沙眼衣原体抑制宿主细胞凋亡的研究

目的探讨沙眼衣原体D血清型感染对宿主细胞凋亡的影响。方法沙眼衣原体D血清型感染的Hela229细胞经凋亡诱导剂依托泊苷（etoposide）作用后，Hoechst33．258染色、荧光显微镜观察核浓缩和凋亡小体，流式细胞仪检测凋亡率。结果经依托泊苷作用后，未感染的Hela229细胞有凋亡形态学特征，沙眼衣原体感染的Hela229细胞则无明显凋亡形态学改变，两者的凋亡率比较有统计学意义（P〈0．05）。结论沙眼衣原体感染后能抑制诱导剂诱导的宿主细胞凋亡。     

沙眼衣原体感染细胞抗凋亡及Bim的表达

目的:研究沙眼衣原体(D血清型)感染的Hela229细胞Bim蛋白质的表达及抵抗凋亡的情况。方法:Western-blot检测沙眼衣原体感染和未感染的Hela229细胞Bim蛋白质的表达水平。凋亡诱导剂etoposide作用Hela229细胞后,琼脂糖凝胶电泳检测DNA Ladder带;流式细胞仪检测凋亡率。结果:Hela229细胞在未感染沙眼衣原体时可检测到Bim的表达;在感染24小时、48小时后均未检测到Bim的表达。经etoposide作用后,未感染的Hela229细胞检测到DNALadder带;流式细胞仪检测的凋亡率为90.64%。感染24小时的Hela229细胞,未检测到DNA Ladder带;凋亡率为11.50%,与未感染的Hela229细胞诱导后的凋亡率比较有统计学意义(P<0.05)。结论:沙眼衣原体感染的Hela229细胞Bim蛋白质的表达下降;并能抵抗etoposide诱导的细胞凋亡。     

沙眼衣原体抑制etoposide诱导的HeLa229细胞凋亡的研究

目的 探讨沙眼衣原体D血清型感染对宿主细胞凋亡的影响.方法 用凋亡诱导剂依托泊苷(e-toposide)作用于沙眼衣原体(D血清型)感染的和未感染的Hela229细胞,Hoechst33258染色后荧光显微镜观察核浓缩和凋亡小体,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率.结果 未感染CT的Hela229细胞经etoposide作用后,用荧光显微镜观察到明显的核浓缩和凋亡小体;流式细胞仪检测的凋亡率为90.64%,与未经诱导剂作用的Hela229细胞比较差异有显著性(P<0.05).而CT感染24 h的Hela229细胞,经etoposide作用后未观察到核浓缩和凋亡小体;流式细胞仪检测的凋亡率为11.50%,与未感染CT的Hela229细胞诱导后的凋亡率比较差异有显著性(P<0.05);而与未经诱导的CT感染Hela229细胞比差异较无显著性(P>0.05).结论 沙眼衣原体感染Hela229细胞后能抑制etoposide诱导的细胞凋亡.     

黄芩苷对人鼻咽癌CNE-2Z细胞生长的抑制作用

目的 研究黄芩苷对人鼻咽癌CNE-2Z细胞的抑制作用及可能机制。方法 用倒置显微镜观察细胞形态学改变和计数法测定生长曲线;用MTT比色法检测给药后鼻咽癌细胞的增殖抑制情况;采用流式细胞术和PI/Hoechst33258荧光双染法检测凋亡。结果 黄芩苷作用后,癌细胞生长延缓并萎缩,胞质粗糙,有大量颗粒状物堆积,而且药物浓度越大,形态学改变越明显;黄芩苷对CNE-2Z细胞的增殖和生长有显著的抑制作用并呈明显的时间-剂量依赖关系;流式细胞仪和荧光双染法结果提示黄芩苷可诱导CNE-2Z细胞凋亡。结论 黄芩苷能抑制CNE-2Z细胞的增殖效应,其机制可能与诱导细胞凋亡和引起细胞周期阻滞于G2/M期有关。     

对沙眼衣原体感染细胞促凋亡蛋白表达的影响

目的：研究蛋白酶体抑制剂MG132对沙眼衣原体感染细胞促凋亡蛋白Bim、Puma表达的影响，探讨沙眼衣原体抑制宿主细胞凋亡的可能机制。方法：以沙眼衣原体（D血清型）感染Hela229细胞，用不同浓度MG132作用后，Western-blot检测Bim、Puma蛋白质表达水平的变化。结果：沙眼衣原体感染12h后Bim、Puma的表达降低；24h后完全消失。MG132能抑制Bim、Puma的表达下降。结论：沙眼衣原体感染Hela229细胞后可降低促凋亡蛋白Bim、Puma蛋白质的表达；MG132可阻止这一作用，Bim和Puma的降解依赖蛋白酶体的活性。     

