夏枯草提取物对肾草酸钙结石模型大鼠肾组织骨桥蛋白表达的影响

目的研究夏枯草50％甲醇提取物对大鼠肾组织骨桥蛋白（osteopontin，OPN）表达的影响。方法采用乙二醇和氯化铵诱导建立大鼠肾草酸钙结石模型，将24只Wistar大鼠随机分成3组：对照组（A）、结石组（B）、夏枯草组（C）。C组则通过灌胃方式予一定剂量的夏枯草50％甲醇提取物。饲养4周后，检测各组大鼠肾组织病理学改变和草酸钙结晶沉积情况。采用原位杂交RT—PCR观察各组大鼠肾组织中OPN mRNA表达，免疫组织化学和Westem blot检测各组大鼠肾组织OPN蛋白的表达水平。结果A组肾小管正常，B组肾小管腔可见大量成片草酸钙结晶存在，管腔明显扩张；C组肾小管腔可见少许散在草酸钙结晶存在，管腔轻度扩张。原位杂交显示A组大鼠肾组织中仅肾脏髓质小部分亨利氏袢中检测到OPN mRNA的表达，与此相反在B组和C组大鼠肾组织中则明显检测到OPN mRNA的表达，只是C组中OPN mRNA的表达强度相对弱于成石对照组。RT-PCR检测结果与原位杂交一致。免疫组化显示A组中仅能检测到OPN蛋白的微弱表达，B组大鼠肾组织中OPN表达则明显增强，C组大鼠肾组织中OPN表达强度低于B组。Western blotting检测显示A组轻度表达OPN，而B组则显著表达，C组表达强度低于B组。结论夏枯草50％甲醇提取物能有效抑制大鼠肾组织OPN的表达，减少肾组织草酸钙结晶的沉积，从而能有效抑制大鼠肾草酸钙结石的形成。     

IgA肾病骨桥蛋白、CD68的表达及其与肾间质损伤的关系

目的：探讨IgA肾病骨桥蛋白（Osteopontin,OPN）、CD68的表达及其与肾间质损伤的关系。方法：根据肾活检结果选取26例已经确诊的原发性IgA肾病的肾组织作为实验组。按Lee氏法将肾组织病理损害分为Ⅰ～Ⅴ级并将肾间质损伤分为0～3级。另取4例因肾外伤或肾肿瘤切除的患肾中的正常肾组织作为对照组。免疫组化法检测肾组织中OPN、CD68的表达,RT-PCR技术检测肾组织OPN mRNA的表达。结果：（1）IgA肾病中有高达86%的患者伴有不同程度肾间质损伤。实验组肾间质中CD68的表达较对照组显著增高,差异有统计学意义。（2）实验组OPN、OPN mRNA的表达均较正常组显著升高（P＜0.05）。OPN、OPN mRNA的表达与肾间质损伤程度无相关性。肾间质内CD68的表达与肾间质损害成正相关。OPN的表达与肾间质内CD68的表达呈正相关（rs=0.545,P=0.044）。结论：单核/巨噬细胞的浸润参与了IgA肾病肾间质的损伤。OPN与炎症有关,它通过介导单核巨噬细胞的浸润参与IgA肾病肾间质的损伤。     

FGF-2和osteopontin在非小细胞肺癌中的表达及其相关性

目的：探讨成纤维细胞生长因子-2(fibroblast growth factor-2,FGF-2)和骨桥蛋白(osteopontin,OPN)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中的表达及其相关性。方法：应用免疫组织化学SP法分析76例NSCLC组织及15例正常肺组织中FGF-2和OPN蛋白的表达水平。采用RT-PCR和Western印迹检测FGF-2对人肺腺癌细胞株A549中OPN mRNA及蛋白表达水平的影响。结果：NSCLC组织中FGF-2和OPN的阳性率分别为65.8%（50/76）和60.5%（46/76）,显著高于正常肺组织13.3%(2/15)和0(0/15)（P<0.01）,FGF-2和OPN的阳性表达与淋巴结转移、临床分期密切相关（均P<0.01）,与年龄、性别和病理分型无明显相关（均P>0.05）。两者表达在NSCLC中呈正相关（r=0.552,P<0.01）。FGF-2可以明显上调A549细胞中OPN mRNA和蛋白的表达（P<0.05）。结论：FGF-2和OPN的高表达与NSCLC的发生及侵袭转移有关,FGF-2的促癌机制可能部分通过上调OPN的表达。     

