亚砷酸对人肝癌细胞HepG2中HIF-1α表达的影响

目的 探讨亚砷酸对人肝癌细胞HepG2中HIF-1α表达的影响.方法 以0、0.25、0.5、1、2和4μmol/L的亚砷酸处理人肝癌细胞HepG2缺氧环境中培养8 h;1μmol/L的亚砷酸处理人肝癌细胞HepG2缺氧培养0-10h,WST-8法和台盼蓝染色法分析细胞增殖和活力,采用RT-PCR和Western Blot方法检测肝癌细胞中HIF-1 α的表达.结果 ①不同剂量的亚砷酸和不同缺氧时间下对肝癌细胞活力和增殖率的影响与对照组相比差异无显著性(P＞0.05).②随着亚砷酸浓度的增加,HIF-1α蛋白表达逐渐降低,与对照组相比差异呈显著性(P＜0.01).③不同剂量的亚砷酸对HIF-1α mRNA表达的影响与对照组相比无差异显著性(P＞0.05).结论 亚砷酸抑制人肝癌细胞HepG2中HIF-1α蛋白表达是通过转录后机制.     

HIF-1α516对人肝癌HepG2细胞侵袭转移能力的影响

目的观察HIF-1α516对人肝癌HepG2细胞侵袭转移能力的影响。方法人肝癌HepG2细胞分为空白组(同步培养,不做任何处理)、对照组(转染siRNA)和siRNA干扰组(转染HIF-1α516 siRNA)。siRNA和HIF-1α516 siRNA通过脂质体转染HepG2,转染18h后Western blot检测HepG2细胞中HIF-1β核蛋白和全细胞蛋白的表达、ELISA法检测细胞培养上清中MMP-2、MMP-9的含量,Transwell小室观察HepG2的转移侵袭能力。结果 HIF-1α516 siRNA能显著降低HepG2细胞HIF-1α516mRNA的表达(降低70.0%)(P<0.01);增强HepG2细胞的侵袭转移能力(增强71.10%)(P<0.01)。HIF-1α516siRNA对全细胞HIF-1β蛋白的表达无影响,但能促进HIF-1β蛋白的核转移(增强64.1%)(P<0.01)。HIF-1α516 siRNA能明显升高HepG2细胞培养上清中MMP-2、MMP-9蛋白表达,分别升高37.72%、55.46%(P<0.01)。结论 HIF-1α516能抑制HepG2的转移侵袭,其机制可能与抑制HIF-1β的核转移有关。     

西罗莫司对肝癌HepG2细胞中HIF-1α表达影响

目的 研究西罗莫司对氯化钴(CoCl2)诱导的肝癌Hep2细胞中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响.方法 用CoCl2诱导细胞模拟缺氧微环境,并根据CoCl2浓度不同分为0、50、100、200及00 μmol/L组;选择CoCl2浓度为200 μmol/L来模拟肿瘤内缺氧微环境,同时分别联合0、10、20、30、0 nmol/L的西罗莫司作用于细胞2 h.应用逆转录-聚合酶链反应检测HIF-1α mRNA的表达.结果 随CoCl2浓度提高,HIF-1α mRNA的表达升高(F=103.67,q=.83～2.15,P<0.05),其中CoCl2浓度为200和00 μmol/L两组比较差异无显著性(q=0.69,P>0.05);西罗莫司可使Hep2细胞HIF-1α mRNA的表达降低并呈剂量依赖性(F=127.90,q=.2～28.28,P<0.05).结论 缺氧微环境可以促进Hep2细胞中HIF-1α mRNA的表达,HIF-1α可能通过在细胞缺氧调控中起作用而参与了肿瘤的发生发展.西罗莫司可以抑制HIF-1α mRNA的表达,这可能是其抗肿瘤的机制之一.     

HIF-1α转染骨骼肌细胞的诱导产物VEGF对血管内皮细胞增殖的影响

目的：将缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）基因转染体外培养大鼠骨骼肌细胞,观察转染后细胞上清液中VEGF蛋白的表达及其对血管内皮细胞增殖的影响。方法：利用机械和酶消化法分离培养大鼠骨骼肌细胞,贴块法培养血管内皮细胞;用阳离子脂质体介导pHOX／HIF-1α质粒转染骨骼肌细胞,ELISA法检测转染后VEGF蛋白的分泌情况,MTT法检测其对血管内皮细胞增殖的影响。结果：成功将HIF-1α基因转染大鼠骨骼肌细胞,转染组细胞培养上清中24、48、72和96h检测到VEGF含量分别为（1308．40±102．00）、（1449．20±69．86）、（1802．30±96．71）和（1494．95±86．24）pg/ml,明显高于对照组;转染后骨骼肌细胞分泌的VEGF对血管内皮细胞有显著的促增殖作用。结论：HIF-1α基因转染大鼠的骨骼肌细胞后可增加具有正常功能的VEGF蛋白的分泌,促进血管内皮细胞的增殖。     

