miR-503通过靶定IGF-1R基因抑制胃癌生长与侵袭

目的探讨miR-503在胃癌细胞生长及侵袭中的作用,并探索其相关分子机制。方法利用Realtime PCR检测人胃癌及癌旁组织miR-503及IGF-1R的mRNA表达情况。在人胃癌细胞系MGC-803和SGC-7901中瞬时转染miR-503模拟物和模拟物对照,运用平板克隆形成实验和Transwell侵袭实验检测miR-503的作用。在MGC-803和SGC-7901中转染IGF-1R干扰RNA和对照siRNA,利用Western blot检测IGF-1R蛋白表达情况,并进一步检测IGF-1R对细胞克隆形成和侵袭能力的影响。结果 miR-503在胃癌中呈现低表达（P〈0.01）,IGF-1R的mRNA呈现高表达（P〈0.01）。与对照组细胞相比,转染miR-503模拟物的细胞克隆数目明显减少（P〈0.01）,发生侵袭的细胞也减少（P〈0.01）,IGF-1R蛋白水平降低。转染IGF-1R干扰RNA的细胞中IGF-1R蛋白水平较对照组降低,且克隆形成和侵袭能力较对照组明显降低（P〈0.01）。结论 miR-503可以通过靶定IGF-1R基因调控胃癌细胞的生长和侵袭,发挥抑癌作用,具有作为胃癌分子治疗和预后靶标的潜能。     

miR-124抑制胃癌MKN-45细胞的侵袭与转移

目的探讨miR-124对胃癌细胞MKN-45侵袭能力的影响。方法使用脂质体将miR-124mimics转染MKN-45细胞．以无关序列（scramblemimics）作为阴性对照。采用细胞划痕实验观察miR-124过表达对胃癌细胞MKN-45侵袭能力的影响。结果细胞划痕实验显示,转染miR-124mimics24h、48h后伤IZl愈合率分别为（0．313±0．005）、（0．369±0．031）．与各自对照组（0．413±0．035）、（0．852±0.024）比较能明显减缓MKN-45细胞划痕伤口的愈合,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论miR-124能抑制胃癌细胞侵袭能力,它可能在胃癌的发生和进展中发挥重要作用。     

卵巢癌组织中miR-223的表达及其对卵巢癌OVCAR3细胞增殖和侵袭的促进作用

目的：分析微小RNA-223 (miR-223)在卵巢癌组织中的表达情况,探讨miR-223对卵巢癌OVCAR3细胞增殖和侵袭的影响,并阐明其分子调控机制。方法：采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测45例卵巢癌患者手术切除组织样本和不同卵巢癌细胞中miR-223表达水平,分析不同临床病理特征卵巢癌患者癌组织中miR-223表达水平。体外培养卵巢癌OVCAR3细胞,采用生物信息学、双荧光素酶报告基因实验和Western blotting法分析miR-223对N-myc下游调节基因1(NDRG1)的靶向调控关系。OVCAR3细胞分别转染阴性对照模拟物(NC组)、 miR-223抑制剂(MiR in组)和同时转染miR-223抑制剂及siRNA-NDRG1质粒(MiR in+si-NDRG1组),克隆形成实验检测各组细胞克隆形成数,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Transwell小室实验检测各组细胞中侵袭细胞数。结果：与癌旁正常组织比较,卵巢癌组织中miR-223表达水平明显升高(P<0.01),miR-223表达水平与卵巢癌患者组织学分化程度、FIGO分期和淋巴结转移有密切...     

miR-34a抑制人鼻咽癌细胞生长与侵袭

目的探讨miR-34a在人鼻咽癌CNE2细胞中的生物学功能。方法采用MTT、Transwell侵袭实验、细胞划痕实验分别检测过表达miR-34a对人鼻咽癌CNE2细胞的生长与侵袭作用。结果 MTT检测发现,过表达miR-34a可抑制人鼻咽癌CNE2细胞的生长增殖;细胞划痕和Transwell侵袭实验显示,在鼻咽癌CNE2细胞中过表达miR-34a 48 h后划痕愈合率为40.3%±9.0%,与对照组（76.3%±6.8%）比较,能明显减缓CNE2细胞划痕的愈合,转染miR-34a mimics 48 h后穿过基底膜的细胞数为71±10,与对照组（147±5）比较,能明显减缓CNE2细胞侵袭能力（P〈0.01）。结论 miR-34a可抑制鼻咽癌CNE2细胞生长与侵袭。     

SNHG15靶向调控微小RNA-4735-3p促进胃癌细胞增殖和侵袭的机制研究

目的 探究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)SNHG15靶向调节微小RNA(microRNA,miR)-4735-3p促进胃癌细胞增殖和侵袭的机制.方法 将人胃癌细胞系AGS分为对照组、si-SNHG15组、si-SNHG15+inhibitor组、si-SNHG15过表达组和in...     

