预适应与后适应联合干预对脑缺血/再灌注损伤的保护作用

目的:探讨缺血预适应联合缺血后适应对大鼠脑缺血/再灌注(I/R)损伤的保护作用及可能的机制.方法:60只SD大鼠随机均分为假手术组,脑I/R组(模型组),脑I/R+预适应(预适应组),脑I/R+后适应组(后适应组),脑I/R+预适应与后适应联合干预组(联合干预组).采用线栓法制作大鼠脑I/R损伤模型,预适应在造模24 h和1 h前采用3个循环的大脑中动脉阻闭15 s/再-通30 s的方法诱导,后适应于再灌注前采用3个循环的再灌注30 s/缺血15s的方法诱导.造模后48 h,分别检测大鼠脑梗死体积,脑组织氧化应激指标及p-Akt与p-ERK1/2蛋白的表达.结果:预适应组与后适应组间脑梗死灶体积比较差异无统计学意义(P＞0.05),但均明显小于模型组,大于联合干预组(均P＜0.01).与假手术组比较,模型组出现脑组织氧化应激水平明显升高(SOD活性降低,MDA含量升高),且脑组织P-Akt和p-ERK1/2表达上调(均P＜0.01).与模型组比较,预适应组脑组织氧化应激指标无明显差异(均P＞0.05),但p-Akt表达轻度上调、p-ERK1/2表达明显上调(P＜0.05,P＜0.01),后适应组脑组织氧化应激水平明显降低(均P＜0.01),且p-Akt表达明显上调和p-ERK1/2表达轻度上调(P＜0.01,P＜0.05).联合干预组脑组织氧化应激水平降低程度及p-Akt与p-ERK1/2表达上调程度均明显强于预适应组或后适应组(均P＜0.01).结论:预适应与后适应联合干预对脑缺I/R损伤的保护作用强于单独的预适应或后适应,可能与预适应与后适应的抗I/R损伤的机制不同且互补有关.     

低分子肝素通过促进SUMO2/3蛋白的表达及核转移对脑缺血再灌注大鼠发挥脑保护作用

目的 探讨低分子肝素(low molecular weight heparins,LMWH)对大鼠脑缺血再灌注后NF-κB活化和表达的影响及其可能机制.方法 通过线栓法对大鼠建立大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,将总计60只大鼠分为3组:假手术组(Sham, n=20)、模型组(I/R, n=20)、低分子肝素干预组(LMWH, n=20),并用1.5 mg/kg的低分子肝素液进行干预.观察大鼠脑缺血再灌注后神经功能评分、梗死灶体积,并用Western blot、免疫组化、免疫荧光检测各组IL-1β、NF-κB P65及SUMO2/3蛋白表达的变化.结果 ①神经功能评分结果显示:MCAO后大鼠出现严重的神经功能障碍,经LMWH干预后能明显减轻MCAO导致的神经功能障碍(P<0.01);②大鼠在脑缺血再灌注后出现严重的脑梗死(P<0.01),而LMWH能明显减小梗死体积(P<0.01),尤其能够有效改善MCAO模型梗死敏感区纹状体的损伤程度(P<0.01);③Western blot 检测结果显示:再灌注24 h后I/R组大鼠脑组织中IL-1β、NF-κB P65蛋白表达均高于Sham组(P<0.01),而经LMWH干预后的大鼠IL-1β、NF-κB P65蛋白表达相比I/R组均下降(P<0.01);再灌注3 h后,与Sham组相比,I/R组大鼠脑组织中SUMO2/3蛋白表达增强(P<0.01),而LMWH干预后SUMO2/3蛋白表达进一步增强(P<0.01);④免疫组化和荧光检测结果显示:再灌注3 h后,与Sham组相比,I/R组大鼠脑组织中蛋白SUMO2/3水平增加,出现核内移现象(P<0.01),并且主要发生在神经元细胞内,而LMWH干预后发生SUMO2/3核内移现象的神经元细胞进一步增多(P<0.01).结论 LMWH在大鼠脑缺血再灌注损伤模型中能够促进SUMO2/3表达及核内移,这可能对抑制NF-κB活化减少炎症因子生成产生影响.     

