乳腺癌相关差异表达基因的筛选及分析

目的构建乳腺癌组织与癌旁正常乳腺组织差异表达的cDNA消减文库,筛选乳腺癌相关基因并进行分析。方法应用抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)技术对15对乳腺癌组织及正常癌旁乳腺组织进行差异基因的消减,构建cDNA消减文库,并转化大肠杆菌进行文库扩增,采用数字表法随机挑选克隆经PCR鉴定后,对200个阳性克隆插入片段的序列进行测定及同源性分析。结果建立了乳腺癌差异表达片段cDNA消减文库;通过测序和同源性分析,得到173个差异表达基因,其中26个与肿瘤发生发展相关;26个基因中有15个已被文献明确报道在乳腺癌组织或细胞中有差异表达。结论应用SSH技术成功建立了乳腺癌差异表达基因cDNA消减文库,为乳腺癌的发病机制研究及寻找潜在的治疗靶点提供了有力的支持。     

抑制性消减杂交法构建甲状腺癌差异表达基因文库

目的：筛选并克隆在甲状腺癌组织与正常甲状腺组织之间差异表达的基因。方法：(1)应用抑制性消减杂交(SSH)进行基因差示表达分析,构建人甲状腺癌组织与正常甲状腺组织之间差异表达的cDNA消减文库;(2)克隆、鉴定甲状腺癌组织特异性高／低表达的基因;(3)登录Genbank,运用Blastn程序进行同源性分析。结果：成功构建了高消减效率的人甲状腺癌cDNA消减文库,对其中数个克隆的插入cDNA片段进行测序,经检索Genbank表明,正向SSH产物中有3个片段与来源于结肠上皮腺癌和Lung Epidermoid carcinoma的EST有100％同源性,提示它们来自恶性肿瘤相关基因。反向SSH产物中有5个片段为未知新序列,提示它们可能来自于在甲状腺癌中特异性低表达的新基因。结论：通过抑制性消减杂交技术,构建了人甲状腺癌cDNA消减文库,为下一步筛选鉴定甲状腺癌特异性基因及其全长克隆、功能研究等工作打下了基础。     

大黄鱼凝血酶原类似基因的克隆及其表达分析

采用快速末端cDNA扩增法,首次从大黄鱼中克隆到全长为2 023 bp的凝血酶原类似基因cDNA,编码为617个氨基酸,其中包括80 bp的5′末端非编码区及89 bp包含poly(A)尾的3′末端非编码区。预测1～15位的氨基酸处存在1个信号肽。推导的氨基酸序列与哺乳动物及其他鱼类进行同源性比较,发现其与红鳍东方鲀有73%同源性,而与哺乳动物的同源性为50%～65%。凝血酶原类似基因虽然在大黄鱼的各个组织中组成型表达,但是在减毒鳗弧菌免疫的大黄鱼的脾脏和肾脏中表达明显上调,这表明凝血酶可能参与大黄鱼对细菌侵染的免疫应答。     

抗甲状腺药物致Graves病患者粒细胞缺乏高表达基因的筛选与克隆研究

目的 筛选可能对抗甲状腺药物(ATD)致Graves病(Graves disease,GD)患者粒细胞缺乏起决定作用的相关基因.方法 采用淋巴细胞分离液分离GD服用ATD导致粒细胞缺乏患者与粒细胞正常患者的单个核细胞,加入EB病毒进行细胞培养,应用抑制性消减杂交(SSH)的方法构建GD服用ATD导致粒细胞缺乏患者与粒细胞正常患者之间差异表达的cDNA消减文库,克隆、鉴定ATD介导GD患者粒细胞缺乏特异性高表达的基因片段,以生物信息学方法进行初步分析.结果 成功构建了人ATD介导GD患者粒细胞缺乏的cDNA消减文库;初步筛选到34条EST,其中21条为新EST,它们可能代表着在ATD介导GD患者粒细胞缺乏中特异性高表达并对ATD介导GD患者粒细胞缺乏的发生有促进作用的新基因.结论 高效消减文库的成功建立,对进一步筛选、克隆GD差异表达的未知新基因和已知基因的新生物学功能研究具有重要意义.     

