3个鼠源性肿瘤线粒体DNA编码区基因RFLP分析

目的了解线粒体DNA突变在肿瘤发生发展中的作用.方法应用PCR-限制性片段长度多态性分析技术对LA795、CT26和SCC891等3个肿瘤细胞系mtDNA编码区基因片段进行了分析.结果 mtDNA编码区的tRNAMet Glu Ⅰle及NDI基因核酸片段经HaeⅢ等16种内切酶消化后,这些肿瘤细胞系表现出完全相同的酶切图谱,其酶切格局及酶切片段大小完全相同.结论本组肿瘤细胞系mtDNA编码区基因结构相对稳定.     

胃癌线粒体DNA D-loop区碱基突变的检测分析

目的 研究胃癌患者的癌组织线粒体DNA （mtDNA）D-loop区碱基突变情况,以探讨mtDNA D-loop区碱基突变与胃癌发生发展的相关性.方法 采用聚合酶链反应和DNA测序相结合的方法,对75例胃癌患者癌组织线粒体D-loop 区进行扩增并测序分析.结果 在75例胃癌组织中共有130个位点发生了变化,其中属于基因多态性有101个,基因突变有29个.75例胃癌组织中39例mtDNA D-loop区存在突变,突变率为52%.结论 mtDNA D-loop 区碱基突变可能在胃癌发生发展中发挥重要作用.     

肝细胞性肝癌线粒体DNA D-loop区基因突变的研究

目的 研究肝细胞性肝癌组织线粒体DNA D-loop区基因的突变情况.方法 选择40例肝细胞性肝癌组织和其相应癌旁组织,取对应患者外周静脉血,提取线粒体DNA后进行PCR扩增和测序.结果 40例肝细胞性肝癌组织线粒体DNA D-loop区中,发生突变16例(40.0%),共发现突变位点34个,其中16个位点为点突变,5个位点发生插入,13个位点发生缺失;另外新发现2个多态性位点.结论 线粒体DNA D-loop区是一个具有高度多态性和突变性的区域,在肝细胞性肝癌组织中突变率较高.     

南方鲇16S rRNA基因扩增片段的RFLP研究

目的分析南方鲇不同地理种群16S rRNA基因扩增片段多态性.方法利用PCR技术扩增获得南方鲇(Silurus meridionalis)线粒体DNA 16S rRNA基因片段,并用10种限制性内切酶酶切.结果 Hind Ⅲ、MspⅠ、DraⅠ、TaqⅠ、Hae Ⅲ在该片段上有限制性位点,但只有Hae Ⅲ在野生种群和养殖品种之间表现限制性片段长度多态性.结论不同野生地理种群间不存在限制性片段长度多态性,养殖品种与各野生种群间在该基因片段上存在一定程度的多态性变异.     

几种肿瘤细胞株线粒体DNA多态性

目的了解和分析线粒体DNA突变与肿瘤发生发展的关系.方法应用PCR-RFLP和PCR-SSCP技术对Lewis肺癌等肿瘤细胞株mtDNA的D-loop,ND3 and tRNAMet Glu Ile基因片段进行了分析.结果mtDNA编码区的tRNAMet glu Ile及ND1基因核酸片段经HaeⅢ等16种内切酶消化后,这些肿瘤细胞株表现出完全相同的酶切图谱.而D-loop片段,小鼠肿瘤Hca-F出现了与对照小鼠不同的酶切方式;用PCR-SSCP分析方法对这些肿瘤细胞株mtDNA的D-loop的5'及3'端作进一步分析,在研究的6个肿瘤中,有4个在mtDNA非编码区上存在着突变.结论mtDNA突变在肿瘤的发生发展中可能起一定作用.     

