白藜三醇对缺氧状态下人脐静脉内皮细胞增殖及HIF—1α表达的影响

摘要：目的研究白藜三醇（resveratrol,Res）对缺氧状态下人脐静脉内皮细胞（humanumbilicalveinendothelialcell,HUVEC）增殖及低氧诱导因子（hypoxia-induciblefactor1,HIF-1μ）表达的影响。方法自藜三醇预孵育HUVEC2h后,采用氯化钴（CoCl2）化学方法制作缺氧模型,实验分为3组进行：正常组（NC）、缺氧组（HY）、药物组（0．1、1、5、10、50μmoL／LRes）。应用CCK-8法检测各组HUVEC增殖情况,免疫细胞化学法和Westernblot检测各组细胞内HIF-1α的表达。结果①缺氧组及药物组（0．1、1、5、10μmol/L）与正常组相比细胞增殖增加（P〈0．01）;1、5μmoL／L药物组与缺氧组比较细胞增殖增加（P〈0．01）,5μm0L／L药物组与其他各浓度组比较细胞增殖增加（P〈0．01）。②正常组HUVEC胞质内HIF-1α 仅微量表达;缺氧组胞质内HIF-1α阳性表达,较正常组增多,显色呈黄褐色;药物组（5μmol／L）胞质内HIF-1α强阳性表达,显色呈深黄褐色。③缺氧组与正常组相比HIF-1α 蛋白表达增加（P〈0．05）,药物组（1、5μmol／L）与正常组相比HIF-1α蛋白表达增加（P〈0．01）;1μmol／L药物组与缺氧组相比HIF-1α蛋白表达增加（P〈0．05）,5μmol／L药物组明显增加（P〈0．01）。结论白藜三醇可能通过促进HIF-1α 的表达而促进血管内皮细胞增殖,从而对新生血管的形成起到一定促进作用。     

LY294002对人乳腺癌细胞株MCF-7／ADR的耐药逆转作用

目的探讨P13K／Akt信号转导通路特异性阻滞剂LY294002在体外对人乳腺癌细胞株MCF-7／ADR的耐药逆转作用。方法乳腺癌细胞MCF-7和MCF-7／ADR各自分为未加LY294002的对照组及加入不同浓度的LY294002组,MTF法观察各组药物的细胞毒作用。选用流式细胞术（FCM）检查细胞凋亡率、细胞分布周期的变化。结果①LY294002在浓度10umol／L以下时对两种细胞基本无毒性,为安全有效的逆转剂量。②阿霉素对MCF-7和耐药细胞MCF-7／ADR的半数抑制浓度（IC50）分别为（0．14±0．02）μmol／L和（15．74±0．08）μmol／L,耐药倍数为112倍。③LY294002能够增强阿霉素对MCF-7／ADM的细胞毒作用,LY294002浓度0．1、2．5、5．0、10μmol／L分别作用于MCF-7／ADM细胞48h后,耐药细胞株的IC50分别降至（13．53±0．10）μmol／L、（10．24±0．08）μmol／L、（5．53±0．16）μmol／L、（2．29±0．12）μmol／L,差异有统计学意义（P〈0．01）。④LY294002可显著增加MCF-7／ADR细胞凋亡率（P〈0．01）。细胞周期分布显示,加用LY294002对各个细胞周期影响不明显。结论LY294002能够增加MCF-7和MCF-7／ADR的化疗敏感性,部分逆转耐药细胞MCF-7／ADR的多药耐药性。     