miR-138靶向SYT13对胃癌细胞侵袭和迁移的影响及机制研究

目的 探究microRNA-138(miR-138)对胃癌细胞侵袭和迁移能力的影响并探讨其相关机制.方法 RT-PCR检测胃癌和癌旁组织中miR-138的表达及miR-138与上皮标志物E-Cadherin及间质标志物Vimentin表达的相关性;使用TargetScan 7.2预测miR-138的可能结合靶点,荧光素...     

miR-19a在结肠癌中高表达以及通过靶定DLC1促进结肠癌细胞增殖

目的:探讨miR-19a在结肠癌组织中的表达对结肠癌细胞系SW620和SW480增殖的影响,以及其靶基因的确定和功能性研究.方法:实时荧光定量PCR检测miR-19a的表达.噻唑蓝(MTT)比色实验和克隆形成实验检测SW620和SW480细胞的增殖活性.生物信息学预测、荧光报告载体实验以及实时荧光定量PCR和western blot验证miR-19a下游靶基因.结果:miR-19a在结肠癌组织中表达增强(P＜0.01).miR-19a可以增强结肠癌细胞系SW620和SW480增殖能力.DLC1是miR-19a的候选靶基因,过表达miR-19a可以同时在mRNA和蛋白水平上抑制DLC1基因的表达(P＜0.01),反之抑制miR-19a的表达后DLC1的表达则升高(P＜0.01).过表达DLC1后,SW620和SW480细胞的活性和克隆形成能力减弱(P＜0.01).结论:DLC1是miR-19a的直接靶基因,miR-19a通过抑制DLC1的表达而促进结肠癌细胞的增殖.     

miR-223-3P通过抑制NLRP3炎性小体的活化减轻心肌细胞损伤

目的 探讨miR-223-3P通过抑制NLRP3炎性小体活化保护心肌细胞及其潜在的作用机制。方法 体外培养小鼠H9c2细胞,建立硫酸吲哚酚（IS）诱导的H9c2细胞损伤模型。根据不同实验内容进行分组。CCK8法测定H9c2细胞活力;Western blot检测蛋白表达水平;RT-qPCR检测miR-223-3P和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-1（caspase-1）mRNA表达水平;生物信息学数据库和荧光素酶报告法分析miR-223-3P和NLRP3之间的相互作用;Elisa检测白介素1-β（Interleukin1-β,IL-1β）表达水平。 结果 与空白对照组和阴性对照组相比,IS组细胞活力降低,miR-223-3p表达水平降低（P＜0.05）。miR-223-3p可靶向结合NLRP3并负调控NLRP3。过表达miR-223-3P可增强H9c2细胞活力,下调caspase-1和IL-1β表达水平(P＜0.05),但是过表达NLRP3可逆转上述结果。 结论 在H9c2心肌细胞损伤模型中,miR-223-3P通过NLRP3炎性小体通路抑制炎症,增强细胞活力。     

长链非编码RNA DRAIC调控miR 223对胃癌细胞迁移和侵袭的影响

【摘要】 目的 探讨长链非编码DRAIC调控miR 223对胃癌细胞迁移和侵袭的影响及其机制。方法 qPCR检测DRAIC在胃癌组织和细胞株中的表达情况及差异;双荧光素酶报告基因检测DRAIC与miR 223之间的相互作用;流式细胞术检测DRAIC对胃癌细胞细胞周期和凋亡行为的影响;Transwell侵袭实验检测抑制DRAIC后胃癌细胞侵袭行为的变化情况;划痕愈合实验检测抑制DRAIC后胃癌细胞迁移行为的变化情况。结果 与正常胃癌组织相比,胃癌组织中DRAIC的表达水平均相对上调,在SGC7901细胞株中DRAIC表达水平最高,差异有统计学意义（P＜005）;双荧光素酶实验证实DRAIC能与miR 223的3’ UTR特异性结合,可以调控miR 223的表达与活性;抑制DRAIC表达后胃癌细胞的凋亡行为得到一定程度的促进;抑制DRAIC的表达后可以抑制胃癌细胞的迁移和侵袭能力。结论 DRAIC可以调控miR 223的表达,从而影响胃癌细胞的迁移和侵袭行为。     

