一起副溶血性弧菌食物中毒的调查报告

2004年8月20日晚，郑某在柳州市某大酒家设满月宴，60人进餐，15人先后出现腹痛、腹泻、恶心和呕吐症状，以阵发性的腹部绞痛表现明显，在两位患者的粪便检出副溶血性弧菌。根据流行病学调查、临床表现和实验室检测结果，认定为一起副溶血性弧菌引起的食物中毒。     

引起食物中毒副溶血性弧菌的病原学鉴定

目的分离食物中毒患者粪便及食物加工工具样本中的病原菌,对分离菌株进行表型和毒力基因鉴定。方法采用TCBS平板法分离食物中毒样本中的病原菌。采用细菌系统鉴定方法,确定所分离的副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,Vp)生化反应特性和血清型。采用PCR检测Vp分离株的种属特异基因、直接耐热溶血素毒力基因(tdh)和直接耐热相关溶血素毒力基因(trh)。采用K-B纸片法检测Vp分离株对14种抗生素的敏感性。结果从1例携带者和3例病人粪便标本中分离出4株Vp,从2份食物加工工具样本中分离出2株Vp。6株Vp分离株均属于含Vp种属特异基因的O1∶K56血清型,tdh基因阳性但trh基因阴性。6株Vp分离株生物学性状和药敏试验结果一致。结论tdh+/trh-O1∶K56血清型Vp是引起本次食物中毒的病原菌。     

广东省2003～2008年副溶血性弧菌血清学分型研究

目的了解广东省副溶血性弧菌食物中毒患者和水产品分离株的血清型分布。方法采用血清玻片凝集试验对365株从食物中毒患者和水产品中分离的副溶血性弧菌进行血清分型。结果365株副溶血性弧菌中,205株食物中毒患者分离株以O3：K6型为主,血清型中排前3位的是O3：K6（71.71%）、O4：K8（10.24%）、O2：K3（4.39%）;160株水产品分离株共分50个血清型,排前3位的是O5：K17（8.13%）、O2：K28（6.25%）、O2：K3（5.63%）,无优势菌型。结论2003～2008年广东省副溶血性弧菌食物中毒分离株血清型以O3：K6型为主,水产品分离株血清型呈多样性。     

副溶血性弧菌食物中毒致心房颤动

患者男 ,3 8岁。因服生鱼片 8ｈ后出现心悸、呕吐、脐周阵发性绞痛、腹泻等症状而就诊。既往体健 ,无腹痛及心脏病史。体检 :Ｔ 3 9℃ ,Ｒ 2 0次 ｍｉｎ ,发育正常 ,神志清 ,皮肤湿冷 ,无颈静脉怒张 ,双肺呼吸音粗 ,未闻及干湿性罗音。心界不大 ,心律绝对不齐 ,心音强弱不等 ,脉搏短绌 ,无杂音 ,腹肌紧张 ,脐周围压痛 ,肝脾未及。实验室检查 :①白细胞总数为 13× 10 9 Ｌ ,中性粒细胞偏高。②大便常规 :肉眼呈洗肉水样血水便 ,镜检有白细胞、脓细胞及少量红细胞。③粪便培养 :检出副溶血性弧菌。心电图示 :各导联Ｐ波消失 ,代之以大小不等…     

龙岩市不同来源副溶血性弧菌耐药性分析

目的 了解福建省龙岩市腹泻患者粪便标本和市售水产品的副溶血性弧菌(VP)的耐药特征。方法 收集VP162株,其中人源32株,水产品来源130株,以实时荧光定量PCR方法检测毒力基因,判断产毒株和非产毒株,采用微量肉汤稀释法开展16种药物敏感试验。结果 162株不同来源的VP对阿莫西林、环丙沙星、左氧氟沙星、四环素、多西环素、氯霉素和阿奇霉素的敏感率均为100.0%,但对9种药物出现不同程度的耐药,耐药率较高的是头孢唑林(25.3%)、氨苄西林(15.4%)和复方磺胺甲恶唑(13.0%);产毒株与非产毒株耐药率差异无统计学意义(χ²=0.353,P>0.05);共有7种耐药谱,耐一种药物的耐药率为15.4%,3种及以上多重耐药率为13.0%。结论 腹泻患者VP与市售水产品VP的耐药特征接近,应严格控制抗生素在临床和养殖业中的使用。     