乳腺癌中线粒体基因组D环区基因突变的研究

目的 通过检测乳腺癌基因组D环区体细胞突变和种系性变异,探讨其与乳腺癌发生的关系.方法 提取24例乳腺癌患者癌、癌旁组织及外周血细胞总DNA,PCR扩增各组织线粒体DNA(mitoohondrial DNA,mtDNA)基因组D环(D-loop),基因测序后与线粒体文库中的剑桥序列比对,分析突变类型.结果 在24例乳腺癌组织中,共发现91个种系性变异,11例(45.8%)肿瘤发现体细胞突变共19例次,36.8%位于第一高变区,52.6%位于第二高变区.结论 乳腺癌mtDNA D环区具有高度多态性和高度突变率,该区的碱基改变在乳腺癌的形成中可能起重要作用.     

胃癌组织线粒体DNA D-loop区的突变及其意义

目的研究胃癌组织中线粒体DNA(mtDNA)D-loop区突变情况及其在肿瘤发生和发展中的作用。方法选择17例胃癌及相应正常胃黏膜组织,应用聚合酶链反应(PCR)对其mtDNA D-loop区进行扩增并测序,将测序结果与线粒体文库中的Revised Cambridge Reference Sequence(rCRS)进行对比分析。结果 17例胃癌组织中共发现mtDNA D-loop区存在175个多态性变异,其中8个(4.6%)为新发现的变异。8例(47.1%)胃癌组织中共发现13次突变;突变热点集中在HV1(23.1%)和HV2(53.9%),并且HV2较HV1更易突变。mtDNA D-loop区突变率与胃癌分化程度、浸润深度、有无淋巴结转移、病人性别和年龄无关(P>0.05)。结论 mtDNA D-loop区尤其是其中的HV1及HV2是一个具有高度多态性和突变性的区域,在胃癌中突变率较高。     

肝细胞性肝癌线粒体DNA D-100p区基因突变的研究

目的研究肝细胞性肝癌组织线粒体DNA D—loop区基因的突变情况。方法选择40例肝细胞性肝癌组织和其相应癌旁组织,取对应患者外周静脉血,提取线粒体DNA后进行PCR扩增和测序。结果40例肝细胞性肝癌组织线粒体DNA D-loop区中,发生突变16例（40．0％）,共发现突变住点34个,其中16个位点为点突变,5个位点发生插入,13个位点发生缺失;另外新发现2个多态性位点。结论线粒体DNA D-loop区是一个具有高度多态性和突变性的区域,在肝细胞性肝癌组织中突变率较高。     

MDA在PCR-RFLP基因分型中的实用性

目的:评估多重置换扩增(MDA)在聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)基因分型中的实用性.方法:用MDA法对50例样本进行了全基因组扩增,并用扩增后的DNA作为模板,对两个单核苷酸多态性(SNP)进行了PCR-RFLP基因分型.结果:对于所检测的两个SNP,以经MDA扩增的基因组DNA为模板,与未经MDA扩增的基因组DNA为模板进行的PCR-RFLP基因分型,结果完全一致.结论:MDA可用于PCR-RFLP等遗传分析.     

云南滇南小耳猪与广西巴马小型猪mtDNA D-Loop的初步研究

目的研究封闭群滇南小耳猪与广西巴马小型猪线粒体DNA（mtDNA）的多态性,探索小型猪遗传监测的方法。方法用18种限制性内切酶对23头滇南小耳猪和21头广西巴马小型猪mtDNA D-loop的PCR产物进行RFLP分析。结果滇南小耳猪和广西巴马小型猪的mtDNA D—loop在品种内和品种间均表现出相同的酶切图谱,未见多态性。结论滇南小耳猪与广西巴马小型猪mtDNA D—loop的遗传多样性贫乏,mtDNA PCR—RFLP技术在其遗传监测中不具应用价值。     

