筛选调控Sonic Hedgehog信号转导的泛素连接酶

目的:发现调控Sonic Hedgehog(Shh)信号转导的泛素连接酶?方法:第一轮筛选,利用荧光素酶报告基因(8 × GliBS-Luc)检测系统,检测相应HECT家族E3泛素连接酶的siRNA对Shh信号通路活性的影响;第二轮筛选,利用细胞免疫荧光激光共聚焦检测系统,检测上述siRNA对Shh的受体Ptch1蛋白原纤毛定位的影响?综合2轮筛选结果,初步发现影响Shh信号通路活性的HECT家族 E3泛素连接酶?结果:通过2轮筛选,发现Smurf1?Smurf2?Ube3c?Wwp1?Wwp2共5个泛素连接酶,不仅能调节Ptch1蛋白的原纤毛定位,也可以增加通路下游转录因子Gli的活性?结论:建立了筛选调控Shh信号通路的泛素连接酶的平台?在初步筛选的27个HECT E3泛素连接酶中,有5个成员参与调控Shh信号通路?     

Sonic Hedgehog信号通路分子Shh和Smo在肝细胞肝癌中表达与意义

目的:探讨Sonic Hedgehog(SHH)信号通路分子Shh和Smo在肝细胞肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达及其意义?方法:用RT-PCR方法检测10例HCC组织及相应癌旁组织和肝癌细胞系HepG2?Huh7中Shh?Smo mRNA的表达?采用免疫组化方法检测30例肝癌组织及10例正常肝组织中Shh?Smo蛋白的表达?结果:RT-PCR结果显示HCC组织中Shh?Smo mRNA的表达率显著高于癌旁组织(P < 0.05);Shh?Smo mRNA在Huh7中的表达强度高于HepG2,但两者间无显著性差异(P > 0.05)?免疫组化结果显示Shh?Smo蛋白在HCC组织中阳性率分别为63.3%(19/30)?76.7%(23/30);Smo蛋白的表达与肿瘤大小相关(P < 0.05)?Shh?Smo蛋白在正常肝组织中均无表达?结论:Shh和Smo在肝癌中高表达,表明SHH信号通路可能参与肝癌的发生,为肝癌防治提供新的依据?     

Sufu的突变位点对Sonic Hedgehog信号通路调控机制的研究

目的：研究髓母细胞瘤患者中发现的Supressor of Fused（Sufu）的突变位点与Sonic Hedgehog（Shh）信号通路异常激活之间的联系,从而揭示其与肿瘤生长发展之间的关系。方法：构建Sufu突变位点的表达质粒,通过定量PCR、蛋白免疫印迹实验检测Sufu突变体对Sufu-/-细胞内源性Gli1表达水平的影响;通过免疫共沉淀检测Sufu突变体蛋白与Gli1的结合情况;通过MTT实验检测Sufu突变体对人髓母细胞瘤细胞（DAOY）生长增殖的影响。结果：定量PCR和蛋白免疫印迹实验发现,过表达Sufu的错义突变体（突变位点H87R）的Sufu-/-细胞中内源性Gli1表达水平接近于过表达野生型Sufu的Sufu-/-细胞,而过表达3个截短突变体（突变位点R146X、R299X、W430X）Sufu-/-细胞中内源性Gli1表达水平相比于野生型明显增高。正常情况下野生型Sufu可以和Gli1蛋白结合,免疫共沉淀实验发现Sufu的突变体都不同程度地破坏了与Gli1蛋白的结合;蛋白周转速率实验发现Sufu的突变体可以通过蛋白酶体途径降解;MTT实验发现Sufu突变体失去了抑制DAOY细胞生长增殖的能力。结论：髓母细胞瘤患者身上观测到的Sufu突变位点可以驱动肿瘤的形成和生长,并通过细胞功能实验证实了Sufu通过结合Gli蛋白从而抑制其功能。     

DGK在Hedgehog信号通路中的作用

目的:研究甘油二酯激酶(diacylglycerol kinase,DGK)对Hedgehog信号通路的调控机制?方法:蛋白质免疫共沉淀实验分析DGK蛋白与IFT88的结合情况;siRNA敲低DGK后,检测Hedgehog信号通路靶基因Gli1蛋白及mRNA的表达水平;激光共聚焦显微镜分析DGK缺失对原纤毛生长和IFT88蛋白在原纤毛内定位的影响?结果:DGK家族的7个成员都可以和IFT88发生特异性结合;siRNA敲低DGK后,通路靶基因Gli1的转录水平明显下降;DGK蛋白对于通路的调控部位介于Ptch1和Smo之间;DGKδ的缺失会抑制原纤毛的生长以及IFT88在原纤毛中的分布?结论:DGK的敲低影响了IFT88向原纤毛的运输,从而影响了原纤毛的结构和纤毛内转运的正常进行,DGK影响Hedgehog信号通路的正常转导及其活性,可能与其抑制原纤毛的生长有关?     