血管内皮生长因子165b对人肝癌HepG2细胞生物学特性的影响

目的：探讨血管内皮生长因子165b（VEGF165b）对人肝癌HepG₂细胞生物学特性的影响,并初步研究其作用机制。方法：HepG₂细胞分为空白组（仅加转染试剂）、对照组（转染阴性对照PcDNA3.0表达载体）和PcDNA-VEGF165b组（转染VEGF165b表达载体PcDNA-VEGF165b）。MTT法检测各组HepG₂细胞生存率,RT-PCR法和Western blotting法检测HepG₂细胞中VEGF165b和VEGF165 mRNA和蛋白表达水平,Transwell小室法检测HepG₂细胞迁移能力。结果：与空白组比较,对照组HepG₂细胞中VEGF165b和VEGF165 mRNA和蛋白表达水平无明显变化（P>0.05）。与空白组比较,PcDNA-VEGF165b组细胞中VEGF165b mRNA和蛋白表达水平明显升高（P<0.05）,VEGF165 mRNA和蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。空白组和对照组细胞生存率比较差异无统计学意义（P>0.05）;与空白组和对照组比较,PcDNA-VEGF165b组细胞生存率有所降低,但差异无统计学意义（P>0.05）。细胞迁移实验,空白组和对照组细胞迁移率比较差异无统计学意义（P<0.05）;与空白组和对照组比较,PcDNA-VEGF165b组HepG₂细胞迁移率明显降低（P<0.05）。结论：VEGF 165b能抑制VEGF165基因和蛋白的表达,VEGF165b对肝癌细胞增殖无明显影响,但可降低肝癌细胞的迁移能力。     

益气化瘀中药对糖尿病皮肤溃疡大鼠缺氧诱导因子-1α和血管内皮细胞生长因子的影响

目的:探讨益气化瘀中药对糖尿病皮肤溃疡气虚血瘀证大鼠缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)和血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的影响。方法:72只清洁级雄性SD大鼠,除8只作正常对照组外,其他大鼠在背部全层皮肤缺损开放性创面的基础上加造气虚血瘀证糖尿病模型后,随机分为模型组、贝复济组、益气化瘀组、益气组和化瘀组。应用免疫组织化学、图像分析等技术,观察各组大鼠创面肉芽组织中HIF-1α和VEGF水平的变化。结果:模型组HIF-1α水平高于正常对照组(P<0.01),VEGF浓度明显低于正常对照组(P<0.01)。各用药组HIF-1α表达水平明显低于模型组(P<0.01),VEGF表达水平明显高于模型组(P<0.01)。益气化瘀组HIF-1α表达水平明显低于贝复济组、益气组和化瘀组(P<0.05或P<0.01),VEGF表达水平明显高于贝复济组(P<0.01)。益气组与化瘀组HIF-1α和VEGF的表达水平相似,它们与贝复济组之间无明显差异。结论:益气化瘀中药能明显促进糖尿病皮肤溃疡气虚血瘀证大鼠的创面愈合,其机制与下调HIF-1α水平、上调VEGF的表达水平和改善局部缺血缺氧状态有关。     