PI3K特异性抑制剂对人大肠癌细胞HCT-8生长的影响

目的：研究PI3K特异性抑制剂LY294002对人大肠癌细胞系HCT-8生长的影响。方法：将对数生长期的HCT-8细胞分组培养,对照组加入不含LY294002的培养液,实验1～4组加入LY294002,其终浓度分别为5、10、20和40μmol/L,培养24、48、72、96h后,MTT法测定细胞增殖抑制率。取传代培养并贴壁的HCT-8细胞分组培养,对照组常规培养,实验组培养液中加终浓度为10μmol/L的LY294002,培养24、48和72h后流式细胞仪检测细胞周期。取对数生长期的HCT-8细胞,对照组常规培养,实验组培养液中加终浓度为10μmol/L的LY294002,培养24h,培养前后,免疫细胞化学SP法检测P-Akt和NF-κB。结果：与对照组比较,随着LY294002剂量、作用时间的增加,对HCT-8细胞增殖抑制率增大（P〈0.01）。10μmol/L的LY294002作用于HCT-8细胞,随着作用时间的延长,G0/G1期细胞逐渐增加,S和G2/M期细胞逐渐减少（P〈0.05）。对照组培养前后HCT-8细胞P-Akt和NF-κB蛋白表达无明显变化,10μmol/L的LY294002作用后HCT-8细胞P-Akt和NF-κB蛋白表达降低（P〈0.01）。结论：LY294002可能通过抑制P-Akt的表达,从而抑制人大肠癌HCT-8细胞的生长。     

PI3K／AKT信号通路在三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-468中的作用及三氧化二砷对其的干预作用

目的：探讨三氧化二砷通过磷脂酰肌醇‐3‐激酶（PI3K）／蛋白激酶B（AKT）信号通路对三阴性乳腺癌细胞MDA‐MB‐468凋亡的影响。方法实验分为空白对照组,三氧化二砷组（2、4、8μmol／L ）,LY294002组（25μmol／L ）,三氧化二砷（4μmol／L）联合LY294002（25μmol／L）组（联合组）;MTT法检测各组细胞活力;流式细胞术检测各组细胞周期;Western blot分析各组PI3K／AKT通路的激活状况及其下游靶分子细胞周期蛋白 A1（Cyclin A1）,Cyclin D1,Bax ,Bcl‐2的表达。结果2、4、8μmol／L三氧化二砷,LY294002都可显著抑制细胞活力（P＜0．05）,并且在48 h抑制程度最高;与对照组比较,4μmol／L三氧化二砷及LY294002都可使细胞周期阻滞在G1期（P＜0．05）,并降低AKT磷酸化水平（P＜0．05）,进而下调Cyclin A1,Cyclin D1, Bcl‐2的表达（P＜0．05）,上调Bax的表达（P＜0．05）;三氧化二砷联合LY294002处理MDA‐MB‐468细胞较药物单独作用效果增强（P＜0．05）。结论三氧化二砷及LY294002可通过阻断PI3K／AKT信号通路来诱导三阴性乳腺癌细胞MDA‐MB‐468凋亡,二者具有协同作用。     

磷脂酰肌醇3(PI3K)激酶信号途径对血小板源生长因子促肝星状细胞增殖与Ⅰ型胶原表达的影响

目的 观察磷脂酰肌醇3激酶特异性抑制剂（LY294002），对血小板源生长因子（PDGF-BB）促大鼠肝星状细胞（HSC）增殖与Ⅰ型胶原表达的影响，并探讨其作用机制。方法用不同浓度的PDGF-BB和LY294002对大鼠肝星状细胞株（HSC-T6）进行处理，MTT法检测细胞的增殖，逆转录聚合酶链反应方法（RT-PCR）检测HSC-T6内Ⅰ型胶原mRNA的表达。结果PDGF-BB在浓度1～10ng／ml时呈剂量依赖性地促进HSC细胞增殖（P〈0．05），当浓度大于10ng／ml时处理组间无显著差异（P〉0．05），其促增殖作用达到饱和。5μmol／L、10μmol／L、25μmol／L的LY294002均能显著且剂量依赖性地抑制PDGF-BB刺激的HSC-T6增殖（P〈0．001）。PDGF-BB能促进HSCI型胶原mRNA表达，24h、48h时相对于对照组的表达量为112．2％。182．5％。LY294002能显著抑制PDGF-BB促Ⅰ型胶原表达，24h、48h时相对表达量为76．4％，52．6％。结论磷脂酰肌醇3激酶信号途径是调节血小板源生长因子促肝星状细胞增殖与分泌胶原的重要通道，抑制该通路可以抑制肝星状细胞增殖和胶原表达，具有抗肝纤维化的作用，对防治肝纤维化有一定的意义。     

