小鼠食管肌层形成与分化

目的：研究α-SMA、α-SCA、结蛋白和MHC在小鼠食管肌层表达的时空特点及和食管肌层发育关系。方法：应用免疫组化PAP法和TINEL，凋亡染色法，对胎龄12d至生后5d小鼠食管连续切片进行染色。结果：α-SMA在胎龄12d开始表达。第14～15d，可见左侧第3、4、6弓动脉壁的α-SMA阳性细胞延伸至食管后壁。α-SCA和结蛋白较强表达见于第14～15d，食管下段和内肌层表达强度高于食管上段和外肌层，但16d后，外肌层显较强α-SCA和结蛋白表达。MHC表达开始于16d食管上段外肌层，18d扩展至甲状腺水平，外肌层和食管上段表达较内肌层和食管下段强。结论：α-SMA、α-SCA、结蛋白和MHC在食管肌层发育过程中有不同的时空表达模式。食管肌层的部分细胞可能和弓动脉壁的平滑肌细胞有同一来源。     

c-kit阳性细胞和胎儿食管平滑肌发育的关系

目的:探讨c-kit阳性细胞和α-平滑肌肌动蛋白阳性平滑肌细胞(α-SMA)在人胎儿食管中分布关系.方法:采用免疫荧光组织化学双重标记法对8例胎儿食管中c-kit阳性细胞和α-SMA阳性平滑肌细胞的分布进行观察.结果:c-kit阳性细胞在食管上段内肌层内侧有少量分布,肌间层和黏膜下层也可见零星分布,在食管中段外肌层开始有少量分布,内肌层数量中等,至食管下段内外肌层均有大量分布.α-SMA阳性平滑肌细胞在食管肌层由上至下逐渐增加,并由内肌层扩展到外肌层.在食管上端肌间层和黏膜下层可见少量c-kit和α-SMA共同表达.结论:c-kit阳性细胞可能是Cajal间质细胞,在胎儿食管的分布与平滑肌密切相关.食管内平滑肌细胞和Cajal间质细胞可能起源于同一种前体细胞.     

肌球蛋白重链Ⅱ和α-平滑肌肌动蛋白在成年犬咽-食管肌层的表达

目的:研究健康成年毕克犬咽和食管肌层肌球蛋白重链Ⅱ(MHC-Ⅱ)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达及其空间分布.方法:采用免疫组织化学SP法对6例健康成年毕克犬咽-食管肌层MHC-Ⅱ、α-SMA的表达进行观察.结果:MHC-Ⅱ在咽部和食管上端至近贲门部肌层均有表达;α-SMA在食管中段下份内肌层最内侧开始有少量表达,至近贲门部食管肌层其表达逐渐增强,由内肌层最内侧扩展至外肌层.结论:与人类不同,成年毕克犬咽和食管上端至近贲门部肌层均有MHC-Ⅱ表达,其表达强度由上而下呈渐进性减弱;成年毕克犬咽和食管肌层α-SMA主要表达在食管中段下份和食管下段,其表达强度自食管中段下份至近贲门部呈渐进性加强.     

胎儿咽-食管肌层α-平滑肌肌动蛋白,肌球蛋白重链Ⅱ、Ⅲ表达的三维分布

目的:探讨胎儿咽、食管肌层中α-平滑肌肌动蛋白(α-smouth muscle actin,α-SMA)、肌球蛋白重链Ⅱ(myosin heary chain-Ⅱ、MHC-Ⅱ)、MHC-Ⅰ表达及其空间分布。方法:采用免疫组织化学SABC法及蛋白印迹法对20例胎儿咽、食管的α-SMA、MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ表达进行观察。结果:MHC-Ⅱ和MHC-Ⅰ共定位食管上、中段肌层,并主要表达在外部纵行肌,由上至下逐渐减少,至食管下段消失。而α-SMA则在食管上端内层肌开始表达,呈环行排列,由上至下逐渐增加,并由内肌层扩展到外肌层。结论:α-SMA、MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ共存于胎儿食管上中段,骨骼肌和平滑肌的移行呈渐进性,无明确界线。     

