人巨细胞病毒活动性感染对绒毛细胞增殖活性的影响

人巨细胞病毒是引起胎儿宫内感染的最主要病原体 ,能导致死胎、畸形、胎儿生长受限 (ＦＧＲ)、智力发育落后等严重后果[1] 。我们曾研究发现孕早期人巨细胞病毒宫内感染可引起孕妇生殖内分泌激素的变化[2 ] 。由此推想 ,人巨细胞病毒感染也可能引起孕早期绒毛组织细胞某些功能的改变。增殖细胞核抗原 (ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅｃｅｌｌｎｕｃｌｅａｒａｎｔｉｇｅｎ ,ＰＣＮＡ)ｍＲＮＡ表达水平是细胞增殖状态的标志。本研究通过对孕早期绒毛组织中ＰＣＮＡｍＲＮＡ表达的定量分析 ,旨在探讨人巨细胞病毒活动性感染对绒毛组织细胞增殖活…     

一氧化氮与妊娠早期人巨细胞病毒宫内活动性感染的关系

目的　探讨一氧化氮与妊娠早期人巨细胞病毒 (HCMV)宫内活动性感染的关系。方法　选取既往有自然流产、死胎、胎儿畸形、胎儿生长受限等异常妊娠史并行人工流产术的早孕妇女 81例 ,应用逆转录 聚合酶链反应技术检测其胎盘绒毛组织HCMV mRNA的表达 ;酶联免疫吸附试验法测定其血清HCMV IgM ;原位杂交法检测其蜕膜巨噬细胞诱生型一氧化氮合酶 (iNOS) mRNA的表达并行定量分析。结果　 (1) 81例孕妇中有 6例胎盘绒毛组织HCMV mRNA阳性 ,14例血清HCMV IgM阳性 ,阳性率为 17 3 % (14/ 81)。依据HCMV mRNA与HCMV IgM检测结果 ,81例孕妇分为 3组 :Ⅰ组 :HCMV mRNA与HCMV IgM均阳性 5例 ,其宫内传播率为 3 5 7% (5 / 14) ;Ⅱ组 :HCMV mRNA阴性而HCMV IgM阳性 9例 ;Ⅲ组 :HCMV mRNA与HCMV IgM均阴性 66例。另有 1例HCMV IgM阴性者其胎盘绒毛组织HCMV mRNA阳性。 (2 )Ⅰ组患者蜕膜iNOS mRNA呈强表达 ,其吸光度值为 0 412±0 0 19,明显高于Ⅱ组的 0 172± 0 0 3 3与Ⅲ组的 0 167± 0 0 3 3 ,Ⅰ组与Ⅱ组及Ⅲ组比较 ,差异有显著性(P <0 0 5 ) ;Ⅱ组与Ⅲ组比较 ,差异无显著性 (P >0 0 5 )。 1例HCMV IgM阴性而胎盘绒毛组织HCMV mRNA阳性者 ,蜕膜iNOS mRNA也呈强表达 ,其吸光度值为 0 40 3。结论　一氧化氮可     

人巨细胞病毒宫内感染对胎婴儿生长发育的影响

探讨人巨细胞病毒宫内感染对胎儿生长发育的近期影响及其与智力发育落后等远期后遗症的关系。方法；采用ＥＬＩＳＡ法检测１４１９例孕妇血清，应用ＰＣＲ技术检测ＨＣＭＶ－ＩｇＭ阳性及部分阴性孕妇血，孕中期羊水和晚期脐血中ＨＣＭＶ，ＤＮＡ，依其结果分为Ａ组：孕妇血ＨＣＭＶ－ＩｇＭ，ＨＣＭＶ ＤＮＡ阳性及羊水和脐血ＨＣＭＶ ＤＮＡ阳性者，５３例；Ｂ组     