替拉扎明联合磷脂酰肌醇-3激酶抑制剂对人卵巢癌细胞的抑制作用

目的研究替拉扎明（TPZ）联合磷脂酰肌醇-3激酶抑制剂（LY294002）对人卵巢癌细胞株的体外抑制作用。方法乏氧及空气条件下,TPZ单用及联合LY294002在不同药物浓度下分别作用于人卵巢癌细胞株H08910PM和OVCAR-3,用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法评价其抑癌效果。结果在乏氧及空气条件下单独使用TPZ对H08910PM的IC50分别为40．6μmol／L和53．0μmol／L,对OVCAR-3的IC50分别为65．9μmol／L和97．4μmol／L;乏氧及空气条件下TPZ联用LY294002,对H08910PM的IC50分别为22．7μmol／L和31．5μmol／L,对OVCAR-3的IC50分别为49.1μmol／L和51．0μmol／L。结论TPZ对人卵巢癌细胞株有抑制作用,抑癌效果在乏氧条件下高于空气条件（P〈0．01）;LY294002对TPZ有协同作用,与TPZ单独用药相比,二者联用显著降低了TPZ对癌细胞的IC50（P〈0．01）。     

LY294002抑制PI3K/Akt信号通路对人胃癌SGC-7901细胞的影响

目的探讨低氧环境下PI3K抑制剂2-（4-吗啉基）-8-苯基-4氢-1-苯并吡喃-4-酮（LY294002）对人胃癌SGC-7901细胞中磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）／丝氨酸苏氨酸激酶（Akt）信号通路、细胞生长、细胞凋亡及低氧诱导因子-1α（HIF-1α）mRNA表达的影响。方法应用LY294002作用于低氧环境中的人胃癌SGC-7901细胞（低氧＋LY294002组）,采用CCK-8试剂盒检测SGC-7901细胞生长;流式细胞仪检测细胞凋亡百分比;Western blotting检测P13K和p-Akt蛋白表达;RT—PCR检测HIF-1α mRNA表达。以低氧环境中未加LY294002的细胞作为对照（低氧组）。结果LY294002能抑制低氧环境中SGC-7901细胞增殖,抑制效果在药物作用后第2～6天时最为明显（P〈0．05）,低氧＋LY294002组中细胞凋亡百分比明显高于低氧组（P〈0．01）。LY294002能明显抑制PI3K、p-Akt蛋白以及HIF-1α mRNA的表达,与低氧组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论LY294002能抑制低氧环境中人胃癌SGC-7901细胞生长,促进细胞凋亡,抑制PI3K／Akt信号通路及其下游HIF-1α mRNA的表达。     

黄芪甲苷对高胰岛素诱导人肾小球系膜细胞损伤的保护作用及机制研究

目的：研究黄芪甲苷（As-IV）对高胰岛素诱导人肾小球系膜细胞（HMCs）损伤的保护作用及其机制。方法以HMCs 为研究对象，用 MTT 法检测不同浓度胰岛素作用不同时间后对 HMCs 增殖的影响，筛选胰岛素的量效与时效关系；实验设正常组、高胰岛素（64 nmol／L）组、二碘苯（DPI 10μmol／L）组、抗氧化剂 Tempol（100μmol／L）组、PI3K／Akt 信号通路抑制剂 LY294002（10μmol／L）组与黄芪甲苷（As-Ⅳ25、50、100μmol／L）组。培养48 h 后，MTT 法检测 HMCs 的细胞增殖状况，DCFH-DA 法测定细胞内活性氧（ROS）含量， Western blot 法检测 NADPH 氧化酶4（NOX4）、磷酸化蛋白激酶 B（p-PKB）（又称 p-Akt）、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）蛋白表达的变化。结果随着浓度增加与作用时间延长，胰岛素对 HMCs 增殖有促进作用且有量效与时效关系；与高胰岛素组比较，DPI 组、Tempol 组、LY294002组与 As-IV 25、50、100μmol／L 组均能有效抑制高胰岛素诱导的细胞增殖，减少细胞内 ROS 含量，降低 NOX4、p-Akt、p-mTOR 蛋白的高表达（P ＜0．05，P ＜0．01）。结论胰岛素呈时间和浓度依赖性促 HMCs 细胞增殖；As-IV 对高胰岛素诱导的 HMCs 有保护作用，其作用机制可能与抑制 HMCs 的过度增殖，减少细胞内 ROS 生成，降低 NOX4、p-Akt、p-mTOR蛋白高表达有关。     