小鼠胚胎气道平滑肌发育的形态学观察

目的 探讨肌特异性蛋白质在小鼠胚胎气道平滑肌的表达特点. 方法 用抗α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、抗α-横纹肌肌动蛋白(α-SCA)和抗结蛋白(Desmin)单克隆抗体,对胎龄10～18d小鼠胚胎连续石蜡切片进行免疫组织化学显色. 结果 胎龄11 ～12d,前肠分隔为腹侧的气管和背侧的食管.胎龄12d,气管起始段后壁出现α-SMA阳性细胞,提示气管平滑肌开始发育,随着向气管下段延伸,α-SMA阳性逐渐减弱,肺静脉周围仅见极少量散在的α-SMA和α-SCA阳性细胞.胎龄13d,气管平滑肌α-SMA表达增强,并开始表达较弱的α-SCA和Desmin.胎龄14d,互为镜像的“C”形α-SMA阳性平滑肌表达出现在左、右支气管壁,α-SCA和Desmin的表达强度弱于α-SMA,此时肺静脉壁呈α-SMA强阳性表达.胎龄15d,α-SMA阳性平滑肌出现在细支气管壁.胎龄17～18d,平滑肌发育已延伸至终末细支气管,并显α-SMA阳性表达,而α-SCA和Desmin表达强度开始减弱. 结论 气道平滑肌发育始于胎龄12d气管上段,逐渐向下段延伸,胎龄18d,延伸至终末细支气管;Desmin的表达标志着平滑肌细胞骨架结构形成和气道平滑肌逐渐发育成熟,有助于气道平滑肌缓慢收缩功能的完善;气道平滑肌的发育早于肺静脉管壁平滑肌.     

小鼠肾小体系膜细胞的发育

目的:探讨小鼠肾小体系膜细胞的来源及α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)与系膜细胞发生发育成熟的关系。方法:采用α-SMA免疫组织化学染色、透射电镜技术及体视学分析方法。结果:α- SMA在小鼠肾小体系膜细胞发育过程中早期阶段无表达,发育阶段表达阳性,成熟期表达消失。结论:系膜细胞可能来源于生后肾组织的间充质细胞,α-SMA的表达短暂与肾小体系膜细胞的发育成熟密切相关。     

α-SCA、α-SMA和结蛋白与小鼠胚胎心肌发育成熟的关系

目的观察α-横纹肌肌节肌动蛋白（α-SCA）、α-平滑肌肌动蛋白（ct-SMA）和中间丝结蛋白在小鼠心脏发育过程中的时空表达特征,以探讨这些蛋白质表达与胚胎及生后小鼠心脏成熟的关系。方法用抗α-SCA、抗α-SMA及抗结蛋白单克隆抗体对胚胎及生后小鼠心脏连续切片进行染色。结果胎龄9d,心室和流出道α-SCA、α-SMA表达较强,而结蛋白表达较弱。在心房α-SCA、α-SMA的表达限于背侧壁和腹侧壁,静脉窦仅见少许α-SCA弱阳性细胞。心房和静脉窦则无结蛋白表达。α-SCA、α-SMA和结蛋白的表达于胎龄12d达高峰。较高水平的α-SCA表达将持续到生后。心脏各部α-SMA和结蛋白表达于胎龄12d后逐渐下降,但在右心室表达持续时间较长。出生后,结蛋白表达主要集中于明带Z线和闰盘。结论α-SMA和结蛋白在小鼠胚胎心脏表达的时空差异性表明小鼠胚胎心脏不同部位发育成熟的时问有差异,右心室成熟较慢。α-SMA表达可能与早期胚胎心脏的缓慢蠕动收缩有关。肌节的发育成熟需要较高的结蛋白表达。     

