胶体金免疫斑点法检测人巨细胞病毒pp150抗体

目的：建立一种简便、快速的检测血清中人巨细胞病毒（HCMV）抗pp150抗体的胶体金免疫斑点法。方法：采用Frens法制备胶体金颗粒，标记葡萄球菌A蛋白（SPA），将本所利用基因工程技术生产的pp150抗原固定于0．45μm孔径的硝酸纤维素膜上，制成免疫斑点检测装置。血清中抗pp150 IgG与硝酸纤维素膜上的抗原结合，然后滴加胶体金标记的SPA，在膜上可形成肉眼可见的红色斑点。结果：胶体金免疫斑点法与ELISA试剂盒对比检测了200份临床确诊血清标本中抗pp150 IgG抗体，胶体金法的特异性和敏感性分别为92％和90％。结论：胶体金免疫斑点法检测血清中的抗pp150抗体特异性、灵敏度较高，简便快速，不需要昂贵的仪器。     

幽门螺杆菌IgG抗体免疫层析分型方法的建立

目的建立1种检测血清中抗幽门螺杆菌(Hp)抗体的胶体金免疫层析(GICA)方法。方法采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记SPA,将Hp重组抗原VacA、CagA和UreaA、UreaB抗原包被于硝酸纤维素膜NC上,制成免疫层析检测试纸条.血清中的抗Hp抗体与测试条上金标记物结合后沿着硝酸纤维素膜移动,与膜上的固相抗原结合形成肉眼可见的酒红色线条。结果用GICA与免疫印迹试剂盒对比检测了180份血清标本中抗Hp抗体,显示本方法检测敏感度、特异度分别为95.4%和96.3%,两法总符合率为96.1%。结论用这种免疫层析GICA分型方法检测血清中抗Hp抗体,灵敏度高、特异性强、简便快速,有着广泛临床应用前景。     

利用酵母重组SSB抗原建立快速斑点免疫金渗滤法检测抗SSB抗体

目的建立一种简便、快速、可靠的检测抗SSB抗体的方法。方法将毕赤酵母菌重组表达的SSB抗原包被于硝酸纤维素(NC)膜上,与待检血清中抗SSB抗体反应后,以胶体金标记的葡萄球菌蛋白A(Staphy lococus protein A,SPA)作为显示剂,与截留的抗SSB抗体结合,出现肉眼可见的红色斑点。结果本法的敏感性和特异性分别为100%和98.75%,与欧蒙斑点酶免疫法检测结果之间的符合率为99.01%。结论本法快速、简便、准确,具有很好的临床诊断应用前景。     

新型自身抗体联合检测斑点免疫金渗滤法的建立及应用评价

目的:建立一种简便快速的联合检测自身抗体的斑点免疫金渗滤法(DIGFA).方法:将多种人自身抗原SmD1、SSA、SSB、Jo-1,采用毕赤酵母重组表达后,纯化抗原点于硝酸纤维素膜上,用来检测血清中相应多种自身抗体,通过胶体金标记的金黄色葡萄球菌A蛋白直接显色,阳性者出现红色斑点.结果:DIGFA检测185份经欧蒙ENA酶斑点法检测为不同自身免疫痛患者血清和50份正常人血清,阳性符合率分别为抗SmD1 91.2%,抗SSA92.8%,抗SSB 96.9%,抗Jo-1 92.6%,阴性符合率为100%(50/50).与欧蒙ENA酶斑点法对比检测的总符合率为93.0%(172/185),差异无显著性(P>0.05).结论:DIGFA法简便、快速、准确,可用于临床自身免疫病的联合诊断.     

用快速斑点免疫金渗滤法检测抗SSA抗体

目的建立一种简便、快速、可靠的检测抗SSA抗体的方法。方法将重组的SSA抗原包被于硝酸纤维素(NC)膜上,以胶体金标记的葡萄球菌蛋白A(StaphylococusproteinA,SPA)作为显示剂,建立一种检测抗SSA抗体的快速斑点免疫金渗滤法(dotimmunogoldfiltrationassay,DIGFA)。结果本法对系统性红斑狼疮(SLE)阳性率为100%,对皮肌炎(DM)阳性率为100%,狼疮性肾炎(LN)阳性率为75%,本法与免疫印迹法(IBT)的符合率为94.1%。IBT法阴性的50例病人中,本法检出3例阳性病例(其ANA均为阳性);健康体检50例均为阴性。结论本法简便、快速、可靠,整个检测过程只需2min,不需其他特殊设备。     