补肾益气方激活ERK通路影响人早孕细胞滋养细胞生长

目的:研究补肾益气方对人早孕细胞滋养细胞增殖和早期凋亡的影响及其可能的信号转导通路。方法:体外分离培养人早孕细胞滋养细胞,用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定细胞的增殖活力,流式细胞术增殖细胞核抗原(PCNA)表达检测细胞增殖、AnnexinⅤFITCPI双染色法检测细胞早期凋亡,Western blot法检测细胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)磷酸化。结果:与20%对照血清组比较,10%及20%补肾益气方含药血清作用48h,上调细胞滋养细胞增殖活力,促进PCNA表达、降低早期凋亡细胞百分率、诱导细胞ERK磷酸化,上述指标均呈量-效关系;ERK通路的特异性抑制剂U0126几乎完全抑制20%含药血清诱导的细胞ERK1/2活化,下调20%含药血清诱导的细胞增殖活力及PCNA蛋白表达、增加早期凋亡细胞百分率。结论:补肾益气方对人早孕细胞滋养细胞的生长具有促进作用,ERK1/2信号通路可能是补肾益气方促进细胞滋养细胞增殖、减少细胞凋亡的主要信号转导通路之一。     

人巨细胞病毒感染对早孕绒毛细胞Cyclins表达的影响及其机制的初步探讨

目的:探讨人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染孕妇后致宫内感染的机制。方法:检测15例血清HCMV IgM(+)早孕妇女绒毛中HCMVmRNA的表达;检测HCMVmRNA表达阳性的绒毛原位杂交蜕膜中诱生型一氧化氮合酶(induced ni-tric oxide sythnase,iNOS)mRNA的表达,用免疫组化技术检测细胞周期蛋白(Cyclins)D、E、B、A蛋白的表达,用生化方法测定绒毛组织中的超氧化物歧化酶(superoxide dis-mutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA);以同期血清HCMV IgM(-)、绒毛HCMVmRNA(-)的15例孕妇绒毛为对照组。结果:(1)15例血清HCMV IgM(+)孕妇中5例绒毛组织HCMVmRNA阳性,宫内传播率为33.33%;(2)5例HCMV-mRNA阳性绒毛Cy-clin D、Cyclin E表达发生率均较对照组高(80%vs 7.1%;80%vs 15.5%);而两组均无Cyclin A及Cyclin B表达;(3)HCMV-mRNA阳性蜕膜中iNOS-mRNA呈强表达,其吸光度为0.5021±0.0189显著高于对照组的0.1860±0.0119,差异有统计学意义(P<0.05);(4)HCMV mRNA阳性绒毛中SOD、MDA均高于对照组(178.35±13.25 vs 102.27±10.12;22.18±5.02 vs 10.15±4.56),(P均<0.05)。结论:孕早期绒毛活动性HCMV感染可导致Cyclin异常表达,NO、SOD、MDA对Cyclin的异常表达起了重要的作用。     

胰岛素相关微环境因子对子宫内膜癌细胞MAPK/ERK通路活化的时间和浓度效应研究

目的检测胰岛素样生长因子(IGF)及胰岛素(insulin)在子宫内膜癌Ishikawa及HEC-1-A细胞中激活MAPK/ERK通路的最佳时间和浓度。方法采用蛋白免疫印迹技术分别检测IGF-1、IGF-2及Insulin不同时间(浓度为10 nmol/L时,分别刺激5 min、10 min、20 min、30 min和60 min)和不同浓度(2 nmol/L、5 nmol/L、10 nmol/L、20 nmol/L和100 nmol/L)作用后,子宫内膜腺癌Ishikawa及HEC-1-A细胞中MAPK通路关键分子ERK1/2磷酸化水平的变化,以确定各因子的最佳刺激时间和最佳刺激浓度。结果①IGF-1、IGF-2及Insulin均能刺激Ishikawa及HEC-1-A细胞ERK通路的激活。②在Ishikawa细胞中,IGF-1浓度为2 nmol/L,刺激20 min时,ERK磷酸化水平最高;IGF-2浓度为10 nmol/L,刺激30 min时,ERK磷酸化水平最高;胰岛素浓度在10 nmol/L刺激5 min作用最强。③在HEC-1-A细胞中,IGF-1浓度为10 nmol/L,刺激10 min时,ERK磷酸化水平最高;IGF-2浓度为10 nmol/L,刺激30 min作用最强;胰岛素浓度在10 nmol/L,刺激10 min作用最强。结论 IGF-1、IGF-2及Insulin能够激活Ishikawa及HEC-1-A细胞的ERK通路,且各种微环境因子的作用均有时间和浓度依赖性。     