常氧酸性环境对肝癌细胞HepG2 HIF-1α蛋白表达及其活性的影响

目的:观察常氧酸性环境对体外肝癌细胞低氧诱导因子(hypoxia-inducible factor,HIF)-1α蛋白表达及其活性的影响,初步探讨其在肿瘤生长中的作用。方法:体外培养肝癌细胞HepG2,以MTT法测定常氧酸性环境(AP组,pH 6.5)作用20 h后细胞存活率,并与正常培养细胞(SD组,pH 7.2)作比较;Western印迹法检测AP组和SD组HepG2细胞核内HIF-1α蛋白表达的变化;应用转录因子DNA结合ELISA试剂盒(TransAMTM)分析AP组和SD组HepG2细胞核内HIF-1 DNA结合活性的变化;免疫细胞化学法和Western印迹法检测各组HepG2细胞内血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF) 蛋白表达的变化。结果:常氧酸性环境(pH 6.5)作用20 h后,AP组细胞存活率为(98.71±1.79)%,与SD组相比轻微降低,但无统计学意义(P>0.05)。Western印迹结果表明,AP组HepG2细胞核内HIF-1α和胞内VEGF蛋白条带平均灰度值分别是SD组的(9.34±1.67)倍和(3.42±0.83)倍,组间均有统计学差异(P<0.01)。AP组HepG2细胞核内HIF-1 DNA结合活性明显高于对照组(P<0.01)。结论:常氧酸性环境能显著提高HepG2细胞HIF-1蛋白含量及其DNA结合活性,同时其下游基因VEGF蛋白含量增加,推测除低氧环境外,酸性环境也可能是导致恶性肿瘤中HIF-1高表达的原因之一。     

缺氧诱导因子1α通过上调Snail促进HepG2肝癌细胞上皮-间充质化

目的上皮-间充质化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）是实体瘤原发灶癌细胞获得转移能力的基础。缺氧诱导前列腺癌、肾癌、卵巢癌的EMT过程已得到证实,缺氧诱导因子1α（hypoxia inducible factor 1 alpha,HIF-1α）在这些过程中发挥重要作用。但是HIF-1α和肝癌细胞EMT之间的关系目前并不清楚。本文探讨HIF-1α在肝癌EMT中的作用。方法利用可调控HIF-1α表达的肝癌HepG2Tet-on-HIF-1α细胞系,在排除缺氧其他反应干扰的情况下研究HIF-1α在肝癌细胞EMT过程中的作用和机制。结果过表达HIF-1α促进HepG2肝癌细胞EMT,下调HIF-1α表达可以抑制HepG2肝癌细胞EMT。HIF-1α促进EMT相关转录因子Snail的表达。结论 HIF-1α通过上调Snail来促进HepG2肝癌细胞EMT。     

蜂毒素对骨肉瘤Saos-2细胞系HIF-1α及VEGF表达的影响

目的：研究低氧条件下蜂毒素（melittin）对骨肉瘤Saos-2细胞缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）及血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响,探讨蜂毒素抗骨肉瘤细胞血管生成的机制。方法：分别设空白对照组和低氧对照组,以及加入终浓度为2、4、8μg/ml的蜂毒素组;采用免疫印迹试验（Western—blot）检测细胞HIF-1α蛋白表达,逆转录RT—PCR检测HIF-1α和VEGFmRNA转录水平的变化。结果：与空白对照组比较,低氧对照组细胞中HIF-1α的蛋白表达及VEGF的mRNA表达均明显升高（P〈0．05）;蜂毒素组细胞的HIF-1α蛋白表达明显低于低氧对照组（P〈0．05）,并具有剂量依赖性;蜂毒素组细胞的VEGF mRNA水平明显低于低氧对照组（P〈0．05）,且有剂量依赖性。结论：模拟的低氧条件可以诱导骨肉瘤Saos-2细胞系中HIF-1α通路的激活;蜂毒素通过抑制HIF-1α蛋白水平的表达、影响其通路中下游基因VEGF mRNA水平的表达而抑制骨肉瘤Saos-2细胞中低氧诱导的HIF-1α通路的激活。由此推断蜂毒素可能通过此途径抑制骨肉瘤血管的生成,达到抗肿瘤的效果。     

IGFBP2增强IGF-1诱导的HepG2细胞增殖、迁移和侵袭

目的探讨胰岛素样生长因子结合蛋白2(IGFBP2)对胰岛素样生长因子-1(IGF-1)诱导人源肝癌(HCC)细胞株HepG2细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响及其机制。方法选用15.6、31.2、62.5、125、250 ng/ml的IGFBP2与50 ng/ml的IGF-1联合刺激HepG2细胞。用CCK-8法检测细胞增殖,transwell法检测细胞迁移和侵袭;Western blot检测细胞内信号通路相关蛋白的活化和表达。结果与IGF-1单独刺激相比,IGFBP2与IGF-1联合作用可增强HepG2细胞增殖、迁移和侵袭能力;IGFBP2与IGF-1联合刺激增加HepG2细胞株中IGF1R、Akt和ERK磷酸化水平,而对总表达无明显改变,同时上调早期生长反应蛋白1(EGR1)的表达。结论 IGFBP2通过活化Akt及ERK信号通路增强IGF-1诱导HepG2细胞增殖、迁移和侵袭的能力。     