斑点金免疫渗滤试验检测不育者血清抗精子抗体

目的研究一种快速鉴定抗精子抗体的新方法的临床意义。方法用化学试剂提纯精子抗原,将其结合于硝酸纤维素膜上;以胶体金颗粒结合的羊抗人lgG作为标记抗体,以斑点金免疫渗滤试验(Dot-immunogoldfiltrationassay,DIGFA)检测人血清抗精子抗体。结果抗原抗体通过渗滤在膜上进行反应,10min内即可用肉眼观察结果,在289例临床血清标本的检测中,阳性率为21%,与酶联免疫吸附试验(ELISA)的结果基本相符。结论斑点金免疫渗滤试验可快速测定抗精子抗体,具有推广使用的价值。     

新型猪囊尾蚴斑点免疫金渗滤法的建立及初步应用

摘　要　目的:建立一种简便快速的检测囊虫抗体的斑点免疫金渗滤法（DIGFA）。方法:将毕赤酵母重组表达的猪囊尾蚴抗原cC1点于硝酸纤维素膜(NC) 上,用来检测血清中囊虫抗体,通过胶体金标记的金黄色萄萄球菌A 蛋白(SPA) 直接显色,阳性者出现红色斑点,结果易于判断。结果:DIGFA检测40人份囊虫病人血清和40人份正常人血清，敏感性为95%（38/40），特异性为100%（40/40）。检测20份包虫病人血清，3例阳性，交叉反应率为15%（3/20）；检测20份肝吸虫病患者血清，20份肺吸虫病人血清，20份血吸虫病患者血清，均未出现交叉反应。与酶联免疫吸附试验对比检测的总符合率为95 %，无显著性差异（p﹥0.05）。结论:DIGFA简便、快速、准确，适于现场应用,可用于囊虫病的诊断及流行病学调查。     

免疫胶体金检测不孕症患者血清EMAb

目的建立快速测定抗子宫内膜抗体(EMAb)的新方法.方法采用经Sepharose4B免疫吸附柱亲和层析纯化的人子宫内膜抗原(EMAg),以胶体金颗粒结合的羊抗人IgG为标记抗体,根据免疫胶体金技术原理,建立斑点金免疫渗滤法(DIGFA)检测人血清EMAb.共检测500份不孕者血清并与酶联免疫吸附试验(ELISA)作对比研究.结果纯化的人子宫内膜抗原与患者血清中特异性EMAb通过渗滤在硝酸纤维素膜上反应,6 min内即可直接观察结果.在500份血清检测中,阳性率为41.2%,与ELISA的结果基本一致(X2=3.66,P＞0.05),符合率96.1%.特异性为95.4%,敏感性为96.3%.交叉试验与重复试验结果显示DIGFA具有较好的特异性及稳定性.结论 DIGFA可快速测定EMAb,具有推广使用的价值.     

斑点金免疫渗滤试验检测不育者血清抗精子抗体

目的：研究一种快速鉴定抗精子抗体的新方法的临床意义。方法：用化学试剂提纯精子抗原,将其结合于硝酸纤维素膜上;以胶体金颗粒结合的羊抗人lgG作为标记抗体,以斑点金免疫汉滤试验（Dot-immunogold filtration assay,DIGFA)检测人血清抗精子抗体。结果：抗原抗体通过渗滤在膜上进行反应,10min内即可用肉眼观察结果,在289例临床血清标本的检测中,阳性率为21％,与酶联免疫吸附试验（ELISA）的结果基本相符。结论：斑点金免疫渗滤试验可快速测定抗精子抗体,具有推广使用的价值。     

胶体金免疫层析法检测乙型肝炎病毒表面抗原

目的 建立一种简易快速，自测式胶体金免疫层析法（ＧＩＣＡ）用于检测血清中乙型肝炎病毒表面抗原（ＨＢｓＡｇ）。方法 采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒，标记乙型肝炎病毒表面抗体（抗ＨＢｓ）制成免疫层析检测试条，血清中ＨＢｓＡｇ与测试条件上金标记抗体结合后沿着硝酸纤维素膜移动，与膜上的固相抗体结合形成肉眼可见的红色线条。结果 ＧＩＣＡ试条只有ＨＢｓＡｇ有特异性反应，与乙型肝炎病毒核心抗原，ｅ抗原等无交     

金标记斑点免疫渗滤法检测尿中微量白蛋白

我们用常规细胞融合技术制备了抗人血清白蛋白 (ｈｕ ｍａｎｓｅｒｕｍａｌｂｕｍｉｎ ,ＨＳＡ)单克隆抗体 (ＭｃＡｂ) ,用胶体金标记抗ＨＳＡＭｃＡｂ ,用抗ＨＳＡ兔抗体点样的硝酸纤维素膜作固相 ,建立了一种快速检测尿中微量白蛋白的金标记斑点免疫渗滤法 (ｄｏｔｉｍｍｕｎ     

