不同冷冻温度对许旺细胞抗原性的影响及最佳温度值的确定

目的检测两步冷冻法不同冷冻温度对外周神经中许旺细胞（Schwanncell，SC）抗原性的影响及冷冻保存最佳温度值的确定。方法取SD雌性大鼠80只，分为8组，每组10只，切取双侧坐骨神经2cm，1组为新鲜对照组，另7组为实验组，采用两步冷冻法分别降温至-20℃、-30℃、-40℃、-50℃、-60℃、-70℃和-80℃，保存2h后转液氮中保存48h，取出后在37℃水浴箱中快速复温1min。每组取3mm长3段神经组织作电镜检测SC超微结构变化。将各组冷冻后的神经段制成石蜡切片，应用抗MHCⅡ抗体（OX6）作免疫组化染色，经计算机图像分析得出各组的抗原性变化。结果电镜检测结果表明-40℃组SC细胞膜及核膜完整，染色质分布均匀；-70％组及-80％组SC染色质碎裂、边聚；抗原性检测结果表明各冷冻组神经组织抗原性均较新鲜组为低（P〈0．01），但-70℃组及-80℃组神经组织抗原性最低。结论-40℃组SC细胞结构完整，组织抗原性低于新鲜组，且SC生物活性最好，综合判断，-40℃是外周神经冷冻保存的最佳温度值。     

冷冻温度对SD大鼠骨组织超微结构及力学性能的影响

目的探讨冷冻温度对SD大鼠骨组织超微结构及力学性能的影响.方法温度选择组分-45℃、-50℃、-55℃、-60℃、-65℃和-70℃组,对SD大鼠胫骨进行上述温度的冷冻预处理,液氮保存一周,与对照组作HE染色和透射电镜;力学测试组用-55℃的冷冻预处理,液氮保存18 d组、180 d组,与对照组进行抗压和抗折实验.结果电镜下-45℃组、-65℃组、-70℃组部分骨细胞轻度水肿,骨细胞核有固缩现象,骨细胞膜不连续;-50℃组、-55℃组和-60℃组骨组织超微结构得到较好保持.骨压缩强度极限(MPa)对照组、18 d组、180 d组为77.26±11.80、76.02±15.00和61.90±12.20;殷骨弯曲最大挠度,对照组18 d、180 d组为44.60±10.54、44.20±9.50和20.01±7.58.结论-55℃是骨组织冷冻预处理的最佳维持温度值.骨抗折挠度,对照组与180 d组有显著差异(P＜0.01),表明骨的脆性增加.     

冷冻预处理温度对胎兔许旺细胞免疫原性的影响

目的 探讨不同维持温度冷冻预处理超深低温保存对胎兔许旺细胞免疫原性的影响.方法 设未冷冻处理细胞为对照组,实验组细胞设计冷冻维持温度为-30℃, -35℃, -40℃, -45℃, -50℃, -55℃, -60℃, -65℃,-70℃,10%二甲基亚砜(DMSO)为低温保护剂,对胎兔许旺细胞进行冷冻预处理,液氮中保存...     

不同冷冻预处理温度对大鼠骨、血管超微结构的影响

目的　探讨不同冷冻预处理温度对大鼠骨、血管组织超微结构的影响。方法　采用两步冷冻法 ,以 15 %二甲基亚砜 (DMSO)为低温保护剂 ,分别对SD大鼠的骨、动脉、静脉进行温度为 -4 5、-5 0、-5 5、-60、-65和 -70℃的冷冻预处理 ,液氮保存 1周 ,HE染色和透射电镜观察。结果　 -5 5℃是骨、动脉组织冷冻预处理最佳温度 ;-60℃是静脉组织冷冻预处理最佳温度。经用上述温度冷冻预处理和超深低温保存的 3种组织 ,超微结构得到较好保持 ,优于其他温度的实验组。结论　 -5 5～ -60℃是适宜吻合血管同种异体骨的冷冻预处理温度。     

