去甲二氢愈创木酸对SHG-44胶质瘤细胞GFAP基因表达的影响

目的：探讨去甲二氢愈创木酸（NDGA）诱导恶性胶质瘤细胞分化过程中中对GFAP基因表达的影响及其意义。方法：用免疫组织化学和原位杂交方法定性、定量检测人恶性胶质瘤细胞系SHG－44细胞GFAP基因的表达水平。结果：NDGA处理后,瘤细胞GFAP蛋白及mRNA表达水平明显增高（P＜0.01）。结论：NDGA具有诱导恶性胶质瘤细胞GFAP基因表达的作用,推测GFAP基因表达上调可能是NDGA诱导胶质瘤细胞分化的作用机制之一。     

bcl-2、c-myc基因表达在去甲二氢愈创木酸诱导人恶性胶质瘤细胞凋亡中的意义

目的：观察bcl-2、c-myc在去甲二氢愈创木酸（NDGA）诱导恶性胶质瘤细胞系SHG－44细胞凋亡中的变化及意义。方法：利用光镜和电镜观察及TUNEL法检测培养细胞凋亡的情况,用免疫组织化学、原位杂交和图像分析等方法检测bcl-2、c-myc基因mRNA和蛋白的表达水平。结果:①一定浓度的NDGA处理SHG－44细胞12－96h,均可诱导SHG－44细胞发生凋亡,且随着作用时间的延长,凋亡细胞数增加越明显;②经NDGA处理细胞后,出现SHG－44细胞bcl-2、c-myc蛋白表达水平降低,且随着作用时间的延长,这种趋势更加明显,与细胞调亡的发生密切相关;③原位杂交结果显示,NDGA处理细胞不同时间后,出现SHG－44细胞bcl-2、c-myc基因mRNA的表达水平降低,结果与免疫组化检测一致。结论：NDGA诱导SHG－44细胞的凋亡可能与其下调bcl-2、c-myc基因的表达有关,但其确切机制有待进一步深入研究。     

去甲二氢愈创木酸与氨甲喋呤、长春新碱配伍对人恶性胶质瘤细胞株的作用

目的：观察体外应用去甲二氢愈创木酸（NDGA）、氨甲喋呤（MTX）、长春新碱（VCR）3种药物单用或合用对人恶性胶质瘤细胞株SHG－44细胞的作用,并探讨其作用的可能机制。方法：用MTT法检测药物作用效应,用免疫组化染色法检测细胞CyclinD1基因的蛋白表达情况。结果：①3种药物单用及两药合用时随着药物浓度的增加其抗肿瘤效应也增加,且两药合用药物的效应增强;②先给NDGA24h后再给MTX或VCR,与同时给药对该细胞的抗肿瘤效应差异无显著性（P＞0.05）,而先给MTX或VCR24h后再给NDGA,与同时给药对细胞的抗肿瘤效应差异有显著性（P＜0.05）;③免疫组化染色结果显示,与对照组相比,NDGA处理后该细胞Cyclin D1基因的蛋白表达明显降低。结论：NDGA与MTX或VCR间有 协同作用,且这种作用可能与NDGA降低细胞cyclin D1基因的蛋白表达有关。     

人恶性胶质瘤细胞SHG-44经诺帝诱导分化后形态学改变及差异表达蛋白的质谱分析

目的:观察人恶性胶质瘤细胞SHG-44经去甲二氢愈创木酸类似物--诺帝诱导分化后形态学的改变,并分析差异表达蛋白.方法:分别用100、200 μmol/L诺帝诱导SHG-44细胞分化,观察处理后24、48、72 h细胞形态学的改变,并与未受刺激的空白对照组相比较;提取200μmol/L诺帝处理后的SHG 44细胞以及空白对照组细胞总蛋白进行双向电泳,用PDqest7.1软件比较两者间的差异表达蛋白,离子飞行时间质谱仪分析高丰度表达的差异蛋白.结果:200 μmol/L诺帝处理后SHG-44细胞的形态学改变较100 μmol/L更为明显;处理72 h时细胞分化最为明显.与空白对照组SHG-44细胞相比,经200 μmol/L诺帝诱导后,双向电泳发现了23个差异蛋白点,其中21个蛋白点表达下调,2个蛋白点表达上调.质谱分析高丰度表达的差异蛋白分别为:未知蛋白、增殖相关基因A、解链蛋白Up1、交替拼接因子ASF-3、cofiln 1、真核转录启动因子5A、β半乳糖苷酶结合凝集素、Pi类谷光苷肽-S-转移酶.结论:诺帝能诱导人恶性胶质瘤细胞SHG-44分化,并呈一定的时效及量-效依赖性,分化后的差异蛋白涉及到细胞增殖、分化、凋亡及基因转录调控等多个方面.     