转录因子GATA4与原始心管的形成和静脉端的发育

目的:探讨GATA4表达和原始心管形成及心静脉端发育的关系.方法:用抗转录因子GATA4、抗α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、抗α-横纹肌肌节肌动蛋白(α-SCA)、抗心肌肌球蛋白重链(MHC)抗体,对胎龄7.5～12d小鼠胚胎心连续切片进行免疫组织化学PAP法显色.结果:GATA4在7.5d小鼠胚胎生心板及原始心管呈较强表达,少数细胞显较弱MHC、α-SCA表达,α-SMA表达阴性.胎龄8.5d,第2生心区来源的胚胎心流出道和静脉端明显可辨,强α-SMA表达延伸至流出道、静脉端与心包腔脏壁中胚层的返折处,GATA4和MHC的表达主要集中在"S"型心的左、右心室,随发育逐渐向流出道和静脉端远侧延伸,但GATA4表达先于MHC和α-SCA.胎龄9.5d后,静脉窦的形态发生以及窦壁心肌化在并入右心房的过程中逐渐完成.第11天,近右心房的上主静脉壁间充质增生分化形成GATA4和α-SMA阳性的窦房结原基,第12天获得较强MHC表达.间充质细胞向心肌细胞的分化在右下主静脉壁也可见到.结论:GATA4是原始生心区心肌前体细胞向心肌细胞分化的较早的标志蛋白.α-SMA是第2生心区来源的心肌细胞早期分化的标志蛋白,它的表达可能不受GATA4调节.GATA4主要调节定向后心肌细胞的增生和分化以及心管静脉端的正确成襻.     

SD大鼠食管体部和食管胃连接部肌细胞的分布特点及其意义

目的:了解SD大鼠食管体部与食管胃连接部肌细胞的分布特点,并试图阐明食管胃连接部功能产生的机制.方法: 选取成年SD大鼠的食管体部及食管胃连接部标本切片,H-E染色和肌球蛋白重链Ⅱ(MHC-Ⅱ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫组织化学显色,观察肌细胞的种类及分布特点.结果: 食管胃连接部内层环形肌明显增厚,以前壁增厚最为显著;食管体部与食管胃连接部均表达MHC-Ⅱ细胞,食管胃连接部后壁环行肌内仅有少量α-SMA表达;贲门近胃底侧有一带状分布的MHC-Ⅱ阳性纵行肌细胞.结论: 胃和食管的肌层在食管胃连接部有一重叠区,食管下括约肌是构成食管胃连接部高压区的主要因素之一,其中增厚的前壁环行肌的作用可能更为重要.     

组织工程化组织收缩现象的研究进展

在组织工程的研究中发现，骨、软骨和肌腱等多种组织工程化组织在体外构建的过程中体积明显缩小，并证实其与α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)有关系。α-SMA基因的表达并非细胞“去分化”现象，可能与体外培养条件有关系，并影响细胞外基质的分泌。组织材料体积的缩小影响组织的构建与修复，因此通过调节α-SMA基因的表达，以及提高支架材料抵抗收缩的能力来控制组织材料收缩是非常必要的。     

α-平滑肌肌动蛋白在人胚心流出道早期发育中的表达

目的 探讨人胚早期心流出道心肌和流出道心内膜垫内α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达规律及其意义. 方法 32例C10～C16期[Carnegie分期法,受精后(22±1～37)d]人胚心连续切片,经抗α-SMA、抗α-横纹肌肌动蛋白(α-SCA)、抗肌球蛋白重链(MHC)抗体免疫组织化学染色,观察流出道重塑过程中α-SMA在心肌与心内膜垫内的表达规律. 结果 人胚发育C10～C15期,心包腔背侧脏壁上皮不断分化为心肌细胞添加至流出道远端,这些心肌细胞α-SMA的表达早于α-SCA和MHC.C16期,流出道嵴近心肌处出现α-SMA强阳性细胞,相邻的心肌细胞伸出突起与其相连.C12～C15期,α-SMA阳性细胞逐渐迁入流出道心内膜垫内,同时可见流出道内皮转为α-SMA阳性,向间充质细胞分化.不同来源的间充质细胞共同参与形成螺旋状流出道嵴. 结论 α-SMA可作为心肌细胞早期分化的标志;流出道嵴内α-SMA阳性细胞可能部分来自神经嵴,部分为正在向间充质细胞分化的内皮细胞.     