浸泡时间与关节软骨冷冻保存的关系

目的　寻求更佳的关节软骨冷冻保存方法。方法　设计两步冷冻法中的不同浸泡时间,对新西兰兔的关节软骨进行冷冻保存。软骨取材后,随机分成五组,Ⅰ组为新鲜对照组,Ⅱ～Ⅴ组为冷冻组,冷冻前先在4℃10%DMSO中浸泡30分钟（Ⅱ组）、1时（Ⅲ组）、2小时（Ⅳ组）及4小时（Ⅴ组）,然后均置超低温冰箱中以-1℃/min的速度降温至-60℃,维持1小时后,投入液氮中保存1周。复温后行透射电镜检查、台盼蓝染色、软骨细胞培养3HTdR掺入率测定。结果　①软骨组织冷冻后,软骨细胞均受到不同程度的损伤。Ⅰ组活细胞率96%,3HTdR掺入率为(4953.13±583.27)%,Ⅱ～Ⅴ组与之比较,有非常显著性差异(P＜0.01)。Ⅰ组超微结构完全正常,而Ⅱ～Ⅴ组均显示细胞器损伤。②Ⅳ组的细胞结构和功能最佳,电镜检查仅见轻度细胞器损伤,活细胞率为56%,3HTdR掺入率(1139.88±146.39)%;Ⅱ、Ⅲ、Ⅴ组与之比较,有非常显著性差异(P＜0.01)。结论　关节软骨在冷冻之前,先浸泡4℃10%DMSO中2小时,可提高软骨细胞的存活率。     

干扰素-γ诱导晚期预处理对离体猪心保存质量的影响

目的评价干扰素-γ(IFN-γ)诱导晚期预处理对离体猪心保存质量的影响。方法20头实验用猪,随机双盲法分为实验组和对照组,实验组予以皮下注射IFN-γ2万U/kg体重,对照组皮下注射生理盐水;测定左室舒张末压力(LVEDP),左室内压力微分(±dp/dt),心肌酶乳酸脱氢酶(LDH),肌酸磷酸激酶(CK-MB)的漏出以及取心肌组织做超微结构分析。4℃冷晶体液保存4h后.温血复灌使离体心脏复跳;分别于复跳15、30、60 min做心功能、酶学检测,60 min取心肌组织做超微结构检测。结果两组心脏的基础LVEDP、±dp/dt、心肌酶LDH、CK-MB以及组织超微结构差异无显著性。冷晶体液保存4 h后,心脏复跳15 min-dp/dt实验组显著高于对照组(P<0.05);30、60 min实验组LVEDP、±dp/dt显著高于对照组(P<0.05);心脏复跳15、30 min LDH、CK-MB的漏出,对照组显著高于实验组(P<0.05);复跳60min后超微结构显示:对照组心肌细胞线粒体、肌原纤维肿胀明显,而实验组心肌细胞线粒体、肌原纤维肿胀变化不明显。结论 提示IFN-γ诱导晚期预处理对4℃冷晶体液保存4 h后的离体猪心具有一定的保护作用。     

γ射线消毒对不同保存方法牛颈静脉管道机械性能的影响

目的探讨γ射线消毒对不同保存方法牛颈静脉管道机械性能的影响,寻求牛颈静脉管道合适的灭菌和保存方法。方法：将采集、制作好的牛颈静脉拉力条按不同保存方法分为6组：新鲜对照组(A组),冷冻干燥组(B组),溶剂干燥组(C组),深冻组(D组),PBS缓冲液保存组(E组),60％乙醇保存组(F组)。各组经25 kGyγ射线消毒(A组不进行γ射线消毒)后分别行单轴拉伸试验、细菌培养及组织形态学观察。结果上述5种方法保存的牛颈静脉管道经γ射线消毒后,其最大负荷与极限抗张强度分别为(25．23±15．95)N、(4．6±2．53)Mpa(B组),(35．28±14．66) N、(7．10±2．08)Mpa(C组),(25．44±7．97)N、(5．20±1．43)Mpa(D组),(31．55±12．32)N、(6．20±2．72)Mpa(E组),(32．02±18．44)N、(6．80±2．03)Mpa(F组)。与对照组[(23．43±11．21)N、(5．12±3．06)Mpa]相比,P＞0．05。断裂延伸率分别为(86．08±31．21)％(B组)、(137．99±38-80)％(C组)、(133．39±42．19)％(D组)、(153．23±55．00)％(E组)和(142．09±54．03)％(F组),与对照组(193.80±37．53)％相比,P＜0．05。细菌培养结果全部为阴性。组织切片显示B组和D组组织呈空腔空泡状改变。结论经25 kGyγ射线消毒后,上述五种保存方法处理牛颈静脉管道其最大负荷与极限抗张强度变化不明显,但其断裂延伸率均下降,尤以冷冻干燥保存组为甚。     