一起副溶血性弧菌食物中毒的病原学分析

目的运用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对一起食物中毒中分离的菌株进行同源性分析,为查明原因和溯源提供依据。方法采集患者、食品从业人员、环境样本以及留样食品进行分离、鉴定,对分离的菌株进行PFGE分析。结果本次事件共采集137份样本,检出11株副溶血性弧菌,其中5株来自病人样本,3株来自冷菜间厨师样本,1株来源于生扇贝样本,2株分别来自龙虾池、桂鱼池养殖水。11株菌株经PFGE分析,除1株患者样本与其余10株的同源性为60.0%外,其余10株副溶血性弧菌的同源性为100.0%。结论 PFGE分型技术揭示菌株之间的流行病学联系,为事件的分析和追溯来源提供分子流行病学证据。     

5岁以下腹泻患儿副溶血性弧菌感染调查分析

目的 了解5岁以下腹泻患儿副溶血性弧菌(VP)的感染情况。方法 收集腹泻患儿粪便样本495例份,非腹泻患儿粪便样本327例份,进行细菌培养。挑取单个菌落,行氧化酶鉴定,阳性者进一步采用全自动细菌鉴定系统检测VP,同时患儿的基本信息采用结构化问卷调查完成。结果 VP在腹泻病例中检出率为5.9%,高于非腹泻病例(1.5%),差异有统计学意义(χ²=9.309,P<0.05,OR=4.008,95%CI:1.535～10.463)。腹泻患儿中VP的检出率在男性和女性中差异无统计学意义(χ²=0.100,P>0.05,OR=0.885);2岁以上年龄组腹泻病例中VP的检出率(9.1%)较2岁以下组(4.2%)高(χ²=4.688,P<0.05,OR=2.257);VP的检出率在腹泻病例中呈现明显的季节分布(χ²=13.982,P<0.05),在秋季检出率最高(13.1%,13/99),其次是夏季(6.6%,8/122)、春季(3.2%,6/186),冬季检出率最低(2.3%,2/87...     

MALDI-TOF MS用于副溶血性弧菌检测初探北大核心CSCD

目的评价基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)对副溶血性弧菌的识别能力,并将该方法用于副溶血性弧菌的同源性分析。方法运用标准菌株判断MALDI-TOF MS方法用于检测副溶血性弧菌的重复性及特异性,将从5种贝类中收集到的65株菌株运用MALDI-TOF MS做鉴定,PCA同源性分析。结果 MALDI-TOFMS对65株副溶血性弧菌的质谱鉴定结果与生化鉴定及PCR鉴定结果一致,即能有效区分副溶血性弧菌、创伤弧菌、蜡样芽胞杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌等5种细菌,其中在副溶血性弧菌,3%NaCl TSA培养24h后的结果鉴定效果更好。10次重复检测副溶血性弧菌的分值均在2.3分以上,PCA聚类分析将65株菌株被分成了4个大类,大多数菌株的PC1、PC2、PC3相对集中靠拢。结论 MALDI-TOF MS检测副溶血性弧菌具有较好的稳定性、特异性,对不同型别的细菌具有较强的分辨能力,且重复性好,同源性分析具有高通量、快速、简单、低成本等优点。     

一起副溶血性弧菌食物中毒事件判定依据的探讨

目的对一起副溶血性弧菌食物中毒事件判定依据进行探讨。方法开展现场流行病学和卫生学调查方法,所得调查数据进行描述性统计分析;并组织专家论证,进行病因的因果推断。结果此事件中共确认病例7例,病例均出现恶心、呕吐、腹泻等症状。2名患者粪样中检出副溶血性弧菌。综合可疑食品调查、现场卫生学调查、暴露因素推断和实验室检测结果,经专家论证,定性为一起副溶血性弧菌食物中毒事件。结论流行病学调查在食物中毒事件调查中有确认地位,现场流行病学调查结果作为食物中毒判定主要依据应得到法律的支持。     

丽水市贝类产品中副溶血性弧菌的血清分型及耐药性研究

目的了解丽水市贝类产品中副溶血性弧菌的血清型分布及耐药性,为防治副溶血性弧菌引起的食源性疾病提供依据。方法从丽水市区农贸市场等采集贝壳类水产品,常规方法分离副溶血性弧菌,参照GB/T 4789.7—2003方法,用标准血清进行分型,用纸片扩散法进行药敏试验。结果检出阳性标本28份,检出率为26.67%(28/105)。分离得到的28株副溶血性弧菌分属于7个血清群,分别为O:4群占39.29%(11/28)、O:3群占14.29%(4/28)、O:2群占14.29%(4/28)、O:11群占14.29%(4/28)、O:1群占7.14%(2/28)、O:7群占7.14%(2/28)、O:10群占3.57%(1/28)。28株副溶血性弧菌中有25株对氨苄西林耐药,1株对四环素耐药。结论从丽水市贝类产品分离的副溶血性弧菌具有血清分群多样化和耐药性简单的特点。     