去甲二氢愈创木酸对人恶性胶质瘤细胞系CHG-5生长的影响

目的观察去甲二氢愈创木酸(nordihydroguaiaretic acid,NDGA)对人恶性胶质瘤细胞系CHG-5体内外生长的影响.方法采用MTT法、流式细胞仪、光镜等技术观察CHG-5细胞体外增殖、细胞周期、凋亡和裸鼠移植瘤生长情况.结果NDGA可显著抑制CHG-5细胞体外增殖,G0/G1期细胞明显增多,S、G2/M期细胞减少,凋亡细胞增加.采用接种后第5天按50 mg/kg腹腔内注射给药,治疗组移植瘤体积较对照组缩小,未见明显的毒副作用.结论NDGA对CHG-5细胞的体内外生长具有一定的抑制作用,其作用可能与细胞周期阻滞和诱导细胞凋亡有关.     

去甲二氢愈创木酸对恶性胶质瘤细胞基因组甲基化水平的影响及其意义

目的：探讨去甲二氢愈创木酸（NDGA）诱导人恶性胶质瘤细胞系SHG－44细胞分化过程中基因组甲基化状态改变及其意义。方法：合成甲基化敏感性AP－PCR引物,用AP－PCR方法检测SHG－44细胞基因组甲基化状态,观察NDGA诱导该细胞分化过程中甲基化水平的变化。结果：对照组基因组DNA经MspI酶解后AP－PCR扩增片段比HpaII酶解后的扩增片段小,几乎未见存留大片段,至少有3个片段与HpaII酶解片段不同。同一时相点HpaII酶解后扩增产物相比,NDGA处理后基因组DNA Msp I酶解后的扩增产物量较少、条带较多,且随时相点延长产物量逐渐增加,条带增多。结论：NDGA诱导人恶性胶质瘤细胞SHG－44细胞分化过程中基因组甲基化状态增高,推测基因组甲基化状态可能是NDGA诱导胶质瘤细胞分化的作用靶点之一。     

脑胶质瘤SHG-44细胞动力学特征的实验研究

目的　探讨脑胶质瘤潜在倍增时间 (Tpot)实验条件。方法　采用荷脑瘤动物模型 ,溴脱氧尿嘧啶核苷(BudR)掺入法测定Tpot。结果　所建立的Wistar脑胶质瘤大鼠模型实用、可靠。在体潜在倍增时间、有效倍增时间 (Teff)分别为 8.15天和 18.4 6天。BudR掺入率、细胞标记指数 (LI)均在BudR掺入后 8h达最高 ,>6Gy辐射其潜在倍增时间明显缩短。结论　在体、离体BudR掺入标记率存在明显差异。辐射吸收剂量 >12Gy,其实际倍增时间、潜在倍增时间、有效倍增时间降至最低点。提示脑胶质瘤放疗过程中存在细胞加速再增殖 ,宜连续治疗     

芳香化酶对胶质瘤细胞系SHG-44细胞生长及分化的作用

目的 在人胶质母细胞瘤细胞系SHG－44细胞中检测到芳香化酶细胞色素P450（AROM）表达的基础上探讨AROM对胶质瘤细胞生长增殖及分化的作用。方法 通过构建反义AROM真核表达载体，转染SHG－44细胞，利用流式细胞仪、MTT法、免疫荧光染色及激光共聚焦扫描显微镜（CLSM）等技术观察封闭AROM基因表达后细胞生长曲线、细胞周期及中间丝蛋白GFAP和Vimentin表达的变化。结果 成功构建了反义AROM真核表达载体PCI／as-AROM并使AROM的表达封闭达50％以上。SHG－44细胞在转 染了PCI／as-AROM和空载体PCI－neo后，生长曲线、细胞周期无明显变化，但GFAP免疫荧光强度减弱而Vimentin免疫荧光强度增强。结论 反光AROM可能对SHG－44细胞增殖无明显影响但对神经胶质瘤细胞的分化有一定的抑制作用。     

