p16基因对脑胶质瘤细胞顺铂化疗敏感性的影响

目的探索ｐ１６基因在脑胶质瘤发生发展过程中的作用及其与脑胶质瘤细胞顺铂化疗敏感性的关系。方法采用脂质转染的方法．将外源野生型ｐ１６基因导入胶质瘤细胞株Ｕ２５１,观察ｐ１６基因长期稳定转染对胶质瘤细胞的作用,并筛选阳性克隆。同时以空载体质粒ＰＣＤＮＡ３为对照。免疫组化、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交检测ｐ１６基因表达,对转染后细胞生长情况、细胞周期及细胞对顺铂（ｃｉｓ－ｄｉａｍｍｉｎｅｄｉｃｈｌｏｒｏｐｌａｔｉｎｕｍ,ＣＤＤＰ）敏感性的变化进行分析。结果外源ｐ１６基因的高水平表达显著掏了胶质瘤Ｕ２５１细胞的生长,克隆形成率减少,克隆形成率减少,肿瘤细胞发生了Ｇ１期阻滞,同时,细胞对顺铂的敏感性降低,化疗药物诱导的凋亡细胞数减少。结论外源野生型ｐ１６基因可抑制胶质瘤细胞恶性增殖,同时降低Ｕ２５１细胞对顺铂的化疗敏感性。ｐ１６基因转染后对顺铂诱导凋亡作用的抑制可能是其主要机制。     

脑胶质瘤p16基因转染对细胞生长及放射敏感性的影响

探索ｐ１７基因在脑胶质瘤发生发展过程中的作用及ｐ１６基因与肿瘤细胞放射敏感性间的关系。方法将外源野生型ｐ１６基因导入胶质瘤细胞珠Ｕ２５１、Ｃ６，筛选阳性克 时以空载体质粒ｐＣＤＮＡ３为对照，免疫组化检测ｐ１６基因表达，用ＭＴＴ法测定细胞生长曲线及肿瘤杀伤率。结果转染Ｐ１６基因的Ｕ２５１、Ｃ６细胞有外源Ｐ２１６基因的整合及表达，克隆形成率减少，生长速度明显减慢，对辐射的敏感性增强。结论导入外源野生型     

转染白细胞介素18基因通过下调多药耐药基因表达增强顺铂对C6胶质瘤细胞毒作用

目的  探讨转染白细胞介素18（IL18）基因对大鼠C6胶质瘤细胞顺铂化疗敏感性的影响及可能的作用机制。方法  体外培养转染IL18基因的C6/IL18细胞株和未转染的C6细胞系，MTT法观察顺铂对两类肿瘤细胞的抑制率；流式细胞术检测顺铂作用后转染及未转染肿瘤细胞的凋亡率；反转录PCR及蛋白质印迹法（Western blot）检测转染细胞内多药耐药基因（Mdr1）和拓扑异构酶TopoⅡα的mRNA水平和蛋白质水平的表达变化。 结果  顺铂对转染IL18基因的胶质瘤细胞株的抑制率明显高于未转染细胞（P <0.05），半数抑制浓度分别为29.66μg/ml和55.49μg/ml；流式细胞术显示顺铂作用后的转染细胞凋亡增多（P <0.05）；反转录PCR及Western blot显示转染细胞的Mdr1基因表达显著下降，TopoⅡα基因表达无明显变化。结论  转染IL18基因能够下调多药耐药基因Mdr1的表达，增强顺铂对大鼠C6胶质瘤细胞的毒作用。

     