吉林省小肠结肠炎耶尔森氏菌脉冲场凝胶电泳分析

目的对小肠结肠炎耶尔森氏菌全DNA进行酶切，了解吉林省小肠结肠炎耶尔森氏菌在核酸水平的差异。方法用脉冲场凝胶电泳（PFGE）方法进行分析。结果用PFGE将33株小肠结肠炎耶尔森氏菌分成7个核型，其中0：3血清型分出5个核型；0：9血清型2个核型。结论提示脉冲场凝胶电泳分析可用于小肠结肠炎耶尔森氏菌遗传关系的研究，以及分析暴发流行和常规监测，追踪传染源。     

Molecular epidemiology of Salmonella Enteritidis food poisoning by pulsed-field gel electrophoresis

During the years 1983 to 1999, a total of 120 Salmonella Enteritidis (SE) isolates from various sources, patient's stool, foods, kitchen wear, river water etc., in 61 cases of food poisoning in the Sakai City, were typed by pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) after XbaI or NotI digestion of chromosomal DNA. XbaI and NotI restriction produced 2 (X1 and X2) and 3 (N1, N2 and N3) pulse-field profiles, respectively. The X1 and N1 types were further divided into 8 (Xla-Xlh) and 6 (N1a-N1f) subtypes, respectively. However, these strains of subtypes showed only 0-4 fragment changes in PFGE patterns and the index of discrimination of over 0.75, indicating that SE isolates belong to the same clonal lineage, or are revealing closely clonal relationships. These results suggested a possible strain transmission in case of food poisoning, and epidemiologically related SE isolates were spread in the Sakai City district during a long period.     

2007年中国四省福氏志贺菌分离菌株的毒力基因检测和PFGE分析

目的分析中国河南等四省的福氏志贺菌分离菌株毒力基因和脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型。方法应用PCR方法检测2007年从河南、青海、甘肃和山西分离的262株福氏志贺菌的侵袭性质粒抗原H基因(ipaH)、志贺肠毒素2基因(sen)、志贺肠毒素1基因(set1A)以及侵袭性蛋白基因(ipaBCD)。参考美国CDC的PulseNet实验方法 ,用限制性内切酶NotI对细菌染色体进行酶切,对这些分离菌株进行PFGE分析,使用BioNumerics软件进行聚类分析,并按照PulseNet命名原则对带型进行命名。结果 262株福氏志贺菌分离菌株ipaH、sen、set1A和ipaBCD基因的携带率分别为100%、93.89%、96.18%和92.75%。具有7种毒力基因携带模式,其中89.31%的菌株为Ⅰ型毒力基因携带模式(ipaH+sen+set1A+ipaB-CD+),有99.24%菌株同时携带两种或以上毒力基因。262株福氏志贺菌共分为83个PFGE型别,其中CNJZXN11.0002、CNJZXN11.0003、CNJZXN11.0060、CNJZXN11.0081、CNJZXN11.0137、CNJZXN11.0169、CNJZXN11.0190、CNJZXN11.0195、CNJZXN11.0196、CNJZXN11.0199、CNJZXN11.0217、CNJZXN11.0325和CNJZXN11.0327为13种主要带型。CNJZXN11.0003型菌株在4省均有分布,CNJZXN11.0199为河南菌株的优势带型,CNJZXN11.0137、CNJZXN11.0325和CNJZXN11.0327为山西特有的PFGE带型,与CNJZXN11.0003等主要带型聚类相似性较小。结论四省分离的福氏志贺菌株中ipaH、sen、set1A和iPaBCD毒力基因的携带率较高,而且这些菌株的PFGE型别既具有地区性差异,又具有优势型别的交叉。     

弓形虫不同株染色体DNA多态性PFGE分析

目的分析弓形虫不同分离株染色体DNA多态性。方法采用PFGE技术对弓形虫8个分离株进行分子核型分析。结果在2.0～6.0Mb范围内分离出7～8条染色体,各株PFGE电泳分子核型大体相似,但部分染色体DNA电泳迁移速度并不一致并存在共迁移现象,8个分离株分为3个类型。结论弓形虫不同分离株既存在一定的同源性,但同时又显示染色体DNA多态性。这可能同弓形虫不同分离株毒力等生物特性的差异有关。     

Molecular epidemiology of mechicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) by pulsed-field gel electrophoresis

A total of 103 methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) isolates from patients and 78 MRSA from hospital workers during the years 1990 to 1994, and 52 MRSA from patients in year 2000, in one hospital at Wakayama Prefecture, were typed by pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) profiles. MRSA isolates were grouped into 20 genomic types. These types were further divided into 57 subtypes. The type 1 was dominant among patients, and closely related type 1 strains were spread during 1990-1993. In contrast, the type 2 was dominant among medical workers in the same period. In 2000, the type 2 and 4 strains increased, and the diversity and complication of types appeared. The common types between the patients and medical workers were only type 1 to 3. Some strains isolated from both during the same period were shown to have the same types. Others were shown to be patient-specific types. These results suggest that there are complicated transmissions of MRSA in the hospital, i.e., the endogenous infection, patient-patient cross infection and medical worker-patient cross infection.     

