人正常骨髓CD34~ 造血细胞体外扩增形成红系及混合系造血祖细胞的能力

根据阳性选择策略，采用ＣＩＭＳ－１００免疫磁性无菌分离系统富集人正常骨髓ＣＤ３４＋造血细胞，然后将其在含Ｅｐｏ＋ＧＭ－ＣＳＦ＋ＩＬ－３＋ＩＬ－６＋ＳＣＦ（简ＥＧＩＳ）组合造血生长因子的无基质液培体系中扩增４周，定期进行单个核细胞计数、ＢＦＵ－Ｅ及ＣＦＵ－Ｍｉｘ的培养。经ＦＡＣＳ鉴定所富集的ＣＤ３４＋造血细胞纯度平均＞９０％。人正常骨髓ＣＤ３４＋造血细胞在该条件下均可持续产生大量单个核细胞，最高可扩增１７７０倍。与ＨＰＰ－ＣＦＣ和ＣＦＵ－ＧＭ相反，ＢＦＵ－Ｅ和ＣＦＵ－Ｍｉｘ扩增量较低，最高仅为２．３６和２．４倍，且仅在第１周出现，随后迅速减少至停止。     

四种造血生长因子对小鼠骨髓巨核系祖细胞集落体外形成的影响

在小鼠巨核系祖细胞集落体外甲基纤维素常规培养基础上，观察了ＥＰＯ、ｒｈＩＬ－３、ｒｈＩＬ－６及ｒｈＧＭ－ＣＳＦ４种造血生长因子单独或两种因子联合对小鼠骨髓ＣＦＵ－ＭＫ形成的作用。结果提示，除ｒｈＩＬ－３外，ＥＰＯ、ｒｈＩＬ－６和中６Ｍ一ＣＳＦ均有一定程度的刺激小鼠骨髓ＣＦＵ－ＭＫ形成的活性，其中以中６Ｍ－ＣＳＦ刺激活性最强，且呈剂量依赖性；ｒｈＩＬ－６和ｒｈＩＬ－３或ｒｈＧＭ－ＣＳＦ之间联合应用时，有协同促进ＣＦＵ－ＭＫ生成的作用，但５００Ｕ／ｍｌ的ｒｈＩＬ－３和１０ｎｇ／ｍｌ的ｒｈＧＭ－ＣＳＦ联合应用时，未观察到两者之间的协同刺激活性。     

人正常骨髓CD34＋造血细胞体外扩增形成红系及混合系造血祖…

根据阳性选择策略，彩ＣＩＭＳ－１００免疫磁性无菌分离系统富集人正常骨髓ＣＤ３４＋造血细胞，然后将在含Ｅｐｏ＋ＧＭ－ＣＳＦ＋ＩＬ－３＋ＩＬ－６＋ＳＣＦ组合造血生长因子的无基质液培体系中扩增４周，定期进行单个核细胞计数、ＢＦＵ－Ｅ及ＣＦＵ－Ｍｉｘ的培养。     

脐血与成人外周血,骨髓中造血干／祖细胞数量汲增殖比较

应用免疫磁珠分离法及甲基纤维素体外集落培养法分别观赏了脐血、成人外周血及骨骨右ＣＤ３４＾＋细胞数疸和ＣＦＵ－Ｍｉｘ、ＣＦＵ－ＧＭ、ＣＦＵ－Ｅ及ＢＦＵ－Ｅ集落形成情况，并进行了比较研究，结果显示脐血造血干／祖细胞数量及增殖能力明显高于成人外周血和骨髓，脐血中ＣＤ３４＾＋细胞数分别是成人外周血和骨髓的２０￣４０倍和４￣５倍，脐血外周血的４倍和３倍，而与骨髓基本相当。     

rhGM－CSF对狗骨髓辐射损伤治疗作用的定量病理研究

目的：为了解细胞因子对骨髓辐射损伤的治疗作用。方法：用＾６０Ｃｏγ射线以５．５Ｇｙ照射１４只比格狗条，静脉注射低剂量（１０μｇ／ｋｇ·ｄ）及高剂量（２０μｇ／ｋｇ·ｄ）ｒｈＧＭ－ＣＳＦ，连续２０天，动物于照射后３０天活杀取胸骨，采用Ｈ·Ｅ及Ａｇ－ｎｏｒ嗜银蛋白染色和图像分析等技术，定量研究了ｒｈＧＭ－ＣＳＦ对骨髓造血的促进作用。结果表明：高剂量的ｒｈＧＭ－ＣＳＦ对狗骨髓辐射损伤后造血重建有明显的促     

