Bcl-2抑制CD3ε分子介导的T淋巴细胞凋亡

目的 研究Ｂｃｌ－２过量表达对人Ｊｕｒｋａｔ Ｔ淋巴细胞凋亡的影响。方法 采用电穿地将ｂｃｌ－２基因表达载体转ε阳性的人Ｊｕｒｋａｔ Ｔ淋巴细胞（ＴＪＫ）,获得稳定Ｂｃｌ－２的细胞株（ＴＪＫ／Ｂｃｌ－２）后,用抗ＣＤ８单克隆抗体刺激和流式细胞仪检测细胞凋亡结果 Ｂｃｌ－２过量表达可显著抑制ＴＪＫ细胞凋亡。结果 Ｂｃｌ－２参与ＣＤ３ε介导的Ｔ淋巴细胞凋亡的调控     

紫杉醇对三株不同类型淋巴瘤细胞的体外作用

目的 观察抗癌新药紫杉醇对不同类型淋巴瘤细胞的作用,探讨其应用价值。方法 应用例置显微镜、显微镜、流式细胞术、ＤＮＡ片段分析等方法,在体外观察了抗癌新药紫杉醇对３株不同类型淋巴瘤细胞株Ｊｕｒｋａｔ（Ｔ细胞淋巴瘤）、ＢＪＡＢ（Ｂ细胞淋巴瘤,ＥＢＶ阴性）及Ｒａｊｉ（Ｂ细胞淋巴瘤,ＥＢＶ阳性）的作用。结果 紫杉醇对３株洒巴瘤细胞生长均有抑制作用,并可诱导细胞凋亡,但敏感性及程度不同。以Ｊｕｒｋａｔ最为敏     

CD3εY171点突变对CD8ε/CD3ε融合分子介导的T淋巴细胞功能影响及bcl-2基因的抗凋亡作用

目的 观察ＣＤ３εＹ１７１／Ｐ１７１ 点突变及ｂｃｌ－ ２ 基因对Ｔ 淋巴细胞凋亡的影响。方法 通过电穿孔对ＣＤ８ 阴性的人Ｊｕｒｋａｔ Ｔ（ＪＫ） 淋巴细胞转染ＣＤ３εＹ１７１／Ｐ１７１ 点突变的ＣＤ８ε融合分子，对表达野生型ＣＤ８ε融合分子的人ＴＪＫ 转染ｂｃｌ－ ２ 基因分别获得稳定表达细胞株（Ｔ１ＪＫ，ＴＪＫ／ｂｃｌ－ ２），利用ＣＤ８ε单克隆抗体刺激细胞，流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果ＣＤ３εＹ１７１／Ｐ１７１ 点突变或ｂｃｌ－２ 表达增强后，细胞凋亡率均明显降低。结论 本文结果表明ＣＤ３εＹ１７１／Ｐ１７１ 是ＣＤ８ε激活诱导细胞凋亡过程中的一个关键位点，ｂｃｌ－ ２ 对ＣＤ８ε激活诱导细胞凋亡有抑制作用     

反义bcl─2RNA促进HL─60细胞的凋亡

目的：分析反义ｂｃｌ－２对ＨＬ－６０细胞凋亡的作用，为进一步研究凋亡机制打基础．方法：我们用ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ将插有反义ｂｃｌ－２基因片段的重组逆转病毒载体ｐＤＯＲ－ＡＢ转染ＨＬ－６０细胞，用核酸打点杂交方法检测转染效果和载体表达效果，用流式细胞仪检测ｂｃｌ－２的改变及细胞周期的变化，用光镜和电镜观察转染细胞的形态学改变，并用转染的细胞对足叶乙甙敏感性的变化间接证明反义ｂｃｌ－２的作用．结果：ｐＤＯＲ－ＡＢ转入ＨＬ－６０细胞并表达ｂｃｌ－２反义ＲＮＡ；细胞内Ｂｃｌ－２蛋白含量明显下降；细胞周期分析可见凋亡峰；电镜下可见凋亡细胞；ＤＮＡ凝胶电泳出现梯状电泳带．结论：反义ｂｃｌ－２瞬时表达可促进ＨＬ－６０细胞的凋亡，ｂｃｌ－２在ＨＬ－６０细胞凋亡的调节中起重要作用     