Hedgehog信号通路在肿瘤转移中的作用研究进展

恶性肿瘤最主要的特征之一就是转移,即从原发灶迁移到其他部位形成转移灶,并维持复发瘤的生长.肿瘤转移的发生涉及复杂的信号通路,这些信号通路的激活及相互作用介导了肿瘤的转移和侵袭.近年来的研究发现,Hedgehog信号的异常与人类肿瘤形成有密切的联系,有可能为肿瘤的诊断和治疗提供新途径.本文对Hedgehog信号通路与肿瘤转移的关系、作为肿瘤的诊断标志及治疗靶点的展望进行了综述.     

Hedgehog信号通路在前列腺癌中的研究进展

[摘要]　Hedgehog（Hh)信号通路不仅在前列腺的胚胎发育和器官形成扮演重要的角色,而且在前列腺癌的肿瘤形成、侵袭、转移中起十分重要的作用。Hh信号通路将为前列腺癌的诊断提供重要的思路,以Hedgehog信号传导通路成员作为靶点,联合其他药物可能成为前列腺癌治疗的新策略。但Hh信号通路如何调控前列腺癌的机制尚不清楚,本文就Hh信号通路在以上方面的研究进展进行综述。     

Hedgehog信号通路在骨性关节炎中的研究进展

近来研究表明,骨性关节炎(OA)关节软骨中印度刺猬蛋白(Ihh)表达上调,而这种上调与OA的进展,软骨细胞的形态变化密切相关.小鼠的遗传研究进一步表明,在软骨细胞有条件缺失Ihh信号可以延缓OA的进展,表明阻断Ihh信号用来作为OA潜在治疗方法的可能,以防止软骨变性.因此,基于Hh在软骨内成骨和骨关节炎的发生发展中发挥的重要作用,本文就Hedgehog信号通路在OA软骨细胞中的作用以及作为潜在治疗靶点的研究作一综述.     

Hedgehog信号通路临床研究进展

Hedgehog通路是一条保守的信号通路,对胚胎发育起重要的调控作用,可促进上皮细胞向间质细胞的转化。Hedgehog基因编码一系列分泌蛋白,最初在果蝇调控胚胎过程中被发现,对胚胎发育过程中的细胞分化和增殖起重要作用。Hedgehog信号通路不恰当的激活可引起多种肿瘤及纤维化的发生。近年来,有关Hedgehog信号通路的研究取得了较大的进展,特别是在肿瘤的发病机制方面。针对Hedgehog信号通路中各靶点的治疗研究也为肿瘤治疗开辟了一条新的途径,具体疗效还需要进一步深入研究。     

Shh信号通路成员Shh蛋白在胃癌细胞SGC-7901中的表达

目的：研究Shh信号通路成员Shh蛋白在胃癌细胞中的表达，探讨其与胃癌发生的关系。方法：培养胃癌细胞（SGC-7901）和正常肠上皮细胞（IEC-6），用免疫细胞化学法检测两种细胞中Shh蛋白的表达，用RT—PCR法检测Shh mRNA在两种细胞中的表达。结果：Shh蛋白在正常肠上皮细胞中表达阳性率为15％，在胃癌细胞中表达阳性率为70％，Shh蛋白在正常肠上皮细胞中的表达明显低于胃癌细胞（P〈0．05）。Shh mRNA在正常肠上皮细胞中不表达或低表达，在胃癌细胞中明显表达（P〈0.05）。结论：Shh信号通路可能与胃癌发生有关。     

幽门螺杆菌及其脂多糖与刺猬蛋白信号通路关系的研究进展

近年来,多项研究表明Shh信号通路与消化道肿瘤密切相关,并发现幽门螺旋杆菌(Hp)感染对Shh信号通路的表达有影响。Hp脂多糖在Hp相关疾病中发挥着重要作用,亦可能影响Shh信号通路的表达,但它们之间具体作用机制尚需进一步明确。现主要对Hp及其脂多糖的功能,Shh信号通路构成及其功能,Hp及其脂多糖与Shh信号通路间的关系予以综述。     

基于Sonic Hedgehog通路探讨复方胃炎合剂干预慢性萎缩性胃炎癌前病变的机制

目的 观察复方胃炎合剂对慢性萎缩性胃炎癌前病变(precancerous lesions of gastric cancer,PLGC)脾虚痰湿热瘀证大鼠Sonic Hedgehog(Shh)通路相关基因表达的影响,并探讨其抑制PLGC进展的机制.方法 SPF级雄性Wistar大鼠随机分为空白组、空白+中药组、模型组、...     