不同冷冻温度和保存时间对同种异体神经移植后神经功能影响的研究

目的研究并探索一种最合适保存同种异体神经的冷冻温度和时间，以获最小的排斥反应和最好的神经再生。方法取１００只大白鼠，分实验组和对照组。实验组：按异体神经的保存时间分成２０分钟、１周和３周组；各组根据保存的温度再分成－１９６℃、－８０℃及－４０℃组，每组各为１０只大白鼠。对照组：１０只大鼠，新鲜异体神经不作处理即行神经移植。各组分别于术后６周和１２周观察神经电图变化。结果随着保存温度的降低与时间的延长，同种异体神经移植后，运动诱发电位的潜伏期缩短；诱发电位的峰值、振幅积分增加；运动神经传导速度加快。结论经冷冻保存的同种异体神经移植后，神经近断端再生轴突能通过并长入远断端。冷冻温度以－１９６℃为好，保存时间以３周为佳     

同种异体腱移植重建膝关节交叉韧带的研究

目的从实验角度观察程序冷冻液氮保存和-80℃深低温保存方法处理同种异体髌腱后重建膝关节交叉韧带的愈合过程并比较其差异。方法将兔的1/2骨-髌腱-骨复合体经-80℃深低温保存和程序冷冻液氮保存2周后观察冻存变化差异并行同种异体移植重建前交叉韧带,分别于术后3周和8周观察细胞毒反应、细胞活性、最大载荷和形态学变化等指标进行比较并与自体移植组对照。结果a）经程序冷冻液氮保存方法处理后,髌腱的最大载荷无明显下降,细胞活性得到了较好的保存,组织学观察冷冻损伤较-80℃深低温保存方法轻微;b）程序冷冻液氮保存处理的移植物在术后未表现明显的排斥反应,且免疫反应随时间的推移而下降;c）移植后3周,各组移植物的最大载荷无显著差异（P〉0.05）,移植后8周,程序冷冻液氮保存组移植物的最大载荷（55.87±1.86）N优于-80℃深低温保存组（52.14±2.79）,而和自体移植组相近（57.70±2.76）N;d）从组织学观察看,-80℃深低温保存组和程序冷冻液氮保存组移植后的愈合过程均和自体移植组相似,而程序冷冻液氮保存组的愈合过程和组织学行为更接近于自体移植组。结论经深低温保存的兔异体髌腱重建膝关节交叉韧带后愈合过程和自体韧带移植重建过程相似。程序冷冻液氮保存法优于传统的-80℃深低温保存法。     

两种方法冷冻保存异体髌腱重建膝关节交叉韧带比较

目的 观察程序冷冻液氮保存和-80℃深低温保存方法处理同种异体髌腱后重建膝关节交叉韧带的愈合过程并比较其差异.方法 将兔的1/2骨-髌腱-骨复合体经程序冷冻液氮保存和-80℃深低温保存2周后,观察冻存变化差异并行同种异体移植重建前交叉韧带,分别于术后3周和8周观察细胞毒反应、细胞活性、最大载荷和形态学变化等指标进行比较并与自体移植组对照. 结果 ①经程序冷冻液氮保存方法处理后,髌腱的最大载荷无明显下降,细胞活性得到了较好的保存,组织学观察冷冻损伤较-80℃深低温保存方法轻微.②程序冷冻液氮保存处理的移植物在术后未表现明显的排斥反应,且免疫反应随时间的推移而下降.③移植后3周,各组移植物的最大载荷差异无显著性,移植后8周,程序冷冻液氮保存组移植物的最大载荷优于-80℃深低温保存组,但和自体移植组相近.④和-80℃深低温保存组相比,程序冷冻液氮保存组的移植物在术后的愈合过程和组织学行为更接近于自体移植组.结论 ①经程序冷冻液氮保存和-80℃深低温保存方法冻存的兔异体髌腱重建膝关节交叉韧带后愈合过程和自体韧带移植重建过程相似.②程序冷冻液氮保存法优于传统的-80℃深低温保存法.     

The effects of cryosurgery and cryoprotectants on peripheral nerve function.

