC中可以检测到p16基因突变。EBC中p16基因突变检测有可能为临床辅助诊断NSCLC提供一种新的途径。EBC中的p16基因可作为诊断NSCLC的分子生物学标志物之一。     

NPM1基因突变在急性髓系白血病中的作用

 目的 探讨急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者中NPM1基因突变发生情况,并了解其临床特征及预后.方法 采用基因组DNA-PCR方法扩增39例初发AML患者骨髓单个核细胞NPM1基因,直接测序法检测AML患者NPM1基因第12外显子的突变情况.结果 (1)39例初发AML患者中NPM1突变7例(17.9%),其中A型突变6例,B型突变1例.(2) NPM1突变在22例染色体正常核型AML中的发生率27.3%(6/22),显著高于异常核型7.7%(1/13)(P<0.01).(3)临床数据显示NPM1基因突变患者外周血白细胞计数高于野生型患者,NPM1基因突变患者具有较高的临床完全缓解率(CR).结论 NPM1基因突变是AML尤其是正常核型AML患者常见的分子学异常,单纯NPM1基因突变患者外周血白细胞数比例较高,预后较好.     

口腔鳞癌患者基因突变情况分析及其对预后影响

目的 分析口腔鳞癌患者基因突变情况及其对预后的影响。方法 回顾性分析北部战区总医院自2017年10月至2021年10月收治的接受手术治疗的30例口腔鳞癌患者的临床资料。根据基因检测结果将患者分入突变组(存在基因突变)和无突变组(无基因突变),并比较两组患者的一般资料,同时记录基因突变情况。对所有患者进行术后24个月的随访,统计患者复发情况,分析突变基因与预后的相关性。结果 突变组和无突变组患者一般资料比较,差异无统计学意义(P>0.05)。22例基因突变患者共检出94个基因的145个突变,其中,以TP53、TERT、ERBB2、PKHD1、PIK3CA最多。单核苷酸变异中,C>T(G>A)突变发生频率最高。随访期内,突变组22例患者中,复发6例,未复发16例。TP53、TERT、ERBB2突变与复发具有相关性(P<0.05)。在存在C>T(G>A)突变的13例患者中,3例复发,10例未复发。C>T(G>A)突变不影响患者预后(P>0.05)。结论 TP53、TERT、ERBB2突变在口腔鳞癌患者中较为常见且可能影响患者复发。     

骨恶性肿瘤中P_(21)基因的改变及其预后意义

采用PCR—SSCP及RNA打点杂交技术对18对骨恶性肿瘤及相应瘤旁组织同时进行P_(21)基因突变及表达程度的检测,并结合3年的随访结果对P_(21)基因突变及高表达与骨肿瘤患者的预后进行了探讨。结果发现:①18例骨肿瘤中有3例突变,4例呈高表达,其中3例为伴有突变标本,还有1例为恶性纤维组织细胞瘤标本。②P_(21)突变或高表达患者与P_(21)突变或高表达患者之间的死亡率存在显著性差异(P<0.05)。结论:P_(21)基因以突变、高表达方式参与骨肿瘤发生发展,检测P_(21)基因有无突变或高表达可辅助判断骨恶性肿瘤病程及预后。     

应用基因芯片技术检测乙型肝炎病毒前-C区/BCP区基因突变的研究

目的　探讨利用基因芯片技术检测乙型肝炎病毒 (HBV)前 C区 /BCP区基因突变方法的临床价值及前 C区 /BCP区基因突变的临床意义。方法　应用基因芯片技术检测 4 6例急慢性肝病的HBV前 C区A1896 (nt1896G→A)、A1899(nt1899G→A)及HBVC基因启动子 (BCP)T176 2A176 4 (nt176 2A→T、nt176 4G→A)四位点突变 ,并探讨该技术的临床应用价值。结果　用基因芯片法测定HBV基因特定变异位点特异性强 ,阳性率为 87 0 %。A1896突变 18例 (4 5 0 % ) ,A1899突变 10例 (2 5 0 % ) ,T176 2A176 4联合突变 30例(75 0 % ) ,多位点突变 14例(35 0 % )。各变异组与未变异组比较 ,肝功损害均有显著性差异 (P <0 0 5～ 0 0 1)。前 C区 /BCP区基因突变在乙型肝炎肝硬化及慢性乙型肝炎中较为常见 ,在急性乙型肝炎中未检出。结论　应用基因芯片法测定HBV特定变异位点特异性强 ,可一次同时检测多个突变位点 ,具有一定的临床应用价值。     