rhGM－CSF对狗骨髓辐射损伤治疗作用的定量病理研究

目的；为了解细胞因子对骨髓辐射损伤的治疗作用。方法：用６０Ｃｏγ射线以５．５Ｇｙ照射１４只比格狗后，静脉注射低剂量（１０μｙ／ｋｇ·ｄ）及高剂量（２０μｇ／ｋｇ·ｄ）ｒｈＧＭ－ＣＳＦ，连续２０天，动物于照射后３０天活杀取胸骨，采用Ｈ·Ｅ及Ａｇ－ｎｏｒ嗜银蛋白染色和图像分析等技术，定量研究了ｒｈＧＭ－ＣＳＦ对骨髓造血的促进作用。结果表明：高剂量的ｒｈＧＭ－ＣＳＦ对狗骨髓辐射损伤后造血重建有明显的促进作用，即ｒｈＧＭ－ＣＳＦ能使骨髓中有核细胞数显著增多；能使增殖活跃的单核系细胞亦增多，与照射对照组比，差异均具有统计学意义（Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．０５）。讨论：高剂量ｒｈＧＭ－ＣＳＦ对狗骨髓造血功能的重建有促进作用。     

重组人铜锌超氧化物歧化酶对小鼠骨髓造血粒─巨系祖细胞的辐射防护作用

目的：探讨重组人铜锌超氧化物歧化酶（ｒｈＣｕＺｎＳＯＤ）的辐射防护作用及其机理。方法：通过γ线辐射损伤小鼠的体内和体外实验，观察了ｒｈＣｕＺｎＳＯＤ和聚乙二醇修饰的ｒｈＣｕＺｎＳＯＤ（ＰＥＧ－ｒｈＣｕＺｎＳＯＤ）对小鼠骨髓造血粒－巨系祖细胞克隆产生率（ＣＦＵ－ＧＭ）的影响。结果：体内实验，小鼠整体照射，静脉给药，以上两种酶（２５`０～３００ｍｇ／ｋｇ）均能非常显著地提高ＣＦＵ－ＧＭ的数量。其中以照射前后联合给药效果最好。而单纯照射前给药，ｒｈＣｕＺｎＳＯＤ仅在照前１小时给药效果较好；ＰＥＧ－ｒｈＣｕＺｎＳＯＤ则在照前３小时或照前１小时给药都有较好的效果。体外实验，小鼠离体细胞照射并给药，未见ｒｈＣｕＺｎ－ＳＯＤ对ＣＦＵ－ＧＭ的影响。结论：以上两种酶对小鼠骨髓ＣＦＵ－ＧＭ有良好的辐射防护作用，其机理可能是通过机体防御系统作用的间接途径实现的。ＰＥＧ－ｒｈＣｕＺｎＳＯＤ的生物半衰期较长，可增加给药时机，因而具有更大的实用价值。     

重组人粒—巨噬细胞集落刺激因子对6.5Gy不均匀照射犬造血功…

重组人粒－巨噬细胞集落刺激因子（ｒｈＧＭ－ＣＳＦ）在白血病及肿瘤病人大剂量放化疗白细胞减少性疾病的治疗中显示出了良好的前景。ｒｈＧＭ－ＣＳＦ可明显改善屏蔽全骨盆后６．５Ｇｙ＾６０Ｃｏγ线照射犬的临床症状，加速外周血白细胞的恢复，提高白细胞的最低值，缩短白细胞减少的持续时间。可明显增加照射犬骨髓有核细胞数及骨髓细胞数，促进骨髓ＣＦＵ－ＧＭ的增殖，提高骨髓细胞的粒／红比值。可应用于事故性骨髓型急性放射     

rhG-CSF在一例急性放射病治疗中的应用

ｒｈＧ－ＣＳＦ在一例急性放射病治疗中的应用陈虎王桂林罗庆良胡亮钉江岷秦茂权夏贞彪近１０年来，重组人类造血生长因子（ｒｈＨＧＦ）的基础与临床应用研究不断深入，其中具有代表性的粒－巨噬细胞集落刺激因子（ｒｈＧＭ－ＣＳＦ）、粒系集落刺激因子（ｒｈＧ－ＣＳＦ...     