Mutations of mitochondrion DNA in mouse tumors

Objective： To ascertain the variations of mitochondrion DNA （mtDNA） in mouse tumors and to inquire into the relationship between mutations of mtDNA and carcinogenesis Methods： The variations of D-loop, ND3 and tRNA^Met＋Glu＋Ile gene fragments of mtDNA from six tumor cell lines of mice were analyzed by PCR technology with restriction fragment length polymorphism analysis （polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism, PCR-RFLP） and single strand conformation polymorphism analysis （SSCP-PCR） method. Results： ND3 and tRNA^Met＋Glu＋Ile gene fragments ofmtDNA from the tumors showed no variation in 27 endonuclease sites; D-loop ofmtDNA from Hca-F had an additional endonuclease sites of Hinf I in contrast to that of the inbred mouse. Deeply analyzed by PCR-SSCP, the D-loop ofmtDNA was found to possess mutations in 4 of 6 tumors. Conclusion： D-loop is the hot spot of tumor mtDNA mutation which can act as contributors to the carcinogenic     

Study on mitochondrial DNA diversity among 7 inbred strains of mice

Objective：To study the genetic variation of mitochondrial DNA （mtDNA） among common laboratory strains of inbred mice. Methods： The genetic polymorphism of mtDNA among 4 classical laboratory strains of inbred mice and 3 inbred strains of mice established in China was analyzed by polymerase chain reaction coupled with restriction fragment length polymorphism（PCR-RFLP） and PCR coupled with single-stranded conformation polymorphism（PCR-SSCP）. Results： With regard to the D-loop （Displacement loop, D-loop）, tRNA^ Met＋Glu＋Ile, and ND3 （NADH dehydrogenase subunit 3, ND3） gene fragments of mtDNA from these mice,no variation was revealed by PCR-RFLP at 46 restriction enzyme sites. Further analyzed by PCR-SSCP,the D-loop 5＇fragment and 3＇end fragment of mtDNA from these mice also showed no genetic variation. Conclusion： Owing to maternal mode of inheritance of mtDNA,the results indicate that these common inbred strains of mice share the same maternal lineage.     

人大肠癌线粒体DNA重组质粒的构建

目的了解大肠癌细胞株（SW480，LoVo，HT29）线粒体DNA的突变，克隆突变的大肠癌线粒体DNA（mtDNA）基因，构建pcDNA3．1（＋）-mtDNA真核表达重组体，并导入NIH3T3细胞，以探讨线粒体基因突变与肿瘤发生的关系。方法提取大肠癌细胞株（SW480，LoVo，HT29）mtDNA，扩增D-LOOP区，产物用DNA自动测序法进行序列分析。利用DNA重组技术将其定向插人真核表达质粒pcDNA3．1（＋），并用脂质体法导人NIH3T3细胞。结果检测出大肠癌细胞株SW480、LoVo、HT29细胞mtDNAD—LOOP分别有10、9、8个突变位点。成功克隆1119bp的mtDNAD—LOOP区至表达质粒pcDNA3．1（＋），并导入NIH3T3细胞中。结论线粒体DNAD-LOOP区是一个具有高度多态性和突变性的区域，在大肠癌细胞株中突变率较高。     

人大肠癌线粒体DNA重组质粒的构建

目的 了解大肠癌细胞株(SW480,LoVo,HT29)线粒体DNA的突变,克隆突变的大肠癌线粒体DNA(mtDNA)基因,构建pcDNA3.I(+)-mtDNA真核表达重组体,并导入NIH3T3细胞,以探讨线粒体基因突变与肿瘤发生的关系。方法 提取大肠癌细胞株(SW480,LoVo,HT29)mtDNA,扩增D-LOOP区,产物用DNA自动测序法进行序列分析。利用DNA重组技术将其定向插人真核表达质粒pcDNA3.1(+),并用脂质体法导人NIH3T3细胞。结果 检测出大肠癌细胞株SW480、LoVo、HT29细胞mtDNAD-LOOP分别有10、9、8个突变位点。成功克隆1119bp的mtDNAD-LOOP区至表达质粒pcDNA3.1(+),并导入NIH3T3细胞中。结论 线粒体DNAD-LOOP区是一个具有高度多态性和突变性的区域,在大肠癌细胞株中突变率较高。     