黄芩苷联合黄芩素诱导乳腺癌细胞凋亡的机制研究

目的：探讨黄芩苷和黄芩素联合应用对乳腺癌细胞凋亡的诱导作用及其相关机制。方法将不同浓度的黄芩苷、黄芩素以及两者联合作用于人乳腺癌（Michigan Cancer Foundation 7,MCF-7）细胞。检测上述化合物对乳腺癌细胞的活力、凋亡情况以及凋亡相关蛋白表达的影响。结果黄芩苷或黄芩素作用于乳腺癌细胞后,与作用前相比细胞生长抑制率显著升高（P〈0.05）;两者联合应用,与两者单独作用相比抗增殖作用明显增强（P〈0.05）。流式细胞术检测发现两者作用后尤其是两者联用后细胞凋亡显著增加。蛋白印迹分析显示黄芩苷和黄芩素联合作用后Caspase-3、Caspase-9、Bax和p53的表达增加而Bcl-2表达下降,同时p-38活化亦增加。结论黄芩苷和黄芩素均能诱导乳腺癌细胞的凋亡,两者联合应用后作用明显增强,其机制可能与其促进促凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-9、Bax和p53等的表达,并抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达有关。     

从受体角度探讨黄芩苷对肺炎衣原体感染细胞的干预机理

【目的】观察黄芩苷对肺炎衣原体诱导的TOLL受体(TLRs)的影响。【方法】体外培养人脐静脉内皮细胞(ECV-304细胞)，待长成单层后加入肺炎衣原体(CPN)为模型组，不加任何刺激者为正常组，每组设3个复孔，6孔板培养2d后，用单克隆抗体荧光标记和姬姆萨染色检测肺炎衣原体在ECV-304细胞内的生长情况；用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测细胞TLR2 mRNA、TLR4 mRNA表达。另取长成单层的ECV-304细胞，加入CPN为模型组，加入CPN 黄芩苷0．48g／L为黄芩苷高剂量组，加入CPN 0．24g／L为黄芩苷低剂量组，用流式细胞仪检测ECV-304细胞表面TLR2蛋白表达。【结果】CPN能在ECV-304细胞内生长；该细胞检测不出TLR4 mRNA的表达，存在TLR2 mRNA和TLR2蛋白的高表达。中药黄芩苷高剂量可降低TLR2蛋白的表达。【结论】黄芩苷对CPN所刺激的TLR2高表达具有抑制作用。     

黄芩苷对胃癌细胞株凋亡作用机制的研究

目的：探讨黄芩苷诱导胃癌细胞株SGC-7972凋亡的作用机制，为黄芩苷在抗肿瘤方面的应用提供理论依据。方法：采用不同浓度的黄芩苷处理细胞后，用流式细胞仪检测胃癌细胞株SGC-7972的凋亡情况。结果：50、100、200μmol／L黄芩苷能够诱导胃癌细胞SGC-7972凋亡，凋亡率与剂量呈正相关，SGC-7972的凋亡随药物浓度及作用时间变化，细胞周期分布呈现G1期细胞比例逐渐增高，并出现典型的凋亡峰。结论：黄芩苷能诱导胃癌细胞凋亡，并明显抑制癌细胞增殖，具有抗肿瘤作用。     

沙眼衣原体感染与精子凋亡关系的初探

目的：探讨精液沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis,CT）感染与精子凋亡的关系,为研究男性不育提供新思路。方法：沙眼衣原体的检测用免疫层析法,采用瑞-姬染色精子,观察精子形态变化;用末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）介导的脱氧核苷酸原位末端标记法（TUNEL）检测凋亡精子。结果：精液CT阳性组精子凋亡率（33.03±14.98）%,正常对照组精子凋亡率为（9.68±2.78）%,组间差异显著（P〈0.01）。结论：精液CT感染导致精子凋亡率增加,CT感染可能是男性不育的重要原因之一。     