脑胶质细胞瘤体内侵袭性的实验研究

目的 探讨胶质瘤的体内侵袭和转移特性。方法 利用体外转染有绿色荧光蛋白（ＧＦＰ）基因的大鼠Ｃ６脑胶质瘤细胞移植模型,将携有增强型绿色荧光蛋白（ＥＧＦＰ）基因的pＥＧＦＰ－N３质粒体外转染Ｃ６细胞,筛选能稳定表达ＧＦＰ的瘤细胞克隆,并做流工细胞仪和电镜检测。将阳性转染和未转染瘤细胞以立体定向法植入ＳＤ大鼠脑实质仙,建立大鼠移植瘤模型。４周后处死大鼠并作脑连续石蜡切片,相邻切片分别行苏木素－伊红（ＨＥ）及免疫组织化学染色和荧光显微镜（激发光波长为４８８mm)检测。对移植瘤细胞行原代培养,以检测荧光基因在体内的保存情况。结果 阳性转染的Ｃ６瘤细胞的ＥＧＦＰ在大鼠脑内获得稳定表达,在荧光显微镜下较易于区分肿瘤与非肿瘤区,并能发现侵袭至远处的单个瘤细胞,其敏感性及特异性明显优于ＨＥ染色或免疫组化方法。结论 ＧＦＰ基因体外转染Ｃ6胶质瘤细胞并行大鼠脑内移植,是一种较好的研究脑胶质瘤侵袭性的体内实验模型。     

转FAS基因治疗膀胱癌的实验研究

目的 探讨Fas基因转染对膀胱癌细胞的作用。方法 应用脂质体介导的方法，将人Fas cDNA导入膀胱癌细胞EJ中，并利用Nordmm bolt、原位杂交、流式细胞术检测细胞的Fas mRNA和分子表达。以顺铂作用转染前后的EJ细胞，用流式细胞仪、DNA梯形带和MTT法分析顺铂对转染前后的EJ细胞抑制增殖和诱导凋亡的能力。结果 脂质体介导的Fas基因转染可明显增强膀胱癌细胞EJ的Fas表达，顺铂对转染后的EJ细胞抑制细胞增殖和诱导凋亡的能力明显增强。结论 Fas系统参与泌尿生殖系肿瘤的发生发展过程，Fas基因转染可显著上调膀胱癌细胞EJ的Fas表达。联合应用Fas基因转染和顺铂可获得协同的细胞毒作用，为进一步将Fas基因用于临床治疗膀胱癌提供了理论与实验基础。     

p16蛋白及c-erbB-2蛋白在脑胶质瘤中的表达及意义

目的 研究ｐ１６蛋白和ｃ－ｅｒＢ－２蛋白在脑胶质瘤发生、发展中的作用。方法 应用Ｓ－Ｐ免疫组化技术检测６０例脑胶质瘤中ｐ１６蛋白及ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白的表达,以１０例正常脑组织作对照。结果 ｐ１６蛋白在脑胶质瘤及正常脑组织中的阳性表达率为４３％和９０％（Ｐ〈０．０５）;ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白在脑胶质瘤及正常脑组织中的阳性表达率为４２％和０（Ｐ〈０．０５）。脑胶质瘤中ｐ１６蛋白缺失率在死亡组和生存组为７４％和３２％（Ｐ〈０．０５）;ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白过度表达率在死亡组和生存组为６８％和２７％（Ｐ〈０．０５）。结论 ｐ１６蛋白缺失和ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白过度表达与脑胶质瘤发生、发展有密切关系。检测ｐ１６蛋白和ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白在脑胶质瘤中的表达对脑胶质瘤预后的评估有积极意义。     

