抗环子孢子蛋白保守II~ 区单克隆抗体的制备及鉴定

目的　获得针对恶性疟原虫环子孢子蛋白 (CSP)保守II 区 (RegionII )的单克隆抗体。　方法　采用恶性疟原虫保守II 区十二肽 (EWSPCSVTCGNG)免疫BALB/c小鼠 ,经融合 ,ELISA 3次筛选 ,获得 3株分泌针对保守II 区单克隆抗体的杂交瘤细胞株。　结果　ELISA检测结果显示单抗能与重组表达的恶性疟原虫CSP片段及天然CSP特异性反应。间接荧光抗体检测显示 ,单抗不仅能识别恶性疟原虫子孢子 ,也能识别约氏疟原虫子孢子。　结论　成功地获得了针对恶性疟原虫CSP保守II 区的单克隆抗体     

抗环子孢子蛋白保守II+区单克隆抗体的制备及鉴定

目的　获得针对恶性疟原虫环子孢子蛋白 (CSP)保守II⁺ 区 (RegionII⁺ )的单克隆抗体。　方法　采用恶性疟原虫保守II⁺ 区十二肽 (EWSPCSVTCGNG)免疫BALB/c小鼠 ,经融合 ,ELISA 3次筛选 ,获得 3株分泌针对保守II⁺ 区单克隆抗体的杂交瘤细胞株。　结果　ELISA检测结果显示单抗能与重组表达的恶性疟原虫CSP片段及天然CSP特异性反应。间接荧光抗体检测显示 ,单抗不仅能识别恶性疟原虫子孢子 ,也能识别约氏疟原虫子孢子。　结论　成功地获得了针对恶性疟原虫CSP保守II⁺ 区的单克隆抗体。     

感染恶性疟原虫或间日疟原虫蚊体内子孢子和环子孢子抗原的定量测定

准确地估计蚊虫体内疟原虫子孢子的数量对于疟疾的监测、预防和媒介控制都是非常必要的。目前使用的蚊虫体内子孢子数量测定法是定量环子孢子(CS)ELISA试验。该法快速、准确,具有种特异性。但近年来的实践证明,该法需要改进。为使目前用于恶性和间日疟原虫子孢子定量检测的CS ELISA法试剂标准化,以及进一步确定蚊虫体内CS抗原量与子孢子数之间的相关性,开展了双抗体夹心法ELISA定量测定恶性疟原虫(Pf)、间日疟原虫(Pv210)和Pv247CS抗原和子孢子的研究。抗Pf、Pv210和Pv247CS抗原的单克隆抗体(MAb)来自WHO疟疾子孢子参考实验…     

间日疟原虫子孢子免疫BALB/c小鼠的试验研究

用间日疟病人血,离体感染中华按蚊,分离子孢子,用10～12万条子孢子/次的量,免疫BALB/c小鼠,抗体效价均达到1:640,取其脾细胞作融合试验,已培养出抗体滴度高、特异性强的抗间日疟原虫子孢子单克隆抗体(McAb)。     

以单克隆抗体鉴定三日疟环子孢子蛋白质及检测巴氏疟原虫子孢子共有的抗原决定簇

本文报道以抗三日疟原虫子孢子单克隆抗体鉴定同种疟原虫的环子孢子蛋白质和研究三日疟原虫与猴巴氏疟原虫两者间的关系。以弗氏按蚊叮咬感染了三日疟的夜猴,吸血后15～21天解剖唾腺获得子孢子,经多次静脉接种免疫BALB/c小鼠,取小鼠的脾细胞与浆细胞瘤细胞融合得杂交瘤细胞,从接种杂交瘤小鼠腹水提纯单克隆抗体(MoAB 6BlO)。环子孢子蛋白质鉴定,以低温贮存的IFAT滴度1:≥50,000、活的三日疟子孢子直接放入于含2%SDS、10%甘油、     

疟疾子孢子疫苗伍用Detox佐剂时的安全性、免疫原性和效果

抗疟原虫环子孢子(CS)蛋白重复区的多克隆和单克隆抗体被动转移给小鼠和猴,能抵抗子孢子诱导的疟疾。以伯氏疟原虫蛋白重复区为主要结构的合成肽和重组蛋白疫苗在实验动物亦显示诱导产生保护性免疫。为此,作者设计了恶性疟原虫的CS蛋白疫苗:含有B细胞表位的CS蛋白重复区(R32)T辅助细胞表位的流感病毒A非结     

人疟原虫的子孢子与红内期虫体间具有免疫交叉反应的证据

疟原虫在哺乳类宿主体内的发育是复杂的,不少研究认为子孢子表面与红内期原虫间无共同抗原。但本文证明,人恶性疟原虫子孢子表面与红内期原虫具有共同抗原,此抗原并能刺激人体发生强免疫应答。作者以间接免疫荧光法,用抗人工培养的恶性疟原虫泰国株(Kl)的单克隆抗体,测试恶性疟原虫子孢子,在22个单克隆抗体中,有一个(McAb5.1)与子孢子呈强阳性反应,其稀释滴度高达1:10~6;而且,其对子孢     