沙眼衣原体T细胞表位融合蛋白对沙眼衣原体感染小鼠的保护机制

目的：探讨沙眼衣原体（Ct）感染的T细胞表位融合蛋白疫苗（H-ctm1）对小鼠生殖道感染保护作用的机制,为研制和开发Ct T细胞表位融合蛋白疫苗奠定理论和实验基础。方法：建立阴道感染沙眼衣原体的动物模型。迟发型超敏反应（DTH）实验中,将14只小鼠随机分2个实验组： H-ctm1免疫组和未免疫组（每组7只）。测量每只小鼠双侧后脚掌厚度,左后脚掌足底皮下注射蔗糖-磷酸盐运送液（SPG）,右后脚掌皮下注射热灭活EB（HK-EBs）,每组分别比较左右后脚掌足底厚度和足底注射前后的厚度;在流式细胞术分析实验中,将21只雌性小鼠随机分为3组（每组7只）,分别为H-ctm1免疫组、HK-EBs免疫组（阳性对照）和磷酸盐缓冲液（PBS）免疫组（阴性对照）。免疫后在各组小鼠阴道内接种Ct。在阴道感染Ct后第6天取外周血对CD4+ 和 CD8+ T细胞进行流式细胞术分析。结果：DTH实验中,未免疫组小鼠左或右后脚掌注射前后足底厚度比较差异无显著性（P>0.05）,注射前或注射后左右后脚掌足底厚度比较差异无显著性（P>0.05）。免疫组小鼠注射前左右后脚掌足底厚度比较差异无显著性（P>0.05）,注射后左后脚掌足底厚度高于右后脚掌（P<0.05）。左后脚掌注射前后足底厚度比较差异无显著性（P>0.05）,右后脚掌注射后足底厚度高于注射前（P<0.05）。流式细胞术记数法测3组活化的CD4+和 CD8+ T细胞,H-ctm1组CD4+和CD8+ T细胞阳性率均高于HK-EBs组(P<0.05或P<0.01);H-ctm1组 和HK-EBs 组CD4+和CD8+ T细胞阳性率均高于PBS组(P<0.01)。结论：DTH参与了H-ctm1免疫小鼠的免疫应答;在H-ctm1中,HSP65的存在刺激DC细胞上调MHC（Ⅰ类途径和Ⅱ类途径）分子的表达水平,提高沙眼衣原体主要外膜蛋白表位的免疫原性。     

沙眼衣原体感染对大鼠着床期间子宫内膜上皮细胞的影响

目的:研究沙眼衣原体(Ct)感染后大鼠着床期间子宫内膜形态学改变及肌动蛋白的变化。方法:大鼠雌雄合笼建立早孕模型,取正常妊娠组和Ct感染后妊娠组大鼠子宫,采用扫描电镜(SEM)观察子宫内膜超微结构改变及荧光免疫组化检测肌动蛋白的表达。结果:SEM示对照组子宫腔可见有微绒毛的分泌细胞;实验组腔上皮细胞表面有的可见破损,微绒毛少见;免疫组化结果显示荧光强度主要定位于腔上皮细胞胞质/胞膜,妊娠第4,5,6天沿胞质顶部分布较密集,而底部较弥散;妊娠第7天顶部强度有所增加;感染组的荧光强度均弱于相应正常组,在妊娠第5天存在显著性差异(P<0.05)。结论:沙眼衣原体感染后可能通过破坏子宫腔上皮分泌细胞,进而影响其内成分肌动蛋白,从而干扰早期妊娠。     

沙眼衣原体引起输卵管损伤的免疫机制

目的：探讨沙眼衣原体引起输卵管性不孕的免疫损伤机制,方法：采用Ｍｅｄｌｉｎｅ网络检索有关外资料,并综合评述,结果：沙眼衣原体引起输卵管损伤与免疫有关,涉及体液免疫,细胞免疫及其他因素,结论;进一步深入研究沙眼衣原体引起输卵管损伤的免疫机理,将有利于输卵管性不孕的防治。     

实时荧光定量PCR法对女性衣原体和淋球菌感染的检测

目的采用PCR方法结合荧光探针外扩增的检测技术,检测妇科衣原体和淋球菌感染,评价性病高危人群的感染率。方法应用FQ-PCR法检测临床疑似性病的150例女性患者及50例健康妇女生殖道标本中的衣原体和淋球菌。结果FQ-PCR法检出疑似性病患者中衣原体为29.3%(44/150),淋球菌检出率为24.00%(36/150);对照组中衣原体为4%(2/50),淋球菌为2%(1/50)。经χ2检验,FQ-PCR法检测疑似患者与健康妇女的衣原体有显著性差异(P<0.05),淋球菌检测也有显著性差异(P<0.05)。结论在疑似性病的女性中应进行衣原体和淋球菌的检测,特别是应用实时荧光定量PCR方法进行检测,对淋病和衣原体感染的诊断有快速、准确、特别的效果,对于淋病和衣原体感染复发和治疗有指导作用。     

非淋菌性阴道炎感染沙眼衣原体及支原体98例检测分析

目的探讨非淋菌性阴道炎患者与宫颈沙眼衣原体及支原体感染的相关性。方法取宫颈分泌物进行沙眼衣原体（CT）及支原体（UU）检测，CT采用抗原免疫法；UU采用培养法。结果98例中，CT和UU的检出率分别为23．5％和31．4％，两者感染的总阳性率为54．9％，两者混合感染率为9．6％。结论提示沙眼衣原体及支原体感染为非淋菌性阴道炎的重要致病因素，对非淋菌性阴道炎患者应重视进行CT和UU的检测。     