冬虫夏草对肾缺血-再灌注大鼠肾组织Caspase-12 mRNA和蛋白表达的影响

目的观察冬虫夏草对肾缺血-再灌注(I/R)大鼠肾组织Caspase-12 mRNA和蛋白表达的影响。方法 SD大鼠随机分为假手术组(sham组)、缺血-再灌注组(I/R组)和冬虫夏草(CS)组3组,采用摘除右肾夹闭左肾蒂60 min的方法复制I/R大鼠模型,sham组和I/R组大鼠再灌注后灌服生理盐水(2 mL/d);CS组再灌注后灌服冬虫夏草提取液[5 g/(kg·d)]。结果 sham组肾小球和肾小管结构基本正常,而I/R组可见肾小管坏死改变,各时间点半定量计分均高于sham组(P<0.01),而CS组肾小管病理改善,半定量计分均低于相同时间点I/R组(P<0.01);正常组和sham组肾组织可见少量的Caspase-12 mRNA和蛋白表达,I/R可诱导Caspase-12 mRNA和蛋白表达上调,各时间点I/R组Caspase-12 mRNA和蛋白表达显著高于sham组(P<0.01)。CS组Caspase-12 mRNA和蛋白水平表达显著低于相同时间点I/R组(P<0.01)。sham组有极少量的肾小管上皮细胞凋亡,I/R可诱导肾小管上皮细胞凋亡显著增多,各时间点I/R组凋亡比例均高于sham组(P<0.01),而CS组各时间点的凋亡比例均低于I/R组(P<0.01)。结论冬虫夏草通过下调肾组织中Caspase-12的表达,抑制内质网应激凋亡途径发挥肾保护作用。     

EGCG对脑缺血再灌注损伤大鼠炎症反应的影响

目的:表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)是茶叶中茶多酚生物活性的主要成分,具有多种生物学效应.脑缺血再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)导致的神经损伤与炎症反应密切相关,促炎细胞因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)与抗炎细胞因子白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)在炎症反应过程中起重要的调节作用.本研究旨在探讨EGCG对脑I/R损伤大鼠脑组织含水量、髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性以及IL-1β、IL-10的影响.方法:采用线栓法建立SD大鼠大脑中动脉栓塞模型,大鼠缺血1.5 h后,将尼龙线拔出,行再灌注24.0 h.将SD大鼠随机分成假手术(Sham)组、I/R组、EGCG1组(I/R+12.5 mg/kg EGCG)、EGCG2组(I/R+25.0 mg/kg EGCG)、EGCG3组(I/R+50.0 mg/kg EGCG)5组.Sham组大鼠除不予栓塞大脑中动脉外,其余与I/R组相同.采用干湿重法检测各组大鼠脑组织含水量,比色法检测MPO活性,RT-PCR测定IL-1β及IL-10 mRNA水平,ELISA测定IL-1β和IL-10含量.另取原代培养的SD大鼠大脑皮层神经元随机分成对照(Control)组、氧糖剥夺/再灌注(oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)组、OGD/R+EGCG组(OGD/R+50.0μmol/L EGCG)3组,采用蛋白质印迹法检测神经元IL-1β和IL-10蛋白质的表达水平.结果:与sham组比较,I/R组大鼠脑组织含水量、MPO活性、IL-1β含量、IL-10含量均显著增加(P<0.05或P<0.01),IL-1β及IL-10 mRNA表达水平均明显上调(均P<0.01).与I/R组比较,EGCG3组大鼠脑组织含水量、MPO活性均显著降低(均P<0.01),IL-1β含量显著减少,IL-10含量显著增加(均P<0.01).与I/R组比较,EGCG2组、EGCG3组大鼠缺血区脑组织IL-1βmRNA水平显著下调、IL-10 mRNA水平显著上调(P<0.05或P<0.01).与Control组比较,OGD/R组神经元IL-1β及IL-10蛋白质表达水平均显著上调(均P<0.01).与OGD/R组比较,OGD/R+EGCG组神经元IL-1β蛋白质表达明显下调,IL-10蛋白质表达明显上调(均P<0.01).结论:EGCG可抑制脑缺血损伤引发的炎症反应,这一效应可能与抑制促炎细胞因子IL-1β和促进抗炎细胞因子IL-10的表达有关.     