表达反义bcl-2的重组腺病毒诱导BT325细胞凋亡

目的 构建携带反义ｂｃｌ－２的重组腺病毒并观察其对ＢＴ３２５细胞生长和凋亡的影响。方法 利用细胞内同源重组的方法构建携带反义ｂｃｌ－２的重组腺病毒，利用反转录ＰＣＲ和免疫组化法检测反义ｂｃｌ－２在细胞内的表达及细胞Ｂｃｌ－２蛋白表达的变化，用ＭＴＴ法和集落形成试验观察重组腺病毒对细胞生长和集落形成能力的影响，用电镜观察、ＤＮＡ片段化分析和流式细胞仪技术检测细胞的凋亡。结果 成功构建了携带反义ｂｃｌ     

转染bcl-2基因抑制足叶乙甙诱导的K562细胞凋亡

目的：观察ｂｃｌ２对Ｋ５６２细胞凋亡的影响。方法：用真核表达质粒ｐ２９０ｂｃｌ２转染Ｋ５６２细胞，用ＲＴＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测ｂｃｌ２ｍＲＮＡ和蛋白表达；用ＭＴＴ实验检测Ｋ５６２细胞对化疗药物足叶乙甙的敏感性变化；用ＤＮＡ“ｌａｄｄｅｒ”检测ｂｃｌ２对凋亡的影响。结果：转染ｂｃｌ２后Ｋ５６２的ｂｃｌ２蛋白表达增高，细胞存活率明显提高，在足叶乙甙低于１２５μｍｏｌ／Ｌ时检测不到凋亡梯形ＤＮＡ；而Ｋ５６２细胞在足叶乙甙为３２μｍｏｌ／Ｌ时就能检测到凋亡梯形ＤＮＡ。结论：若把ｂｃｌ２导入正常造血干细胞，从而增强干细胞对化疗药物的耐受性，这将对化疗具有重要意义。     

转染bcl—1基因抑制足叶乙甙诱导的K562细胞凋亡

观察ｂｃｌ－２对Ｋ５６２细胞凋亡的影响。方法：用真核表达质粒ｐ２９０－ｂｃｌ－２转染Ｋ５６２细胞，用ＲＴ－ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测ｂｃｌ－２ ｍＲＮＡ和蛋白表达；用ＭＴＴ实验检测Ｋ５６２细胞对化疗药物足叶乙甙的敏感性变化；用ＤＮＡ“ｌａｄｄｅｒ”检测ｂｃｌ－２对凋亡的影响。     

乳香提取物诱导Jurkat细胞凋亡的实验研究

检测不同浓度、不同时间作用了下乳香提取物对人急性Ｔ淋巴细胞血病细胞株Ｊｕｒｋａｔ细胞的促凋亡作用。方法：用琼脂糖凝胶电泳技术、透射电子显微镜（ＴＥＭ）和流式细胞仪（ＦＣＭ）分别检测Ｊｕｒｋａｔ细胞的ＤＮＡ梯状带,形态学改变及凋亡峰与药物作用的细胞周期。     

bcl-xL基因介导白血病细胞多药耐药的形成

观察ｂｃｌ－ｘＬ基因可否介导白血病细胞的多药耐药,并探讨其机制。方法采用脂质体法将ｂｃｌ－ｘＬｃＤＮＡ转导入ＨＬ－６０细胞,免疫印迹法检测Ｂｃｌ－ｘＬ及抗凋亡蛋白Ｂａｘ的表达;ＭＴＴ法测定呈足乙甙、柔红霉素、阿霉素对转染细胞的细胞毒性;流式细胞仪定量检测凋亡细胞及细胞内药物浓度。     

