脐带间充质干细胞无血清培养的实验研究

目的建立一种简单的体外无血清培养扩增人脐带间充质干细胞（human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs）的方法。方法利用酶消化法分离hUCMSCs,在无血清干细胞培养体系下培养扩增,进行形态学观察,CCK-8法分析细胞生长曲线,流式细胞仪分析细胞表面抗原表达及细胞周期,进行成骨、成脂诱导分化。结果hUCMSCs呈典型的成纤维细胞形态,具有较强的增殖能力。CD29、CD44、CD90、CD105均呈阳性表达,而CD34、CD45呈阴性表达。3周可诱导分化为脂肪细胞和成骨细胞。结论利用酶消化法和无血清的培养体系能够快速分离培养出大量hUCMSCs,该方法扩增得到的间充质细胞具备稳定的细胞标记物和生长状态,可用于各种治疗的临床试验。     

无动物源成分培养基用于人脐带间充质干细胞培养的研究

目的建立一种无动物源成份无血清的间充质干细胞培养基XF/SF-MSCM,并探讨其支持人脐带间充质干细胞(h UC-MSCs)体外增殖、维持分化潜能的效果。方法组织块贴壁法分离获得原代人脐带间充质干细胞,P1代起分别使用自制的XF/SF-MSCM培养基与含10%胎牛血清的传统培养基(SC-MSCM)对脐带间充质干细胞进行连续培养传代至P6代,观察比较两组P6代细胞的形态及增殖能力,以流式细胞术检测连续传代后细胞的免疫学表型,比较其成骨、成脂肪的分化潜能。结果分离获得的原代P0脐带间充质干细胞,分别在XF/SFMSCM与SC-MSCM两种培养基中连续培养传代,细胞增殖能力及形态无显著差别。两组P6代细胞的生长曲线相似,但XF/SF-MSCM组间充质干细胞贴壁的紧密程度稍低;流式细胞检测结果显示,XF/SF-MSCM组细胞保持了间充质干细胞的免疫学表型,高表达CD29、CD44、CD90,不表达CD31、CD34、CD45并维持了良好的成骨和脂肪细胞的分化能力。结论本室制备的无动物源成份无血清培养基XF/SF-MSCM可支持脐带间充质干细胞的体外扩增,维持其免疫学表型及分化潜能,提供数量充足的高质量间充质干细胞,满足临床治疗及生物医学研究的需要。     

表达vWF蛋白的重组BHK细胞的无血清培养

采用HADAMARD统计设计方法建立了适于重组BHK细胞培养和vWF蛋白表达的无血清培养基SFMA。用SFMA进行重组BHK细胞的批培养，细胞生长明显优于有血清培养(DMEM FBS(φPRS=0．05))和无血清培养基SFM-Ⅱ的培养，最大细胞密度可分别提高16．7％和40%。同时，在培养的96h，蛋白的表达水平比有血清培养提高了18．7%，SFMA维持培养48h的vWF蛋白的表达水平比SFM-Ⅱ提高了50％。     

无血清培养法在肿瘤干细胞培养中的应用

无血清培养基（Serum free medium,SFM）是在合成培养基的基础上,引入成分完全确知或部分明确的血清替代成分,使培养基既满足细胞培养要求,又有效避免因使用血清而带来的问题,已被广泛应用于研究和生产领域。     

脐带间充质干细胞无血清培养体系的筛选

目的：筛选培养脐带间充质干细胞的无血清培养基。方法：采集新生儿脐带标本,将脐带剪成组织碎块,随机分为A组、B组、C组,分别加入MesenCult、Ultraculture和AM-V 3种不同的无血清培养基进行培养。观察3组脐带原代细胞游出时间和细胞形态,检测细胞的增殖能力、分化能力和表面抗原的表达。结果：A组、B组、C组原代细胞从组织块长出的平均时间分别是17 d、6 d、7 d。显微镜下观察可见,从组织块游出的细胞散在分布,呈短梭形或多角形,形态饱满,折光性好,生长融合时A组和B组细胞呈旋涡状生长,细胞折光性好,大小均一,C组细胞细长,折光性稍差,无明显的旋涡状生长的特征。3组均表达CD105、CD90、CD73抗原,不表达CD34、CD45、HLA-DR抗原;3组各标志物的表达差异均无统计学意义(P>0.05)。3组间充质干细胞均具有向成脂细胞、成骨细胞分化的能力,C组分化能力弱于A组和B组。结论：B组培养体系用时较短,干细胞特性保持较好,价格适宜,可以作为大规模培养人间充质干细胞的首选培养基。     