缺血后处理对心肌缺血/再灌注大鼠血红素加氧酶-1表达的影响

目的:探讨缺血后处理对心肌缺血/再灌注大鼠血红素加氧酶-1(HO-1)表达的影响。方法:56只雄性SD大鼠随机分为4组:假手术组(Sham组)(n=8)、缺血再灌注组(I/R组)(n=16)、缺血后处理组(IPo组)(n=16)和血红素加氧酶抑制剂锌原卟啉组(ZnPP组)(n=16)。采用结扎心脏左冠状动脉前降支30 min,再灌注2 h制备心肌缺血再灌注损伤模型。IPo组在结扎心脏左冠状动脉前降支30 min,再灌注10 s,缺血10 s,重复3次后,完全恢复心肌血流。再灌注2 h后开胸,每组8只取心尖部缺血心肌,测定超氧化物歧化酶(SOD)活性、心肌组织中丙二醛(MDA)含量和心肌中HO-1蛋白表达。I/R组I、Po组和ZnPP组另取8只大鼠测定心梗面积。结果:与S组比较,I/R组缺血心肌中MDA含量增加,SOD活性降低(P<0.01),I/R组HO-1表达无统计学差异(P>0.05)。与I/R组比较,IPo组缺血心肌中MDA降低,SOD活性升高且心梗面积明显减小(P<0.01),HO-1蛋白表达显著增强(P<0.01)。与IPo组比较,ZnPP组MDA含量升高,SOD活性降低(P<0.01),HO-1表达明显减少(P<0.01)。结论:缺血后处理能减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤,其机制与增强心肌抗氧化能力和增加血红素加氧酶(HO-1)的表达有关。     

大豆异黄酮对大鼠缺血再灌注脑组织CaMKⅡ表达的影响

目的:研究大豆异黄酮对缺血再灌注脑组织钙离子/钙调蛋白依赖性蛋白激酶(CaMK)Ⅱ表达的影响.方法:选取603健康成年SD大鼠,随机分成假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)和大豆异黄酮预处理组(SI组),各203.采用Longa改良线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞模型,缺血2 h后再灌注24 h,行神经功能缺损评分,TTC染色检测脑梗死体积,Western blotting技术检测CaMKⅡ蛋白表达.结果:I/R组神经功能缺损评分明显高于Sham组(P<0.01),与I/R组比较,SI组神经功能缺损评分明显下降(P<0.01).I/R组梗死体积高于Sham组(P<0.01),与I/R组比较,SI组梗死体积降低(P<0.01).I/R组缺血区CaMKⅡ蛋白表达量低于Sham组(P<0.01),与I/R组比较,SI组缺血区CaMKⅡ蛋白的表达量增加(P<0.01).结论:大豆异黄酮可能通过上调缺血区CaMKⅡ蛋白表达,减轻缺血再灌注脑损伤.     

蒺藜皂苷预适应对心肌缺血再灌注损伤大鼠心功能的影响

目的 建立 Langendorff 离体心脏灌流系统,制备缺血再灌注实验模型,观察蒺藜皂苷 (gross saponins from Tribulus terrestris , GSTT) 预适应对大鼠心肌缺血再灌注损伤心功能的影响。 方法 56 只大鼠随机分为7组,正常对照组、缺血/再灌组 (I/R)、心肌缺血预适应组 (IPC)、阳性药腺苷组、GSTT 200、100、50 mg/L 组,缺血 30 min,再灌 40 min,记录给药前、再灌后 5、10、15、20、30 min 心率 (HR)、左室收缩压 (LVSP) 等心功能指标,并同步记录冠脉流量 (CF),同时测定心肌组织 ATP 水平。 结果 I/R 组再灌注后 5、10、15、20、30 min HR、LVSP 明显下降 (P＜0.001);IPC 组,GSTT 200、100 mg/L 预适应组和腺苷预适应组再灌注后 5、10、15、20、30 min HR、LVSP 均明显升高 (P＜0.05、0.01);I/R 组再灌注后各时间点 (5、10、15、20、30 min) CF 明显减少 (P＜0.001);与 I/R 组相比,IPC 组,GSTT 200、100 mg/L 预适应组和腺苷预适应组再灌注后各时间点 (5、10、15、20、30 min) CF 均增加 (P＜0.05、0.01、0.001);I/R 组 Na+K+ ATP 酶活力明显降低 (P＜0.001)。与I/R 组相比,IPC 组,GSTT 200、100 mg/L 预适应组和腺苷预适应组 Na+K+ ATP 酶活力明显升高 (P＜0.05、0.01)。I/R 组的 Ca2+Mg2+ATP 酶活力有增高趋势,与 I/R 组相比,IPC 组,GSTT 200、100 mg/L 预适应组和腺苷预适应组 Ca2+Mg2+ ATP 酶活力明显升高 (P＜0.05、0.01)。 结论GSTT 可抑制心功能低下,舒张冠状动脉,增加冠脉血流量而改善心肌的供血、供氧;GSTT 还可增加心肌组织 ATP 酶活性,通过抑制 Na+/Ca2+交换,使得细胞摄取的 Ca2+ 减少。     