反义bcl—2RNA促进HL—60细胞的凋亡

目的：分析反义ｂｃｌ－２对ＨＬ－６０细胞凋亡的作用，为进一步研究凋亡机制打基础，方法：我们用ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ将插有反义ｂｃｌ－２基因片段的重组逆转病毒载体ｐＤＯＲ－ＡＢ转染ＨＬ－６０细胞，用核酸打点杂交方法检测转染效果和载体表达效果，用流式细胞仪检测ｂｃｌ－２的改变及细胞周期的变化，用光镜和电镜观察转染细胞的形态学改变，并用转染的细胞对足叶乙甙敏感性的变化间接证明反义ｂｃｌ－２的作用，结果：ｐ     

柔红霉素体外对HL-60细胞的凋亡作用

目的：了解柔红霉素（ＤＮＲ）体外作用于ＨＬ－６０　细胞时产生凋亡的规律及一些相关蛋白表达的变化。方法：应用光镜、ＤＮＡ电泳及ＦＣＭ检测ＨＬ－６０细胞发生的凋亡模式；用ＩＣ、ＦＣＭ观察相关蛋白的变化。结果：当ＤＮＲ浓度为０．２μＭ～２μＭ时，ＨＬ－６０细胞发生的凋亡率随浓度的增加与作用时间的延长而升高，可见典型的凋亡细胞及明显的ＤＮＡ梯度条带。１μＭ　ＤＮＲ作用２ｈ时，ｂｃｌ－２与ｃ－ｍｙｃ的荧光强度指数（ＦＩ）降低，ｂａｘ、ｃａｓｐａｓｅ－３　的　ＦＩ　升高；而作用５ｈ时，ｂａｘ、ｃａｓｐａｓｅ－３的ＦＩ值反而降低。结论：一定浓度的ＤＮＲ在体外可诱导ＨＬ－６０细胞凋亡，它可抑制ｂｃｌ－２与ｃ－ｍｙｃ蛋白的表达，而激活ｂａｘ、ｃａｓｐａｓｅ－３蛋白的表达。     

精-甘-天-丝四肽对肾小球系膜细胞凋亡相关基因的作用

目的探讨精氨酸－甘氨酸－天门冬氨酸－丝氨酸（ＲＧＤＳ）四肽对肾小球系膜细胞凋亡相关基因白细胞介素－１β－转化酶（ＩＣＥ）和ｂｃｌ－２表达的影响,为利用ＲＧＤＳ四肽调控系膜细胞的增殖与凋亡提供实验理论依据。方法合成ＲＧＤＳ四肽,采用经典的肾小球系膜细胞培养方法进行体外研究;碘化丙啶染色法观察凋亡细胞细胞核的固缩、碎裂现象;琼脂糖凝胶电泳法观察凋亡细胞核小体ＤＮＡ的断裂现象;逆转录－聚合酶链反应技术检测凋亡相关基因ＩＣＥ和ｂｃｌ－２的表达变化。结果与ＲＧＤＳ四肽孵育１０小时后,肾小球系膜细胞出现了典型的凋亡征象,诸如细胞核固缩、碎裂和ＤＮＡ梯形条带等;同时,ＲＧＤＳ四肽处理组的ＩＣＥ和ｂｃｌ－２表达亦明显高于对照组。结论在ＲＧＤＳ四肽诱导的肾小球系膜细胞凋亡过程中,ＩＣＥ和ｂｃｌ－２基因对细胞凋亡可能具有重要的调节作用。     

人乳腺癌MCF—7细胞凋亡过程中p53与bcl—2表达的时序性

目的：研究细胞凋亡过程中ｐ５３与ｂｃｌ－２基因表达变化的时序关系，以探索ｐ５３调控ｂｃｌ－２的可能性。方法：选择具有野生型ｐ５３的人乳腺癌ＭＣＦ－７细胞系，用５－Ｆｕ为诱导剂诱导细胞凋亡；用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交及Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法检测细胞凋亡过程中ｐ５３与ｂｃｌ－２表达变化的时序性。结果：ｐ５３表达增高出现在ｂｃｌ－２表达降低之前。结论：ｐ５３在时序上具有作为ｂｃｌ－２基因负调控转录因子的可能性     

