DDPH对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖及癌基因表达的影响

采用氚－胸腺嘧啶核苷（3H－TdR）参入、电镜、原位杂交及Northern blot杂交方法，观察了 1－ （2，6－二甲基苯氧基）－2－（3，4－二甲氧基苯乙胺基）丙烷盐酸盐（DDPH）对自发性高血压大鼠（SHR）血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的作用及对原癌基因及抑癌基因的影响。结果发现：DDPH在降低SHR血压 的同时，能减少VSMC的线粒体、粗面内质网及3H－TdR参入量（P＜0．01），并能逆转c－fos、c－myc、c－sis 原癌基因mRNA表达增强（P＜0．05或＜0．01）以及P53抑癌基因mRNA表达减弱（P＜0．05）。表明： DDPH能抑制SHR的VSMC增殖，与癌基因调控的分子生物学机制有关。     

牛磺酸抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖

以~3H-胸腺嘧啶参入和细胞计数的方法,观察牛磺酸对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的抑制效应。结果表明,培养液中加入牛磷酸(5、10和20mmol/L)能明显抑制培养的自发性高血压大鼠(SHR)和正常血压大鼠(WKY)VSMC的~3H-胸腺嘧啶参入,降低其细胞计数。牛磺酸对血管紧张素Ⅱ(10~(-7)mmol/L)刺激的VSMC增殖亦呈剂量依赖地抑制效应。     

肉桂氨茴酸对血管平滑肌细胞生长及周期蛋白P21和P53表达的影响

目的探讨肉桂氨茴酸对血管平滑肌细胞(VSMC)生长及周期蛋白P21和P53表达的影响。方法以培养的兔主动脉VSMC株为模型,应用活细胞计数进行细胞增殖和迁移检测,计算半数抑制浓度(IC50)。采用流式细胞仪分析肉桂氨菌酸作用24h后VSMC周期的变化和细胞凋亡率,以western印迹法检测细胞周期蛋白P21和P53的表达。结果20%的胎牛血清条件下,肉桂氨茴酸显著抑制VSMC的增殖和迁移,在9．6～305．8/μmol/L范围内,随剂量增加其抑制率增加。IC-(50)为75．6/μmol/L。IC-(50)的肉桂氨茴酸作用VSMC 24h后,G1期细胞数占24%,显著低于作用前的51%(P＜0．01),形成明显的亚二倍体峰,细胞凋亡率为36．7%。经IC_(50)的肉桂氨茴酸作用VSMC 24h后出现明显的P21和P53条带,而空白对照组无表达。结论肉桂氨茴酸浓度依赖性抑制VSMC的生长,其抑制作用主要通过细胞凋亡的方式。肉桂氨茴酸抑制VSMC增殖与细胞周期蛋白P21和P53的表达有关。     

川芎嗪对高血压大鼠心肌和血管平滑肌细胞游离钙的影响

目的研究川芎嗪对自发性高血压大鼠心肌和血管平滑肌细胞游离钙浓度的影响。方法以体外培养的自发性高血压大鼠和正常血压对照大鼠的心肌细胞及动脉平滑肌细胞为实验模型，用Fura-2荧光法检测细胞内游离钙浓度。结果自发性高血压大鼠心肌和血管平滑肌细胞的游离钙浓度显著高于正常血压对照大鼠。川芎嗪对自发性高血压大鼠心肌和血管平滑肌细胞的游离钙浓度具有显著抑制作用，并呈现量效关系。较高剂量的川芎嗪对正常血压对照大鼠心肌和血管平滑肌细胞的游离钙浓度也有抑制作用；而较低剂量的川芎嗪不仅无抑制作用，还使正常血压对照大鼠心肌细胞游离钙浓度显著升高。结论川芎嗪具有钙离子拮抗剂的特性，其在高血压防治中的作用，值得进一步探讨。     