酶联免疫吸附试验用于检测和鉴别人疟媒介内的子孢子

昆虫学家判定疟疾媒介历来以在其唾腺内发现子孢子为依据,此法操作烦琐且在现场鉴定的标本数量受到限制,更主要的是发现子孢子后仍难以根据形态鉴别疟原虫的虫种,其结果也不可靠。用酶联免疫吸附试验(ELISA)则可解决不少问题。1985年美国的纽约大学,Walter Reed陆军研究所及海军医学研究所合作,制成抗恶性疟原虫和间日疟原虫(子孢子)的环子孢子蛋白质的单克隆抗体(IgG)。其中的2A10与NMR1-3分别在抗恶性疟和间日疟子孢子时显示有较高的敏感性与特异性。目前用此法已能检测带有     

以间接免疫荧光试验或免疫过氧化物酶抗体试验检测体外培养的伯氏疟原虫红外期的血清反应性

以有人胎肺细胞的盖玻片置于含10%小牛血清的NCTC-135培养基培养至细胞生长接近汇合成片时,加入按蚊唾腺的伯氏疟原虫子孢子,放5%CO_2培养箱中37℃孵育,于不同时间,取培养物用Hanks缓冲盐水(HBSS)洗涤,以冷甲醇固定,再以HBSS洗后即成培养的红外期抗原片,存4℃备用。经84拉德~(60)Co照射的伯氏疟原虫子孢子,按每次30,000个子孢子的剂量静脉免疫小鼠3次,获得与红细胞期无交叉反应的抗子孢子血清。用氯喹控制小鼠的感染,取得抗红细胞期的血清。单克隆抗体有二:其一是能与伯氏疟原虫子孢子保护性表面抗原(Pb44)反应的,腹水液纯化的IgG_1,在体内可中和子孢子感染;另一种是能与子孢子表面抗原相反应并     

感染恶性疟原虫或间日疟原虫蚊体内子孢子和环子孢子抗原的定量测定[英]／De Arruda ME，Collins KM, Hochberg LP, et al//Ann Trop Med Parasitol

准确地估计蚊虫体内疟原虫子孢子的数量对于疟疾的监测、预防和媒介控制都是非常必要的。目前使用的蚊虫体内子孢子数量测定法是定量环子孢子（CS）ELISA试验。该法快速、准确，具有种特异性。但近年来的实践证明，该法需要改进。为使目前用于恶性和间日疟原虫子孢子定量检测的CS ELISA法试剂标准化，以及进一步确定蚊虫体内CS抗原量与子孢子数之间的相关性，开展了双抗体夹心法ELISA定量测定恶性疟原虫（Pf）、间日疟原虫（Pv210）和Pv247 CS抗原和子孢子的研究。     

以种特异性的放射免疫法测定蚊体内疟原虫子孢子的实验室评价

本文报道以单克隆抗体(Mab)放射免疫法(RIA)检测按蚊体内的疟原虫子孢子抗原。实验使用3种单克隆抗体,其中2种为抗诺氏疟原虫子孢子(2G3和8E11),另一种为抗食蟹猴疟原虫子孢子,实验蚊均自泰国分离的大劣按蚊。将受检蚊置塑料微量离心管内,用玻璃棒研碎,加入50μl蛋白酶抑制剂PBS,通过     

恶性疟原虫乳酸脱氢酶特异性单克隆抗体的制备

目的制备恶性疟原虫乳酸脱氢酶特异性单克隆抗体。方法克隆、表达恶性疟原虫乳酸脱氢酶基因,并以表达的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备单克隆抗体,对所制备的单克隆抗体确定其亚类和效价,蛋白质印迹法(Western blotting)分析其特异性。结果成功克隆并表达了恶性疟原虫乳酸脱氢酶基因,以重组恶性疟原虫乳酸脱氢酶蛋白作为免疫源制备单克隆抗体,共筛选了15株能高效分泌效价在1∶6 400～1∶51 200特异抗体的细胞株,抗体亚类为IgG1或IgG2。所有抗体均能唯一识别恶性疟原虫虫源蛋白Mr 33 000组分,而与疫区非疟疾发热病人的红细胞组分无交叉反应。结论以重组恶性疟原虫乳酸脱氢酶蛋白为免疫源成功制备了能识别天然恶性疟原虫乳酸脱氢酶蛋白的特异性单克隆抗体。     

用单克隆抗体分析约氏疟原虫抗原的研究 Ⅰ.约氏疟原虫红内期与人疟原虫的共同抗原

用粗提的约氏疟裂殖子免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与Sp 2/0瘤细胞融合,获得13株分泌抗约氏疟红内期单克隆抗体的杂交瘤。这些McAb分别属于小鼠:IgG_1,IgG_(2a),IgG_(2b)及IgG_3亚类。据免疫荧光观察,13株McAb可分为4类:1.与红内期各发育阶段的原虫能出现荧光反应;2.针对晚期滋养体及裂殖体;3.抗裂殖体及裂殖子;4.单纯抗裂殖子。有5株McAb与人疟原虫发生荧光反应,其中4株只与恶性疟原虫交叉,M_(26-32)则不仅与恶性疟原虫且与间日疟原虫均有强的交叉反应,,表明约氏疟与人的两种疟原虫间有共同抗原,并提示恶性疟原虫与间日疟原虫间也有共同抗原。共同抗原在不同种间的分布和含量不尽相同。用未经固定的感染红细胞加McAb作间接荧光试验,在感染红细胞表面未观察到荧光反应。     