葛根提取物诱导急性非淋巴细胞性白血病细胞凋亡的实验研究

为了探讨葛根提取物诱导白血病细胞凋亡的作用及机制。以１８例急性非淋巴细胞性白血病（ＡＮＬＬ）患者骨髓及ＨＬ－６０细胞分别与葛根提取物、高三尖杉酯碱（ＨＨＴ）、阿糖胞苷（Ａｒａ－ｃ）及ＨＡ（ＨＨＴ＋Ａｒａ－ｃ）共同培养２４ｈ,应用细胞形态学、ＤＮＡ凝胶电泳、ＤＮＡ片段百分率测定等观察以上处理对白血病细胞凋亡的影响;对其中１０例处理前后的骨髓细胞用免疫组化法进行ｂｃｌ－２、ｃ－ｍｙｃ（Ｂ细胞淋巴瘤／白     

类风湿关节炎病人滑膜细胞增生与fas和bcl-2基因的表达

目的探讨类风湿关节炎（ＲＡ）病人滑膜细胞增生是否与细胞凋亡有关。方法通过体外转录合成,并标记ｆａｓ及其配体（ｆａｓＬ）和ｂｃｌ－２ＲＮＡ探针,应用原位杂交方法检测１９例滑膜组织的基因表达。用免疫组织化学方法检测蛋白表达。用ＤＮＡ电泳和流式细胞分析仪检测细胞凋亡。结果７例ＲＡ病人滑膜衬里层细胞明显增生,其中６例有ｆａｓｍＲＮＡ表达,５例表达ｂｃｌ－２,而ｆａｓＬｍＲ－ＮＡ在所有病例均不表达。在ＲＡ滑膜衬里层中,ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ总是伴随ｆａｓ而表达,且ｆａｓ和ｂｃｌ－２的表达率较骨性关节炎（ＯＡ）及正常对照者（ＮＣ）明显增高（Ｐ＜０．０５）。免疫组织化学结果表明,ｆａｓ和ｂｃｌ－２蛋白在滑膜衬里层有表达。从６例ＲＡ、４例ＯＡ病人及３例正常对照者滑膜组织中提取ＤＮＡ,仅１例ＯＡ病人可见典型的ＤＮＡ梯形图形。培养的ＲＡ和ＯＡ病人滑膜细胞经流式细胞分析仪检测,表明自发凋亡的细胞很少（＜５％）。结论ＲＡ病人滑膜细胞内不存在明显的细胞凋亡现象,ｂｃｌ－２过量表达可能抑制了ＲＡ滑膜细胞凋亡,是ＲＡ滑膜细胞增生的原因之一。     

足叶乙甙诱导HL—60细胞凋亡及其bcl—2基因表达

目的：研究ＨＬ－６０细胞在足叶乙甙诱导的细胞凋亡中ｂｃｌ－２基因表达，以说明药物致凋亡的分子机制。方法：采用细胞存活率，形态改变，ＤＮＡ梯形片段分析和原位缺口标记法，分析药物引起的细胞凋亡，以细胞原位杂交和免疫组化分析ｂｃｌ－２ ｍＲＮＡ及其蛋白的表达水平。     