衣原体感染快速诊断试纸在冠心病危险因子研究中的应用

目的用衣原体免疫胶体金快速诊断试纸，检测冠心病患者血清中衣原体抗体IgG，从而研究衣原体感染与冠心病的关系。方法采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒，并标记金黄色葡萄球菌蛋白A；用衣原体可溶性蛋白多糖复合物抗原致敏硝酸纤维素膜；组装成免疫层析法诊断试纸，用于临床血清标本检测。结果用该试纸检测了临床上已确诊为冠心病患者的血清106份，其中包括不稳定性心绞痛(UA)47例、稳定型心绞痛(SA)19例、急性心肌梗塞(AMI)23例及心律失常伴心肌缺血(ATM)17例，同时设100份健康人血清作对照，用衣原体免疫兔血清作阳性对照，生理盐水作阴性对照。结论患者抗衣原体抗体阳性率为72．2％，对照血清为29％，阴、阳对照完全相符，从而得出，衣原体感染与冠心病的发病有关，同时也证明衣原体感染快速诊断试纸条具有较好的特异性和敏感性，并且简便快速，适合基层单位使用，便于推广和普及。     

胶体金免疫层析技术同步检测甲、戊型肝炎病毒IgM抗体的研究

目的 建立胶体金免疫层析(GICA)同步检测血清中的甲、戊型肝炎病毒的IgM抗体的方法。方法 采用胶体金标记鼠抗人IgM单克隆抗体，制成免疫层析测试条。血清中甲、戊型肝炎的特异性抗体与测试条上金标抗体结合后沿着硝酸纤维素膜移动与膜上固相包被的抗原(HAAg、HEAg)、抗体(羊抗鼠IgM)结合形成肉眼可见的红色线条。结果 自制的GICA试条与EIA对比检测血清标本188份，各单项指标IgM—抗HAV、IgM-抗HEV两法总符合率依次为97．9％、98．4％，检测灵敏度可达2ng／ml。结论 用于同步检测血清中的甲、戊型肝炎病毒特异性抗体的GICA试条的制备条件已基本建立；其检测结果特异性强、灵敏度高、操作方法简便快捷且无需特殊仪器设备。     

用快速斑点免疫金渗滤法检测抗双链DNA抗体

为了提供一种简便、快速、可靠的检测抗双链ＤＮＡ抗体的新方法，将生物素化的质粒ｄｓ－ＤＮＡ结合于包被了亲和素的硝酸纤维素膜上，以胶体金标记的葡萄球菌蛋白Ａ作为显示剂，建立了一种检测抗ｄｓ－ＤＮＡ抗体的快速斑点免疫金渗滤法。     

布鲁氏菌血清 IgM,IgG 抗体胶体金免疫层析检测方法的建立及初步临床应用

目的　应用胶体金免疫层析技术建立一种快速检测布鲁氏菌 IgM,IgG 抗体的方法,并进行初步的性能验证。方法　采用枸椽酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记纯化的抗重组布鲁氏菌抗原,将鼠抗人 IgG 抗体、鼠抗人 IgM 抗体和兔抗布鲁氏菌抗体喷在硝酸纤维素膜上作为检测线和质控线,对 pH 值和抗体浓度等条件优化;评估试剂盒灵敏度、特异度、交叉反应、准确度、精密度和干扰实验;用该方法对临床的 400 份血清进行检测,试管凝集试验验证其准确性。结果　该试纸条最佳胶体金标记的 pH 值为 7.5,标记重组抗原质量浓度为 30?g/ml。方法的灵敏度和稳定性较好且与其他病原菌无交叉反应。血清总胆红素、血脂和血红蛋白浓度的增高会使试纸条显色结果减弱。对400份临床样本进行检测,其结果与试管凝集试验的符合率为 93.75%。结论　该试验建立的布鲁氏菌 IgM/IgG 抗体的胶体金免疫层析检测方法具有较好的特异度和稳定性,整个检测过程可在 15min 内完成,能够快速检测样品血清,适用于现场快速检测。     