Cryosurgery has many advantages in the treatment of musculoskeletal tumors, but complications can occur, with injuries to the peripheral nerves. Cryoprotectants such as dimethylsulfoxide (DMSO) and glycerol enhance the in vitro survival of cultured Schwann cells, but they have not been studied in vivo. In vitro, 10 percent DMSO provided the maximal survival after freezing to -80 degrees C. The neurologic recovery of a peripheral nerve, following cryoinjury and using liquid nitrogen, was evaluated both with and without pretreatment of the nerve with 10 percent DMSO. There were three experimental groups: 1) one sham operation; 2) with freezing of the sciatic nerve; and 3) with freezing of the sciatic nerve after treatment with DMSO. Gait analyses (sciatic function index, SFI), muscle weights, and histologic evaluations were performed in order to follow the neurologic recovery over a ten-week period. The freezing-only group and the sham-operated control had an excellent functional recovery in terms of the SFI following surgery (-4.2 percent +/- 4.0 percent and -2.4 percent +/- 5.7 percent, respectively), in contrast to the freezing group with DMSO (-34.1 percent +/- 5.5 percent, p less than .01). The average tibialis anterior muscle weight, reported as the ratio of the operated to the unoperated limb (88.2 percent +/- 1.0 percent) in the freezing-only group, was greater than the average for the freezing-with-DMSO-treated group (70.6 percent +/- 3.9 percent, p less than .01). Cryoprotectants are routinely used to optimize the survival of cells in tissue culture. However, DMSO not only failed to protect peripheral nerves from cryoinjury, but it also inhibited functional recovery.     

大鼠失神经靶肌肉注射异体不同细胞对神经再生影响的研究

目的研究注射异体不同细胞于大鼠失神经靶肌肉对神经再生的影响.方法 SD成年大鼠36只,雌性,体重120～150 g,随机分为4组,每组9只.无菌条件下切断左侧坐骨神经,一期神经外膜缝合.术后即于小腿三头肌处注射相应细胞,7天注射1次,共4次.A组注射单纯雪旺细胞1×106/ml 1 ml,B组注射雪旺细胞加成肌细胞(雪旺细胞∶成肌细胞为1∶1)1×106/ml 1 ml,C组注射肾内皮细胞提取液1 ml,D组注射无血清培养液1 ml作对照.术后3个月取手术侧坐骨神经及坐骨神经所支配的小腿三头肌,进行大体和组织形态学观察、神经鞘细胞密度及单位面积靶肌肉(小腿三头肌)运动终板计数.结果术后3个月,各组近端神经鞘细胞均数为A组0.134 5±0.029 8,B组0.093 1±0.025 6,C组0.072 4±0.023 7,D组0.187 7±0.054 2;A组∶D组P值<0.05,B组∶D组、C组∶D组及A组∶B组P值均<0.01,B组∶C组P值＞0.05.术后3个月各组远端神经鞘细胞密度均数为A组0.186 0±0.042 5,B组0.155 1±0.032 1,C组0.104 7±0.013 3,D组0.240 9±0.056 8;A组∶D组P值<0.05,B组∶D组、C组∶D组及B组∶C组P值<0.01,A组∶B组P值＞0.05.术后3个月各组靶肌肉运动终板个数均数为A组6.000±0.866,B组9.000±2.291,C组12.780±1.394,D组3.110±0.782;A组∶D组、B组∶D组及C组∶D组P值<0.01,A组∶B组、A组∶C组及B组∶C组P值<0.01.结论雪旺细胞、混合细胞、肾内皮细胞提取液均有促进神经再生作用,肾内皮细胞提取液优于雪旺细胞及混合细胞.     