大鼠心肌IP对I/R心肌细胞凋亡及bcl-xl蛋白表达的影响

目的研究缺血预适应(ischemic preconditioning,IP)对大鼠缺血再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)心肌细胞凋亡和凋亡抑制基因bcl-xl蛋白表达的影响.方法采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的带萤光的dUTR缺口末端标记(TUNEL)法和免疫组化方法.结果 IP组TUNEL法阳性心肌细胞核数量及阳性心肌细胞核占总心肌细胞核数的百分比均明显少于I/R组(P<0.05或0.01);IP组表达bcl-xl蛋白阳性的心肌细胞数及阳性心肌细胞占心肌细胞总数的百分比均明显高于I/R组(P<0.01) .结论大鼠心肌IP能够显著减少I/R心肌细胞凋亡;IP通过上调凋亡抑制基因bcl-xl基因表达可能是其减少I/R心肌细胞凋亡的机制之一.     

PI3K-Akt通路对老年心肌缺血预适应模型大鼠线粒体通透性转换孔开放程度的影响

目的：探讨PI3K-Akt通路对老年心肌缺血预适应（IPC）模型大鼠线粒体通透性转换孔（mPTP）开放程度的影响,阐明其可能机制。方法：21~23月龄Wistar大鼠35只随机分为缺血再灌注（I/R）组、I/R+PI3K抑制剂Wortmannin（Wort）组、IPC组、IPC+Wort组和假手术组,每组7只。分别建立I/R、IPC模型,Wort组大鼠再灌注前尾静脉注射Wort 0.6 mg·kg^-1。120 min再灌注结束后,提取心肌组织蛋白,Western blotting法检测大鼠心肌组织中Akt及p-Akt蛋白相对表达水平。差速离心法分离大鼠心肌线粒体,酶标仪检测线粒体内超氧化物水平、超氧化物歧化酶（SOD）活性及心肌mPTP开放程度。结果：与I/R组 （0.288±0.071）比较,IPC组大鼠心肌组织p-Akt蛋白相对表达水平（0.346±0.051）明显升高（P < 0.05）,I/R+Wort组大鼠心肌组织中p-Akt蛋白相对表达水平（0.044±0.010）明显降低（P < 0.01）。与I/R组（0.216±0.024）比较,IPC组大鼠粒线粒体超氧化物水平（0.187±0.022）明显降低（P < 0.05）,I/R+Wort组大鼠粒线粒体超氧化物水平（0.218±0.029）无明显变化（P > 0.05）。与I/R组（1.15±0.15）比较,IPC组大鼠线粒体SOD活性（1.39±0.14）明显升高（P < 0.05）,I/R+Wort组大鼠线粒体SOD活性（1.17±0.21）无明显变化（P > 0.05）。在6~20min时,与I/R组比较,IPC组大鼠心肌mPTP开放程度明显降低（P < 0.05）,I/R+Wort组大鼠心肌mPTP开放程度无明显变化（P > 0.05）;与IPC组比较,IPC+Wort组大鼠心肌mPTP开放程度明显增加（P < 0.05）。结论：老年大鼠IPC可通过激活PI3K-Akt通路抑制心肌mPTP的开放。     

缺血预适应减轻大鼠后肢缺血再灌注后肺损伤的研究

目的:探讨缺血预适应(IPC)对大鼠后肢缺血再灌注(I/R)后肺损伤的影响.方法:阻断肾下腹主动脉建立大鼠双侧后肢I/R损伤模型.观察肺组织形态学、湿/干重比、丙二醛(MDA)及髓过氧化物酶(MPO)的变化.原位杂交和RT-PCR检测胞间黏附分子1(ICAM-1)mRNA,Westem蛋白印迹检测ICAM-1.结果:I/R组各项指标表达明显增加,与假手术组、缺血组比较差异显著(P＜0.01).IPC±I/R组的各项指标明显减少,与I/R组比较差异显著(P＜0.01).结论:IPC减轻大鼠双侧后肢缺血再灌注后肺损伤,其作用机制可能是通过抑制ICAM-1介导的中性粒细胞在肺组织内的黏附、浸润而实现的.     