人膀胱癌异质性表型相关基因的筛选与鉴定

目的 筛选和鉴定膀胱肿瘤异质性生物学表型相关的基因。方法 以已建立的两株同一来源、不同生物学表型的膀胱移行细胞癌细胞系为材料,采用抑制性削减杂交技术筛选差异表达的基因片段,构建cDNA文库;挑取克隆进行筛选,获得差异表达片段,测序并与Genbank比对,Northernblotting验证差异片段在两株细胞系的不同表达。结果 建立了两个消减文库,分别含有168和206个白色克隆,白色克隆含有约200～700bp的插入片段,对这些克隆进行筛选,获得35个差异表达基因片段,其中15个对应于细胞骨架蛋白、细胞代谢酶基因等已知基因,另外19个为未知功能基因,1个为新EST片段,注册Genbank（注册号为DR008207）。结论 抑制性消减杂交技术是筛选、克隆差异表达基因的有效手段;keratin7、Vimentin等细胞骨架蛋白的不同表达,与细胞形态的表型差异有关;DDH等代谢基因的不同。与细胞的药物敏感性差异相关;筛选到的新基因片段为进一步克隆其全长、研究基因功能提供了实验基础。     

用抑制性消减杂交方法筛选人肾癌相关基因

目的 应用抑制性消减杂交技术构建人肾癌差异表达基因文库并进行差异表达基因筛选.方法 以肾癌细胞株RLC-310和肾近曲小管细胞株HK-2互为实验组和对照组,提取mRNA,应用抑制性消减杂交技术进行正反两向消减杂交,获得人肾癌细胞差异表达基因文库,结合反向Northern斑点印迹杂交,筛选差异基因克隆,并进行测序分析.结果 正向和反向文库共包含1200多个阳性克隆,经斑点杂交筛选后,对213个差异克隆进行测序并经BLAST分析,得到144个差异表达基因,与肾癌相关的高表达基因67个,低表达基因77个,其中新EST 14个,未知功能基因21个;对测序基因进行聚类分析发现与细胞生长、黏附、凋亡等肿瘤细胞生物学行为相关.结论 该文库质量可靠,所筛选出的差异基因和新的基因为进一步筛选肾癌特异性相关基因,绘制肾癌差异基因表达谱,最终阐明肾癌发生、发展、转移机制提供了实验材料和研究靶点.     

应用抑制性消减杂交技术筛选成骨肉瘤转移相关基因

目的：探讨与人成骨肉瘤转移相关的基因表达变化．方法：通过抑制性消减杂交技术从一对同一亲本、转移表型不同的人成骨肉瘤细胞株中分别提取细胞总RNA，筛选差异表达基因并测序，将结果与核酸数据库进行同源性比较．结果：获得12个在低转移成骨肉瘤中高表达的、均与已知的人类基因片段有很高同源性的核甘酸片段．结论：差异表达的基因可能与成骨肉瘤细胞转移生物学特性呈密切相关，特别是在维持肿瘤细胞自身稳定、防止转移中起重要作用．     

cDNA文库的构建策略

cDNA文库在基因分离和克隆中具有重要作用．近年来，随着分子生物学技术的发展，cDNA文库构建方法有了很大改进和提高．就cDNA文库构建的方法作一综述，     

高凝状态大鼠主动脉表达上调新基因HCR2的克隆及生物信息学分析

目的 获得高凝状态大鼠主动脉上调表达新基因HCR2的全长cDNA,并对该基因进行生物信息学分析。方法 从高凝大鼠主动脉中表达显著上调的序列标签（EST,GenBank登录号为BQ901227）出发,利用cDNA末端快速扩增（rapid amplification of cDNA end,RACE）和巢式PCR技术扩增其全长cDNA,利用NCBI的数据库对其进行生物信息学分析。结果 成功地获得了HCR2的全长cDNA,在GenBank中的登录号为AY234417。用RT-PCR证实HCR2是高凝大鼠表达上调基因。生物信息学分析显示,该基因cDNA序列全长为1275bp,定位于大鼠染色体4q11,编码由78个氨基酸组成、相对分子质量为8841．7、pI为8．59的蛋白质;无信号肽序列和跨膜序列,很可能是一种核蛋白;与已知蛋白无明显同源性。结论 HCR2的成功克隆为进一步研究其生物学功能及其在高血凝的发生、发展中的作用奠定了坚实基础。     