红芪减方不同组分促周围神经再生作用的初探

目的 观察淫羊藿苷和按红芪减方由淫羊藿苷、红芪多糖、地龙水提液组成的混药对大鼠周围神经再生的促进作用.方法 制备浓度为0.005 g/mL的淫羊藿苷溶液和浓度约等于1 g(原药材)/mL的由淫羊藿苷、红芪多糖、地龙水提液组成的混药.取体重为(200±10)g的雄性SD大鼠20只,随机分为4组(n=5),分别为假手术组(A组)、模型组(B组)、淫羊藿苷组(C组)和混药组(D组).A组仪暴露左侧坐骨神经后缝合皮肤,不钳夹神经:B、C和D组以钳夹左侧坐骨神经的方式制备大鼠周围神经损伤模型:右侧不作任何处理.于次日开始每日定时灌胃给药,A组和B组给予生理盐水;C组给予淫羊藿苷溶液,D组给予混药,均为2 mL/d.给药后观察大鼠一般情况,给药后第21天检测神经功能指数、坐骨神经传导速度和有髓坐骨神经纤维形态及数量.结果 术后各组大鼠存活至实验完成,一般状况良好.第21天,A、B、C及D组大鼠体重分别为(366.94±14.0)、(370.14±16.3)、(373.3±19.6)及(374.0±11.4)g,各组间差异无统计学意义(P＞0.05).坐骨神经功能指数测定A组与D组、B组与C组间差异无统计学意义(P＞0.05),余各组间差异有统计学意义(P＜0.05);胫神经功能指数,A组与B、C、D组间差异有统计学意义(P＜0.05),B组与C、D组间差异无统计学意义(P＞0.05);腓总神经功能指数,A组与C、D组间、B组与C、D组间差异无统计学意义(P＞0.05).A、B、C和D组坐骨神经传导速度分别为(45.0±2.9)、(8.0±2.6)、(13.4±6.8)及(19.6±9.3)m/s,B组与C组间差异无统计学意义(P＞0.05),A组与B、C、D组间,B组与D组间差异有统计学意义(P＜0.05).锇酸染色观察B、C、D组的再生有髓坐骨神经纤维较A组细;B、C、D组再生有髓坐骨神经纤维数分别为A组的93.3%±35.6%、90.6%±37.1%和115.4%±40.6%,各组间差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 淫羊藿苷和混药具有良好的安全性,混药促周围神经再生作用较淫羊藿苷显著,提示应整体研究红芪减方,以期发现有效部位或多个化合物以固定配比组成的有效成分群.     

大鼠陈旧性坐骨神经缺损修复期限的实验研究

目的 探讨大鼠陈旧性坐骨神经缺损的修复期限,观察自体神经移植对大鼠陈旧性坐骨神经缺损的修复作用.方法 清洁级SD大鼠36只,随机分为6组,每组6只.切除大鼠左侧部分坐骨神经,制作神经缺损模型.神经损伤后1、3、6个月用对侧自体神经修复神经缺损作为A1、B1、C1组,不予修复作为对照A2、B2、C2组.术后每周观察步态、足趾皮肤及腿部肌肉的变化.第2次术后3个月,进行电生理检查、荧光金(fluoro gold,FG)逆行示踪、腓肠肌Masson染色、再生神经亮绿.变色酸2R-磷钨酸法染色与透射电镜观察.结果 神经损伤后各组大鼠均有足部溃疡、跛行等失神经表现,修复术后2个月,A1、B1组溃疡愈合,跛行改善,其余各组仍有溃疡、跛行.修复术后3个月,A1、B1、C1组的运动神经传导速度分别为(21.84±6.74)、(20.02 ±4.17)、(16.09±8.21)m/s,组间差异无统计学意义(P＞0.05).复合肌肉动作电位(compound muscle action potential,CAMP)波幅分别为(12.68±4.38)、(9.20±3.43)、(1.22±0.39)mV,A1、B1组与C1组比较差异有统计学意义(P＜0.05):A2、B2、C2组未记录到CAMP.FG逆行示踪观察,A1组阳性细胞最多,胞体较大,B1组居中,C1组阳性细胞最少,胞体最小.腓肠肌Masson染色示A1、B1组腓肠肌纤维形态接近正常,G1、A2、B2、C2组肌纤维明显萎缩.A1、B1、C1组肌纤维横截面积为(340.73±118.46)、(299.88±119.75)和(54.33±53.43)μm2,A2、B2、C2组为(78.60±51.38)、(65.62±25.36)和(40.93±28.22)μm2.A1、B1组与C1、A2、B2组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).神经形态观察,A1组再生有髓神经纤维数量多,直径粗,髓鞘厚;B1组再生神经纤维的数量和形态与A1组相似;C1组中再生的有髓神经纤维数量少,纤维细,髓鞘薄:A2、B2、C2组则仪见SC及增生的胶原纤维.结论 自体神经移植能不同程度修复缺损1个月和3个月的大鼠坐骨神经,但对缺损6个月的大鼠坐骨神经修复作用不明显.     