哈萨克族人群中FVLeiden突变的研究

目的　研究分析中国新疆哈萨克族健康人群中FVLeiden突变的发生率。方法　应用多聚酶链反应 限制性片段长度多态性分析 (PCR RFLP) ,对新疆地区 183例 (汉族 98例 ;哈萨克族 85例 )健康个体进行FVLeiden基因突变研究分析。结果　哈萨克族人群中检出 3例FVLeiden(FVArg50 6→Gln)突变杂合子 ;汉族人群中均无该突变类型。结论　中国新疆地区哈萨克族人群中存在FVLeiden基因突变 ,而汉族人群中未检测到该类型突变 ,FVLeiden突变可能不是中国人群静脉血栓 (VT)发病的主要危险因素。不同种族人群的VT致病的分子机制存在差异。     

幽门螺杆菌感染与hMLH1和APC基因突变及hMLH1甲基化异常的关系

目的　探讨幽门螺杆菌 (H .pylori)感染与hMLH1和APC突变及甲基化异常的关系。方法　采用改良的Giemsa染色和PCR方法检测H .pylori;采用二维DNA电泳、DGGE电泳和DNA测序技术检测hMLH1和APC突变 ;采用甲基化特异性PCR检测hMLH1启动子区的甲基化状态 ;采用以PCR为基础的方法检测微卫星DNA不稳 (MSI)。结果　 6 8例胃癌中检出hMLH1基因突变 3例 ,突变率为 4 4 %。APC基因突变 15例 ,突变率为 2 2 1%。hMLH1突变与肿瘤大小、分化程度、组织学类型、浸润深度和临床病理分期无显著相关。APC突变率在肠型胃癌显著高于弥漫型胃癌 (P <0 0 5 )。正常胃黏膜未见hMLH1高甲基化。 6 8例胃癌中检出hMLH1高甲基化 11例 ,占 16 2 % ,均为去甲基化和高甲基化并存。将MSI分为高频率MSI(MSI H ,≥ 2个位点 ) 8例、低频率MSI(MSI L ,仅为 1个位点 ) 9例和MSI阴性 (MSS) 5 1例三组 ,结果 3例hMLH1基因突变均发生于MSI H组 ,而MSI L和MSS组未见 ;APC突变均发生于MSI L和MSS组 ,而MSI H组未发现有APC突变者 ;MSI H组hMLH1高甲基化的检出率显著高于MSI L和MSS组 (P <0 0 1)。hMLH1和APC基因突变及hMLH1甲基化在H pylori阳性组和H pylori阴性组及CagA 组和CagA-组检出率差异均无统计学意义 (P>0 0 5 )。结论　hMLH1突变和     

肿瘤标志物联合CT特征对肺腺癌表皮生长因子受体基因突变的预测价值

目的:探讨肿瘤标志物联合CT特征对肺腺癌表皮生长因子受体(EGFR)基因突变的预测价值.方法:收集132例经病理确诊的肺腺癌患者治疗前的肿瘤标志物、CT特征及组织学EGFR基因检测结果,并根据EGFR基因检测结果分为突变组(61例)和未突变组(71例).将肿瘤标志物及肿瘤标志物联合CT特征分别构建Logistic回归模...     

肺癌病理特征及CT征象与EGFR的相关性分析

目的 探讨肺癌病理特征、CT征象与EGFR的相关性分析。方法 选取我院2019年6月～2020年6月期间住院患者96例,患者均在术前2周内接受肺薄层高分辨率CT检查,并于术后进行组织病理分析确诊为肺腺癌。所有病灶均进行EGFR基因检测,统计患者临床病理、组织病理以及CT检测表现,分析其与EGFR基因突变之间的相关性。结果 经分析存在EGFR基因突变患者46例,EGFR基因未突变50例,主要为19号外显子和21号外显子突变,无吸烟者EGFR基因突变发生率高于吸烟者(P <0.05);病灶直径3 cm以下EGFR基因突变发生率高于3 cm及以上(P <0.05),有胸腺侵犯者EGFR基因突变发生率高于无胸腺侵犯者(P <0.05);病灶含实性成分灶EGFR基因突变率高于纯磨玻璃病灶(P <0.05),有毛刺征灶EGFR基因突变率高于无毛刺征灶病灶(P <0.05),有胸膜凹陷征灶EGFR基因突变率高于无胸膜凹陷征灶(P <0.05); EGFR基因突变患者TTP、BV水平高于EGFR基因未突变者(P <0.05)。结论病灶直径在3 cm以下,存在胸...     

应用聚合酶链反应——单链构象多态技术检测大肠癌P53基因的研究

 为探讨P<'53>基因突变在大肠癌发生过程中的分子机制,应用聚合酶链反应一单链构象多态性(PGR-SS-CP)技术对30例大肠腺癌组织中P<'53>基因外显子5、6、7和8分别进行检测.结果发现16例(53.33%)大肠癌组织出现了反映P<'53>基因突变的异常条带.高、中、低分化腺癌中P<'53>基因突变率分别为33.33%、50%和70%.提示P<'53>基因突变与大肠癌的发生和发展有关.PCR-SSCP能在DNA片段的不同部位检测DNA多态性和点突变,且灵敏、快速.该方法对大肠癌的基因诊断具有应用价值.     