基于 PI3K／A kt信号转导通路探讨电针足三里、曲池对脑缺血再灌注大鼠神经细胞凋亡的影响

目的：观察电针干预对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用,应用磷脂酰肌醇‐3激酶／丝氨酸‐苏氨酸蛋白激酶（PI3K／Akt）信号转导通路抑制剂LY294002,深入探讨电针的神经保护作用与 PI3K／Akt信号转导通路的关系。方法本研究采用Zealonga线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）缺血再灌注模型。将60只SD大鼠随机分为5组：假手术（SC）组、模型（IC）组、电针（EA）组、电针＋溶剂（DMSO）组,电针＋抑制剂（LY294002）组,每组各12只。术后24 h开始电针治疗30 min ,1次／天,治疗3 d。采用Zealonga 5分评价方法观察神经功能缺损恢复程度;氯化三苯四唑（TTC）法脑组织染色计算脑梗死体积;TUNEL法观察皮质区缺血周围神经细胞凋亡的情况;应用Western blot检测脑组织中PI3K、Akt、p‐Akt、bad、p‐bad蛋白表达水平。结果神经功能评分、TTC染色显示EA组与DMSO组的神经功能恢复及脑缺血改善明显优于IC组和LY294002组（P＜0．05）;EA组与DMSO组凋亡阳性细胞数少于IC组和LY294002组,差异有统计学意义（P＜0．01）;与 IC组及 LY294002组比较,EA组与DMSO组提高了PI3K、p‐Akt及p‐bad的蛋白表达（P＜0．05）。结论 PI3K／Akt信号转导通路参与了电针足三里穴、曲池穴对脑缺血再灌注损伤的神经保护作用。     

果糖二磷酸钠对新生大鼠缺氧缺血心肌损伤的作用

目的：观察果糖二磷酸钠（FDP）对新生大鼠心肌缺氧缺血（HI）损伤的作用及其机制。方法：40只新生大鼠随机分为4组（每组10只）：假手术组、HI组、FDP组和预使用FDP组,采用冠状动脉结扎和置缺氧箱的方法,制备大鼠在体心肌缺血缺氧损伤模型。分别测定血清氧化亚氮（NO）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）和乳酸脱氢酶（LDH）水平,观察光镜及透射电镜下心肌结构病理变化。结果：HI组血清LDH（7789．36U／L）、MDA（4．30μmol／L）水平明显高于假手术组（3608．47U／L,1．76μmol／L）（P〈0．01）,NO（23．24μmol／L）、SOD（115．49U／mL）低于假手术组（56．88μmol／L,239．52U／mL）（P〈0．01）;FDP组和预使用FDP组血清LDH（4237．58U／L和3600．82U／L）、MDA（2．76μmol／L和1．99μmol／L）明显低于HI组（P〈0．01）,NO（44．16μmol／L和52．15μmol／L）、SOD（203．24U／mL和237．86U／mL）高于HI组（P〈0．01）。光镜及透射电镜下观察HI组心肌结构破坏,心肌细胞呈灶状或片状坏死;线粒体损伤,核皱缩,核染色质边集。FDP组和预使用FDP组心肌细胞排列较有序,胞核线粒体稍肿胀。结论：果糖二磷酸钠可使氧自由基产生减少,增加NO含量,增强SOD活性,修复心肌缺氧缺血损伤。     