HSP70与突变型P53在卵巢癌中的表达及临床意义

目的:探讨卵巢上皮癌组织中HSP70与突变型P53(mtP53)的表达情况及其在临床应用E1B-55KD缺陷型腺病毒联合化疗治疗卵巢癌中的指导意义。方法:采用免疫组化方法测定84例卵巢肿瘤(初治癌36例,复发癌23例,良性和交界性肿瘤25例)组织中HSP70与mtP53表达的阳性率。结果:卵巢癌组织中HSP70与mtP53的表达明显高于良性和交界性肿瘤(P<0.05),复发性卵巢癌HSP70与mtP53阳性率明显高于初治卵巢癌,且与卵巢恶性肿瘤的病理分级、进展期密切相关。卵巢癌中HSP70和mtP53共同阳性率为55.93%,复发癌组织中,HSP70和mtP53共同阳性率69.57%,明显高于初治癌(47.22%)。复发癌中铂类耐药型卵巢癌HSP70与mtP53阳性率分别为87.5%、87.5%,均明显高于非耐药组(57.14%、42.86%)。结论:mtP53和HSP70的表达与卵巢癌的进展期及细胞分化程度相关,晚期和低分化的卵巢癌中mtP53与HSP70阳性率明显高于早期和高分化型,提示两者可作为推测卵巢癌预后的指标。铂类耐药型卵巢癌mtP53与HSP70表达率明显高于非耐药型卵巢癌,且复发性卵巢癌mtP53与HSP70共同阳性率明显高于初治卵巢癌,表明mtP53与HSP70的相互作用可能在复发性卵巢癌发展中起作用。而溶瘤性腺病毒应用可能为难治性卵巢癌治疗提供新途径。     

检测P21、P53、HSP70在食道癌及癌前病变中的表达及意义

目的分析P21、P53、HSP70检测在食道癌及癌前病变中的表达,积极探讨临床意义和价值。方法选取我院2012年1月-2013年1月收治的60例食道癌、40例食道良性增生性疾病及20例正常食管组织者,分别取患者病理切片进行HE染色,病理切片中P21、P53、HSP70采用免疫组化法进行检测。结果 HSP70在食道癌组织中表达量低于癌前病变组织,癌前病变组织表达量较正常组织更低,P53和P21在食道癌组织中表达量高于癌前病变组织,癌前组织组织又高于正常组织(P0.05);食道癌分化程度越高,P21和P53表达水平越高,HSP70表达水平越低,差异显著(P0.05)。结论检测P21、P53、HSP70等指标的表达,与食道癌的发生密切相关,为食道癌临床诊断、治疗及预后评估提供参考依据。     

P27对血管平滑肌细胞增殖的调控

社会正逐步进入老龄化,血管增殖性疾病如动脉粥样硬化,经皮腔内冠状动脉成形术后再狭窄等发病率和死亡率逐年上升,已成为严重影响人类健康的主要疾病目前认为血管平滑肌(vascular smoth muscle cell,VSMC)的异常增殖和迁移在冠心病等血管增殖性疾病的发生发展中具有重要作用.随着分子生物学的发展,对引起VSMC异常增殖和迁移的分子学机制正在不断深入,为血管增殖性疾病的治疗提供了新的思路.通过对细胞周期素(Cyclins)和细胞周期素依赖性激酶(cyclins delay kinase,CDK)及其复合物的抑制作用来调控细胞周期的进程.对P27蛋白的研究将有助于血管增殖性疾病的治疗.本文就P27与VSMC增殖和迁移做一综述.     

P53病毒增强型质粒-脂质体复合物对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的:研究腺相关病毒增强型质粒载体介导的p53基因对血管平滑肌细胞（VSMC）的作用,探讨其用于防治冠状动脉旁路术后移植血管再狭窄等心血管内外科疾病的可能性。方法：构建了野生型p53基因的腺相关病毒增强型质粒表达载体,通过阳离子脂质体Dosper介导,体外转染杂VSMC。聚合酶链技术检测的基因表达。应用细胞计数及DNA合成分析技术,测定p53基因对VSMC增殖的抑制效应。结果：外源性p53基因可有效导入VSMC并表达;p53基因导入可显著抑制细胞生长,DNA合成减少。结论：野生型p53基因腺相关病毒增强型质粒载体转染VSMC可有效地抑制细胞增殖。     