miR-145在肝癌中的表达和功能研究

目的 探讨miR-145在肝癌组织、HepG2细胞株和肝脏正常组织中的表达情况及其对肝癌细胞株HepG2 增殖和侵袭能力的影响.方法 运用荧光定量PCR技术检测肝癌、HepG2细胞株及肝组织中miR-145的表达量.应用MTT法检测miR-145对HepG2细胞增殖的影响,通过侵袭实验观察miR-145对细胞侵袭能力的影响.结果 肝癌组织中miR-145表达明显低于正常组织(P＜0.05).浓度为100 nmol/L的miR-145作用时间72 h时,对HepG2细胞的增殖抑制最强,侵袭实验显示100 nmol/L的miR-145 mimics处理组穿膜细胞数目明显减少,并与对照组有显著差异.结论 miR-145在癌组织中的表达明显低于正常组织;miR-145抑制肝癌细胞株HepG2的增殖和侵袭能力,其在肿瘤发生发展过程中可能担任抑癌基因的角色.     

MicroRNA-184靶向作用EPB41L5抑制肾细胞癌存活与迁移研究

目的:研究MicroRNA-184(miR-184)对肾癌细胞存活与迁移的影响,并分析其靶基因及功能。方法:RT-PCR法检测肾细胞癌模型小鼠肿瘤组织及细胞系中miR-184的表达水平。脂质体法转染miR-184mimic至肾癌细胞A498、786-O,利用平板克隆及Transwell法测细胞克隆形成及迁移能力。生物信息学分析预测miR-184靶基因,荧光素酶报告基因法检测miR-184对靶基因的作用,Western blot法检测靶基因表达量。转染靶基因siRNA检测细胞克隆形成及迁移情况。结果:肾细胞癌小鼠肿瘤组织及肾癌细胞中miR-184表达水平显著降低(P<0.05)。转染miR-184mimic后,肾癌细胞的克隆形成能力及细胞迁移数目显著减少(P<0.05)。靶基因预测结果表明,EPB41L5的3’-UTR包含miR-184的潜在结合位点。miR-184mimic转染降低EPB41L5正常3’-UTR载体的荧光素酶活性,而对突变3’-UTR的荧光素酶活性则无影响。EPB41L5siRNA转染后,肾癌细胞中EPB41L5表达水平较对照组明显下降,同时,细胞体外克隆形成数目及迁移数目显著减少。结论:miR-184可通过作用靶基因EPB41L5而调控肾癌细胞的存活及迁移能力,影响肾细胞癌的发展。     

miR-552-3p通过抑制DACH1促进肝细胞性肝癌细胞增殖、迁移、侵袭功能

目的：探讨miR-552-3p在肝细胞性肝癌（Hepatocellular carcinoma, HCC）中的表达及其促进细胞增殖和迁移、侵袭功能的机制。方法：qRT-PCR检测HCC细胞系及人正常肝细胞系中miR-552-3p的表达情况;下载TCGA数据库的HCC样本的微阵列数据分析miR-552-3p在HCC癌组织及癌旁组织中是否存在表达差异;miR-552-3p mimics以及miR-552-3p inhibitor转染HCC细胞,荧光素酶报告基因验证miR-552-3p与DACH1是否存在靶向关系,CCK8及Transwell实验检测miR-552-3p及其与DACH1相互作用对于HCC细胞增殖、迁徙、侵袭功能的影响。结果：TCGA数据库中HCC样本的分析结果表明miR-552-3p在HCC中高表达,同时qRT-PCR显示miR-552-3p在HCC细胞系中的表达水平显著高于人肝细胞系L02;miR-552-3p的高表达促进HCC细胞的增殖、迁移、侵袭功能而抑制miR-552-3p的结果则相反;荧光素酶报告实验验证了miR-552-3p靶向作用于DACH1的3’-UTR,上调miR-552-3p的表达抑制DACH1而下调miR-552-3p则DACH1表达增加;DACH1的过表达可抑制HCC细胞相关功能,但同时过表达miR-552-3p后DACH1对于HCC细胞相关功能的抑制即可解除;miR-552-3p正向调控Wnt/β-catenin 信号通路的激活。结论：miR-552-3p靶向作用于DACH1促进HCC细胞增殖、迁移、侵袭功能,并参与调控Wnt/β-catenin 信号。可能作为HCC的诊疗策略提供潜在靶点。     