黄芪多糖对小鼠生殖道沙眼衣原体感染免疫保护作用的研究

[目的]探讨黄芪多糖（舡七ragaluspolysaccharide,APS）对小鼠生殖道沙眼衣原体感染的免疫保护效果。[方法]建立小鼠生殖道沙眼衣原体感染的模型得出原体的最小有效感染量,用不同剂量（10mg·kg^-1、20mg·kg^-1、40mg·kg^-1）的黄芪多糖和0．9％生理盐水注射液免疫小鼠,并以空白组作为对照组,免疫后ELISA方法检测各小鼠血清IgG抗体水平,免疫一周后用两倍有效感染量的原体攻击生殖道,再每间隔2d取小鼠生殖道脱落上皮细胞进行培养,10d后处死小鼠计算脾、胸腺指数,并观察小鼠整个生殖道的病理改变。[结果]黄芪多糖组脾（胸腺）指数和血清IgG抗体水平明显高于对照组,生殖道脱落细胞沙眼衣原体培养结果显示。黄芪多糖组阳性率明显降低,所形成的包涵体数也明显减少,且随黄芪多糖浓度的增加,保护效果越明显。生理盐水组各项指标与对照组无明显差异。[结论]黄芪多糖对沙眼衣原体生殖道攻击的小鼠有免疫保护作用,且在研究浓度范围内。随浓度的增加保护效果越佳。     

沙眼衣原体K血清型感染细胞IL-6分泌水平的测定

目的:探讨沙眼衣原体K血清型感染细胞IL-6分泌水平及其意义。方法:用ELISA双抗体夹心法检测沙眼衣原体感染细胞培养上清IL-6水平的变化。结果:沙眼衣原体感染McCoy细胞在沙眼衣原体感染后36h、48h、60h、IL-6分泌量分别为1.3655±0.0046、2.9601±0.0104、4.0408±0.0722,均显著高于相应的对照组(P<0.05),并且随感染时间的延长IL-6分泌水平显著地逐步增高(P<0.05)。结论:沙眼衣原体K血清型感染可诱导McCoy细胞分泌IL-6,并且呈时间依赖性。     

不规则阴道出血患者沙眼衣原体和解脲脲原体感染136例临床分析

目的:了解不规则阴道出血患者沙眼衣原体和解脲脲原体感染的情况.方法:采用衣原体检测试剂盒(胶体金法)及解脲脲原体抗原免疫荧光检测对我院妇科门诊136例不规则阴道出血患者行沙眼衣原体和解脲脲原体检测.结果:此类病人沙眼衣原体的阳性率为24.26%,解脲脲原体阳性率为41.18%,总阳性率为62.5%. 结论:不规则阴道出血患者,通过常规对症或行激素治疗无效时,应做沙眼衣原体和解脲脲原体检测,尤其是有非婚性行为史、年龄＜30岁,患中度以上宫颈炎、无采用避孕措施者更应检测.     

黄芩苷对白念珠菌DNA合成的抑制作用

目的 :观察黄芩苷对白念珠菌DNA合成的影响。方法 :采用试管稀释法测定黄芩苷对白念珠菌的最低抑菌浓度 (MIC) ;运用3 H -TdR掺入法观察不同浓度黄芩苷对白念珠菌DNA合成的抑制作用。结果 :黄芩苷对白念珠菌的MIC值为 1.0mg/ml;黄芩苷能明显抑制白念珠菌DNA的合成 (P <0 .0 0 5 ) ,且随药物浓度升高 ,白念珠菌DNA的合成呈下降趋势。结论 :黄芩苷可能通过抑制白念珠菌DNA的合成而达到抗菌作用。     

黄芩甙对过氧化脂质生成的抑制作用

研究了从黄芩中提取得到的黄芩甙的抗氧化作用。ＮＩＨ小鼠ｐｏ２５,５０ｍｇ／ｋｇ／ｄ黄芩甙,连续３ｄ,可以显著抑制ｉｐ－ＦｅＣｌ２－ＡＤＰ－ＮＡＤＰＨ混合物诱导的过氧化脂质的生成,抑制率分别为７５％和８４％;体外试验,０．１、０．２和０．４ｍｍｏｌ／Ｌ的黄芩甙可以显著抑制由ＦｅＣｌ２－ＡＡ和ＡＤＰ－ＮＡＤＰＨ诱导的大鼠肝匀浆过氧化脂质的生成,且呈剂量依赖关系。提示黄芩甙有良好的抗氧化作用。