骨桥蛋白、环氧化酶-2在宫颈癌组织中的表达及其与化疗敏感性的相关性

目的观察骨桥蛋白（OPN）、环氧合酶-2（COX-2）在宫颈癌组织中的表达,并分析两者与化疗敏感性的相关性。方法157例行新辅助化疗（NACT）治疗宫颈癌病人,根据相关肿瘤疗效评价标准分为化疗敏感组（112例）和化疗不敏感组（45例）。采用RT-PCR、Western blotting法检测2组病人NACT治疗前后OPN、COX-2 mRNA和蛋白表达水平,分析治疗前宫颈癌组织OPN、COX-2 mRNA表达水平与血管形成指数（VI）、血流指数（FI）、血管血流指数（VFI）等超声相关参数的关系,采用logistic回归法对影响宫颈癌病人化疗敏感性的多因素进行分析。结果化疗不敏感组治疗前OPN、COX-2 mRNA和蛋白表达水平明显高于化疗敏感组（P < 0.01）,化疗不敏感组治疗后OPN、COX-2 mRNA和蛋白表达水平未出现明显改变（P>0.05）,而化疗敏感组治疗后OPN、COX-2 mRNA和蛋白表达水平明显降低（P < 0.01）;治疗前宫颈癌组织OPN、COX-2 mRNA表达水平与VI、FI均呈正相关性关系（P < 0.05）,而与VFI无明显相关性关系（P>0.05）;化疗前宫颈癌组织OPN、COX-2 mRNA表达水平及VI、FI为影响化疗敏感性的独立危险因素（P < 0.05）。结论宫颈癌组织中OPN、COX-2 mRNA和蛋白均呈高表达状态,且两者与化疗敏感性之间存在密切的联系。     

肾透明细胞癌组织Osteopontin表达及临床意义分析

目的：探讨骨桥蛋白（Osteopontin,OPN）在肾透明细胞癌（Clear Cell Renal Cell Carcinoma,CRCC）组织中的表达及临床意义.方法：SP免疫组织化学法检测OPN在90例CRCC组织及正常肾组织中的表达,分析其与CRCC临床特征的关系.结果：OPN在CRCC和正常肾组织中的表达率分别为81.1％（73/90）与4.3％（1/23）;OPN的表达与CRCC患者的性别、年龄、肿瘤大小及分化程度无明显关联（P＞0.05）,但与患者TNM分期、有无淋巴结转移及肿瘤包膜显著相关,差异具有统计学意义（P＜0.05）.结论：OPN在CRCC组织中呈高表达,可能参与了CRCC的发生及进展.     

骨桥蛋白在原发性干燥综合征患者唇腺中的表达

目的：研究骨桥蛋白（osteopontin,OPN）在原发性干燥综合征（primary Sjgren’s syndrome,pSS）患者唇腺组织中的表达情况。方法：收集24例pSS患者和14例对照者的唇腺标本,提取唇腺中总RNA,利用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）法扩增OPN、β-肌动蛋白（β-actin）的片段,计算OPN/β-actin光密度比值。采用免疫组织化学染色方法检测OPN蛋白在唇腺中的表达情况。结果：pSS组唇腺中OPN的mRNA转录及蛋白表达水平均高于对照组（P<0.05）。OPN表达水平与淋巴细胞灶性评分(lymphocyte foci-score, LFS)呈正相关,mRNA转录水平与LFS相关系数为0.407（Pearson相关系数）,P=0.049;蛋白表达程度与唇腺LFS相关系数为0.476（Spearman相关系数）,P=0.039。免疫组织化学染色显示,OPN蛋白主要分布在腺上皮细胞胞浆内,但在浸润的淋巴细胞胞浆中也有阳性表达。结论：pSS患者唇腺中OPN表达增加,可能是唇腺结构破坏的原因之一。     