缺血预处理对脑缺血再灌注损伤保护作用的实验研究

目的：通过观察Toll样受体4（Toll-like receptors,TLR4）和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达变化,探讨缺血预处理对大鼠再灌注损伤的保护作用并研究其意义。方法：将36只SPF级健康雄性SD大鼠随机分为缺血预处理组（CIP组n=12）、缺血再灌注组（I/R组n=12）和假手术组（Sham组n=12）;I/R组采用线栓法阻断大脑中动脉（MCAO）2h建立模型,CIP组先给予MCAO阻断10 min,再灌注72 h后给予与I/R组相同的处理,假手术组仅分离血管。均于术后1d取材检测脑梗死体积、用 Zea Longa评分标准进行神经功能评分以及通过荧光实时定量PCR（Real-time Quantitative polymerase chain reaction）法测定TLR4和TNF-α mRNA水平的表达。结果：缺血再灌注后1 d各组大鼠比较,CIP组大鼠脑梗死体积明显低于I/R组,差异有显著统计学意义（P＜0.05）,CIP组大鼠的神经功能缺损评分明显低于I/R组,二者比较有显著性差异（P<0.05）。TLR4、TNF-α mRNA在CIP组与I/R组的表达明显高于Sham组,差异有显著统计学意义（P＜0.05,P＜0.01）,而二者在CIP组的表达明显低于I/R组（P＜0.05）。结论：缺血预处理能改善由再灌注损伤引起的功能障碍,可能通过下调促炎因子的表达来减轻脑组织缺血再灌注损伤,从而减轻炎症反应。     

丙泊酚后处理对离体大鼠缺血再灌注心肌的保护作用及机制

目的研究丙泊酚后处理对离体大鼠缺血再灌注心肌细胞的保护作用以及对PI3K/Akt信号通路的影响。方法选用SD大鼠28只,按照随机数字表法分为缺血再灌注组(I/R组)、丙泊酚后处理组(PPC组)、丙泊酚后处理+Wortmannin后处理组(PPC+W组)、Wortmannin组(W组)。4组均建立Langendorff离体心肌缺血再灌注模型。各组心肌做相应分组处理后,观察缺血前及再灌注120 min时左室心功能变化情况,免疫组化检测Bcl-2蛋白的表达,Tunel法检测各组心肌细胞凋亡情况,Western blot测定p-Akt(Ser473)蛋白表达。结果与I/R组相比,PPC组LVEDP降低[(43.31±4.70)vs(29.93±3.72),P<0.05],+dp/dtmax和-dp/dtmax均明显升高[(1 140±138)vs(1 622±160),(749±99)vs(1 008±178),P<0.05],心肌组织Bcl-2蛋白和p-Akt的表达均增加[(0.171 9±0.012 1)vs(0.199 1±0.014 4),(0.241 4±0.053 9)vs(0.436 3±0.081 7),P<0.05],心肌细胞凋亡明显减少[(33.87±1.72)vs(29.84±1.83),P<0.05]。Wortmannin能阻断丙泊酚后处理的心肌保护效应(P<0.05)。结论丙泊酚后处理能减少离体大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡,发挥心肌保护作用,其保护机制与激活PI3K/Akt信号通路及上调Bcl-2蛋白的表达有关。     

雷帕霉素靶蛋白参与缺血后处理减轻大鼠骨骼肌缺血/再灌注损伤

目的 探讨哺乳类动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号转导通路在缺血后处理(I-postC)减轻大鼠骨骼肌缺血再灌注(I/R)损伤中的表达和意义.方法 48只雄性健康Wistar大鼠,无创动脉夹夹闭右侧股动脉4 h,松夹再灌注12 h或24 h建立大鼠右后肢I/R损伤模型,随机分为I/R组(n=16)、缺血预处理(IPC)组(5 min缺血/5 min再灌,3个循环,n=16)及缺血后处理(IpostC)组(1 min再灌/1 min缺血,3个循环,n=16).分别于再灌注后12 h、24 h取标本.观察骨骼肌组织形态学、湿,干重比、丙二醛(MDA)及髓过氧化物酶(MPO)的变化,Western blot和免疫组织化学方法检测mTOR的表达.结果 I-postC和IPC组的骨骼肌水肿明显减轻,MDA和MPO指标亦明显降低,与I/R组比较差异显著(P＜0.05).I-postC组和IPC组之间无显著差异(P＞0.05).I-postC和IPC组mTOR蛋白产物表达显著增加,与I/R组比较差异显著(P＜0.05).结论 I-postC减轻大鼠后肢骨骼肌I/R损伤,与缺血预处理可能存在共同的作用机制,及通过激活mTOR信号转导通路发挥作用.     