丙型肝炎病毒核心区蛋白在HepG2细胞中的表达

目的 :构建能稳定表达丙型肝炎病毒核心区蛋白的哺乳动物细胞系 ,以便对丙型肝炎病毒核心区蛋白的抗原性及其他功能作进一步研究。方法 :通过PCR扩增丙型肝炎病毒核心基因 ,将其亚克隆入真核表达质粒pcDNA3.1( )中 ,用脂质体包裹后转染肝癌细胞系HepG2 ,通过G4 18筛选获得稳定转染细胞系 ,并通过间接免疫荧光法检测HepG2中丙型肝炎病毒核心区蛋白的表达。结果 :克隆的基因全长 5 94bp ,并经测序和重组质粒双酶切证实为所需目的基因 ;经间接免疫荧光验证实转染了目的基因的HepG2细胞中有丙型肝炎核心区蛋白的表达。结论 :丙型肝炎病毒核心区蛋白能在HepG2细胞中稳定表达。     

FOLFOX方案联合沙利度胺体外抑制人肝癌HepG2细胞VEGF、Caspase-3基因表达的研究

目的研究沙利度胺联合FOLFOX(folinic acid fluorouracil oxaliplatin)作用肝癌细胞HepG2后VEGF、Caspase-3的表达,以及探讨沙利度胺联合FOLFOX诱导HepG2细胞凋亡的机制。方法应用MTT法和流式细胞仪体外研究沙利度胺对HepG2细胞增殖的影响;采用western blot法,观察沙利度胺联合FOLFOX作用HepG2细胞48h后VEGF、Caspase-3的表达情况。结果沙利度胺对肝癌HepG2细胞有抑制作用,且沙利度胺联合FOLFOX显著提高了对肝癌细胞生长的抑制作用,沙利度胺联合FOLFOX作用于HepG2细胞48h后,细胞表面Caspase-3的表达均增强,VEGF的表达均降低。结论沙利度胺联合FOLFOX诱导肝癌HepG2细胞凋亡的机制可能可能通过调节VEGF蛋白表达激活caspase-3,从而诱导HepG2细胞凋亡。     

重组P_(53)基因在HepG-2中的表达及作用

为进一步探索正常Ｐ５３ 对肿瘤细胞增殖的抑制作用,本文用磷酸钙 ＤＮＡ共沉淀法,将本室构建的ＰＸＴ１ Ｐ５３ 真核表达细胞转移至ＨｅｐＧ ２ 肝癌细胞系内,经斑点杂交技术和间接免疫荧光技术证实,外源性Ｐ５３ 基因已在ＨｅｐＧ ２ 细胞中稳定表达,导入的Ｐ５３基因亦能抑制ＨｅｐＧ ２ 肝癌细胞系增殖并诱导其凋亡。实验结果提示正常Ｐ５３ 基因可成为治疗不同肿瘤的重要靶分子之一。     

冬凌草甲素对肝癌HepG2细胞株体外放射增敏作用

目的观察冬凌草甲素对肝癌细胞株体外的放射增敏作用。方法对肝癌细胞系（HepG2）进行克隆形成实验。照射前用1.804、3.608、5.412、7.216、18.040μmol/L冬凌草甲素处理HepG2细胞6～72h,然后分别给予0、1、2、3、4、5、6Gy的^60Co照射,观察细胞存活率,计算放射增敏比（SER）。并运用常规照射剂量2Gy时的放射增敏比（SERSF2）作为评价指标。结果冬凌草甲素可提高HepG2细胞的放射敏感性,并呈时间、浓度依赖关系。照射前用1.804μmol/L冬凌草甲素处理HepG2细胞6～72h,在6、12和24h未观察到放射增敏作用,放射增敏作用仅在48和72h出现。当高浓度冬凌草甲素（18.040μmol/L）处理HepG2细胞6、12和24h,各时间点均可见放射增敏效应。结论冬凌草甲素可能是一种肝癌放射增敏剂。     

胃癌细胞系幽门螺杆菌感染对HIF-1α、HIF-2α及VEGF表达的影响

目的研究幽门螺杆菌对人胃癌细胞株BGC-823中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、缺氧诱导因子-2α(HIF-2α)、血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法将不同浓度的H.pylori悬液与BGC-823细胞共培养24h后收集细胞,应用MTT法检测细胞存活率,RT-PCR和Western blotting技术检测HIF-1α、HIF-2α及VEGF的表达。对照组加稀释用培养液。结果与对照组比较,H.pylori可显著促进BGC-823细胞的增殖(P<0.05)并能显著提高细胞HIF-1α、HIF-2α及VEGF mRNA和蛋白的表达(P<0.05),呈浓度依赖性。结论 H.pylori感染能够刺激BGC-823细胞VEGF的表达,其机制可能是通过HIF-1α、HIF-2α途径介导。这可能是其诱导胃癌血管生成和促进胃癌侵袭转移的机制之一。     