过表达THEM4抑制高糖诱导小鼠系膜细胞细胞外基质分泌

目的观察过表达硫酯酶超家族成员4(thioesterase superfamily member 4,THEM4)对高糖诱导的小鼠系膜细胞细胞外基质蛋白分泌的影响。方法体外培养小鼠系膜细胞,分别给予高糖(30 mmol/L)刺激0、6、12、24和48 h后收集细胞。提取RNA,RT-PCR技术检测THEM4 mRNA的表达;提取总蛋白,Western blot法检测THEM4、phospho-Akt(Ser 473)、TGF-β1、α-SMA的表达;ELISA法检测细胞上清液Ⅳ型胶原(collagenⅣ,ColⅣ)、纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)的分泌情况。为进一步检测过表达THEM4对高糖诱导的细胞外基质沉积的影响及可能机制,将常规培养的系膜细胞随机分为正常对照组(5.5mmol/L)、高糖组(30 mmol/L)、高糖+p Yr-ads-4-THEM4质粒转染组(高糖+THEM4组)、高糖+p Yr-adshuttle-4空质粒对照组(高糖+V组)。后3组经高糖刺激48 h后终止培养并进行上述检测。结果随着高糖刺激时间的延长,小鼠系膜细胞THEM4表达呈下降趋势,phospho-Akt(Ser 473)、TGF-β1、α-SMA的表达增强,伴随细胞外基质蛋白(包括ColⅣ、FN)的分泌增加;过表达THEM4能逆转高糖刺激所导致小鼠系膜细胞Akt蛋白的活化,下调α-SMA、TGF-β1的表达,抑制细胞外基质蛋白(包括ColⅣ、FN)的分泌。结论过表达THEM4能降低高糖诱导的小鼠系膜细胞细胞外基质蛋白的分泌,可能是通过抑制Akt蛋白的活化,下调α-SMA、TGF-β1表达而实现。     

小鼠胚胎心流出道心内膜垫的形成与融合

目的观察不同发育时期小鼠胚胎心流出道心内膜垫的发育过程。方法对胚龄9-12d小鼠胚胎心脏连续切片进行HE染色和免疫组化染色。结果胚龄10d,流出道远端心胶质内开始观察到间充质细胞。胚龄11d,两侧流出道心内膜垫形成,心内膜垫内部分间充质细胞染色呈α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)阳性。胚龄12d,两侧流出道心内膜垫内部分间充质细胞聚集形成致密漩涡状结构,随着心内膜垫融合,两侧漩涡状结构融合。结论小鼠胚胎流出道心内膜垫形成于胚胎发育第11天,第12天融合,间充质细胞参与心内膜垫融合。     

Notch1通过非经典的Notch信号通路调节胰腺星形细胞的活化

目的:探讨Notch1在胰腺星形细胞(pancreatic stellate cells,PSCs)活化中的作用。方法:利用免疫组织化学法与免疫荧光双标法检测Notch1在人胰腺导管腺癌(pancreatic ductal adenocarcinoma,PDAC)组织的表达情况;原代分离培养小鼠PSCs,利用油红O染色、Western blot及RT-qPCR法对其进行鉴定,并利用Western blot及RT-qPCR检测Notch1及其下游关键分子HES1的表达情况;转染Notch1小干扰RNA(Notch1 siRNA)至小鼠PSCs后,利用Western blot检测α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、纤连蛋白(fibronectin)、I型胶原(collagen typeⅠ,ColⅠ)、Notch1及HES1的表达情况;利用划痕实验与CCK-8实验检测Notch1 siRNA对小鼠PSCs迁移与细胞活力的影响。结果:免疫组化与免疫荧光双标染色结果显示,Notch1表达在α-SMA阳性的PDAC间质细胞中;成功培养了小鼠PSCs细胞,且活化的PSCs中α-SMA、fibronectin和ColⅠ的表达升高,Notch1与HES1的表达均高于未活化的PSCs(P<0.01);转染Notch1 siRNA至小鼠PSCs后,细胞中α-SMA和ColⅠ的表达显著降低,而fibronectin和HES1的表达无显著改变;敲减活化的PSCs中Notch1的表达后,细胞的活力及迁移能力显著降低。结论:Notch1参与调节PSCs的活化,抑制Notch1的表达可抑制活化PSCs标志物α-SMA和ColⅠ的表达,降低PSCs的活化程度、活力及迁移能力,并且Notch1调节PSCs的活化不依赖经典的Notch信号通路。     