碱性成纤维细胞生长因子在大鼠坐骨神经损伤修复中的作用

目的　研究碱性成纤维细胞生长因子（ｂ Ｆ Ｇ Ｆ）对周围神经损伤的促修复作用。方法　建立大鼠坐骨神经离断模型,镜下进行神经外膜缝合,局部滴加药物和术后肌注ｂ Ｆ Ｇ Ｆ 以及临床用药神经生长因子（ Ｎ Ｇ Ｆ）,通过神经传导速度和功能指数评定观察坐骨神经修复情况。结果　术后１ 个月,以正常对照为标准,０ 基线为正常水平,生理盐水、 Ｎ Ｇ Ｆ、ｂ Ｆ Ｇ Ｆ 使用组神经功能指数评定结果分别为：－ １１４．３０±１０．３４、－ ７０．５０±１１．０１、－ ５０．４５±７．８２;术后３ 个月,分别为：－ ５４．９６±１６．４６、－ ３５．２１±１０．８０、－ ２７．５３±１１．２３,ｂ Ｆ Ｇ Ｆ组神经传导速度明显快于生理盐水组和 Ｎ Ｇ Ｆ 组（ Ｐ＜ ０．０１）。结论　ｂ Ｆ Ｇ Ｆ对坐骨神经损伤具有显著的促功能修复作用,并且在神经损伤早期就能最有效地发挥作用,效果明显优于临床用药 Ｎ Ｇ Ｆ。     

Effects of obstructive jaundice on the peripheral nerve: an ultrastructural study in rats

Obstructive jaundice (OJ) and hepatic disorders have been shown to be associated with peripheral neuropathy in several clinical studies. The study evaluated the effect of OJ on the ultrastructure of the rat sciatic nerve. In the OJ group, jaundice was created by ligation of common bile duct in Wistar-Albino rats. In the sham-operated control group the same procedure was performed without ligation of the bile duct. On day 7, all rats were re-operated and sciatic nerves were explored to harvest 2-cm-long nerve segments for quantitative and qualitative histopathological analysis by light and electron microscopy. Bilirubin was measured on serum samples. Bilirubin levels were significantly higher in jaundiced rats compared with that of controls (8.46 +/- 0.45 vs. 0.80 +/- 0.14 mmol/l, means +/- SD, p < 0.01). Control nerves did not show anything other than the normal histology. In the OJ group, degenerative changes such as irregularities, thinning, ruffling and invaginations, irregularshaped bodies, vacuolizations and focal segmental demyelination were observed in the myelin sheath. Myelin clusters were noted in the axoplasm. A varying degree of swelling was noted in the nucleus and cytoplasm of the Schwann cells. Morphometric analysis of specimens obtained from sciatic nerves showed that myelin injury (370.9 +/- 51.3 vs. 11.6 +/- 0.5 axons), axonal edema (142.1 +/- 24.2 vs. 10.6 +/- 0.5 edematous axons) and Schwann cell degeneration (50.3 +/- 11.6 vs. 3.2 +/- 0.2 Schwann cells) was significantly higher in the jaundiced rats than in the control group (p < 0.01). The ultrastructural alterations spotted in the rat peripheral nerve were attributed to hyperbilirubinemia and increased concentrations of several neurotoxic substances released from the Kupffer cells in OJ. Neuropathy in jaundiced patients seems to result from accompanying degenerative changes in the peripheral nervous system. However, the exact nature and initiating factors of this nerve injury remains to be unveiled.     

Hypothermic preservation of peripheral nerve grafts: A histomorphometric study

Nerve preservation is essential for peripheral nerve grafting. We studied nerve regeneration in autografts preserved under hypothermic conditions. Twenty-mm sciatic nerve segments were resected from Lewis rats and preserved at 4°C for 0 to 48h, the duration of preservation being increased in 12-h increments. These nerve segments were then transplanted to syngeneic rats. At 15 weeks, the recipient sciatic nerves were examined histologically. Fibrous tissue proliferation and extraperineurial regeneration of nerve fibers were increased in the 36-and 48-h groups. There were no significant differences between histograms of fiber diameters and mean fiber diameters at various sites in each group, this finding implying that the maturity of the regenerated fibers was similar. On the other hand, the percentage of neural tissue distal to the graft was decreased in the 36-and 48-h groups. These results show that hypothermic preservation for up to 24h maintains the viability of Schwann cells and allows nerve regeneration. With preservation times in excess of 36 hours, fibroblasts proliferated instead of Schwann cells, and nerve regeneration decreased.     