胰高血糖素样肽-1对高糖诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响及相关机制

目的：探讨胰高血糖素样肽-1（glucagon—like peptide-1,GLP—1）对高糖诱导人脐静脉内皮细胞huma numbilica lvein endothelial cells,HUVECs）凋亡的影响及相关机制。方法：HUVECs加入不同处理因素后分组,分别培养48h后,MTT检测细胞活力;流式细胞仪检测细胞早期凋亡率;Westernl印迹测定细胞P-Akt,p-eNOS水平;NO试剂盒检测NO浓度。结果：高糖（33mmol／L）培养48h后HUVECs细胞活力下降p〈0．05）,细胞凋亡率增加（p〈0．01）,细胞p-Akt,p-eNOS,NO水平均下降（P〈0．05）;高糖条件下加人GLP．1（3nmol／L）培养48h,与高糖组相比较,HUVECs细胞活力增加（P〈0．01）,细胞凋亡率减少（p〈O．05）,细胞p-Akt,p-eNOS,NO水平均增／JH（V〈0．05）;P13K抑制剂wortmannine（100nmol／L）可以阻断GLP-1的抗凋亡作用及其对P—Akt蛋白、p-eNOS蛋白及NO水平的影响;eNOS抑制剂L—NAME（100umol／L）仅能阻断GLP-1的抗凋亡作用及对NO水平的影响,不影响p-Akt蛋白的表达。结论：GLP．1可改善高糖诱导的HUVECs凋亡,该抗凋亡作用可能与P13K／Akt／eNOS通路的上调相关。     

中药脑心通对血管内皮细胞的保护作用

目的：研究脑心通对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）损伤血管内皮的保护作用及其分子机制.方法：在建立人脐静脉内皮细胞（HUVEC）ox-LDL（50mg/L）损伤模型的基础上,以阿托伐他汀（1μmol/L）作为阳性对照,并给予0.2,0.4,0.6,0.8g/kg不同剂量脑心通含药血清预先干预.采用硝酸还原酶法、放免法、分光光度计比色法、流式细胞技术等检测HUVECNO,ET-1,LDH释放量,细胞内Caspase-3活性和早期凋亡率.结果：HUVEC损伤后,ox-LDL组（4.74±1.61）μmol/L与对照组（9.96±1.57）μmol/L相比较,NO的合成显著减少,而ET-1释放明显增加[（44.72±2.01）ng/Lvs（21.42±2.84）ng/L,P〈0.01].与ox-LDL组（4.74±1.61）μmol/L相比较,ox-LDL＋脑心通0.2,0.4,0.6,0.8g/kg组[（8.33±1.78）,（11.35±2.14）,（14.80±2.40）,（17.82±2.02）μmol/L,P〈0.05）]呈剂量依赖性,并可促进NO合成,但对ET-1释放无明显影响.而ox-LDL＋阿托伐他汀组不仅可以促进NO合成,且能抑制ET-1释放（P〈0.01）;ox-LDL可显著提高HUVEC的Caspase-3酶活性,促进LDH释放（P〈0.05）,与ox-LDL组比较,ox-LDL＋脑心通组对此呈剂量依赖性抑制作用[（193.00±16.81）μmol/Lvs（168.00±11.51）,（135.00±11.18）,（117.00±10.37）,（99.00±9.62）μmol/L,P〈0.05],[（470.28±23.34）μmol/Lvs412.14±25.67）,（311.37±28.34）,（294.57±20.22）,（276.49±25.32）μmol/L,P〈0.05],但阿托伐他汀对LDH释放无明显影响.脑心通、阿托伐他汀均能明显抑制ox-LDL诱导的内皮细胞凋亡（P〈0.01）.结论：中药脑心通可促进内皮细胞NO释放,减轻内皮细胞的损伤与凋亡,是其保护血管内皮的可能机制.     