小鼠胚胎心脏流出道嵴的发育

目的探讨小鼠胚胎心脏流出道嵴内α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)阳性细胞的来源及流出道嵴融合时间充质细胞超微结构的变化。方法用抗α-SMA、抗α-横纹肌肌动蛋白(α-SCA)单克隆抗体、PlexinA2探针,对胚龄10～14d小鼠胚胎心脏切片进行免疫组织化学和原位杂交染色;透射电镜观察胚龄12.5d时小鼠心流出道嵴的融合过程。结果胚龄10～11d,小鼠神经管及其周围、动脉囊和弓动脉壁可见PlexinA2阳性细胞,并沿动脉囊壁迁入流出道嵴内,部分细胞同时表达α-SMA。胚龄12d,PlexinA2阳性细胞分布在脊神经节、咽前间充质、主肺动脉隔以及主、肺动脉壁。主肺动脉隔显α-SMA强阳性,但动脉壁仅见少量α-SMA阳性细胞。胚龄12.5d,流出道嵴内致密间充质细胞团形成并开始融合,PlexinA2表达较弱,α-SMA表达呈强阳性。在流出道嵴融合开始后,嵴表面的内皮细胞带形成继而断裂消失,由含微丝少、排列稀疏的间充质细胞取代。两侧致密细胞团逐渐靠拢、融合。有的间充质细胞内含较多线粒体和微丝,细胞之间形成细胞连接点;有的间充质细胞含微丝少,细胞膜间断融合。结论流出道心内膜垫内α-SMA阳性间充质细胞来自神经嵴;内皮细胞-间充质细胞转化可能参与了流出道嵴融合;致密细胞团内间充质细胞富含微丝束和细胞连接点或发生细胞膜融合有助于流出道嵴的融合。     

α-SMA在口腔粘膜下纤维性变成纤维细胞中的表达

目的探讨肌成纤维细胞在口腔粘膜下纤维性变(OSF)发病机制中的作用.方法免疫组化法检测组织中和体外培养成纤维细胞中平滑肌肌动蛋白α (α-SMA)的表达;免疫组化法和RT-PCR法检测槟榔碱对OSF及正常成纤维细胞产生α-SMA和其mRNA表达情况.结果正常口腔粘膜组织中除血管壁外无阳性染色,而OSF组织中在粘膜下层有大量梭形细胞胞浆被染成棕黄色;体外培养的正常组织来源成纤维细胞中有很少量的α-SMA蛋白表达,OSF来源的成纤维细胞中早期有大多数细胞(85.80%±3.56%)表达α-SMA;槟榔碱干预成纤维细胞后不能增加平滑肌肌动蛋白α蛋白和mRNA的表达.结论肌成纤维细胞可能在OSF的发病机制中起重要作用,OSF组织中的肌成纤维细胞可能不是槟榔成分直接作用于成纤维细胞转化而来的.     

血清应答因子、平滑肌肌动蛋白在食管鳞癌中表达及意义

目的:探讨食管鳞癌组织中血清应答因子(SRF)、平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达及其与临床病理特征的关系.方法:采用免疫组织化学显色法检测73例食管鳞癌、30例手术切缘食管黏膜组织中SRF、α-SMA的表达.结果:食管鳞癌组织中SRF、α-SMA的表达高于正常食管黏膜,与肿瘤的分化程度、浸润程度、淋巴结转移相关.结论...     