NPPB对人脑胶质瘤SHG-44细胞凋亡的诱导作用及其机制

目的：探讨氯通道阻断剂5-硝基-2-（3-苯丙胺）苯甲酸（NPPB）对人脑胶质瘤SHG-44细胞凋亡的诱导作用,并阐明其可能的机制。方法：体外培养脑胶质瘤SHG-44细胞,分为对照组及50、100和200 μmol·L^-1 NPPB组。采用MTT法检测细胞活力,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用免疫组织化学法和蛋白免疫印记法分别检测SHG-44细胞中凋亡蛋白的表达水平。结果：MTT检测,与对照组比较,作用24和48 h,100和200 μmol·L^-1 NPPB组SHG-44细胞活力明显降低（P < 0.01）。流式细胞术检测,100和200 μmol·L^-1 NPPB组细胞凋亡率分别为24.64%和41.85%,高于对照组（4.17%）（P < 0.01）。免疫组织化学和蛋白免疫印记法检测,100 μmol·L^-1 NPPB组SHG-44细胞中caspase-3和Bax蛋白表达水平升高（P < 0.05或P < 0.01）,Bcl-2蛋白表达水平降低（P < 0.05）。结论：NPPB可以通过下调Bcl-2的表达、上调Bax的表达,使caspase-3活化,进而引起SHG-44细胞凋亡。     

人参皂甙Rh2对人脑恶性胶质瘤SHG-44细胞抗肿瘤作用的蛋白质组学分析

目的：利用蛋白质组学研究技术分离、鉴定人脑恶性胶质瘤SHG-44细胞经人参皂甙Rh2（G-Rh2）作用后差异表达蛋白,探讨G-Rh2抗胶质瘤作用机制。方法：提取32 μmol?L-1 G-Rh2处理72 h后的SHG-44细胞及空白对照组细胞总蛋白;通过双向凝胶电泳分离蛋白质
,选取2D图谱中差异表达≥1.5倍且P<0.05的蛋白质斑点,使用基质辅助激光解析离子飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）进行肽指纹图谱（PMF）鉴定。结果：与空白对照组比较,SHG
-44细胞经G-Rh2作用后,双向电泳发现了20个差异蛋白质点,其中16个蛋白质点表达下调,4蛋白质点上调。质谱分析了前5个差异显著的下调蛋白质点,分别为丝切蛋白1（cofilin 1）、磷酸甘油酸激酶（phosphoglycerate kinase,PGK）、过氧化物氧化还原酶1（peroxiredoxin 1,Prx 1）、热休克蛋白（heat shock proteins,HSP）和增殖细胞核抗原（proliferation cell nuclear antigen,PCNA）。结论：差异表达的蛋白质可能参与了G-Rh2对人脑恶性胶质瘤的抗肿瘤作用。     

CDK4在去甲二氢愈创木酸抑制恶性胶质瘤细胞增殖中的作用

目的：探讨细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶4（CDK4）在去甲二氢愈创木酸（NDGA）抑制人恶性胶质瘤细胞系SHG－44细胞增殖中的作用。方法：采用细胞培养、细胞计数、流式细胞仪检测、免疫沉淀、免疫组化及图像分析等技术方法。结果：①在10－200μmol/L浓度范围内,NDGA可使SHG－44细胞增殖受阻,且NDGA液浓度越高,这种作用越明显,即呈明显的剂量依赖性;②NDGA对细胞周期抑制作用主要表现于G1→期;③NDGA处理后,SHG－44细胞CDK4蛋白激酶的活性降低,且这种作用与NDGA的处理浓度呈正相关,与NDGA对SHG－44细胞的增殖抑制作用相一致;④NDGA处理后,SHG－44细胞CDK4基因的蛋白表达明显减弱。结论：CDK4蛋白激酶活性降低在NDGA抑制SHG－44细胞增殖中起着十分重要的作用。     

血管生成抑制剂TNP-470对人恶性胶质瘤细胞系SHG-44及其移植瘤生长的影响

目的：观察TNP－470对人恶性胶质瘤细胞系SHG－44体内和体外生长的影响。方法：采用MTT法、软琼脂克隆法、流式细胞仪、光镜和透射电镜技术观察SHG－44细胞体内外增殖、克隆形成、细胞周期和形态学变化及异种移植瘤生长情况。结果：20－2000ng/mlTNP－470可显著抑制SHG－44细胞体外增殖,克隆形成率显著降低,G0／G1期细胞明显增多,S、G2／M期细胞减少。彩和30mg/kg体重TNP－470隔日皮下注射后,移植瘤体积缩小、重量显著减轻,组织出现明显调亡细胞和坏死。结论：TNP－470对SHG-44细胞的生长抑制作用与其调控细胞周期和诱导细胞凋亡相关,提示TNP－470作为一种血管生成抑制剂对胶质瘤细胞生长也具有直接抑制作用。     