白藜三醇抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖的作用机制

目的 探讨植物雌激素白藜三醇（RV）对大鼠血管平滑肌细胞增殖的调控及可能机制.方法 用植块贴壁法体外培养大鼠血管平滑肌细胞,使用Western blotting检测各组雌激素受体α（ERα）、雌激素受体β（ERβ）、P38、P-P38、C-myc蛋白的表达水平.实验分为6组（每组n=6）：正常对照组（NC组）,含10% 胎牛血清（FBS）的DMEM; RV干预组（RV组）,50 μmol/L RV干预24 h; 血管紧张素Ⅱ组（AngⅡ组）,1 μmol/L AngⅡ干预12 h;RV＋ AngⅡ组,1 μmol/L AngⅡ干预12 h,然后加入50 μmol/L RV干预24 h;RV＋ICI182780组,1 μmol/L ICI182780干预2 h,然后加入50 μmol/L RV干预24 h;RV＋ICI182780＋AngⅡ组,1 μmol/L ICI182780干预2 h,然后加入1 μmol/L AngⅡ干预12 h,最后加入50 μmol/L RV干预24 h.结果 各组P38蛋白表达差异无统计学意义（P＞0.05）;ERα、ERβ蛋白的表达：RV组ERα、ERβ蛋白的表达水平较正常对照组增高（P＜0.01）,而RV＋ICI182780组与RV组比较表达降低（P＜0.01）;C-myc蛋白的表达：RV组与NC组比较表达降低（P＜0.01）,AngⅡ组与NC组比较表达增高（P＜0.01）,AngⅡ组与RV组比较表达增高（P＜0.01）,RV＋AngⅡ组与RV组比较表达增高（P＜0.01）,RV＋ICI182780＋AngⅡ组与RV＋AngⅡ组比较表达降低（P＜0.05）;P-P38蛋白的表达：RV组与NC组比较表达降低（P＜0.01）,AngⅡ组与NC组比较表达增高（P＜0.01）,AngⅡ组与RV组比较表达增高（P＜0.01）,RV＋AngⅡ组与RV组比较表达增高（P＜0.01）,RV＋ICI182780＋AngⅡ组与RV＋AngⅡ组比较表达降低（P＜0.01）.结论 白藜三醇可以抑制C-myc的表达,抑制P38的磷酸化,此作用可被ICI182780阻断,说明白藜三醇可能是通过ER进而抑制C-myc的表达和P38的磷酸化发挥抗平滑肌细胞增殖的作用.     

尼克酰胺抑制PKC-βⅡ活性改善高糖导致的心肌微血管内皮细胞血管形成障碍

目的探讨尼克酰胺对高糖导致的微血管生成障碍的影响及可能机制。方法将原代心肌微血管内皮细胞分为正常糖组（NG,5.6 mmol/L）、高糖组（HG,33.3 mmol/L）、高糖＋尼克酰胺组（HG＋N,33.3 mmol/L＋20 mmol）和高糖＋蛋白激酶C-βⅡ（PKC-βⅡ）抑制剂LY333531组（HG＋LY,33.3 mmol/L＋20 nmol）,培养24 h后分别观察细胞的管腔形成、迁移及增殖情况。Western blotting检测不同组细胞PKC-βⅡ、Akt和内皮型一氧化氮合酶（eNOS）的表达情况。结果与NG组相比,HG组细胞的管腔形成、迁移和增殖能力明显降低（P〈0.05）;而HG＋N组和HG＋LY组细胞的管腔形成、迁移和增殖能力得到明显改善。Western blotting结果显示：与NG组相比,HG组PKC-βⅡ磷酸化程度上调,且伴随Aktser473及eNOSser1117表达水平的降低（P〈0.05）。尼克酰胺不仅抑制了高糖导致的PKC-βⅡ磷酸化程度上调,并且恢复Akt、eNOS磷酸化至NG组水平（P〈0.05）。结论高糖导致了PKC-βⅡ的激活,进而抑制Akt/eNOS通路的活性,从而阻碍了微血管细胞的血管形成。尼克酰胺抑制了高糖条件下PKC-βⅡ的磷酸化,上调Akt/eNOS通路活性,从而改善微血管形成障碍。     