无活性放线菌野生株抗肿瘤活性突变株的自发突变抗性筛选和化学诱变抗性筛选

目的由无活性放线菌野生株转化获取活性突变株,为药源活性产物研究拓展新菌株资源。方法以海洋来源无活性放线菌野生株L35-1为出发菌株,通过自发突变抗性筛选以及化学诱变结合抗性筛选,筛选获得抗性突变株。采用MTT法检测突变株发酵样品对K562细胞的抑制活性。结果通过自发突变抗性筛选,得到新霉素抗性突变株114株、链霉素抗性突变株68株,其中7株新霉素抗性突变株和3株链霉素抗性突变株样品对K562细胞有抑制作用,在100μg/ml浓度下抑制率大于20%。通过化学诱变结合抗性筛选,得到硫酸二乙酯诱变链霉素抗性突变株41株、硫酸二乙酯诱变新霉素抗性突变株32株、亚硝基胍诱变新霉素抗性突变株46株,其中1株硫酸二乙酯诱变链霉素抗性突变株和1株亚硝基胍诱变新霉素抗性突变株有抗肿瘤活性,100μg/ml样品对K562细胞的抑制率大于20%。结论上述结果初步表明,无活性放线菌野生株可通过抗性筛选转化为活性突变株,因此有可能成为筛选获取药源活性新菌株的重要原始资源。     

Mutation rate evaluation at 21 autosomal STR loci: Paternity testing experience

The short tandem repeats (STRs) or microsatellites are used for paternity testing and these sequences mutate more rapidly than bulk DNA sequences. A total of 746 paternity cases were analysed to understand the mutation rate of 21 autosomal STR loci. We identified 41 mutations in 11 STR Loci with a maximum at SE33. No mutations occurred in the remaining 10 STR loci. The overall average mutation rate was estimated as 0.004523 and the estimated locus-specific mutation rate varied between 0.001214 and 0.016990. Among these 90.24% was accounted for single-step mutation, 2.44% for two steps, and 7.32 % for three or muti steps. The obtained data is crucial and could be helpful for ensuring the accuracy of DNA testing and interpretation.     

利用RAPD分子标记检测空间飞行诱导的蕃茄DNA突变

为快速、有效地分析经空间飞行的蕃茄基因组ＤＮＡ，采用了随机引物扩增多态ＤＮＡ分析的分子标记方法，检测了基因序列的多态性。蕃茄种子搭载返地卫星，空间飞行３５５ｈ，回收后地面种植，选择三个同工酶有差异的空间处理植株进行ＲＡＰＤ检测。结果表明：在５０个供试引物中，有１８个扩增出了ＤＮＡ带，共有１５６条，其大小在２００￣２０００ｂｐ之间。     

一种国产基因芯片用于乙型肝炎病毒P基因突变的检测

目的：验证国产基因芯片检测HBV—P基因突变的准确性和敏感性。方法：选择14例服用拉米夫定48周时HBV—DNA定量检测仍阳性的慢性乙型肝炎病人的血清标本，用HBV基因突变检测基因芯片检测患者血清中HBV—DNA聚合酶基因，观察发生YMDD变异的情况。同时用聚合酶链反应(PCR）技术扩增上述血清标本中编码HBV—DNA聚合酶的P基因片段并直接测序，以对比检查P基因发生YMDD变异的情况。结果：14例患者血清标本用基因芯片均检出HBV—DNA，9例为野生株，5例发生YMDD变异，其中3例为M552I(YIDD)变异，2例为M552V(YVDD)变异，同时均伴有L528M变异。与用PCR扩增产物直接测序的结果完全相同。结论：国产HBV基因突变检测芯片具有特异性强、灵敏性高、快速、简便等优点，可以替代繁琐的DNA序列测定和分析，可作为临床监测HBV—DNA变异的常规方法。     

在分子克隆中用PCR进行定点突变

目的：在视蛋白基因启动子上增加一个XbaI酶切位点。方法：设计突变引物，用致突变PCR的条件引入突变，然后对产物作酶切鉴定并测序。结果：除人工引入突变的地方产生预期突变外，其它的碱基序列无改变。结论：定点突变成功。     