创伤患者外周血树突状细胞免疫功能研究

为了解创伤性骨折患者外周血树突状细胞（ＤＣ）免疫功能变化和粒／巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）及白介素－４（ＩＬ－４）对其免疫功能的影响，笔者检测ＧＭ－ＣＳＦ及ＩＬ－４联合刺激前后骨折患者ＤＣ表面人类白细胞抗原－ＤＲ（ＨＬＡ－ＤＲ）和Ｂ７－１表达...     

慢病毒颗粒包装、浓缩及对脐带血CD34^＋细胞感染

目的：建立慢病毒包装、浓缩及感染脐带血CD34＋细胞的条件方法。方法：采用第3代慢病毒系统包装病毒上清,结合超滤和超速离心两种方法对病毒进行浓缩。联合应用体外扩增培养,促进静止期细胞进入细胞周期、感染过程中促进细胞黏附和固定及重复感染等方法促进病毒感染。结果：CD34＋细胞体外培养48h,细胞表面CD34标志物表达水平没有明显改变,通过两步法浓缩后,病毒滴度可达5.06×10^7/ml,对脐带血CD34＋细胞的感染效率可达37.7%。结论：通过上述方法可以获得滴度为107/ml以上的慢病毒上清,实现对脐带血CD34＋细胞的有效感染。     

Sprague-Dawley大鼠外周血来源间充质干细胞的动员、分离培养及鉴定

目的:探讨Sprague-Dawley大鼠外周血来源间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)的动员、分离培养及鉴定方法,分析其表面标记和多向分化潜能,为运动创伤中的细胞治疗和组织工程产品培育提供新来源的、可以微创获得和自体细胞移植的种子细胞。方法:联合动员大鼠外周血MSC,采集腹主动脉外周血4 ml,使用淋巴细胞分离液结合密度梯度离心方法分离外周血单核细胞,体外培养至第3代,于显微镜下观察其形态和生长状态。取第3代MSC,鉴定其表型并向成骨、成脂和成软骨诱导分化,以证明其干细胞的特性。结果:经淋巴分离液结合密度梯度离心方法分离培养的外周血单核细胞,3~5天可见少量长梭形细胞贴壁,7~9天见细胞成簇生长,并形成克隆集落。第3代细胞形态较均一,生长增殖良好;表达典型的MSC标记CD44和CD90,不表达造血干细胞标记CD34和CD45。成骨诱导21天后,茜素红和ALP染色阳性,有矿化结节形成。成脂诱导21天后,油红O染色阳性,细胞内有脂滴形成。细胞微团无血清成软骨诱导21天后,甲苯胺蓝染色阳性,细胞外有蛋白多糖分泌;免疫组织化学染色示,特异性软骨基质II型胶原表达阳性。结论:采用联合药物动员方法能促进干细胞向外周血释放,分离培养的外周血干细胞经鉴定为MSC,体外具备三系分化潜能,有望成为运动创伤中新的细胞治疗和组织工程产品培育的种子细胞来源。     

以人胎肝基质细胞为饲养层有效扩增脐带血CD34~＋细胞

目的以人胎肝基质细胞（fetal liver stromal cell,FLSC）作为饲养层,进行脐带血CD34＋细胞的扩增培养,寻找更加有效的体外扩增方法。方法比较脐带血CD34＋细胞在无饲养层和人FLSC饲养层条件下,培养7,13,15d的细胞增殖状况;并利用流式细胞仪检测不同时间点CD34＋细胞的比例。结果随着培养时间的延长,脐带血CD34＋细胞的扩增呈现时间依赖性改变;在FLSC饲养层条件下,CD34＋细胞培养7,13,15d的扩增数量分别为（11.83±0.76）×105,（14.37±0.32）×105和（18.73±0.25）×105,而在无饲养层条件下的扩增数量分别为（2.90±0.10）×105,（8.87±0.15）×105和（11.97±0.15）×105,两者相比有显著性差异（P（0.01）;此外,流式细胞仪检测各时间点CD34＋细胞的比例,在培养第13天,FLSC饲养层条件下CD34＋细胞的比例为10.21%,而在无饲养层为1.01%,两者存在显著差异。结论以人FLSC作为饲养层可以有效扩增脐带血造血干/祖细胞,为今后临床造血干细胞移植提供充足的细胞来源。     