Ghrelin对血管紧张素Ⅱ诱导的脐静脉内皮细胞氧化应激和内皮功能损伤的影响（英文）

目的：探讨促生长激素释放肽（ghrelin）对血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ,AngⅡ）诱导的离体培养的脐静脉内皮细胞（human umbilicus vein endothelial cell-12,HUVEC-12）损伤的保护作用。方法：（1）在培养的人脐静脉内皮细胞中加入10-9～10-6mol/L AngⅡ共培养24h,或用10-9～10-6mol/Lghrelin预处理2h后与10-6mol/L AngⅡ共培养24h。用MTT法测量内皮细胞活力和用AnnexinV-FITC凋亡试剂盒在流式细胞仪下测量内皮细胞凋亡率。（2）HUVEC用10-9,10-8,10-7,10-6mol/L AngⅡ分别培养3,6,12或24h,10-9,10-8,10-7或10-6mol/L ghrelin预处理2h后与10-6mol/L AngⅡ共培养24h。生长激素促分泌剂受体1a（growth hormone secretagogue receptor1a,GHSR1a）受体阻断剂[D-Lys3]GHRP-6加入10-6mol/L ghrelin预处理2h后与10-6mol/L AngⅡ共培养24h组,DCF荧光探针法测细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）。（3）HUVEC分别与10-9,10-8,10-7或10-6mol/L AngⅡ和ghrelin共培养24h,与10-6mol/L AngⅡ孵育3,6,12或24h,或10-9,10-8,10-7或10-6mol/L ghrelin预处理30min,1h或2h后与10-6mol/LAngⅡ培养24h,加入丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶信号通路（mitogen-activated protein kinase/extracullar signal regulated kinase1/2,MAPK/ERK1/2）信号通路抑制剂PD98058、磷脂酰肌醇3-激酶/丝-苏氨酸激酶（phosphoinositide-3-kinase/serine threonine kinase,PI3K/Akt）阻断剂wortmannin和[D-Lys3]GHRP-6共培养24h,与用AngⅡ和ghrelin孵育的HUVEC比较上清液中NO产量,HUVEC用ghrelin,PD98059,wortmannin,[D-Lys3]GHRP-6预处理2h后与10-6mol/L AngⅡ共培养24h,或用ghrelin加上PD98059,wortmannin及[D-Lys3]GHRP-6预处理2h后与10-6mol/L AngⅡ共培养24h。内皮细胞上清中的一氧化氮（nitric oxide,NO）用Griess法测量。（4）HUVEC用空白对照或AngⅡ在有或没有用ghrelin或ghrelin和wortmannin一起预处理的情况下孵育,用免疫印迹法（Western blot）测量内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase,eNOS）的蛋白表达及丝苏氨酸激酶（serine threonine kinase,Akt）磷酸化蛋白表达。结果：AngⅡ引起内皮细胞损伤,增加HUVEC细胞凋亡率,减少培养的HUVEC细胞上清中NO含量,而ghrelin保护HUVEC免受AngⅡ损伤;Ghrelin减少与AngⅡ共同孵育的HUVEC ROS的产生。这种作用被[D-Lys3]GHRP-6消除。PD98059能阻止AngⅡ导致的HUVEC分泌NO减少,Wortmannin和[D-Lys3]GHRP-6消除Ghrelin保护HUVEC释放NO的作用;AngⅡ减少eNOS的表达,但ghrelin能增加eNOS表达,Wortmannin消除Ghrelin的这种作用;Ghrelin能刺激p-Akt的表达并在10～20min达到高峰。结论：Ghrelin在AngⅡ导致的HUVEC损伤中起保护作用,其机制与通过GHSR1a受体减少氧化应激、增加eNOS蛋白表达和激活PI3K/Akt信号通路有关。     