TWEAK在肝癌细胞系高/低淋巴道转移株中表达的初步分析

[目的]研究肿瘤坏死因子样弱凋亡因子（TWEAK）在小鼠腹水型肝癌细胞系高／低淋巴道转移株（Hca—F／Hca—P）中的表达及差异。[方法]分别提取Hca—F和Hca—P细胞的总RNA，通过RT—PCR在mRNA水平检测TWEAK基因的表达；提取Hca—F和Hca—P细胞的总蛋白，用蛋白印迹法从蛋白表达水平验证差异表达。[结果]RT—PCR检测到两株细胞均在358bo处出现特异性扩增的条带，并且Hca—F的条带亮度低于Hca—P，图像分析显示，Hca—F细胞中TWEAK的转录子含量低于Hca—P细胞（P〈0．05）；蛋白免疫印迹法验证两株细胞表面均有TWEAK蛋白的表达，Hca—P强于Hca—F，与基因芯片的结果一致。[结论]TWEAK在鼠腹水型肝癌细胞系Hca—F和Hca—P均有表达，且Hca—F中较低，而在Hca—P中表达较高。这说明了TWEAK可能与淋巴道转移有关，同时可能参与了细胞的凋亡与组织分化。     

人大肠癌线粒体DNA重组质粒的构建及对NIH3T3细胞的转染

目的: 构建pcDNA3. 1( )-mtDNA真核表达重组体,并导入NIH3T3细胞.方法: 提取大肠癌细胞株(SW480,Lovo,HT29)mtDNA,扩增D-loop区,产物用DNA自动测序法进行序列分析.利用DNA重组技术将其定向插人真核表达质粒pcDNA3. 1( ),并用脂质体法导入NIH3T3细胞.结果: 大肠癌细胞株SW480,Lovo,HT29细胞mtDNA D-loop分别有10,9,8个突变位点.成功克隆1119 kb的mtDNA D-loop区至表达质粒pcDNA3. 1( ),并导入NIH3T3细胞中.结论: 成功构建了pcDNA3. 1( )-mtDNA真核表达重组体,并成功导入NIH3T3细胞中.     

人肝癌SMMC-7721细胞株部分线粒体基因表达的研究

目的:观察人肝癌SMMC-7721细胞株部分线粒体DNA(mtDNA)基因表达的情况.方法:根据人线粒体DNA(mtDNA)基因序列,利用primer premier 5.0生物软件设计了4对PCR引物,分别是扩增D-loop区、ND6、ATPase8-ATPase6、16sRNA基因,采用RT-PCR方法对SMMC-7721细胞线粒体DNA上D-loop区及其他3个基因的表达进行了检测,并与其在正常人肝细胞株(L02)线粒体中的表达作了比较.结果:我们发现,与正常人肝细胞株(L02)相比,在SMMC-7721细胞中,D-loop区、ND6、ATPase8-ATPase6基因表达总体是增高的,16sRNA基因表达基本不变,同时在同一基因两条链(重链和轻链)之间的表达也存在差异.结论:我们认为,由于线粒体DNA编码的多肽均是氧化磷酸化酶复合物的亚单位,这些基因表达的异常可能造成细胞对氧利用障碍,细胞能量产生减少,成为造成SMMC-7721细胞主要以糖酵解的方式提供能量的重要原因之一.     

肾癌患者线粒体基因组D环区基因突变的研究

目的：通过检测肾癌基因组 D 环区体细胞突变及种系性变异情况,探讨其与肾癌发生的关系。方法选取肾癌患者20例,对其癌组织、癌旁组织及外周血细胞总 DNA进行 PCR扩增并测序,相关结果与线粒体文库中剑桥序列进行比对,综合分析基因突变类型。结果在20例肾癌患者各组织中,共有7例检出线粒体DNA（mitochondrial DNA,mtDNA）的D-环区（displancement loop,D-Loop）存在突变,突变发生率为35%,涉及突变位点17个,其中4个属微卫星不稳定序列;20例患者中共发现9个基因库未记载的新的多态性变化。结论肾癌患者mtDNA的D环区具有高度多态性和高度突变率,该区的基因突变在肾癌的形成中可能发挥重要作用。