基质金属蛋白酶-9在狼疮性肾炎肾组织中的表达及其意义

目的 研究基质金属蛋白酶-9（Matrix Metalloproteinase-9,MMP-9）在狼疮性肾炎（Lupus Nephritis,LN）肾组织中的表达,探讨与临床表现、肾脏病理之间的关系。方法 采用非生物素免疫组化二步法,对31例LN患者肾组织MMP-9的水平进行检测,并结合临床及肾脏病理进行统计学分析。结果LN组MMP-9表达水平较正常对照组显著增高（P〈0.01）,各型LN亚组MMP-9表达强度具有统计学意义（P〈0.05）。LN肾小球MMP-9水平与血清肌酐、24h尿蛋白定量、SLEDAI、RAI呈正相关（P〈0.05）。结论 LN肾组织MMP-9的表达与肾脏病理类型相关,LN肾小球MMP-9表达水平不仅可反映患者的肾功能状态,还可反映SLE的疾病活动程度及LN肾组织病理活动程度。     

尿RANTES与LN活动性、肾组织RANTES mRNA和NF-kB p65 mRNA表达的相关性

目的分析狼疮肾炎(LN)患者尿液中受激活调节正常T细胞表达和分泌的因子(RANTES)水平与LN病变组织RANTES mRNA、核转录因子(NF-kB)p65 mRNA表达与活动性的相关性。方法选择2012年11月至2016年6月深圳龙岗区人民医院肾内科经治的22例系统性红斑狼疮(SLE)患者作为LN组,根据LN活动指数(AI)分为高、低活动组,选取10例肾功能正常的志愿者作为对照组,均测定尿液RANTES水平及肾组织RANTES mRNA、NF-kB p65 mRNA表达,分析其与患者尿RANTES水平及肾炎活动性的相关性。结果 LN组尿RANTES浓度高于对照组(P0.05),高AI组尿RANTES水平、RANTES蛋白阳性细胞数、RANTES蛋白阳性小管数、RANTES mRNA相对表达量均高于低AI组(P0.05),其NF-kB阳性细胞数、NF-kB p65蛋白阳性小管数、NF-kB p65 mRNA相对表达量、肌酐、24 h尿蛋白均高于LN低AI组与对照组(P0.05);LN低AI组上述指标均高于对照组(P0.05);尿RANTES与LN患者AI、RANTES mRNA、NF-kB p65 mRNA明显相关,以RANTES mRNA相关度最高(P0.05)。结论尿RANTES与LN肾组织RANTES mRNA、NF-kB p65 mRNA呈正相关,可间接反映LN活动度。     

Fractalkine在狼疮性肾炎患者血液和肾组织中的表达及其意义

目的研究Fractalkine（FKN）在狼疮性肾炎（lupus nephritis, LN）患者血液和肾组织中的表达及其意义。方法选取48例
LN患者,根据病理分型分为轻型组22 例、重型组26 例,采用RT-PCR 检测患者血液中FKN mRNA的表达、酶联免疫吸附法
（ELISA）检测患者血液中FKN蛋白的表达,并与26例正常对照比较;同时通过免疫组织化学染色法测定LN患者肾组织FKN
的定位与表达情况。结果与正常对照组相比,LN中轻型组和重型组患者血液中FKN的mRNA和蛋白的表达均明显升高,且重
型组升高更为显著（P<0.01）,重型组FKN mRNA和蛋白的表达也明显高于轻型组。在LN患者肾组织中,FKN主要表达于肾
小球足细胞和肾小管上皮细胞的胞浆中,重型组肾小球FKN阳性细胞数较轻型组明显增多（P<0.01）,但皮质间质的FKN阳性
细胞数无差异（P>0.05）。结论FKN在LN患者血液和肾小球中的表达与LN的肾组织病理损伤表现的程度有关。
     

骨桥蛋白在结肠癌组织中的表达及血清水平检测

目的:探讨骨桥蛋白(OPN)在结肠癌中的标志性作用及与术后复发的关系。方法: 应用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测58例结肠癌患者（观察组）及22例结肠镜检查正常者（对照组）血清中OPN水平,采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）半定量法检测组织中OPN mRNA的表达,并观察术后1年复发病例(23例)和未复发病例（35例）结肠癌组织OPN mRNA表达及血清OPN水平。结果： 观察组血清中OPN水平及结肠癌组织OPN mRNA表达均高于对照组（P<0.01）。结肠癌术后1年内复发者血清OPN水平及OPN mRNA的表达明显高于未复发者（P<0.01）。 结论:OPN是一种肿瘤标志物,在结肠癌患者中有标志性作用。可被用于结肠癌的诊断和预后估计。     