氧化苦参碱对脂多糖诱导的RAW264.7细胞一氧化氮及其诱导型合酶表达的影响

目的：观察氧化苦参碱（OMT））对脂多糖（LPS）诱导的RAW 264.7细胞一氧化氮（NO）释放量及诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达的影响。方法：采用LPS诱导RAW 264.7细胞建立细胞炎症反应模型。实验分组：空白对照组、LPS组（1μg/mL）、OMT组（100μmol/L）、LPS＋OMT小剂量组（20μmol/L）、LPS＋OMT中剂量组（50μmol/L）、LPS＋OMT大剂量组（100μmol/L）。采用Griess试剂法测定细胞培养液中NO释放量。采用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）方法测定RAW 264.7细胞iNOS mRNA的表达。结果：OMT显著减少LPS诱导的RAW 264.7细胞NO的释放（P〈0.05,P〈0.01）;同时减少LPS诱导的RAW 264.7细胞iNOS mRNA的表达（P〈0.05,P〈0.01）。结论：OMT可能通过抑制LPS诱导的巨噬细胞iNOS mRNA表达,减少NO的释放量而发挥抗炎作用。     

广枣总黄酮对体外培养大鼠心脏成纤维细胞周期影响

目的：研究广枣总黄酮（totalflavonesoffructuschorspondiatis,TFFC）对血管紧张素Ⅱ（angiontensin,AngII）诱导大鼠心脏成纤维细胞（cardiacfibroblasts,CFs）细胞周期的影响,并进一步探讨其与一氧化氮（nitricoxide,NO）-一氧化氮合酶（nitricoxidesynthase,NOS）系统的关系.方法：建立新生大鼠心脏成纤维细胞系：采用流式细胞仪（flowcytometry,FCM）分析技术检测细胞周期;采用化学比色法测定CFs培养上清乳酸脱氢酶（1actatedehydrogenase,LDH）水平;采用硝酸还原酶法测细胞培养液中NO水平;化学比色法测细胞上清液中NOS水平。结果：25、50、100mg／L的TFFC作用72h后,CFs的G0／G1期细胞百分率较AnglI组显著增高（P〈0．01,P〈0．05）,S期细胞百分率,G2／M期细胞百分率和增殖指数（proliferationindex,PI）则显著低于对照组（P〈0．01,P〈0．05）,且随着作用浓度的增加,TFFC对细胞周期的影响逐渐增强。100mg／L的TFFC干预72h后,CFs培养上清NO浓度为（23．23±0．70）μmol／L,与AngII组（20．20±0．83）μmol／L相比,差异非常显著（P〈0．01）;培养上清NOS活性为（20．43±0．53）U／L,和AngⅡ组（20．90±0．85）U／L相比,亦有非常显著性差异（P〈0．01）oNO浓度和NOS活性呈显著正相关（r=0．964,P〈0．01）o结论：TFFC能够抑制AngⅡ诱导大鼠CFs的细胞周期增殖,其效应可能与上调No—NOS系统活性有关。     

血清尿酸水平检测在慢性肺心病患者心衰严重程度评估中的预测价值

目的：分析血清尿酸水平在慢性肺心病（CCP）心衰程度评估的价值。方法：将100例CCP患者按NYHA心功能分级法分为三组,采用尿酸酶法检测血尿酸水平,并将检测结果与30例健康者比较。结果：CCP组高尿酸血症发病率为58．00％,高于健康组的36．67％,差异具有统计学意义（P〈0．0S）;CCP组尿酸水平为（462．7±109．5）肚mol／L,高于健康组的（341．8土102．1）μmol／L,差异具有统计学意义（P〈0．05）;Ⅳ级组尿酸水平为（491．5±112．6）μmol／L,高于I-Ⅱ级组的（351．2±102．8）μmol／L（P〈0．01）、III级组的（421．8±107．1）μmol／L（P〈0．05）;血尿酸与LVED呈正相关（P〈0．01）,与LVEF呈负相关（P〈0．01）。结论：CCP患者血尿酸水平与心衰程度呈正相关,血尿酸水平检测可作为评估心衰程度的可靠指标。