骨髓和动员外周血中CD34+细胞基因表达差异的研究

为探讨骨髓的造血干细胞和动员的外周血造血干细胞在基因表达水平是否有差别，作者以CD34抗原作为造血干细胞的标记，筛选出同一个供者的静息散骨髓和经G－CSF（granulocyte colony-stimulating factor）动员后的外周血CD34^ 细胞，用抑制性消减杂交（suppression subtractive hybridization,SSH）技术检测两种来源的CD34^ 细胞的基因表达差异。结果发现，动员外周血CD34^ 细胞有１１个高表达基因，主要涉及的基因有核蛋白、转录调节因子、锌指蛋白和干扰素相关的分析。提示动员外周血CD34^ 细胞与静息期骨髓CD34^ 细胞基因表达谱并不完全相同，从而导致其生物学行为的差异。因此，进一步的研究可能对造血干细胞的迁移、归巢过程有更深的了解，对如何加速造血干细胞移植后造血功能的恢复具有一定的意义。     

IL-11对造血的刺激作用及其在辐射损伤治疗中的应用

体内外实验结果表明,IL-11(白细胞介素-11)可刺激骨髓巨核系、粒系和红系造血祖细胞的增殖,升高外周血小板、白细胞和红细胞数。因此,IL-11作为一种新的刺激骨髓造血细胞增殖的细胞因子具有它的特殊价值,可用于平时辐射事故病人和核战时伤员的救治,也可用于癌症患者放、化疗后造血功能低下的治疗,具有广阔的临床应用前景。     

成人骨髓间充质干细胞培养上清对人脐血间充质干细胞体外培养及扩增的支持作用

目的：研究人骨髓间充质干细胞培养上清对人脐带血（HUCB）中所含有间充质干细胞（MSCs）的影响。方法：取脐带血，肝素抗凝，Percoll淋巴细胞分离液分离出单个核细胞，低糖DMEM培养获得贴壁细胞层。与人骨髓间充质干细胞培养上清共孵育。流式细胞仪检测表面抗原。结果：脐带血的单个核细胞与人骨髓间充质干细胞培养上清共孵育经体外培养贴壁后出现形似纤维状细胞形态并表达与MSCs相关的抗原（CD13，CD44，CD71，CD166）。但不表达造血细胞抗原（CD34，CD45），这与源于骨髓的MSCs一致。结论：人脐血间充质干细胞与骨髓间充质干细胞培养上清共孵育，对脐血间充质干细胞体外分离培养及扩增有支持作用。     

IL-15与IL-21细胞因子组合优化临床级人NK细胞培养体系

目的探讨IL-15、IL-21细胞因子组合建立的临床级人NK细胞培养体系对NK细胞增殖、免疫细胞表型和细胞毒作用的影响。方法分离9例健康志愿者外周血单个核细胞(PBMCs),根据以下3组进行扩增培养:(1)对照组(我科临床级人NK细胞培养体系),(2)IL-15组(对照组+IL-15),(3)IL-15/IL-21组(对照组+IL-15+IL-21)。台盼蓝拒染法计数细胞总数和活力;流式细胞术分析免疫细胞表型和NK细胞活化受体表达;乳酸脱氢酶释放法检测细胞毒活性。结果培养至14 d,IL-15/L-21组细胞总数明显升高,NK细胞增殖倍数达到(761.68±449.30)倍,明显高于IL-15组,差异有统计学意义(P<0.05);IL-15/IL-21组明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。3组培养物中CD3~-/CD56~+细胞百分率比较,IL-15/IL-21组和IL-15组明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),但IL-15/IL-21组和IL-15组比较,差异无统计学意义(P>0.05);3组中CD3~+/CD4~+细胞百分率均呈下降趋势,且IL-15/IL-21组和IL-15组明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),但IL-15/IL-21组和IL-15组比较,差异无统计学意义(P>0.05);3组中总CD3~+细胞百分率比较,IL-15组明显低于对照组(P<0.05),但IL-15/IL-21组和IL-15组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。IL-15/IL-21组NKG2D活化受体表达水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),但与IL-15组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。3组中CD3~+/CD56~+细胞百分率、CD3~+/CD8~+细胞百分率以及NKp46活化受体的表达水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。相同的效靶比,3组细胞的细胞毒作用比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论采用IL-15/IL-21组合优化人NK细胞培养体系,可以选择性地扩增NK细胞,提高培养物中NK细胞数量和细胞总数,以及活化受体NKG2D的表达水平,这将为优化临床级人NK细胞制备体系提供科学依据。     