缺血预处理对大鼠缺血再灌注小肠能量代谢、Bcl-2和Bax表达的影响

目的:探讨缺血预处理对小肠细胞能量代谢和凋亡基因bcl-2,bax表达的影响及它们与肠细胞凋亡的内在联系. 方法:健康SD大鼠36只,雌雄不限,随机分为3组,空白对照组(C组)、缺血预处理组(IPC-I/R组)和缺血再灌注组(I/R组),每组12只. 按Murry法制备缺血预处理模型,I/R组用血管钳夹闭肠系膜前动脉1 h,再灌注2 h, IP-I/R组用血管钳夹闭肠系膜前动脉10 min松开10 min,反复4次,余同I/R组. 高效液相色谱法测定ATP,ADP含量;免疫组化检测Bcl-2及Bax蛋白的表达,每组选24个视野分别测量A值. TUNEL法检测凋亡的小肠细胞并计算凋亡指数. 结果:C和IPC-I/R组ATP含量高于I/R组(P<0.05);IPC-I/R组Bcl-2 A值高于C组和I/R组(P<0.01),I/R组Bcl-2 A值低于C组(P<0.05);I/R组Bax A值明显高于C组和IPC-I/R组(P<0.01),且IPC-I/R组高于C组(P<0.05);与C组比较,I/R组和IPC-I/R组凋亡指数较高(P<0.01, P<0.05);与I/R组相比,IPC-I/R组凋亡指数较低(P<0.01). 结论:缺血预处理能在一定程度上延缓ATP降解并调控Bcl-2及Bax蛋白的表达、抑制缺血再灌注介导的小肠细胞凋亡.     

葛根素预处理与缺血预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的: 观察葛根素(PUE)预处理与缺血预处理(IPC)对大鼠心肌缺血再灌注损伤(I/R)的保护作用,以进一步明确PUE药物预处理(PPC)的心肌保护效应.方法: 采用开胸结扎冠状动脉左前降支的方法复制大鼠心肌I/R模型,设立假手术组(sham组)、I/R组、IPC组、PUE组.用红四氮唑染色法测定各组心肌梗死面积,TUNEL法检测心肌细胞凋亡情况,同时测定血清肌酸激酶(CK)活力和血清肌钙蛋白T(TnT)水平.结果: I/R组心肌梗死面积、血清CK活力、TnT浓度以及心肌细胞凋亡指数较sham组显著增高(P＜0.05或P＜0.01),与I/R组比较,PUE组和IPC组心肌梗死面积明显缩小(P＜0.05),血清CK活力、TnT浓度(P＜0.05或P＜0.01)、心肌细胞凋亡指数显著降低(P＜0.01),PUE组与IPC组间各指标差异无明显性(P＞0.05).结论: PUE预处理明显减轻了大鼠心肌I/R,并与IPC的保护效应相似,产生了PPC效应.     

缺血后处理联合预处理对大鼠脑组织HSP70的表达和脑缺血再灌注损伤的影响

目的:探讨缺血后处理、缺血预处理及两者联合应用对急性全脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织超微结构及热休克蛋白70(HSP70)的影响及其可能的机制。方法:采用改良的四血管法制造大鼠全脑缺血模型,实验分5组,假手术A组、缺血再灌注B组、缺血预处理C组、缺血后处理D组,联合处理E组,各组动物分别于再灌注结束后(6,8,24h)断头处死。采用免疫组织化学染色的方法测定大鼠脑组织中HSP70灰度值;电镜观察脑组织超微结构的变化。结果:缺血再灌注损伤后,各组脑组织HSP70表达增强,在各时间点E组HSP70表达明显高于B组、C组、D组,差异有显著性(P<0.01),C组与D组在各时间点无明显差异(P>0.05);电镜下观察B组脑组织损伤最重。E组脑组织损伤最轻,C组和D组优于B组。结论:短暂脑缺血再灌注损伤可诱导HSP70表达,有利于脑缺血再灌注后损伤神经元的修复。     