逆转录聚合酶链反应技术用于产前诊断人巨细胞病毒宫内活动性感染的临床价值

目的　探讨逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)技术用于产前诊断人巨细胞病毒 (HCMV)宫内活动性感染的临床价值。方法　应用酶联免疫吸附试验 (ELISA)、RT PCR及血浆套式聚合酶链反应 (N PCR)法 ,检测 2 0 9例孕妇外周血HCMVmRNA、HCMVIgM及HCMVDNA ,其中任意 2项阳性为HCMV活动性感染 (99例 ,观察组 )、任意 2项均阴性为非活动性感染 (110例 ,对照组 )。应用RT PCR和N PCR技术 ,检测两组孕妇从宫内采集的孕早期绒毛共 78例、孕中期脐血和羊水共 131例 ,并追踪胎儿生长发育及出生后情况。结果　 (1)观察组绒毛、脐血HCMV感染率分别为 5 3 3% (16 30 )、4 7 8% (33 6 9) ;对照组分别为 8 3% (4 4 8)、9 7% (6 6 2 ) ,两组比较 ,差异有极显著性 (P <0 0 0 1)。观察组绒毛、脐血HCMV活动性感染率分别为 30 0 % (9 30 )和 2 9 0 % (2 0 6 9) ;显著高于对照组的 4 2 %(2 4 8)和 4 8% (3 6 2 ) ,两组比较 ,差异有极显著性 (P <0 0 0 1)。 (2 )HCMVDNA阳性胎儿中 ,HCMVmRNA阳性胎儿的流 (早 )产率为 4 1 2 % (14 34) ,显著高于HCMVmRNA阴性胎儿的 8 0 % (2 2 5 )。HCMV活动性感染胎儿中 ,有 10例因胎儿生长发育异常而行终止妊娠术。结论　应用RT PCR技术产前诊断HCMV宫内活动性感染安全可靠 ,对于活动性感     

人巨细胞病毒先天性感染大鼠海马空间学习记忆功能受损

目的 探讨先天性感染人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)的子代大鼠空间学习记忆情况及其影响机制. 方法 40只12周龄无特定病原体级Sprague-Dawley大鼠按雌雄3∶1合笼.用随机数字表法将受精大鼠分为研究组和对照组,每组15只.研究组妊娠3d腹腔接种组织半数感染量为1×10-6的病毒悬液0.5 ml;对照组同时腹腔注射人胚肺成纤维细胞上清液0.5 ml.接种后l周检测2组孕鼠外周血HCMV特异性抗体IgM和IgG.于临产前,取研究组和对照组孕鼠各3只行剖宫产,用随机数字表法在2组剖宫产所获仔鼠中各取5只,取双侧海马组织进行病毒分离.仔鼠饲养至28日龄时,从各组随机选择6只进行神经行为学检测(包括Morris水迷宫学习后的定位航行试验和空间探索试验).取完成神经行为学检测的大鼠脑组织,HE染色切片,光镜下观察;取仔鼠海马组织块透射电镜下观察、摄片.Morris水迷宫空间学习记忆测试数据采用广义混合线性模型,并用Origin 8.0绘制结果图.采用秩和检验、独立样本t检验和x2检验进行统计学分析. 结果 (1)研究组15只雌鼠中,11只成功分娩;对照组15只均成功分娩.研究组母鼠的产仔量低于对照组[(5.5±2.4)只与(8.7±3.1)只,t=2.366,P=0.033),仔鼠生后1周内死亡率高于对照组[26.1％(18/69)与4.9％(6/122),x2=191.020,P=0.000].研究组7只次海马病毒分离阳性,对照组均为阴性.(2)研究组第1～4天逃避潜伏期均长于对照组,差异有统计学意义(广义混合线性模型检验,F=499.473,P=0.000).研究组第1～4天的总路程长于对照组(广义混合线性模型检验,F=440.167,P=0.000).空间探索能力方面,研究组穿越平台次数少于对照组[(4.2l±1.44)次与(7.50±1.72)次,t=7.182,P=0.003],目标象限游泳时间占总时间比例少于对照组[(26±4)％与(47±5)％,t=15.487,P=0.000].(3)光镜观察可见研究组大鼠脑组织存在不同程度皮层液化坏死,空泡变性较多,海马结构紊乱;电镜下可见研究组大鼠脑组织存在典型的陈旧性髓鞘损伤及崩解. 结论 HCMV先天性感染仔鼠出现较明显的空间学习记忆功能下降,其病理机制主要与皮层和海马结构损伤有关.     