激活TRPV1对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 探讨瞬时受体电位香草醛亚家族1 (transient receptor potential vanilloid 1,TRPV1)对培养的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖的影响.方法 用组织贴块法分别培养SHR和WKY大鼠的主动脉VSMCs,采用细胞免疫荧光进行鉴定.分别用辣椒素和iRTX激活和拮抗TRPV1受体,CCK-8法检测VSMCs增殖;Westem blot法检测TRPV1、磷酸化-Akt(p-Akt)和总Akt (t-Akt)的蛋白表达.结果 ①SHR-VSMCs中TRPV1蛋白相对表达量低于WKY-VSMCs(0.32±0.05 vs 0.55 ±0.11,P＜0.05);TRPV1激动剂辣椒素可显著上调SHR-VSMCs (0.65±0.19)和WKY-VSMCs(0.89±0.13)中TRPV1的表达(P＜0.05).②SHR-VSMCs的增殖能力高于WKY-VSMCs(1.30±0.07 vs0.88±0.23,P＜0.05);辣椒素呈剂量依赖性地抑制SHR-VSMCs的增殖(对照组:1.30±0.07,1μmol/L辣椒素组:0.93 ±0.10,10 μmol/L辣椒素组:0.83±0.16,P＜0.05);应用iRTX拮抗TRPV1即拮抗辣椒素的抗增殖作用(1μmoL/L辣椒素组:0.93 ±0.10,1μmol/L辣椒素±1 μmol/LiRTX组:1.23 ±0.14,P＜0.05).③SHR-VSMCs中Akt磷酸化水平高于WKY-VSMCs(0.44 ±0.02 vs0.29±0.09,P＜0.05);辣椒素激活TRPV1抑制VSMCs中Akt的磷酸化(WKY-VSMCs:0.13±0.02,SHR-VSMCs:0.23±0.03,P＜0.05);TRPV1拮抗剂iRTX可拮抗辣椒素作用,使WKY-VSMCs (0.37±0.07)、SHR-VSMCs(0.43 ±0.10)中Akt磷酸化水平升高(P＜0.05).结论 激活TRPV1可能通过抑制Akt的磷酸化而抑制SHR-VSMCs增殖.     

热休克蛋白70和P53在人类乳腺癌中的表达及意义

目的　探讨HSP70和P5 3在乳腺癌中所起的作用及其在临床诊断中的应用价值。方法　运用超敏免疫组织化学技术 (SP法 )检测HSP70和抑癌基因P5 3蛋白在 5 2例乳腺癌中的表达情况。结果　HSP70的阳性率为 35 % (18/ 5 2 ) ,其表达与乳腺癌的病理学级别有关 (P <0 .0 5 )。P5 3的过度表达率为 36 .5 % (19/ 5 2 ) ,其表达与乳腺癌的病理学级别有关 (P <0 .0 5 )。在 5 2例乳腺癌中 ,P5 3的过度表达和HSP70的表达具有一定的相关性 (P<0 .0 5 )。结论　HSP70和P5 3在乳腺癌中的相关性提示HSP70可能参与P5 3的代谢 ;HSP70和P5 3表达程度与肿瘤的恶性程度有关。     

神经肽Y对培养的自发性高血压大鼠动脉平滑肌细胞的影响

应用细胞培养,~3(H-)胸腺嘧啶核苷和~3(H-)亮氨酸的掺入及细胞计数方法,研究缩血管物质神经肽Y(NPY)对血管平滑肌细胞生长的作用。结果发现,用神经肽Y作用48h后可促进离体培养的自发性高血压大鼠(SHR)动脉平滑肌细胞DNA合成增加28.0％,蛋白质合成增加54.6％,与对照组比较有显著性差异(P<0.01);而细胞数无明显增加(P>0.05)。提示,NPY对培养的SHR动脉平滑肌细胞有促肥大效应;SHR血管壁上NPY分布密度增加是引起高血压时血管壁结构改变的重要因素之一。     

Effects of Total Flavonoids ofHippophae RhamnoidesL.on Intracellular Free Calciumin Cultured Vascular Smooth Muscle Cells of Spontaneously Hypertensive Rats and Wistar-Kyoto Rats

Essential hypertension (EH) has become oneof the main diseases that endanger human healthinmodern society . It has been a key project forscholars at home and abroad to find out howto ef-fectively prevent and cure hypertension andlesionsinits target organs . Total flavonoids ofHippophae rhamnoidesL.(TFH) ,a natural flavonoids ,is extractedfromthe fruit of wild plantHippophae rhamnoidesL.,the great mass of which is quercetin ( Que) andisorhamnetin (Isor) . Research has found thatTFH has di…     