人卵巢癌顺铂耐药细胞株的建立及其耐药机制的研究

目的 通过建立人卵巢癌体外耐药模型，研究卵巢癌对顺铂的耐药机制。方法应用顺铂连续作用并逐步提高药量的递增压力选择法，从人卵巢腺癌细胞ＣＯＣ１中分离出对顺铂耐药的细胞亚株（ＣＯＣ１／ＤＤＰ），并比较耐药细胞和亲代细胞某些生物学特性差异。结果ＣＯＣ１／ＤＤＰ细胞对顺铂的耐药性是ＣＯＣ１的６．５倍，群体倍增时间较亲代细胞缩短了１２．９％。对卡铂和丝裂霉素Ｃ有不同程度的交叉耐药性，对阿霉素和５－氟尿嘧啶则保持敏感。并且耐药细胞内铂离子含量及ＤＮＡ链间交联指数均明显低于ＣＯＣ１细胞，但免疫细胞化学显示ＣＯＣ１及ＣＯＣ１／ＤＤＰ细胞内均无Ｐ糖蛋白表达。结论ＣＯＣ１／ＤＤＰ细胞对顺铂耐药的主要原因是细胞内药物浓度降低及ＤＮＡ链间交联形成减少，与Ｐ糖蛋白关系不大。     

细胞因子联合抗癌药抑制肺腺癌细胞的研究

目的 检测白细胞介素２（ＩＬ－２）、肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）与顺铂（ＤＤＰ）合用对肺腺癌Ａ５４９细胞株（Ａ５４９）和耐顺铂Ａ５４９细胞株（Ａ５４９／ＤＤＰ）的细胞毒性作用。方法 采用四氯唑蓝快速比色法（ＭＴＴ法）进行体外细胞毒性实验。结果ＩＬ－２与顺铂使用后顺铂对两株细胞的毒性作用无明显变化；ＴＮＦα与顺铂用后顺铂对两株细胞的毒性作用明显增强；ＩＬ－２、ＴＮＦα与顺铂三者合用后顺铂对两株细胞的毒     

热疗联合DDP诱导大肠癌细胞凋亡和bcl—2表达的实验 …

目的：研究热化疗诱导大肠癌（ＬｏＶｏ）细胞凋亡及其与ｂｃｌ－２基因表达的关系，探讨热化疗治疗大肠癌的机制。方法：应用热疗联合顺铂（ＤＤＰ）在不同药物浓度、时间和温度条件下诱导ＬｏＶｏ细胞凋亡，以流式细胞仪检测其凋亡率及ｂｃｌ－２基因的表达。结果：随着药物浓度的升高、作用时间的延长，细胞凋亡率增加；热疗联合ＤＤＰ所致凋亡率大于单纯化疗组和单纯热疗组之和；随着药物浓度的升高，ｂｃｌ－２的表达下凋；各处     

抑制USP22表达对胶质瘤细胞顺铂耐药的影响

目的 探讨泛素特异性肽酶22（ubiquitin specific peptidase 22,USP22）对胶质瘤细胞顺铂耐药的作用。 方法 采用顺铂剂量梯度爬升筛选方法诱导顺铂耐药胶质瘤细胞株U251/CP2,转染USP22小干扰RNA沉默胶质瘤顺铂耐药细胞株U251/CP2中USP22的表达,RT-PCR检测细胞USP22 mRNA的表达水平,流式细胞术检测转染USP22-shRNA对细胞凋亡的影响,CCK-8法检测细胞的活力及耐药指数,Western blotting检测USP22的蛋白水平。 结果 成功构建了顺铂耐药胶质瘤细胞株U251/CP2、USP22基因沉默细胞株U251-shUPS22和U251/CP2-shUSP22。抑制USP22的表达可以明显提高U251/CP2-shUSP22细胞的凋亡率（P < 0.05）,顺铂上调USP22蛋白在U251和U251/CP2细胞中的表达（P < 0.01）。U251-shUPS22、U251/CP2和U251/CP2-shUSP22各组细胞的顺铂半数抑制浓度分别为（0.56±0.07）μg/mL、（73.73±2.74）μg/mL和（51.25±1.09）μg/mL,与对照U251组（1.23±0.13）μg/mL比较差异均有统计学意义（P < 0.01）。 结论 抑制USP22表达可增强胶质瘤细胞对顺铂的敏感性,且可在一定程度上逆转耐药细胞株的顺铂耐药,提示USP22是胶质瘤顺铂耐药的潜在分子机制之一。