Sonic Hedgehog信号通路在心血管系统疾病中的研究进展

Sonic Hedgehog(Shh)在Hedgehog家族中表达最为广泛,Shh信号通路存在于多种动物体内,Shh信号通路对调节心肌细胞发育、心血管系统形成、细胞分化、组织损伤后修复、组织再生等过程发挥重要作用,其异常激活参与多种肿瘤细胞的发生过程。近年来研究发现,Shh信号通路不仅参与胚胎时期的心肌细胞发育、心血管系统形成,也可促进心肌细胞/血管再生、招募内皮祖细胞移位至损伤区域、减少再灌注心律失常,对缺血缺氧后心肌细胞的保护起关键作用。总结Shh信号通路转导机制及其在心血管系统疾病中发挥的作用,有望为先天性心脏病的修复以及缺血性心脏病的分子靶向治疗提供新思路。     

Sonic Hedgehog信号在小脑早期发育中的作用

目的:研究Sonic Hedgehog(Shh)信号在小脑发育早期对小脑外颗粒层的颗粒细胞前体(GCP)细胞增殖迁移的影响?方法:通过石蜡切片免疫荧光观察小脑外颗粒层GCP细胞增殖情况;建立体外培养小鼠脑片系统,检测小脑外颗粒层GCP细胞的增殖和动态迁移情况?结果:小鼠出生后7 d小脑外颗粒层增殖的GCP细胞最多;Shh信号通路促进小脑外颗粒层GCP细胞的增殖,用环巴胺(cyclopamine,CPA)抑制信号通路后小脑外颗粒层GCP细胞增殖受到抑制,但迁移不受影响?结论:Shh信号通路是促进小脑外颗粒层细胞增殖及有丝分裂必不可少的一部分,且它的作用只部分局限于外颗粒层?     

转染LKB1基因乳腺癌细胞与胚胎发育信号通路及cAMP/PKA通路的关系

 目的 探讨抑癌基因LKB1与胚胎发育(Sonic Hedgehog,SHH)信号通路、cAMP/PKA信号通路之间的相互关系。方法 抑癌基因LKB1转染人乳腺癌细胞MDA MB 231,分MDA MB 231组(231组)和转染LKB1基因的MDA MB 231(LKB1组)两组,每组分别采用0、 5×10-6、1×10-5、2×10-5mol/L等4种浓度的SHH信号通路抑制剂环靶明(cyclopamine)作用于细胞,各小组细胞分别用RT PCR法和Western blot法检测SHH信号通路相关基因SHH、Smo的mRNA表达水平和蛋白表达水平,用cAMP、PKA试剂盒检测cAMP、PKA数值水平。 结果 LKB1组的细胞通过不同剂量环靶明抑制后,SHH信号通路相关基因SHH、Smo的mRNA和蛋白表达水平相应较231组明显抑制,且与环靶明剂量呈正相关,抑制效果在环靶明浓度为10×10-6mol/L时最明显,继续增加环靶明浓度到20×10-6mol/L,抑制效果保持不变。231组和LKB1组中细胞的PKA和cAMP数值均随环靶明浓度增加而增高,至10×10-6mol/L时达到最高,继续增加环靶明浓度到20×10-6mol/L,两组中的PKA和cAMP数值保持不变。在相同环靶明浓度下,LKB1组中PKA和cAMP数值高于231组中相应数值。结论 抑癌基因LKB1协同环靶明抑制乳腺癌MDA MB 231细胞的SHH信号通路的同时亦协同增加cAMP/PKA信号通路的表达,且在环靶明浓度为10×10-6mol/L时效果最明显;推测存在LKB1 SHH cAMP/PKA通路。     

sonic hedgehog信号通路在血管平滑肌细胞中的表达及意义

目的 研究sonic hedgehog(Shh)信号通路各蛋白在血管平滑肌细胞(VSMC)中的表达情况,探讨其是否与VSMC的增殖相关.方法 应用免疫荧光、激光共聚焦检测Shh信号通路蛋白在体外培养的VSMC中的表达,MTT法及Ki67的表达情况联合评价细胞增殖.结果 Shh信号通路的配体Shh蛋白、patched1受体及其下游转录因子Gli2在VSMC中有表达,MTT法及Ki67染色结果显示外源的Shh蛋白能够促进VSMC的增殖,而应用Shh信号通路的特异抑制剂Cyclopamine则能抑制细胞增殖.结论 Shh信号通路与VSMC增殖密切相关.