鼻咽癌组织HSP27与P53、P21癌基因蛋白表达相关性研究

探讨鼻咽癌 (nasopharyngeal carcinoma,NPC)组织中热应激蛋白 2 7(heat stress protein 2 7,HSP2 7) ,P5 3及 P2 1癌基因蛋白表达水平及其相互关系 ,采用间接免疫荧光染色和 SABC相结合的双重荧光染色法 ,分析 3种蛋白在鼻咽癌发生、发展及预后中的作用。结果发现 :32例 NPC中 HSP2 7,P5 3和 P2 1阳性表达比例 (阳性率 )分别为83.8%、 5 0 %、 93.8% ;8例鼻咽增生性炎症组织中三者比例为 4/ 8、 0 / 8、 4/ 8;4例正常组织则全部阴性表达。 HSP2 7、P5 3、 P2 1的共表达以 HSP2 7与 P2 1的共表达最为显著 ,且与 NPC恶性程度和临床分期有关。提示 :HSP2 7及 P2 1阳性表达可能是 NPC发生的早期变化 ,可将二者联合作为 NPC早期诊断及预防的敏感生物标志物。     

通络益智散对血管性痴呆大鼠脑组织HSP70表达的影响

目的：通过动物实验探讨通络益智散对 VD 大鼠脑组织 HSP70表达的影响。方法：以13只 Wistar 大 鼠为一组，随机共设5组：空白组、模型组、通络益智散低剂量组、通络益智散高剂量组、尼莫地平组。除空白组外， 其余各组采用腹腔注射硝普纳及反复夹闭双侧颈动脉的方法，制造血管性痴呆模型。3周后，在脑组织观察 HSP70 的表达。结果：模型组及给药各组 VD 大鼠脑内 HSP70的表达均明显高于正常组(P＜0． 01) 。结论：通络益智散 能够增强 HSP70的表达，增加脑细胞对缺氧的耐受性，抵抗进一步致死性损伤。     

通络益智散对血管性痴呆大鼠脑组织HSP70表达的影响

目的：通过动物实验探讨通络益智散对VD大鼠脑组织HSP70表达的影响.方法：以13只Wistar大鼠为一组,随机共设5组：空白组、模型组、通络益智散低剂量组、通络益智散高剂量组、尼莫地平组.除空白组外,其余各组采用腹腔注射硝普纳及反复夹闭双侧颈动脉的方法,制造血管性痴呆模型.3周后,在脑组织观察HSP70的表达.结果：模型组及给药各组VD大鼠脑内HSP70的表达均明显高于正常组（P＜0.01）.结论：通络益智散能够增强HSP70的表达,增加脑细胞对缺氧的耐受性,抵抗进一步致死性损伤.     

雷帕霉素对血管平滑肌细胞增殖影响的实验研究

 【目的】观察雷帕霉素（rapamycin）对体外培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞（SMC）增殖的作用。【方法】组织贴块法体外原代培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞，取对数生长期细胞（第6-10代）用作实验，MTr法检测不同浓度雷帕霉素对平滑肌细胞增殖的效果，并用RT-PCR法检测其对平滑肌细胞增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）mRNA表达情况的影响。【结果】①MTT法检测显示雷帕霉素呈剂量依赖性抑制体外培养的大鼠平滑肌细胞增殖，各组吸光值似）分别为：对照组0．902±0．106；0．1ng／mL组0．873±0．079；1ng／mL组0．797±0．046；10ng／mL组0．692±0．061；100ng／mL组0．624±0．075。方差分析差异有显著性。F=28．85，P〈0．001；两两比较1ng／mL以上浓度组与对照组间差异均有显著性，不同浓度间差异显著。0．1ng/mL组与对照组相比差异无显著性。②RT-PCR显示雷帕霉素以浓度依赖模式抑制大鼠平滑肌细胞PCNA-mRNA合成。各组校正后光密度值分别为：对照组219．35±7．20；0．1ng／mL组212．39±6．56；1ng/mL组113．15±10．09；10ng／mL组97．17±12．25；100ng／mL组84．38±8．66。方差分析F=195．49，P〈0．001。两两比较与MTT检测相同。【结论】雷帕霉素呈剂量依赖性显著抑制大鼠平滑肌细胞的增殖，1ng／mL时即可明显起效。雷帕霉素有望成为治疗内支架术后再狭窄的理想药物之一。     

P53蛋白在宫颈脱落细胞中的异常表达

利用免疫组织化学方法，对６４例，年龄在２２～７６岁之间患者的宫颈脱落细胞中Ｐ５３的表达进行检测，结果发现：Ｉ级细胞２８例，Ⅱ细胞３３例中Ｐ５３表达均为阴性，Ⅱ～Ⅲ级细胞３例中２例Ｐ５３表达阳性（６６．６％）；Ｐ５３表达阳性与宫颈病变患者年龄无关。结果提示：利用免疫组织化学方法，检测宫颈脱落细胞中Ｐ５３表达，对宫颈癌的早期诊断有一定的意义。