三城市孕妇人巨细胞病毒感染及其母婴传播的流行病学调查

目的：分析武汉、上海及沈阳三城市孕妇人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）感染及其母婴垂直传播状况。探讨早期诊断胎儿ＨＣＭＶ宫内感染的方法。方法：应用酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）筛查５０１５例孕妇ＨＣＭＶ的特异性抗体（ＩｇＧ及ＩｇＭ），同时应用聚合酶链反应技术（ＰＣＲ）检测其中３０１例具有活动性ＨＣＭＶ感染者的胎儿附属物，新生儿血、尿及母乳的ＨＣＭＶＤＮＡ。结果：三城市孕妇ＨＣＭＶ感染率为８８．９３％；沈阳、上海分别为９６．７４％和９１．４２％，明显高于武汉（７９．５３％）；孕妇活动性感染率为５．４２％，武汉与沈阳分别为１１．２３％和１０．９８％，明显高于上海。有异常妊娠史孕妇的活动性感染率为１４．５９％；孕早期绒毛和孕中期羊水的ＨＣＭＶＤＮＡ阳性率分别为１６．００％和３５．３３％；羊水的ＨＣＭＶＤＮＡ阳性率与分娩期脐血、胎盘、新生儿血相比较，差异无显著性（Ｐ＞０．０５）。结论：我国城市孕妇ＨＣＭＶ感染有地区差异，三城市孕妇多数于孕前早已感染ＨＣＭＶ；孕妇于活动性感染时易传播胎儿，ＥＬＩＳＡ结合ＰＣＲ方法是当前诊断宫内ＨＣＭＶ感染的有效手段     

初次巨细胞病毒感染垂直传播对妊娠结局的影响

巨细胞病毒感染是世界上最常见的先天性感染,在新生儿中的发生率为0.2％～2.2％。10％产前感染的新生儿在出生时就有症状:20％死亡,幸存者中90％出现远期后遗症,因此产巨细胞感染的诊断和预防是围生期学的重要课题。为了解初次巨细胞病毒感染并存在垂直传播的母儿妊娠结局,选取1992～2000年50例确诊初次感染巨细胞病毒并存在垂直传     

The effect of maternal soluble FMS-like tyrosine kinase 1 during pregnancy on risk of preterm delivery

Objective: Soluble fms-like tyrosine kinase 1 (sFlt1) is an antiangiogenic protein that is associated with a number of disorders of placental angiogenesis. It has been hypothesized that disruption of placental angiogenesis may contribute to the pathophysiology of preterm delivery (PTD). However, the relationship of PTD risk to variation in sFlt1 levels is not well known. We investigate the relationship between longitudinal variation in maternal serum concentrations of sFlt1 and risk of PTD. Methods: Data were collected in a longitudinal cohort study involving 278 pregnant women. Maternal serum sFlt1 concentrations were measured at 6–10, 10–14, 16–20, 22–26, and 32–36 weeks gestation. Data analyses used longitudinal regression models using repeated measures that allow robust inferences from our modest sample size. The outcome was birth prior to 37 weeks gestation. Results: sFlt1 concentrations were higher in first trimester for preterm compared to term deliveries. This relationship reversed in second trimester because sFlt1 concentrations increased more rapidly across gestation for term deliveries. In Cox proportional hazards analyses, a 2?ng higher sFlt1 concentration across gestation was associated with a hazard ratio of 1.3 (95% CI: 1.1, 1.5) for PTD suggesting the importance of levels in early pregnancy. Conclusion: Elevated maternal serum sFlt1 concentration during pregnancy is associated with increased risk of PTD.     