再生障碍性贫血患者T淋巴细胞早期激活功能的研究

目的:了解再生障碍性贫血(AA)患者T淋巴细胞早期激活功能的变化。方法:应用流式细胞仪分析了34例AA患者骨髓和外周血单个核细胞T淋巴细胞亚群的变化以及CD4 和CD8 T细胞培养前后CD69的表达情况。结果:AA患者存在T细胞亚群数量的异常,CD4 /CD8 比值的下降与对照组比较有显著差异。重症AA患者体内有一部分CD4 与CD8 细胞表达CD69,而慢性AA患者只有部分CD8 细胞表达CD69,应用PHA刺激T细胞4 h后,AA和正常对照CD4 与CD8 T细胞CD69的表达率均迅速升高,但重症AA和慢性AA患者CD69的表达率均显著高于正常对照。结论:AA患者不仅存在T细胞数量异常,而且其T细胞早期激活功能也异常,可能与AA发病机制有关。     

Reversible effect of MR and ELF magnetic fields (0.5 T and 0.5 mT) on human lymphocyte activation patterns

PURPOSE: The aim of this study was to investigate the effects of magnetic fields (MF) of different intensity generated by a magnetic resonance (MR) unit (0.5 Tesla) and a double cylindrical coil (0.5 m Tesla) on human CD4(+) T cell lines. MATERIALS AND METHODS: CD4(+) T cells were exposed for two hours under isothermal conditions (37 +/- 0.5 degrees C) to the above mentioned MF; a control group was provided for each exposed sample. After exposure, the samples were analysed in the laboratory for the following endpoints: release of cytokines, expression of surface markers, cell proliferation and levels of cytosolic free-calcium. RESULTS: Exposure to MF for 2 h and subsequent in vitro stimulation in the presence of the appropriate mitogen, caused a decrease of interferon-gamma production, a decrease of cell proliferation, a decrease of expression of CD25 and a decrease of cytosolic free calcium concentration in exposed CD4(+) T cell lines. Data obtained, were statistically significant when evaluated after 24 h of in vitro culture, but were not significant, for both types of MF, when the experimental groups were analysed after prolonged in vitro culture. CONCLUSION: These results indicate that static magnetic fields (SMF) can give rise to transient biological effects on T lymphocytes and the present system is a sensitive model for understanding the effects of MF on the immune system.     

脐带全层源间充质干细胞分离培养及向成软骨细胞分化的实验研究

目的从人脐带全层中分离培养间充质干细胞(MSCs),并进行成软骨诱导分化,为组织工程软骨和软骨损伤后修复提供种子细胞。方法采用胶原酶消化法从脐带全层中分离培养间充质干细胞,显微镜下观察细胞形态,细胞计数法绘制细胞生长曲线,采用流式细胞仪检测细胞周期及细胞表型,采用微团细胞培养在软骨诱导液中向软骨细胞分化,阿尔辛蓝及甲苯胺蓝染色检测细胞分化情况,RT-PCR法检测诱导后细胞表达聚集蛋白聚糖(ACAN)基因情况。结果人脐带全层来源的MSCs呈成纤维样形态漩涡状贴壁生长,细胞高表达HLA-I类分子、CD73、CD90、CD166及CD105,不表达CD34、CD45、CD14、CD31、CD80、CD86及HLA-DR。细胞诱导分化21d后,阿尔辛兰及甲苯胺蓝染色阳性;RT-PCR检测诱导后的细胞表达ACAN,而对照组无表达。结论人脐带全层为成体MSCs提供一种新而方便的来源,人脐带间充质干细胞(hucMSCs)体外培养能够向软骨细胞分化。