不同基底静态加载方式对兔肌成纤维细胞(前体)表达α-SMA的影响

目的通过对不同分化阶段的兔肌成纤维细胞及前体施加不同的基底应变刺激,研究此过程中细胞表达α-SMA的时间剂量关系。方法选取异体蛋白植入法获得5 d和7 d的肌成纤维细胞(前体),培养于弹性膜上;利用基底静态拉伸对其分别施以应变从0%～3%和3%～6%的分段载荷及0%～6%的阶跃式载荷。结果 3 d阶段的肌成纤维细胞(前体)没有表达α-SMA;5～7 d阶段可以监测到α-SMA的表达;在10～15 d阶段则表达显著增强(P<0.01)。两种加载方式下,α-SMA的表达量均显著增加;分段加载作用下SMA的表达量更高。结论肌成纤维细胞(前体)α-SMA受基底静态拉伸后表达增加,且对不同的加载方式能做出不同的响应,提示在肌成纤维细胞的分化和愈伤反应过程中,力学因素扮演着十分重要的角色。     

THEM4/Akt在糖尿病小鼠肾脏细胞外基质沉积中的作用

目的探讨硫酯酶超家族成员4(thioesterase superfamily member 4,THEM4)/Akt在糖尿病小鼠肾脏中的表达以及与细胞外基质沉积的关系。方法采用链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)腹腔注射复制糖尿病小鼠模型,饲养8周后处死小鼠,应用Western blot、免疫组化及RT-PCR技术检测糖尿病小鼠肾脏中THEM4/Akt、phospho-Akt(Ser 473)、TGF-β1、α-SMA、ColⅢ、FN蛋白及THEM4 mRNA的表达。结果与对照组小鼠相比,糖尿病小鼠肾脏中THEM4蛋白低表达,相对于对照组下降了37.7%;同时伴随phospho-Akt(Ser 473)、TGF-β1、α-SMA、ColⅢ及FN蛋白表达升高,较对照组分别上调了3.66、1.29、2.33、1.99及2.82倍;糖尿病小鼠肾小管间质可见细胞外基质沉积。结论糖尿病小鼠肾小管间质细胞外基质沉积可能是由于THEM4的低表达进而激活Akt,上调TGF-β1和α-SMA蛋白的表达而实现的。     

miR-433在NIH-3T3细胞纤维化和矽尘诱导的小鼠肺纤维化中的作用

目的:本研究旨在探究微小RNA-433(miR-433)在纤维化中的作用及机制。方法:采用TargetScan预测miR-433的潜在靶基因。检测转化生长因子β1(TGF-β1)处理小鼠胚胎成纤维细胞(NIH-3T3细胞)24h后miR-433表达的变化。检测miR-433 mimic对TGF-β1处理的NIH-3T3细胞中p-SMAD2、纤维连接蛋白(FN)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和结缔组织生长因子(CTGF)表达水平的影响。采用CCK-8法和流式细胞术检测转染miR-433 mimic对TGF-β1诱导的NIH-3T3细胞生长和S期阻滞的影响。构建矽尘诱导的小鼠肺纤维化模型并使用agomiR-433进行干预,HE染色和Masson染色观察miR-433对小鼠肺纤维化的影响,采用免疫组化检测小鼠肺组织中α-SMA的表达。结果:miR-433能特异性结合SMAD2的3'-UTR,并抑制其蛋白和mRNA的表达。TGF-β1能下调NIH-3T3细胞中miR-433的表达水平,上调p-SMAD2蛋白的水平,同时也增强FN、α-SMA和CTGF蛋白和mRNA的表达,并增强细胞活力,诱导S期细胞数量增加;而miR-433 mimic能逆转TGF-β1对NIH-3T3细胞活力和S期阻滞的影响。在矽尘诱导的小鼠肺纤维化模型中,agomiR-433能抑制肺纤维化进程,减少小鼠肺组织中α-SMA的表达。结论:miR-433可能通过靶向调控SMAD2干预TGF-β1/SMAD2信号通路,从而参与调节纤维化的病理过程。