结核分支杆菌抗体金免疫测定法的建立及应用

为寻求快速、简便、敏感、特异的检测抗结核杆菌抗体的方法,用于结核病的诊断,以脂阿拉伯甘露糖为抗原,胶体金标记抗人IgG单抗为探针,建立快速检测TB抗体的金免疫测定法。用该法检测41份痰菌阳性血清和58份痰菌阴性的活动性TB病人血清,以及160份非结核人群的抗分支杆菌抗体,发现DIGFA的敏感性为85．9％,特异性为92．5％;DIGFA与ELISA比较,其符合率达98．1％。结果提示DIGFA检测抗分支杆菌抗体敏感性高,特异性强,在结核病诊断中具有一定的实用价值。     

梅毒螺旋体抗体快速检测试纸条的应用

梅毒螺旋体 (简称 TP)血清学检测方法可分为非特异性抗体和特异抗体检测两大类。非特异性抗体检测常用 TURST,该试验多用于筛查人体内的非特异性抗体 ,如抗心拟脂抗体 ,此方法的主要缺点是缺乏特异性 ,不能作为确诊梅毒感染的标准。特异性抗体检测如 TP血球凝集实验 (TPHA) ,可以作为梅毒的确诊实验 ,但是 ,该法需制备大量梅毒病原体 ,且价格昂贵 ,不利于大量样本的筛查。 TP快速检测试纸条是根据双抗原夹心免疫层析原理 ,在硝酸纤维素膜上包被 TP重组抗原 ,在玻璃纤维上吸附胶体金标记 TP重组抗原 ,样品中的 TP抗体首先与金标抗原…     

胶体金免疫层析法检测乙型肝炎病毒表面抗原

目的建立一种简易快速、自测式胶体金免疫层析法（ＧＩＣＡ）用于检测血清中乙型肝炎病毒表面抗原（ＨＢｓＡｇ）。方法采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒、标记乙型肝炎病毒表面抗体（抗ＨＢｓ），制成免疫层析检测试条。血清中ＨＢｓＡｇ与测试条上金标记抗体结合后沿着硝酸纤维素膜移动，与膜上的固相抗体结合形成肉眼可见的红色线条。结果ＧＩＣＡ试条只与ＨＢｓＡｇ有特异性反应，与乙型肝炎病毒核心抗原、ｅ抗原等无交叉反应。检测中国药品生物制品检定所ＨＢｓＡｇ标准品，灵敏度可达１ｎｇ／ｍｌ。用ＧＩＣＡ与酶免疫法比较检测了３９５份不同血清标本中ＨＢｓＡｇ，两法符合率为９９．０％。结论ＧＩＣＡ检测血清中的ＨＢｓＡｇ特异性强、灵敏度高、简便快速，无需特殊仪器设备，有广泛应用价值。     

胶体金免疫层析技术同步检测甲、戊型肝炎病毒IgG抗体的研究

[目的]探索并建立胶体金免疫层析(GICA)同步检测血清中的甲、戊型肝炎病毒的IgG抗体的方法。[方法]采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒，标记鼠抗人IgG单克隆抗体，制成免疫层析测试条。血清中甲、戊型肝炎的特异性IgG抗体与测试条上金标抗体结合后沿着硝酸纤维素膜移动与膜上固相包被的抗原(HAAg、HEAg)、抗体(羊抗鼠IgG)结合形成肉眼可见的红色线条。[结果]自制的GICA试条与EIA对比检测血清标本188份，各单项指标抗-HAV IgG、抗-HEV IgG两法总符合率分别为98．9％、98．9％，检测灵敏度可达1ng／ml。[结论]用于同步检测血清中的甲、戊型肝炎病毒特异性IgG抗体的GICA试条的制备条件已基本建立；其检测结果特异性强、灵敏度高、操作方法简便、快捷，无需特殊仪器设备，有广泛的应用价值。     

早期快速诊断肾综合征出血热胶体金试纸条的研制

目的 建立一种可早期、快速检测肾综合征出血热(HFRS)患者血清中抗汉坦病毒IgM抗体的胶体金试纸条方法.方法 用胶体金标记纯化的汉坦病毒重组核蛋白(rNP),将羊抗人μ链抗体固定于硝酸纤维素膜上作为检测区,以鼠抗汉坦病毒抗体作为质控区,组装成免疫层析试纸条检测HFRS确诊患者以及健康人血清,并与ELISA对照,评价其特异度和敏感度.结果 在试纸条加入待检血清后10～15 min内即可获得结果,经临床ELISA确诊的50份HFRS患者血清均呈阳性,健康人血清标本均为阴性.结论 该胶体金免疫层析快检纸条与ELISA法的检测结果具有很高符合率,可用于HFRS患者的早期诊断,该法操作简便、反应迅速、无需特殊仪器设备,适于在基层医疗单位推广使用.