Th1型/Th2型细胞因子对人孕早期蜕膜的免疫调节作用

目的 :研究Th1型 /Th2型细胞因子对人孕早期蜕膜细胞活性及TGFβ1和PRL分泌的影响。方法 :蜕膜细胞活性采用MTT法进行检测 ,蜕膜组织分泌TGFβ1和PRL的活性分别采用ELISA法和RIA进行分析测定。结果 :Th1型细胞因子IFNγ低浓度时 ( 1～ 10ng/ml)对蜕膜细胞活性及PRL分泌有促进作用 (P <0 .0 5 ) ,高浓度时 ( 10 0～ 10 0 0ng/ml)则有抑制作用 (P <0 .0 1) ;IFNγ在一定剂量范围内 ( 10～ 10 0 0ng/ml)还可抑制TGFβ1的分泌 (P <0 .0 1)。而Th2型细胞因子IL 4在一定浓度范围内 ( 1～ 10ng/ml)可明显促进蜕膜的分泌活性 (P <0 .0 1)。结论 :Th1型 /Th2型细胞因子可能是通过影响蜕膜细胞活性及TGFβ1和PRL分泌而在早期妊娠中起重要的免疫调节作用     

阻断丝裂原活化蛋白激酶信号通路对子宫内膜癌生长抑制作用的研究

目的:研究丝裂原活化蛋白激酶(MAPK/ERK)信号通路抑制剂(PD98059)对ER阳性表达的Ishikawa和ER低表达的HEC-1A人子宫内膜癌细胞系的裸鼠体内抗增殖作用,探讨阻断MAPK/ERK信号传导通路治疗子宫内膜癌的可行性。方法:体外培养人子宫内膜癌Ishikawa、HEC-1A细胞,将对数生长期的两种细胞分别接种于裸鼠背部皮下,建立子宫内膜癌裸鼠移植瘤模型。将两种细胞系成瘤阳性裸鼠随机分为对照组和实验组,每组6只,分别腹腔注射生理盐水和PD98059,每周2次,共3周,观察各组裸鼠移植瘤的生长情况,建立移植瘤生长曲线,计算抑瘤率。实验结束时取肿瘤组织切片HE染色,原位末端标记(TUNEL)法检测组织细胞的凋亡,Western blot检测各组织中ERK1/2的活化。结果:(1)PD98059能有效抑制人子宫内膜癌Ishikawa、HEC-1A细胞裸鼠皮下移植瘤的生长;(2)HE染色可见实验组瘤细胞核浆比相对较小,血管密度降低;TUNEL染色可见两种细胞移植瘤中实验组细胞凋亡率较对照组明显增加;(3)Western blot检测结果:PD98059能有效降低裸鼠移植瘤组织中p-ERK表达。结论:PD98059通过阻断MAPK/ERK信号传导通路增加Ishikawa和HEC-1A细胞裸鼠移植瘤组织中细胞凋亡,抑制肿瘤生长,抗肿瘤效果明显,可成为治疗子宫内膜癌的有效方法。     