丁酸钠对人脑胶质瘤细胞系SHG-44增殖分化的影响

目的 研究丁酸钠对培养人脑胶质瘤SHG-44细胞的增殖抑制和分化诱导。方法 以2mmol／L丁酸钠处理SHG-44细胞，用MTT比色、核仁组成区银染观察细胞增殖抑制，用流式细胞术、电镜观察超微结构、免疫组织化学染色、凝集试验鉴定细胞分化。结果 SHG-44细胞经丁酸钠处理后：①细胞增殖受到明显抑制，并具有时间、剂量依赖性；②细胞周期受阻，S期细胞比例减少；③电镜观察发现细胞核变规则，异染色质增多，胞浆中线粒体、粗面内质网等细胞器增多并趋于正常；④胶质纤维酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein，GFAP)表达增强，改型蛋白(Vimentin)表达减弱；⑤细胞凝集度明显变低。结论 丁酸钠能抑制人脑胶质瘤SHG-44细胞的增殖，2mmol／L丁酸钠能诱导SHG-44细胞发生明显分化。     

五味子多糖对人脑胶质瘤细胞凋亡的影响

目的：观察五味子多糖对人脑胶质瘤细胞生长的抑制作用,初步探讨五味子多糖作用肿瘤细胞的机制。方法通过体外细胞实验的方式,培养人脑胶质瘤SHG-44细胞,将其分为空白组和用药组,倒置显微镜观察五味子多糖作用后的凋亡情况,用WST-1法检测人脑胶质瘤细胞中SOD和GSH的含量,ELISA法检查凋亡蛋白Bcl-2、bax和Caspase-3的表达情况。结果通过与用药组进行比较,倒置显微镜下观察不同浓度的五味子多糖作用于脑胶质瘤SHG-44细胞48 h可明显抑制其生长;与对照组相比,肿瘤细胞中SOD和GSH含量变化具有统计学意义（P＜0．01）,含量轻度降低;Caspase-3和Bcl-2/bax含量明显降低。结论五味子多糖可以在一定程度上促进脑胶质瘤细胞凋亡。     

人恶性胶质瘤细胞系CHG-5和SHG-44细胞骨架的比较研究

目的：比较人恶性肿瘤胶质瘤细胞系CHG－5和SHG－44的细胞骨架系统成分,以进一步了解胶质瘤细胞骨架特征与其分化程度的关系。方法：利用免疫荧光细胞化学染色结合激光共聚焦显微镜观察两种细胞系微管、微丝、中间丝的含量及分布,并比较几种常用固定剂和缓冲液对各骨架成分检测的影响。结果：除微管和微丝均被染色外,所有细胞表达Vimentin(波形蛋白）,而只有部分细胞呈胶质纤维酸性蛋白（GFAP）阳性。微管及中间丝在两种细胞胞质中的分布特征基本相似,但两种相细胞微丝的定位、分布及荧光强度有一定差异。Vimentin型中间丝在SHG－44细胞中表达较强,而GFAP在CHG－5细胞中表达较强。丙酮、75％酒精和4％多聚甲醛对微管的固定效果较好;用醛类固定后中间丝（尤其是Vimentin）染色极弱。结论：CHG－5分化程度较SHG－44高,两种细胞系细胞骨架状态的差异可能是二者生物学特性差异的结论基础。     

PTEN基因诱导人脑胶质瘤SHG-44细胞凋亡及bcl-2表达下调

目的 探讨PTEN基因对人脑胶质瘤SHG－44细胞凋亡及凋亡相关基因bcl-2表达的影响，阐明PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖的机制。方法PTEN基因体外转染SHG－44细胞，筛选阳性细胞克隆，以原位杂、免疫组化方法检测PTEN基因的表达情况；采用透射电镜、流式细胞仪和核DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞的凋亡情况；以免疫荧光法检测bcl-2基因的表达。结果 PTEN基因转染的SHG－44细胞有PTEN蛋白的表达。透射电镜下可见转染PTEN基因后细胞核染色质浓缩边集、胞质浓缩、核破裂及凋亡小体形成等典型的凋亡表现；流式细胞仪显示细胞周期从G1期到S期发生抑制，并且在G1期峰前出现一明显的凋亡峰（15．9％）；细胞核DNA琼脂糖凝胶电泳呈现凋亡细胞特有的梯状条带；bcl-2的表达也显著下调。结论 PTEN基因可诱导SHG－44细胞凋亡，并下调bcl-2蛋白的表达，这可能是PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖的分子机制之一。     