热化疗联合5-Fu诱导大肠癌细胞凋亡和bcl-2表达

目的　研究热化疗诱导大肠癌（ＬｏＶｏ）细胞凋亡及其与ｂｃｌ－２基因表达的关系,探讨热化疗治疗大肠癌的机制。方 法,应用热疗联合５－氟尿嘧啶（５－Ｆｕ）在不同药物浓度、时间和温度条件下诱导ＬｏＶｏ细胞株凋亡,以流式细胞仪检测其 凋亡率及ｂｃｌ－２基因的表达。结果　随着药物浓度的升高、作用时间的延长,细胞凋亡率增加;在相同时间和浓度条件 下,热疗联合５－Ｆｕ的凋亡率与单纯化疗组、单纯热疗组相当;随着药物浓度的升高,ｂｃｌ－２的表达下调;各处理组与对照 组比较均差异显著（Ｐ＜０．０５）;但热化疗使ｂｃｌ－２表达下调的程度与单纯热疗及单纯化疗相当;高温也可以使ｂｃｌ－２的表 达下调。结论　热化疗、单纯化疗及单纯热疗均能诱导ＬｏＶｏ细胞凋亡且可使ｂｃｌ－２基因表达下调;热疗联合５－Ｆｕ在诱 导凋亡及下调ｂｃｌ－２基因表达方面无协同作用。     

CD3εY171点突变对CD8ε／CD3ε融合分子介导的T淋巴细胞？…

目的 观察ＣＤ３εＹ１７１／Ｐ１７１点突变及ｂｃｌ－２基因对Ｔ淋巴细胞凋亡的影响,方法 通过电穿孔对ＣＤ７８阴性的人ＪｕｒｋａｔＴ（ＪＫ）淋巴细胞转染ＣＤ３εＹ１７１／Ｐ１７１点突变的ＣＤ８ε融合分子,对表达野生型ＣＤ８ε融合分子的人ＴＪＫ转染ｂｃｌ－２基因分别获得稳定表达细胞株（Ｔ１ＪＫ,ＴＪＫ／ｂｃｌ－２）,利用ＣＤ８ε单克隆抗体刺激细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 ＣＤ３εＹ１７１／Ｐ１     

鼻咽癌肿瘤细胞增殖与凋亡关系及其分子机制的研究

目的了解鼻咽癌肿瘤细胞增殖与凋亡的关系及ｂｃｌ２表达在发病机制中的作用。方法１５例癌旁组织,６５例鼻咽癌用免疫组化技术标记ｂｃｌ２、ＰＣＮＡ,ＨＥ染色中作核分裂像计数,并将后两者合并为增殖指数;用ＩＳＥＬ法显示４４例鼻咽癌及１５例癌旁组织中的细胞凋亡。结果①鼻咽癌ＰＣＮＡ、核分裂像、凋亡细胞数均显著高于癌旁组织,但均与组织分型无关。增殖指数与凋亡细胞数呈正相关。②ｂｃｌ２在鼻咽癌中高表达,与组织分型有关,与凋亡细胞数呈负相关。结论①鼻咽癌肿瘤细胞具有高水平增殖的同时也具有高水平的凋亡,其肿瘤本身是高水平基础上增殖与凋亡失衡的结果。②ｂｃｌ２不是调控肿瘤细胞凋亡的唯一因素,但其抑制细胞凋亡的功能在鼻咽癌发病机制中有重要作用。     

紫杉醇诱导HL—60细胞凋亡的研究

目的：观察抗微管药紫杉醇对急性白血病细胞株HL－60是否具有凋亡诱导作用,并进一步研究bcl－2基因在此过程中的作用。方法：（1）以紫杉醇处理HL－60细胞,观察细胞生长抑制作用的时间效应和剂量效应,在光镜和电镜下观察细胞形态变化;（2）用流式细胞仪检测药物孵育前后细胞凋亡率（AP）的变化;（3）用RT－PCR法检测药物孵育前后bcl-2基因的表达水平。结果：（1）在一定剂量和时间范围内紫杉醇能抑制HL－60细胞生长;（2）紫杉醇能诱导HL－60细胞凋亡,并显示剂量效应：（3）在紫杉醇诱导HL－609细胞凋亡过程中,bcl－2基因表达水平下调。结论：紫杉醇能诱导HL－60细胞凋亡;bcl-2基因参与了紫杉醇诱导HL－60细胞凋亡的调控。