抑制性消减杂交筛选与克隆果蝇七氟烷敏感性相关基因

目的 采用抑制性消减杂交(SSH)方法筛选与克隆果蝇七氟烷敏感性相关的基因,以进一步研究吸人麻醉药的作用机制.方法 以对七氟烷敏感和耐药的果蝇品系为研究模型,以野生型黑腹果蝇作为对照,应用SSH方法筛选与吸人麻醉药七氟烷敏感性相关的候选基因.结果 筛选到的差异片段中,在敏感品系中高调的有77个.低调的有56个;在耐药品系中高调的有58个,低调的有52个;在敏感品系中高调而耐药品系中低调的有4个.经过与果蝇基因库比对,确定了其中大部分基因的功能,发现这些基因均非位于Y染色体上;与吸入麻醉药敏感性相关的基因大部分位于第2号染色体上.结论 本实验结果与先前有的学者用遗传学方法定位所得结果基本一致,七氟烷麻醉相关基因定位于2号染色体上,为常染色体显性遗传,并且果蝇对吸入麻醉药的敏感性在雌性与雄性间无差异,为进一步研究吸人麻醉药的作用机制提供了新的思路和方法.     

甲状腺未分化癌和乳头状癌超声成像特征的差异

目的 探讨甲状腺未分化癌和甲状腺乳头状癌超声成像特征的差异。方法 回顾性分析2001年4月至2014年6月在北京协和医院就诊并经病理证实的7例甲状腺未分化癌的临床和超声特征,并以同时期内性别、年龄相匹配的21例经病理证实甲状腺乳头状癌患者为对照,分析两组的超声特征差异。结果 甲状腺未分化癌的患者以女性为主(5/7,71.4%),平均发病年龄为(64.9±11.3)岁。分析超声特征结果显示,甲状腺未分化癌较甲状腺乳头状癌病灶大[(5.17±1.26)cm比(1.85±1.89)cm,P＜0.001]、纵横比＜1的比例高(100.0%比47.6%,P＝0.03)、微钙化程度高(100.0%比52.4%,P＝0.03)。两组在形态、边界、回声、均匀性、囊性变、血流状况、被膜受侵与否方面差异均无统计学意义(P均＞0.05)。结论 老年女性甲状腺内最大径大于5 cm结节如具备常见的超声恶性征象,同时又存在纵横比小于1和微钙化,应高度怀疑未分化癌。     

应用抑制性消减杂交筛选大鼠不同程度肝纤维化的上调基因

目的应用抑制消减杂交技术,筛选大鼠正常肝脏组织、轻度肝纤维化和重度肝纤维化组织中差异表达的上调基因。方法利用抑制消减杂交技术,构建大鼠轻度肝纤维化和重度肝纤维化2个差异cDNA文库,并挑选36条上调显著的基因进行测序鉴定。结果获得1152个克隆,其中有1036个含有插入片段。挑选32个克隆测序,与GenBank数据库进行初步比较,其中28条与已知基因的部分序列高度同源。结论应用抑制消减杂交技术成功构建了轻度肝纤维化和重度肝纤维化差异表达基因的cDNA削减文库,为进一步研究肝纤维化发生、发展和逆转的机制奠定了理论基础。     

甲状腺癌的超声误诊分析

目的 分析甲状腺癌超声图像特征,降低超声误诊或漏诊率.方法 总结术后病理确诊,超声误诊、漏诊的37例甲状腺癌声像图特征,进行声像图与病理对照回顾分析.结果 病理诊断的37例甲状腺癌,乳头状癌28例,滤泡癌3例,髓样癌4例,鳞癌1例,转移癌1例.声像图分4型:①实质型;②实质并钙化型;③以液性为主混合型;④以实性为主混合型.甲状腺癌结节内细小钙化点7例,结节边界呈"毛玻璃"征6例,伴颈部淋巴结肿大者12例.甲状腺两种疾病并存5例.结论 甲状腺内低回声结节内细小光点有诊断价值,结节边界呈"毛玻璃"征,具有特异性.应用多项指标综合分析,遇到甲状腺内多个结节,比较结节间的声像图关系,对可疑结节进行超声引导下穿刺活检,能够提高超声诊断甲状腺癌的准确率.     