大鼠骨髓间充质干细胞的无血清培养与鉴定

目的探索大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)的体外分离纯化、培养、扩增及鉴定方法,为MSCs后续研究提供种子细胞。方法采用Percoll密度梯度离心法和贴壁法相结合分离纯化MSCs并传代,在无血清组和有血清组培养基DMEM/F12中培养,传代扩增。倒置相差荧光显微镜下观察两组细胞生长特性和形态,采用MTT(噻唑蓝)法检测增殖水平并绘制生长曲线,检测两组细胞周期。分别取两组细胞第三代MSCs,采用流式细胞仪检测细胞表型。结果无血清组培养基培养9~10 d有明显的细胞丛生长,略晚于有血清组的7~8 d;MTT测定生长曲线显示两组细胞增殖能力相似;流式细胞仪检测两组培养方式下细胞均表达CD29、CD54,不表达CD34、CD45;细胞周期检测显示无血清组G0/G1期细胞为68.0%,明显高于有血清组的46.4%,两组差异有显著性。结论无血清培养基的条件能较好地使细胞处于G0/G1期,保持更好的分化潜能及干细胞特性。     

无血清细胞培养基添加蛋白—白蛋白和转铁蛋白的制备和纯化

建立了一个从成年牛血清同时制备纯化白蛋白和转铁蛋白的方法。从无血清培养基添加蛋白的角度作了纯度检测，内毒素和脂肪酸含量测定，并通过了无血清细胞培养检测。结果表明，用此方法生产的白蛋白和转铁蛋白可以用作无血清培养基添加蛋白。     

rCHO细胞无血清适应及悬浮培养

考察了血清对rCHO(C28)细胞生长与产物(HBsAg)表达的影响,发现φ血清<0.01时细胞出现明显的代谢转换;考察了微量元素、氢化可的松、混合脂类与短多肽混合物(TL混合物)对细胞的影响,建立了适于rCHO(C28株)生长的无血清培养基MT-SFM;在将细胞从有血清转到无血清状态时,阶段性降血清比直接降血清更有利于rCHO(C28)细胞的无血清适应;当细胞适应了MT-SFM无血清培养基后,批培养中细胞的最大平均比生长速率可达0.65d-1,产物HBsAg的滴度在32～64之间。     

人肺癌细胞系NCI-H1650中肿瘤干细胞的分离及鉴定

目的 在人肺癌细胞系NCI-H1650中分离出肺癌干细胞及鉴定.方法 将NCI-H1650细胞在含人胰岛素、重组人表皮生长因子(EGF)、重组人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、牛血清清蛋白(BSA)的无血清培养基中连续培养 ,用紫杉醇刺激诱导干细胞 ,通过流式细胞术、免疫荧光的方法分析肺癌干细胞标志物CD133和CD326的表达;采用RT-PCR和Western blot的方法检测干细胞相关标记物Oct4、Nanog和Sox-2的表达.结果 经无血清连续培养结合紫杉醇诱导的NCI-H1650细胞呈球形悬浮生长 ,相比于有血清培养的NCI-H1650细胞 ,其干细胞标志物CD133和CD326高表达 ,干细胞相关标志物Oct4、Nanog和Sox-2表达水平提高(P＜0 .05).结论 采用体外无血清连续培养结合紫杉醇刺激诱导 NCI-H1650细胞能有效分离出其中干细胞.     

无血清培养基中成釉细胞瘤细胞的生长特性

【目的】 研究成釉细胞瘤细胞在无血清培养基中的生长特性，建立成釉细胞瘤细胞的无血清培养法。【方法】 用Defined Keratinocyte-SFM（DK-SFM）无血清培养基和DMEM培养成釉细胞瘤细胞，观察细胞的生长特性、细胞形态和传代次数，流式细胞仪（FCM）测定S期细胞比率（SPF）和增殖指数（PI）。【结果】在DK-SFM培养基中，细胞传代6次，平均生长92d；细胞形态清晰，仅见少许散在的成纤维细胞生长：SPF值为12．3％～14．5％，PI值为11．6％～15．3％。在DMEM中，细胞传代3次，平均生长61d；细胞境界不清．并可见较多的成纤维细胞；SPF值为7．9％～9．2％，PI值为8．3％～9．6％。【结论】成釉细胞瘤细胞在DK-SFM无血清培养基中存活时间长，DK-SFM较DMEM更适合体外培养成釉细胞瘤细胞。     

无血清培养基中成釉细胞瘤细胞的生长特性

 【目的】 研究成釉细胞瘤细胞在无血清培养基中的生长特性，建立成釉细胞瘤细胞的无血清培养法。【方法】 用Defined Keratinocyte-SFM（DK-SFM）无血清培养基和DMEM培养成釉细胞瘤细胞，观察细胞的生长特性、细胞形态和传代次数，流式细胞仪（FCM）测定S期细胞比率（SPF）和增殖指数（PI）。【结果】在DK-SFM培养基中，细胞传代6次，平均生长92d；细胞形态清晰，仅见少许散在的成纤维细胞生长：SPF值为12．3％～14．5％，PI值为11．6％～15．3％。在DMEM中，细胞传代3次，平均生长61d；细胞境界不清．并可见较多的成纤维细胞；SPF值为7．9％～9．2％，PI值为8．3％～9．6％。【结论】成釉细胞瘤细胞在DK-SFM无血清培养基中存活时间长，DK-SFM较DMEM更适合体外培养成釉细胞瘤细胞。     