脑胶质瘤中骨桥蛋白表达初步研究

目的研究胶质瘤中骨桥蛋白（OPN）mRNA表达及其临床意义。方法应用半定量RT—PCR法检测OPNmRNA在60例胶质瘤及相应正常脑组织中的表达及相对含量,分析其与胶质瘤临床病理特征和预后之间的关系。结果本组OPNmRNA的阳性表达率为73．3％（44／60）,正常脑组织OPNmRNA表达均为阴性,OPNmRNA的相对表达量与肿瘤临床病理分级有关;所有患者平均随访12个月,OPN表达阳性组44例中复发36例,表达阴性组16例中仅复发2例（P〈0．05）,此外表达阳性组中死亡23例,表达阴性组仅2例死亡（P〈0．05）。结论胶质瘤中骨桥蛋白mRNA表达明显增高,并与肿瘤临床病理分级密切相关,骨桥蛋白可作为一临床评价胶质瘤患者预后的良好指标。     

Elevated interleukin-13 in patients with active lupus nephritis

目的　探讨白细胞介素 13(IL 13)在活动性狼疮肾炎患者中的作用。方法　选择 10名健康人和 16名活动性狼疮肾炎患者。采用酶联免疫吸附法 (ELISA)测定IL 13血浆水平 ,反转录多聚酶链反应 (RT PCR)检测外周血单个核细胞IL 13基因表达水平。肾组织内IL 13基因表达采用原位杂交技术 (ISH)测定。结果　活动性狼疮肾炎患者IL 13血浆水平和外周血单个核细胞IL 13mRNA表达水平均较正常对照组增高 (P<0 0 0 1)。活动性狼疮肾炎患者肾组织内IL 13mRNA表达较正常对照组明显增高 (P <0 0 0 1)。直线相关分析结果表明 ,活动性狼疮肾小管间质区IL 13mRNA表达量与血肌酐浓度、肾小球活动指数和肾小管间质活动指数、血C3浓度相关 (P <0 0 5 )。结论　IL 13水平增高在活动性狼疮肾炎的分子发病机制中起一定的作用。     

活动性肾小球肾炎中过氧化脂质体增殖激活受体γ在肾脏的表达

目的 :研究过氧化脂质体增殖激活受体γ(PPAR γ)在人肾小球肾炎病变活动时肾组织中的表达变化。方法 :根据临床及肾活检病理诊断 ,选择炎症病变明显活动的病人 ,细胞性新月体肾小球肾炎 (RPGN) 17例、狼疮性肾炎 (Ⅳ型 ) (LN) 15例 ,并以炎症病变轻微的轻度系膜增生性IgA肾病 (IgAN) 7例和无炎症病变肾小球微小病变 (MCD) 10例为对照。分别收集各组病人临床资料 ,光镜下观察并计数肾脏病变活动指数 ;免疫组化和原位杂交方法观察肾组织PPAR γ蛋白和mRNA表达。结果 :LN和RPGN组病人临床上呈明显病变活动表现 ,肾脏病理活动指数显著高于IgAN和MCD组。肾组织PPAR γ免疫组化显示PPAR γ在MCD组未见表达 ;在IgAN组肾小球和肾小管少量表达 ;在病变活动的RPGN和LN组肾小球和肾小管表达显著上调。相关分析结果显示 ,在病变活动性指数与肾小球和肾小管PPAR γ染色阳性细胞数间呈显著相关性 (相关系数分别为 0 .4 78,P <0 .0 1;0 .5 13,P<0 .0 1)。原位杂交方法也进一步证实LN和RPGN组肾小管上皮细胞PPAR γmRNA表达较IgAN和MCD组显著上调。结论 :活动性肾小球肾炎病人的肾组织PPAR γ表达上调 ,这可能是肾组织对炎症应激反应的一种表现 ,并预示PPAR γ可能在肾小球炎症过程中发挥重要作用     

前列腺癌组织中骨桥蛋白及基质金属蛋白酶-2检测

目的:检测前列腺癌组织中骨桥蛋白(OPN)及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达。方法:对前列腺癌、良性前列腺增生与正常前列腺组织标本,应用半定量RT-PCR检测OPNmRNA的表达,应用免疫组织化学技术检测OPN和MMP-2蛋白的表达。结果:46例前列腺癌组织中OPNmRNA的表达阳性率为76.1%(35/46),OPN及MMP-2蛋白的表达阳性率分别为71.7%(33/46)和67.4%(31/46),两者表达呈正相关(P<0.01)。并且两者在前列腺癌不同分期和分级之间差异有统计学意义(P<0.05)。前列腺增生及正常前列腺组织中2者均未见阳性表达。结论:OPN阳性表达可能与肿瘤的浸润转移有关,OPN与MMP-2可能在前列腺癌的进展中起协同作用。     