海洋贝类提取物对血管平滑肌细胞PCNA及PDGF表达的影响

①目的　探讨海洋贝类提取物 (ES)对大鼠血管平滑肌细胞 (VSMCs)增殖的影响及其作用机制。②方法　取培养的 5～ 8代VSMCs,加入 5 0 μg/L碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF) ,同时给药组分别加入体积分数为 0 .5 0的ES及 10 0mg/L肝素 ,孵育 4 8h后 ,用免疫组织化学LSAB法和计算机图像分析系统 ,检测VSMCs的增殖细胞核抗原 (PCNA)及血小板衍化生长因子 (PDGF)的表达。③结果　ES作用下 ,VSMCs的PCNA ,PDGF表达的平均吸光度值、阳性细胞率均显著低于对照组 (F =8.93～ 14 9.4 4 ,q =4 .78～ 2 1.6 9,P <0 .0 1)。 ④结论ES能显著抑制VSMCs增殖 ,该作用可能是通过抑制PDGF的表达而最终影响PCNA调控作用的发挥来实现的。     

重复加热对肝癌HepG2细胞增殖及细胞周期蛋白D1的影响

目的探讨多次热疗后残存下来的HepG2细胞增殖速度的变化及与此相关的可能原因。方法HepG2细胞43℃加热，每次80分钟，每天两次，共10个循环后，分析细胞倍增时间，检测细胞周期及细胞周期素D1的表达。结果热处理后的HepG2细胞增殖加快，细胞周期中S期和G2期的比率增高，细胞周期素D1的表达增强。结论热处理后的HepG2细胞增殖加快与其完成DNA复制而进入分裂的细胞比率高、细胞周期素D1的表达增强有关。     

铜锌超氧化物歧化酶基因对HepG2肝癌细胞增殖的抑制作用

目的：探讨超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）对肝癌细胞增殖的抑制作用。方法：利用逆转录病毒载体介导的基因转移技术，将人铜锌ＳＯＤ基因导入人肝癌细胞系ＨｅｐＧ２细胞内，获得高表达。检测其对ＨｅｐＧ２细胞生物学特性的影响。结果：与对照相比ＳＯＤ基因转染后的肝癌细胞生长受到抑制，细胞体积变大，分裂象减少，Ｓ期细胞比率减少，软琼脂集落形成率低，裸鼠成瘤瘤体小。结论：铜锌ＳＯＤ基因具有抑制ＨｅｐＧ２肝癌细胞增殖的作用。     

辣椒素对肝癌HepG2细胞凋亡的诱导作用

目的:探讨辣椒素对肝癌HepG2细胞生长抑制及凋亡诱导作用的机制。方法:以100、200、400μmol/L浓度辣椒素处理肝癌HepG2细胞后分别培养12、24、48 h,MTT法测定细胞增殖抑制率;TUNEL法检测细胞凋亡;Western Blotting检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Bad的表达。结果:随着作用浓度及时间增加,经辣椒素处理的肝癌HepG2细胞增殖活性明显降低(P<0.01);抑制率均显著增加,呈浓度和时间依赖性(P<0.01);HepG2细胞凋亡率也随辣椒素浓度增加而上升;凋亡相关蛋白Bcl-2表达下降,Bax、Bad表达上升(P<0.05)。结论:辣椒素对肝癌HepG2细胞具有增殖抑制和诱导凋亡作用,其机制可能与调节凋亡相关蛋白有关。     

应用流式细胞光度计研究人参单体Rh_1和Rh_2对小鼠S180肉瘤细胞周期移行的影响

人参皂甙单体Rh_1和Rh_2给予接种S180肉瘤细胞3天后的载瘤小鼠腹腔注射,50mg/kg.d,连续7天。应用FACS 420荧光细胞激活器对肿瘤细胞进行周期分析发现,在短期内Rh_1对肿瘤细胞周期影响不大;Rh_2可阻断S_(180)肉瘤细胞从S期向G_2期过度(P<0.005),抑制肿瘤细胞生长。