人乳腺癌原代细胞和细胞系中肿瘤干细胞的比较

目的比较人乳腺癌原代细胞以及人乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231S中乳腺癌干细胞的含量和细胞表型。方法采用流式细胞技术对人乳腺癌原代细胞以及MCF-7、MDA-MB-231S进行检测和分选,并测定不同细胞亚群在裸鼠体内重建肿瘤的能力。结果人乳腺癌原代细胞以及MCF-7、MDA-MB-231S细胞的CD44和CD24表达与分布不同;和人乳腺癌原代细胞相比,MCF-7、MDA-MB-231S细胞中乳腺癌干细胞的含量更高(P<0.01)。结论和人乳腺癌原代细胞相比,人乳腺癌细胞系中含有更高比例的乳腺癌干细胞,并且细胞表型也发生了改变。     

神经内分泌肿瘤干细胞的研究进展

该文简要介绍了肿瘤干细胞(CSC)和神经内分泌肿瘤(NEN)近年来的发展状况,指出目前在NEN患者的临床诊疗中确实存在诊断困难、传统治疗效果差以及预后不佳的现象。随后阐述了关于NEN信号通路的最新研究进展,发现NEN中似乎也存在一些调控正常干细胞生长分化的信号通路,因此间接证实了NEN中存在神经内分泌肿瘤干细胞的可能性,并且认为神经内分泌肿瘤干细胞的耐药性可能是造成NEN临床疗效差的重要原因。     

氨基酸对中华仓鼠卵巢（CHO）细胞在无血清培养基中的作用

研究了１５种氨基酸对中华仓鼠卵巢细胞在无血清培养基中的作用。实验表明，添加的精氨酸，亮氨酸，脯氨酸及蛋氨酸对细胞生长有明显的促进作用；而高浓度的丝氨酸，色氨酸则对细胞生长有明显的抑制作用；其它几种氨基酸在细胞不同生长时期所起的作用为不同。     

在无血清培养基中代谢副产物对杂交瘤细胞生长代谢的影响 I.乳酸的作用

研究了无血清批培养中乳酸对杂交瘤细胞生长代谢的影响，当乳酸浓度低于5．3mmol/L时，乳酸对细胞生长和代谢无明显影响，当乳酸浓度在10mmol/L-25mmol/L时，对杂交瘤细胞的生长代谢有弱抑制，当乳酸浓度高于34mmol/L时，对细胞生长代谢有较明显的抑制。     

在无血清培养基中代谢副产物对杂交瘤细胞生长代谢的影响Ⅲ.丙氨酸的作用

研究了无血清培养中的代谢副产物丙氨酸对杂交瘤细胞生长代谢的影响。丙氨酸浓度在0～ 8.9mmol/L范围时 ,丙氨酸对细胞生长影响不大 ,对单抗的生成没有直接影响 ,但对细胞代谢有较大的影响。随着丙氨酸浓度的提高 ,葡萄糖的消耗增加 ;同时 ,乳酸的生成增加 ,而丙氨酸和氨的生成减少     

乳腺癌干细胞标志物的研究进展

乳腺癌干细胞是乳腺癌组织中极少数具自我更新能力和多向分化潜能的细胞,与乳腺癌的发生发展密切相关。CD44、CD24、B38.1和ESA等表型标志物和标记滞留细胞、侧亚群细胞、细胞内乙醛脱氢酶1等功能性标志物可为乳腺癌干细胞提供重要的分离和纯化依据,与乳腺癌的转移和预后密切相关,对于研究乳腺癌的生物学特征、调控机制以及靶向治疗有着重要意义。     

乳腺癌干细胞信号转导通路的研究进展

随着乳腺癌干细胞的发现,人们对于乳腺癌的发生、发展、转移等机制有了进一步的了解。Wnt/β-catenin、Notch、Hedgehog 3条信号通路对乳腺干细胞的自我更新与分化起着重要的作用,一旦信号通路发生异常,乳腺干细胞就会异常分化,无限增殖形成乳腺癌干细胞,进而形成乳腺癌。为了更好地了解Wnt/β-catenin、Notch、Hedgehog 3条信号通路在乳腺癌干细胞中的调控机制,以及信号通路关键分子的表达情况,现结合信号通路的研究进展予以简要综述。     

肝癌干细胞的研究进展

肿瘤干细胞(CSC)假说是近年来提出的关于肿瘤发生的新理论,该学说认为不是所有的细胞都能突变发育成肿瘤,只有一部分特殊的细胞能够发育成肿瘤,并维持肿瘤的生物学特性。过去几年内研究者已经证明包括肝癌在内的许多CSCs的存在,并分别针对肝癌干细胞与肝癌的关系、肝癌干细胞的生物学特性和鉴定标志等问题展开讨论,总结了一些治疗措施。现对CSCs及肝癌干细胞的研究进展予以综述。