T细胞死亡相关基因8对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响

目的: 探讨活化T细胞死亡相关基因8（T cell death associated gene 8,TDAG8）对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响。方法: 将健康成年雄性SD大鼠132只采用随机数字表法分为6组：对照组（n=18）,缺血再灌注组（I/R组,n=42）,TDAG8激动剂BTB09089组（BTB组,n=18）,空白载体组（空载体组,n=18）,TDAG8-siRNA阴性对照组（siRNA阴性组,n=18）和TDAG8-siRNA组（siRNA组,n=18）。采用线栓法短暂性阻塞大鼠大脑中动脉（middle cerebral artery occlusion,MCAO）制备大鼠局灶性脑I/R模型。BTB组、空载体组、siRNA阴性组和siRNA组于缺血前72 h、48 h 和24 h分别经侧脑室注射20 μmol/L的BTB09089、空白转染试剂jetPEI、4 μg siRNA阴性对照和4 μg TDAG8-siRNA各8 μL,其中空载体组、siRNA阴性组和siRNA组同时均注入等量转染试剂jetPEI。于再灌注6 h时每组取6只大鼠断头取脑,蛋白质印迹法检测缺血半暗带TDAG8、cleaved caspase-3、Bcl-2和TDAG8下游相关蛋白p-Akt、p-CREB的表达水平;于再灌注24 h和72 h时每组分别取6只大鼠评价神经功能并测定脑梗死体积百分比。结果： 与对照组比较,其他5组再灌注6 h时缺血半暗带TDAG8、cleaved caspase-3、p-Akt和p-CREB表达均上调（均P<0.05）,Bcl-2表达下调（P<0.05）,再灌注24 h和72 h时脑梗死体积百分比明显升高、神经功能缺陷评分显著降低（均P<0.05）;与I/R组比较,BTB组再灌注6 h时 TDAG8、Bcl-2、p-Akt和p-CREB水平上调（均P<0.05）,cleaved caspase-3表达下调（P<0.05）,再灌注24 h和72 h时脑梗死体积百分比显著降低,神经功能缺陷评分明显升高（均P<0.05）;与siRNA阴性组比较,siRNA组再灌注6 h时TDAG8、Bcl-2、p-Akt和p-CREB水平下调（P<0.05）,cleaved caspase-3表达上调（P<0.05）,再灌注后24 h和72 h脑梗死体积百分比显著升高,而神经功能缺陷评分明显降低（P<0.05）。结论： 活化TDAG8可能通过Akt信号通路调控短暂性大鼠MCAO诱导的脑缺血再灌注损伤。     

NDLIP对大鼠脑缺血再灌注损伤后血脑屏障的保护作用

目的 观察无创性肢体缺血预适应(noninvasive delayed limbischemic preconditioning,NDLIP)对大鼠脑缺血再灌注损伤后血脑屏障(blood brain barrier,BBB)的保护作用.方法 30只雄性SD大鼠随机分成NDLIP组、缺血再灌注组和假手术组.NDLIP组、缺血再灌注组采用阻断大鼠一侧大脑中动脉(MCA)血流2h,再灌注24h制成局灶性脑缺血模型.于再灌注前,NDLIP组左后肢无创性3次缺血5min/再灌5min,1次/d,连续3d;缺血再灌注组和假手术组不给予NDLIP.再灌注24h后断头取脑,制作冰冻切片,免疫组化染色榆测BBB内皮屏障抗原(endothelial barrier antigen EBA)、纤维蛋白原(fibrinogen)的表达,并测量各组梗死体积.结果 缺血再灌注组(I/R)EBA表达5.3±1.24,假手术组EBA表达15.2±1.02,两组比较有统计学差异(P＜0.01).NDLIP组EBA表达11.61±0.98,较缺血再灌注组显著增加(P＜0.01);缺血再灌注组fibrinogen表达8.60±3.12,假手术组fibrinogen表达1.30±0.46,两组比较有统计学差异(P＜0.01).NDLIP组fibrinogen表达5.56±2.58,较缺血再灌注组显著减少(P＜0.01);NDLIP组梗死体积(218.05±112.14)mm3,缺血再灌注组梗死体积(250.68±129.76)mm3,两组比较有统计学差异(P＜0.01).结论 NDLIP能显著增加脑缺血再灌注损伤后EBA表达,降低BBB通透性,缩小梗死体积,对BBB及脑缺血再灌注损伤具有保护作用.