贵州省3株钩端螺旋体分离株PFGE分型与基因种鉴定

目的应用脉冲场电泳（PFGE）分型技术和16S rRNA基因测序分析技术分别对贵州省3株动物宿主钩 端螺旋体分离菌株进行分子分型和基因种鉴定,了解贵州省钩端螺旋体的分子流行病学特征。方法应用 DNA限制性内切酶Not I对钩端螺旋体染色体DNA酶切后,用PFGE将DNA片段分离,采用BionumericsV4.0将3 株钩体菌株PFGE图谱与中国15群15型参考菌株进行聚类分析;同时,应用PCR扩增几乎全长的钩体16S rRNA基因片段,并将扩增产物进行双向序列测定,并与GenBank数据库已注册的核酸序列进行同源性比对 、确定基因种、分析亲缘进化关系。结果来自贵州省的3株动物宿主分离钩体菌株PFGE带型命名为LepNot I 002和LepNot I 003,经聚类分析,3株菌株与黄疸出血群黄疸出血型赖株的相似性大于95%。16S rRNA 基因测序和分析表明,3株贵州分离钩体菌株之间的同源性为100%,与致病性钩体问号钩端螺旋体种（L. interrogans）不同血清型参考菌株的同源性达100%。结论3株贵州动物分离钩体菌株经PFGE分型鉴定与黄 疸出血群赖型赖株的相似性大于95%,经16S rRNA基因测序分析鉴定为L. interrogans种,上述两种方法 对贵州省钩体分离菌株的鉴定结果一致,有助于贵州省钩端螺旋体病的主动监测、暴发调查和传染源追踪 。     

鼠疫疫苗株脉冲场凝胶电泳操作规范的建立

目的建立鼠疫菌脉冲场凝胶电泳的操作规范,并对操作进行风险评估。方法应用疫苗株EV76进行实验,比较不同培养时间、两种酶切的电泳图形,以及胶块中细菌存活情况的检测。结果不同培养时间对电泳结果没有影响,FseI酶切图谱条带较容易分析,胶块内无细菌存活。结论严格执行标准操作程序,才能确保鼠疫菌脉冲场凝胶电泳(PFGE)操作的实验室生物安全。     

Molecular epidemiology of Bordetella pertussis by pulsed-field gel electrophoresis profile: Cincinnati, 1989-1996

Reported cases of pertussis have increased in the United States, with peaks occurring every few years. Bordetella pertussis isolates collected in Cincinnati from 1989 to 1996 were analyzed with pulsed-field gel electrophoresis (PFGE), to evaluate trends. Among 496 isolates, 30 PFGE profiles were identified; 32% were CYXXI-010, the profile that predominated each year. Eighteen profiles (198 strains) were identified in 1989-1992, 20 profiles (197 strains) were identified during the 1993 epidemic, and 11 profiles (101 strains) were identified in 1994-1996. From 1989 to 1996, among 42 patients, isolates from household members in 17 (89%) of 19 households had concordant PFGE profiles. There was no association between PFGE profile and seasonality, age, and hospitalization or pneumonia in infants <1 year old. The 1993 epidemic was associated primarily with an increased prevalence of PFGE profiles that circulated before and after 1993, which suggests that the epidemic was due to factors other than the emergence of a novel B. pertussis strain.     

脉冲场凝胶电泳在肠炎沙门菌食源性疾病溯源中的应用

目的对2006年广州地区食源性疾病中分离的肠炎沙门菌进行分子分型,探讨广州地区肠炎沙门菌的分子型别和多态性,为食源性疾病溯源及致病菌数据库的建立提供依据。方法采用限制性内切酶XbaI,对2006年分离到的菌株进行PFGE分子分型,使用BioNumericsVersion4.0软件(使用Dice系数和UPGMA法)对菌株进行聚类分析,并与深圳市的肠炎沙门菌PFGE型别进行比较。结果所有74株肠炎沙门菌均得到一致的PFGE克隆型,表明两次不同的食源性疾病均由同一PFGE型引起。广州与深圳的肠炎沙门菌PFGE图谱的比较表明,两地食源性疾病分离株具有很近的亲缘关系。结论PFGE分子分型与流行病学资料紧密结合可增强对肠炎沙门菌食源性疾病的溯源和预警。