妊娠期高血压疾病患者子宫蜕膜组织中Th1/Th2比率变化研究

目的研究妊娠期高血压疾病患者子宫蜕膜组织中Th1和Th2细胞比率变化,探讨其变化在发病中的作用。方法河北医科大学第二临床医学院于2004年2～9月采集12例正常妊娠孕妇,10例妊娠期高血压和25例子疒间前期患者子宫蜕膜组织,采用流式细胞技术分别检测Th1/Th2细胞比率。结果(1)子疒间前期组和妊娠期高血压组Th1/Th2细胞比率明显高于正常妊娠组(P<0.05)。(2)子疒间前期组Th1/Th2比率明显高于其他两组(P<0.01),妊娠期高血压组明显高于正常妊娠组(P<0.05)。在子疒间前期组,随病情的严重程度的增加,其比率变化呈加重趋势,但与孕周无明显关系。(3)子疒间前期患者Th1/Th2比率与平均动脉压、24h尿蛋白量呈正相关(P均<0.01)。结论Th1/Th2比率变化可能是妊娠期高血压疾病发病的重要原因。     

早期干预对宫内感染致脑损伤仔鼠神经干细胞增殖能力的影响

目的研究早期干预对宫内感染致脑损伤新生大鼠内源性神经干细胞原位增殖能力的影响。方法30只孕17d大鼠连续2d腹腔注射脂多糖(450μg/kg),设为脂多糖组,制备宫内感染脑损伤动物模型,生理盐水组6只注射等量生理盐水。将脂多糖组所产足月新生仔鼠用随机数字表法分为损伤组和训练组,生理盐水组所产仔鼠为对照组,每组各30只。对训练组进行早期干预至日龄28d,对照组、损伤组常规饲养;选取1,3,7,14,28d各组仔鼠用免疫组织化学方法动态检测海马齿状回颗粒层,BrdU阳性细胞的表达。结果(1)出生后1d对照组、训练组、损伤组新生大鼠海马齿状回颗粒层均存在BrdU,对照组显著高于训练组、损伤组(P0.01)。(2)对照组BrdU阳性细胞数3d开始增加,7d达到高峰,14d后下降,28d接近正常成年大鼠水平。(3)早期丰富环境刺激后,训练组大鼠海马齿状回颗粒层BrdU阳性细胞数在3d开始增加,14d达高峰,峰值显著高于对照组水平(P0.01),28d后下降,但仍高于对照组,BrdU阳性细胞数在时间上均呈一过性增高表达。结论宫内感染致大鼠脑损伤可导致内源性神经干细胞增殖能力降低,并较长时间内难以自然恢复;早期干预可激活脑损伤鼠内源性神经干细胞原位增殖能力,推迟高峰出现,延长作用"时间窗"。     

NCK1 promotes the angiogenesis of cervical squamous carcinoma via Rac1/PAK1/MMP2 signal pathway

Objective

The study was to explore the roles of Nck1 in the angiogenesis of cervical squamous cell carcinoma (CSCC).

干扰CLDN6基因表达通过调控MAPK/ERK信号通路对多囊卵巢综合征大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响

目的:探讨Claudin-6(CLDN6)在多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠中的表达及其对卵巢颗粒细胞(GC)增殖与凋亡的影响和可能作用机制.方法:SD雌性大鼠皮下注射脱氢表雄酮(DHEA)诱导建立PCOS模型,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和West-ern blot法检测卵巢组织中CLDN6表达.分离培养原...     

The protective effect of the ER22/23EK polymorphism against an excessive weight gain during pregnancy

It has been shown that women who gained an excessive weight during pregnancy had an increase in long-term BMI compared with those without an excessive weight gain. Several studies have demonstrated that some polymorphisms of the glucocorticoid receptor (GR) gene may influence body composition and metabolic parameters. In the present study, we wanted to explore whether any association could exist between the BclI, N363S and ER22/23EK polymorphisms of the GR gene and the weight gain during pregnancy. We found that the allelic frequencies of the BclI, N363S and ER22/23EK polymorphisms in 300 women with uncomplicated pregnancies were similar to those measured in healthy Hungarian population. None of the three polymorphisms associated with body weight or BMI at the 1st trimester of pregnancy or before delivery. However, a significantly lower weight gain (p = 0.044) and consequently lower increase of BMI during pregnancy (p = 0.044) was observed in heterozygous carriers of the ER22/23EK polymorphism. These results support a protective role of the ER22/23EK polymorphism against an excessive weight gain and excessive increase of BMI during uncomplicated pregnancy.