NF-κB对尿白蛋白诱导肾小管上皮细胞骨桥蛋白转录的影响

目的研究NF-κB对尿白蛋白诱导肾小管上皮细胞骨桥蛋白转录的影响。方法去脂的小牛血清白蛋白(BSA)20mg/ml分别加入到体外培养的肾小管上皮细胞和加入NF-κB抑制剂(PDTC)共同培养半小时的肾小管上皮细胞内,EMSA、RT-PCR检测不同时限NF-κB活性、骨桥蛋白mRNA表达情况。结果去脂的小牛血清白蛋白可刺激肾小管上皮细胞内NF-κB活性增加,骨桥蛋白mRNA表达上调,而提前加入NF-κB抑制剂(PDTC)共同培养半小时的肾小管上皮细胞内NF-κB活性、骨桥蛋白mRNA表达明显下降。结论尿白蛋白诱导小管上皮细胞损伤的机制与诱导肾小管上皮细胞内NF-κB活性、骨桥蛋白mRNA增加有关,而且骨桥蛋白转录由NF-κB调控。     

狼疮性肾炎患者血清和肾内B淋巴细胞刺激因子及BR3的表达

目的 探讨B淋巴细胞刺激因子(BlyS)及其Blys受体3(BR3)在狼疮性肾炎(LN)中的作用.方法 ELISA法检测系统性红斑狼疮(SLE)患者及正常健康体检者血清BlyS、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-1(IL-1)的表达水平,免疫组化法检测肾活检确诊为LN的患者及正常对照者肾组织中BlyS及其BR3的...     

骨桥蛋白在原发性干燥综合征患者唇腺中的表达

目的:研究骨桥蛋白(osteopontin,OPN)在原发性干燥综合征(primary Sjgren’s syndrome,pSS)患者唇腺组织中的表达情况。方法:收集24例pSS患者和14例对照者的唇腺标本,提取唇腺中总RNA,利用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法扩增OPN、β-肌动蛋白(β-actin)的片段,计算OPN/β-actin光密度比值。采用免疫组织化学染色方法检测OPN蛋白在唇腺中的表达情况。结果:pSS组唇腺中OPN的mRNA转录及蛋白表达水平均高于对照组(P<0.05)。OPN表达水平与淋巴细胞灶性评分(lymphocyte foci-score,LFS)呈正相关,mRNA转录水平与LFS相关系数为0.407(Pearson相关系数),P=0.049;蛋白表达程度与唇腺LFS相关系数为0.476(Spearman相关系数),P=0.039。免疫组织化学染色显示,OPN蛋白主要分布在腺上皮细胞胞浆内,但在浸润的淋巴细胞胞浆中也有阳性表达。结论:pSS患者唇腺中OPN表达增加,可能是唇腺结构破坏的原因之一。     

白细胞介素15和骨桥蛋白在大鼠肾移植急性排斥反应早期的表达

目的 研究白细胞介素(IL)15、骨桥蛋白、穿孔素及颗粒酶B在大鼠肾脏移植急性排斥反应(AR)早期的表达变化.方法 以BN大鼠和LEW大鼠分别作为供受体,建立大鼠肾移植动物模型.环孢素A处理组(CsA组):(BN→LEW,术后注射环孢素A);IL-15阻断组:(BN→LEW,术后注射IL-15抗体);AR组:(BN→LEW,术后注射生理盐水);对照组:(LEW→LEW,术后注射生理盐水).对照组6只大鼠,其余组10只大鼠,于移植后1、3、5、7 d取外周血,逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)动态检测骨桥蛋白、IL-15、穿孔素及颗粒酶B mRNA的表达,并作移植肾病理分析.结果 AR组、CsA组及IL-15阻断组肾移植术后IL-15、骨桥蛋白mRNA表达逐渐上调,第5天均达到高峰;对照组均处于低水平.术后第5天,CsA组和IL-15阻断组IL-15 mRNA分别为9685±1440、4346±741均低于AR组(17 022±2153,P<0.01),IL-15阻断组明显低于CsA组(P<0.01);CsA组和IL-15阻断组骨桥蛋白mRNA分别为13 226±1565、19 112±2908均低于AR组(24 663±2449,P<0.01),IL-15阻断组明显高于CsA组(P<0.01).术后第5天IL-15阻断组和CsA组穿孔素和颗粒酶B mRNA表达明显低于AR组(P<0.01).移植肾病理组织检查显示,AR组呈现重度急性排斥反应,IL-15阻断组排斥反应征象轻微.结论 大鼠肾移植AR发生早期骨桥蛋白、IL-15、穿孔素和颗粒酶B mRNA在外周血中均高水平表达,通过阻断IL-15/IL-15受体途径可明显下调颗粒酶B和穿孔素mRNA的表达.     