一种用于上调内源性人SOD1表达多肽筛选的随机文库及细胞系的构建

目的以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为示踪物,建立一种简便、经济、有效的随机多肽文库,为进一步筛选出可上调内源性人SOD1表达多肽的药物奠定基础。方法采用点突变技术,在pET-14b-His-Tat-EGFP载体多克隆位点XhoI之后插入12个随机多肽的36个随机碱基序列。用阳离子脂质体LipofectamineTM2000包裹已构建的重组质粒pDsRed1-1-SOD1p后,转染NIH/3T3细胞,荧光显微镜观察SOD1启动子驱动的红色荧光蛋白的表达。用G418筛选稳定表达SOD1启动子驱动的红色荧光蛋白的细胞系,荧光显微镜检测红色荧光蛋白的表达及定位。结果在示踪载体的基础上构建的随机多肽文库理论上至少包含了107个独立克隆,且几乎所有克隆插入的随机片段都是36个碱基。稳定转染3个月后,重组质粒转染的细胞质及细胞膜上均有携带SOD1启动子的红色荧光蛋白的表达。结论成功建立随机多肽表达文库,获得了稳定表达SOD1启动子驱动的红色荧光蛋白的NIH3T3细胞系。     

金黄色葡萄球菌ltaS突变株的构建与eLtaS蛋白的表达

目的通过构建金黄色葡萄球菌(SAU)ltaS突变株以及体外重组表达其胞外形式的eLtaS蛋白,研究LtaS以及eLtaS蛋白在SAU中的生物学功能。方法利用同源重组的方法构建SAU 8325-4来源的ltaS缺失突变菌株,并对其生长以及外毒素水平进行检测;同时,在大肠杆菌中,体外重组表达并纯化eLtaS蛋白,继而观察其对SAU生长的影响。结果在SAU 8325-4中成功构建了ltaS缺失突变菌株,并发现ltaS突变株生长较野生型菌株缓慢;通过表达纯化成功获得高纯度的eLtaS蛋白,其与突变株共培养后对突变株的生长缓慢现象没有回复作用。结论 LtaS蛋白在SAU侵袭机体的过程中发挥着重要的功能,其胞外形式的eLtaS蛋白可能未参与脂磷壁酸(lipotei-choic acid,LTA)的合成。     

鼠疫耶尔森菌生物型变异遗传基础的研究和新生物型--田鼠型的提出

目的 探究鼠疫耶尔森菌生物型变异的遗传基础。方法 通过全基因组序列的比较分析,鉴定可能与生物型变异相关的基因突变,采用DNA测序和位点特异性PCR的方法,分析基因突变在鼠疫耶尔森菌自然分离株中的分布。结果 田鼠鼠疫自然疫源地菌株在毒力、生化表型和分子特征上与其他型别鼠疫耶尔森菌相差很大。所有脱氮阴性菌株的napA基因发生了突变,所有甘油利用阴性菌株的glpD基因发生了突变,所有阿拉伯糖利用阴性菌株的araC基因发生了突变。结论 提出了一个新的生物型——田鼠型;相应糖醇代谢相关基因发生突变是4个生物型变异的遗传基础。     

金黄色葡萄球菌ltaS突变株的构建与eLtaS蛋白的表达

目的通过构建金黄色葡萄球菌（SAU）ltaS突变株以及体外重组表达其胞外形式的eLtaS蛋白,研究LtaS以及eLtaS蛋白在SAU中的生物学功能。方法利用同源重组的方法构建SAU 8325-4来源的ltaS缺失突变菌株,并对其生长以及外毒素水平进行检测;同时,在大肠杆菌中,体外重组表达并纯化eLtaS蛋白,继而观察其对SAU生长的影响。结果在SAU 8325-4中成功构建了ltaS缺失突变菌株,并发现ltaS突变株生长较野生型菌株缓慢;通过表达纯化成功获得高纯度的eLtaS蛋白,其与突变株共培养后对突变株的生长缓慢现象没有回复作用。结论 LtaS蛋白在SAU侵袭机体的过程中发挥着重要的功能,其胞外形式的eLtaS蛋白可能未参与脂磷壁酸（lipotei-choic acid,LTA）的合成。     

银染PCR—SSCP法检测横纹肌肉瘤p53基因点突变

应用银染ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法和免疫组织化学ＡＢＣ法，检测３０例横纹肌肉瘤（ＲＭＳ）中ｐ５３基因突变及其蛋白表达。结果显示：３０例ＲＭＳ中，７例ＳＳＣＰ阳性（２３．３％）。表明这些病例相应ＤＮＡ片段中发生了点突变，其中第５、６、７、８外显子ＳＳＣＰ阳性出现的例次分别为０、０、５、４次。ｐ５３蛋白表达率６６．７％（二者符合率５６．７％）。ｐ５３基因突变及蛋白表达与年龄、性别、肿瘤组织类型无关。而与肿瘤