甲状腺乳头状癌端粒酶活性的研究

目的 通过检测甲状腺乳头状癌中的端粒酶活性,探讨其在甲状腺乳头状癌中潜在的临床价值。方法 采用ＴＲＡＰ－ＰＣＲ－ＥＬＩＳＡ定量及ＴＲＡＰ－ＰＣＲ银染定性法,对４９份甲状腺组织进行端粒酶活性的分析。结果 ２３例甲状腺乳头状癌组织中端粒酶阳性率为８６．９％,其活性水平与组织学分级无关,病灶越大,年龄越大,病期越晚,端粒酶活性水平越高,淋巴结转移者高于无转移者。１０例甲状腺正常组织端粒酶皆为阴性。８例甲     

甲状腺乳头状癌的超声表现特征

目的：探讨甲状腺乳头状癌（ PTC）的超声表现特征及超声对甲状腺乳头状癌的诊断价值。方法回顾性分析经手术病理证实的65例（108个结节）甲状腺乳头状癌及186例（256个结节）甲状腺良性结节的超声特点,主要包括结节的边界、形态、质地、内部回声、血流情况等,并对两组结节的超声表现征象进行统计学分析。结果108个PTC患者中,实性或以实性为主的结节占91．7％（105/108）,低回声结节占83．3％（81/108）,边缘毛糙,呈浸润性生长结节占85．2％（92/108）,结节内砂砾样微小钙化占64．8％（70/108）,上述征象与良性结节对比有统计学意义（P＜0．01）;结节形态、结界内血流信与良性结节对比无统计学意义（P＞0．05）。结论 PTC的主要超声特征包括：实性低回声或极低回声,边缘毛糙、结节内纵横比≥1、合并微小钙化。     

层粘连蛋白在良恶性甲状腺肿瘤组织中的表达及意义

目的 :探讨层粘连蛋白 (LN)在良恶性甲状腺肿瘤的表达及其意义。方法 :采用免疫组化方法检测 10例甲状腺正常组织和 4 6例甲状腺腺瘤、19例甲状腺癌组织中LN的表达 ,对LN表达率两两比较。结果 :LN在甲状腺瘤与甲状腺癌组织中阳性表达率差异有显著性意义 (P <0 .0 5 ) ;在甲状腺癌组织中与甲状腺正常组织中的阳性表达率差异有高度显著性 (P <0 .0 1)。LN在甲状腺癌细胞及出现于甲状腺滤泡性腺瘤组织中的乳头状腺瘤细胞胞浆中有表达。结论 :LN参与了肿瘤的发生发展与癌变 ,可作为甲状腺良恶性肿瘤的鉴别诊断指标之一。LN免疫反应物出现于肿瘤细胞胞浆很可能是良性肿瘤转化为癌的标志     

分化型甲状腺癌的多因素预后分析

 【目的】探讨影响分化型甲状腺癌（differentiated thyroid carcinoma，DTC）预后的因素。【方法】回顾性收集1985年1月1日至1997年12月31日在中山大学肿瘤防治中心治疗的分化型甲状腺癌581例，对其预后进行单因素和多因素分析。【结果】581例分化型甲状腺癌的5、10、15年生存率分别为93．6％、87．5％和80．6％。单因素分析显示影响分化型甲状腺癌预后的因素有性别、年龄、肿瘤大小、T分期、远处转移、治疗方式、复发和临床病理分期，P〈0．05，病理类型、淋巴结转移对预后无显著性影响，P〉0．05。Cox多因素分析表明T分期、治疗方式和临床病理分期是影响分化型甲状腺癌预后的独立因素。【结论】性别、年龄、肿瘤大小、T分期、复发、远处转移和临床病理分期是影响分化型甲状腺癌预后的主要因素，其中T分期、治疗方式和临床病理分期为独立的预后因素。     

分化型甲状腺癌诊治的进展

甲状腺癌是常见疾病,中青年女性发病率较高,其中90%是分化型甲状腺癌。分化型甲状腺癌诊治方面存在很多争议,如分化型甲状腺癌的术前诊断、原发癌灶的切除范围、是否行淋巴结清扫及清扫的范围、手术后放射碘治疗的适应证及所需131I的剂量,术后何时开始内分泌治疗及服用剂量。目前我国在甲状腺癌诊治方面尚无统一规范化的指南,各地区诊治水平参差不齐。在此就近年来相关文献予以综述。     

nm23基因在甲状腺乳头状腺癌中的表达

用免疫组化ＳＰ染色法检测３６例甲状腺乳头状腺癌的ｎｍ２３Ｈ１表达水平，结果显示：３６例甲状腺乳头状腺癌阳性表达率８６．１％（３１／３６），癌旁正常甲状腺组织阳性表达率８２．７６％（２４／２９），两者无明显差异（Ｐ＞０．５）。有或无淋巴结转移的表达水平也无明显差异（Ｐ＞０．１）。结果表明：ｎｍ２３Ｈ１的表达水平在甲状腺乳头状腺癌的转移过程中并不起主导作用