骨桥蛋白及其mRNA在肺癌组织中的表达及临床意义

目的分析骨桥蛋白（OPN）在肺癌组织中的表达,探讨其在肺癌发生发展中的作用。方法采用免疫组织化学（SP）和原位杂交技术检测骨桥蛋白和骨桥蛋白mRNA在57例肺癌组织、30例肺部炎性假瘤和20例肺大疱组织（作为正常肺组织）中的表达。结果骨桥蛋白在肺癌组织、肺部炎性假瘤中的表达率分别为57．9％（33／57）和16．7％（5／30）（X^2=13．581,P=0.000）。骨桥蛋白mRNA在肺癌组织、肺部炎性假瘤中表达分别为71．9％（41／57）和30,0％（9／30）（X^2=14．138,P=0.000）。肺大疱组织中骨桥蛋白及骨桥蛋白mRNA的表达均为阴性。骨桥蛋白和骨桥蛋白mRNA在38例有淋巴结转移的肺癌组织中分别为71．1％（27／38）和86．8％（33／38）,在19例无淋巴结转移的肺癌组织中分别为31．6％（6／19）和42．1％（6／19）,两组比较差异有统计学意义（X^2=6．558,P=0．010及X^2=10．438,P=0．001）。骨桥蛋白和骨桥蛋白mRNA在10例小细胞肺癌组织中表达率分别为10％（1／10）和25％（4／10）,在47例非小细胞肺癌组织中表达率分别为68．1％（32／47）和78．72％（37／47）,两者比较差异有统计学意义（X^2=11．412,P=0．001及x。=6．124,P=0．013）。在肺癌组织中骨桥蛋白与骨桥蛋白mRNA的表达呈正相关（r=0．623,P=0．001）。57例肺癌患者术后随访24-40个月,中位随访28个月。骨桥蛋白及其骨桥蛋白mRNA均表达阳性组32例中8例复发,13例出现远处转移;均表达阴性组15例中仅复发1例（X^2=14．258,P=0．000）;骨桥蛋白和骨桥蛋白mRNA均表达阳性组中死亡12例,均表达阴性组无一例死亡（X^2=7．554,P=0．006）。结论骨桥蛋白及骨桥蛋白mRNA在肺癌组织中的表达增高,这与肿瘤转移及预后有关。     

miR-186靶向调控骨桥蛋白基因表达对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

目的:探讨miR-186对骨髓间充质干细胞(bMSCs)成骨向诱导分化过程中骨桥蛋白(OPN)基因的靶向作用及其对bMSCs成骨分化的影响.方法:分离培养bMSCs,应用骨形成蛋白2成骨向诱导分化并采用碱性磷酸酶染色和Von-kossa染色鉴定;运用生物信息学方法对miR-186和OPN基因的靶向配对关系进行预测,采用荧光素酶报告系统鉴定;脂质体2000转染miR-186模拟物以及干扰OPN基因的siRNA后,Real-time PCR检测miR-186和OPN mRNA的表达,Western blot检测OPN蛋白的表达.结果:光镜下可见bMSCs均匀分布,诱导分化后的细胞碱性磷酸酶染色呈蓝色.生物信息学软件TargetScan和miRanda显示miR-186和OPN基因二者靶向配对良好,荧光素酶报告系统进一步验证发现,miR-186能够抑制OPN mRNA表达.Real-time PCR和Western blot检测结果表明过表达miR-186能够降低OPN mRNA和蛋白的表达.结论:miR-186通过下调bMSCs成骨向诱导分化过程中OPN基因表达进而抑制bMSCs的成骨分化.