丁酸钠诱导人脑胶质瘤细胞系SHG-44凋亡的初步探讨

目的:研究短链脂肪酸盐丁酸钠对培养人脑胶质瘤细胞系SHG-44的增殖抑制和凋亡诱导.方法:通过细胞体外培养的方法,以2mmol/和4mmol/L丁酸钠处理SHG-44细胞,用MTT比色试验和PCNA免疫组化染色观察细胞增殖,电子显微镜、线粒体跨膜电位(△ψm)检测以鉴定细胞凋亡.结果:①SHG-44细胞增殖受到明显抑制,PCNA表达减弱;②4mmol/L丁酸钠明显诱导SHG-44细胞凋亡,电镜下可见细胞膜内陷自行分割包裹碎裂的核片段和部分胞浆,脱离细胞主体,形成凋亡小体;罗丹明123染色示凋亡细胞△ψm下降.结论:丁酸钠能抑制人脑胶质瘤SHG-44细胞的增殖,4mmol/L丁酸钠能诱导SHG-44细胞发生线粒体途径凋亡.     

去甲二氢愈创木酸对VEGF及其受体KDR基因表达影响的研究

目的：探讨去甲二氢愈创木酸（NDGA）对血管生成因子（VEGF）及其相应受体KDR基因表达状况的影响及其意义。方法：采用免疫组化、原位杂交及图像分析等技术方法观测NDGA作用下人恶性胶质瘤细胞系SHG－44细胞VEGF基因、人脐静脉内皮细胞系ECV－304细胞VEGF的相应受体KDR基因表达的变化。结果:①100μmol/L的NDGA处理胶质瘤细胞1－3d ,引起VEGF蛋白及mRNA表达水平的降低;②100μmol/L的NDGA处理内皮细胞1－3d,受体KDR的蛋白表达也呈下降趋势,且KDR基因表达的降 低较胶质瘤细胞VEGF的降低更为明显。结论：NDGA对胶质瘤细胞VEGF的表达有抑制作用,NDGA也抑制了内皮细胞KDR的表达,此抑制作用可能是NDGA抗血管生成的重要分子基础。     

蜂毒肽对人神经胶质瘤细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用

目的 研究蜂毒肽对体外培养的入神经胶质瘤细胞的增殖抑制和诱导凋亡的作用.方法 MTT法检测蜂毒肽对两种人神经胶质瘤细胞(U87、U251)的增殖抑制率;流式细胞仪和凝胶电泳法检测蜂毒肽对两种肿瘤细胞的凋亡诱导作用.结果 蜂毒肽能够明显抑制两种细胞的生长(P＜0.05);浓度为1、10、20、40、80、160、200 mg/L的蜂毒肽诱导U87和U251细胞的凋亡率分别达到12.80%、16.92%、22.69%、34.05%、41.82%、59.87%、80.25%和11.61%、16.21%、22.03%、30.57%、41.10%、58.33%、79.12%,其诱导凋亡作用与剂量呈正相关.结论 蜂毒肽对人神经胶质瘤细胞具有明显的增殖抑制和促进凋亡作用.     

NDGA诱导人胶质瘤细胞株分化过程中基因组甲基化及甲基转移酶的变化及意义

目的 了解去甲二氢愈创木酸(Nordihydroguaiaretic acid,NDGA)处理前后两种人胶质瘤细胞系CHC-5、SHC-44甲基转移酶(DNA methyltransferase，DNMT)活性、DBNT mRNA表达和基因组甲基化程度的改变。方法 以NDAG处理人恶性胶质瘤细胞系CHC-5及SHC-44，观察两种细胞增殖和分化状态；采用同位素微量示踪法测定甲基转移酶活性和基因组DNA甲基化程度；应用RT-PCR法测定洲DNMT mRNA表达水平。结果 NDMT处理后两种细胞增殖速度明显减缓，分化水平升高；DNMT活性显著降低、基因组甲基化程度明显升高；而DNMT mRNA改变不明显。结论 NDGA能抑制甲基转移酶的活性，升高基因组甲基化水平，这些作用可能与其诱导恶性胶质细胞瘤分化的机制有关。