猴和人疟原虫子孢子的抗体反应:子孢子的发育期、种的特异性和株的交叉反应性

本文报告了猴疟原虫子孢子抗原的成熟性、猴疟原虫子孢子抗体的种特异性、人疟原虫子孢子种的特异性和株的交叉反应性的研究结果,为制备子孢子免疫虫苗提供参考。通过对猴间日疟(B株)原虫孢子增殖的不同时期对宿主的免疫诱发力和感染力的观     

识别疟原虫环子孢子蛋白的T细胞克隆及其保护效应

已有的研究表明,小鼠经照射灭活的疟原虫子孢子或子孢子表面抗原免疫后获得的抗子孢子感染的抵抗力,主要依赖于能识别环子孢子蛋白(CS)和子孢子表面抗原(SSP_2)的CD8~+T细胞。环子孢子蛋白的T     

用双部位酶联免疫吸附试验鉴定感染疟原虫的蚊媒

鉴于应用免疫放射试验(IRMA)检测蚊体内子孢子要有较复杂的条件设备,本文报导试用双部位酶联免疫吸附试验(ELISA)微量法进行检测子孢子的研究。抗原为子孢子阳性蚊,以大劣按蚊叮咬感染诺氏疟原虫(H株)的恒河猴或弗氏按蚊叮咬感染伯氏疟原虫(ANKA株)的仓鼠后14～16天将蚊杀死而得,置室温干燥器内保存8周后使用。抗血清为对诺氏疟原虫子孢子特异的单克隆抗体(2G3),先以DEAE-Se-     

抗恶性疟原虫子孢子单克隆抗体的比较测试以发展ELISA

应用单克隆抗体(McAb)检测恶性疟原虫子孢子,因各实验室均采用自己的抗体及所用McAb对环子孢子蛋白上的抗原决定簇识别有差异,使结果难以比较。本文旨在选择一种理想的McAb,按标准化方法建立ELISA检测技术。这种McAb应对恶性疟子孢子有特异性,对世界各地区的子孢子均有识别力,与辣根过氧化酶(HRP)结合后活性仍保存,较现有检测法敏感性好。 10种McAb:CDC58-159-2,NFS1,NFS2,2C11,2A10,1B2.2,1G3.4,5G5.3,5A4.1,和5C1.1分别由美国疾病防治中心等4个单位提供。抗体均经A-蛋白柱层析     

伯氏疟原虫子孢子感染肝组织的活体观察

疟原虫子孢子对宿主肝组织的感染是一个非常复杂的过程。目前有一种流行的模式认为子孢子通过库普弗细胞(kupffer cell,KFC)进入宿主肝组织,但该模型缺乏直接证据。纽约大学医学院医学与分子寄生虫学系Frevert等利用绿色荧光蛋白EGFP或红色荧光蛋白drFP583/DsRed/RFP标记的伯氏疟原虫子孢子,感染荧光标记的Tie2-GFP小鼠或lys-EGFP-ki小鼠,利用活体显微镜对子孢子在肝组织中的移行过程进行动态监测,并且通过肝组织病理学切片的观察和血清丙氨酸转氨酶(ALT)活性的测定,分析疟原虫子孢子在感染过程中对宿主肝组织造成的危害。对26只…     

疫苗接种预防人体疟疾的展望

应用X线照射的血内伯氏鼠疟原虫,或血内伯氏鼠疟原虫的水不溶性部分,或X线照射的子孢子作为疫苗,接种啮齿类防御活的伯氏鼠疟原虫攻击感染已获得了成功,并已证明这些疫苗具有期的特异性。本文概述了一种没有危险的现场试验方法及类似的疫苗预防人体恶性疟的效力。强调指出:(1)在没有模型的情况下虽能测试疫苗的效力,但仅能测试疫苗对人体恶性疟原虫的预防作用;(2)衡量防护作用应以防止发病和防止死亡为依据;(3)为了适应需要,必须加强大量繁殖疟原虫裂殖子和/或子孢子的研究,并寻找增高人体防御恶性疟原虫的免疫反应水平的方法。     

在巴布亚新几内亚在对恶性疟原虫环子孢子蛋白的应答中独特的CD4~+T细胞亚群的有限激活

一般认为CD4~+和CD8~8T淋巴细胞以及抗体在子孢子免疫应答中起重要作用。动物试验发现,细胞因子特别是γ-IFN和IL-6参与免疫应答。但这些因子的相互作用及其疫苗发展的重要性仍不了解。为了阐明疟原虫子孢子免疫调节机制,本文分析了疟疾高发区自然感染疟原虫人群抗恶性疟原虫环子孢子(CS)蛋白的CD4~+T细胞免疫和体液免疫应答。