化学去细胞异体神经修复神经缺损长度的实验研究

[目的]研究神经长度是否影响化学去细胞神经的质量及化学去细胞异体神经修复犬神经缺损的适当长度范围。[方法]切取犬的坐骨神经全长，截取直径近似段长度12cm，去除神经外膜的脂肪组织及血管，在5．0％Triton X-100和5．0％脱氧胆酸钠中重复消化得到化学去细胞神经；部分神经用于组织学评价，将12cm神经按顺序切割为6段，石蜡包埋制备切片，厚度5μm。HE染色和Fastblue染色，观察去细胞程度、神经细胞外基质结构完整性、髓鞘染色强度，观察每段神经的差异。在体内实验中，用化学去细胞异体神经桥接犬的坐骨神经缺损，缺损长度分别为8、10cm组，每组各有6条成年犬，随访时间12个月。观察动物肢体功能恢复、肌电图变化及再生神经组织学表现，包括HE染色、S-100免疫组织化学染色、乙酰胆碱酯酶染色。[结果]去细胞神经全长各段在去细胞程度、结构完整性及残余髓鞘染色综合评价中无差异。体内移植实验结果显示8cm去细胞异体神经移植组的犬在术后12个月踝关节可直立行走，而10cm去细胞异体神经移植组犬12个月时踝关节不能直立行走。肌电图检查结果显示，两组动物的手术肢体均可记录到诱发的运动和感觉电位。肌电图波幅、时限及运动神经传导速度结果显示，8cm移植组明显高于10cm移植组（P〈0．05）。组织学检查显示8cm移植组再生的神经轴突通过移植段神经到达远侧的神经中，并与所支配的肌肉建立新的运动终板联系，坐骨神经支配的小腿三头肌中有大量新生的运动终板形成。在10cm移植组有部分再生的神经纤维通过移植段神经进入远端的神经，小腿三头肌中新生的运动终板数量和大小明显低于8cm移植组（P〈0．05）。[结论]在化学去细胞神经的制备中，神经的长度对去细胞的质量无影响；化学去细胞异体神经修复神经缺损的长度若不超过8cm可取得较满意的功能康复结果。     

亲和素-生物素黏附系统修饰纳米纤维构建组织工程神经的实验研究

目的 观察亲和素-生物素黏附系统(avidin-biotin binding system,ABBS)快速黏附雪旺细胞(SCs)对组织工程神经促进神经再生的影响.方法 以坐骨神经缺损10 mm作为实验模型.取40只Wistar大鼠分成A、B、C、D4组,每组10只.A组:自体神经移植修复组;B组:空白对照组,用聚乳酸己内酮共聚物[ Poly(L-lactic acid-co-epsilon-caprolactone),P(LLA-CL)]支架修复神经缺损;C组:P(LLA-CL)支架上用普通方法黏附雪旺细胞修复神经缺损;D组:P(ILA-CL)支架上用ABBS法黏附雪旺细胞修复神经缺损.术后3个月,检测坐骨神经功能指数、神经传导速度、再生神经轴突及髓鞘厚度,评估ABBS对于促进神经再生的影响.结果 C组与D组的神经修复效果无差别.虽然修复效果不及A组,但是均明显好于没有雪旺细胞的B组.结论 ABBS在动物体内实验中未对组织工程神经促进神经再生造成不利影响,是一种可靠的细胞快速黏附方法.     

雪旺细胞胞浆神经营养蛋白促进周围神经再生的实验

目的 研究雪旺细胞胞头神经营养蛋白（ＳＤＮＦ）对周围神经再生的影响。方法 选用９０只成年ＳＤ大鼠,在右侧坐骨神经造成长１０ｍｍ缺损,用植入血管的变性骨骼肌桥接神经缺损。分成三组,每组３０只。分别将分子量为２６、５８ｋｕ的ＳＤＮＦ和生理盐水（对照组）于术中、术后７及１４天注入肌桥的近段、中段和远段。术后均观察６个月。术后１５天开始,每隔１５天走足印一次,测定坐骨神经功能指数。术后１、３、６个月,每组