circ_0000069靶向miR-338-3p对非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨环状RNA 0000069(circ_0000069)是否靶向miR-338-3p调控非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞增殖、迁移和侵袭。 方法采用qRT-PCR技术检测NSCLC患者癌组织、癌旁正常组织中circ_0000069和miR-338-3p表达量。采用CCK-8、Transwell实验分析抑制circ_0000069或过表达miR-338-3p对A549细胞增殖活力、迁移和侵袭的影响。使用荧光素酶酶报告实验和qRT-PCR分析circ_0000069和miR-338-3p之间的相互作用。 结果NSCLC组织中circ_0000069表达量较癌旁组织升高(P＜0.05),而miR-338-3p表达量显著降低(P＜0.05)。抑制circ_0000069或过表达miR-338-3p后A549细胞活力、迁移和侵袭细胞数显著降低(P＜0.05)。miR-338-3p是circ_0000069的靶基因,circ_0000069靶向负调控miR-338-3p表达。干扰miR-338-3p表达显著减弱circ_0000069对A549细胞增殖、迁移和侵袭的抑制(P＜0.05)。 结论抑制circ_0000069通过上调miR-338-3p抑制NSCLC细胞A549增殖、迁移和侵袭。     

miRNA-381 对胃癌细胞增殖和侵袭的影响及机制

目的 观察miRNA-381 对胃癌细胞增殖和侵袭的影响,并探讨其作用机制。方法 应用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测胃癌细胞系AGS、MGC-803、Hs746T 及BSG823 和正常胃黏膜上皮细胞系RGM-1 中miRNA-381 的表达;将AGS 细胞系分成两组,阴性对照组和miRNA-381 模拟物组,采用Lipofectamine TM 2000 分别转染miRNA-381 scramble 及mimics,采用CCK-8、Transwell 实验测定两组细胞增殖和侵袭的影响,Western blot 检测两组细胞肝受体类似物1（LRH-1）和扭曲相关蛋白1（Twist1）表达水平。结果 胃癌细胞系AGS、MGC-803、Hs746T 及BSG823 中miRNA-381 相对表达量较正常胃黏膜上皮细胞系RGM-1 为低。miRNA-381 模拟物组在转染后72 和96 h OD 450 nm 值低于阴性对照组（P <0.05）;阴性对照组侵袭细胞数为（79.6±7.2）个,miRNA-381 模拟物组侵袭细胞数为（31.70±4.2）个,miRNA-381 模拟物组侵袭细胞数少于阴性对照组（P <0.01）;miRNA-381 模拟物组LRH-1 蛋白相对表达量为（0.39±0.04）,阴性对照组为1.0,miRNA-381 模拟物组LRH-1 蛋白相对表达量低于阴性对照组（P <0.01）;miRNA-381 模拟物组Twist1蛋白相对表达量为（0.51±0.05）,阴性对照组为1.0,miRNA-381 模拟物组Twist 1 蛋白相对表达量低于阴性对照组（P <0.01）。结论 miRNA-381 低表达于胃癌细胞系,miRNA-381 过表达可抑制胃癌细胞增殖和侵袭能力,其机制可能与下调LRH-1 和Twist1 的表达有关。     

MicroRNA-223表达与肝癌根治性切除术预后的相关性

 摘要：目的  识别可以作为肝癌根治性切除术患者预后标志物的microRNA（miRNA）分子。方法  利用miRNA微阵列方法对2例原发性肝癌及对应的肺转移性肝癌进行miRNA表达分析。将原发性和转移性肝癌中表达量有2倍差异的miRNAs作为候选miRNAs分子。在miRNA验证过程中,运用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）分析37例肝癌及相应癌旁非肿瘤组织中候选miRNAs分子的表达,并将其与患者的临床病理特征及生存情况进行相关性分析。结果  最终选取8种miRNAs（miR-27b、122、142-5p、196a、223、590-5p、630及944）作为候选miRNA。只有miR-223表达水平与肿瘤分期、有丝分裂指数相关。将肝癌患者分为miR-223高表达组（25例）和miR-223低表达组（12例）后发现,miR-223高表达与较高T分期、淋巴结转移、较高丝分裂指数及较高Ki-67阳性指数相关。此外,miR-223高表达还与总体生存率和无病存活率下降相关（P <0.05）,中位随访时间37.9个月[疾病复发危险比为16.267（95%CI：1.732,153.789）P =0.015]。结论  肝癌组织中miR-223异常表达与肝癌患者治疗结束后发生复发转移,以及无病生存时间和总生存率有关,通过检测肿瘤组织中miR-223 qRT-PCR反应有可能预测患者预后。

     

MicroRNA-222对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

摘要：目的  探讨microRNA-222（miR-222）对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法  将miR-222和对照分别转染入肺腺癌细胞系A549进行活细胞计数法试剂盒（CCK-8）增殖实验、Transwell迁移及Matrigel侵袭实验,观察miR-222对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。运用荧光素酶报告实验、实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）及Western blot验证miR-222靶向下调ETS1的过程。结果  CCK-8增殖实验,Transwell迁移及Matrigel侵袭实验发现,与对照组相比miR-222能够促进肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。荧光素酶报告实验、qRT-PCR及Western blot实验发现,miR-222可以靶向下调ETS1的表达,且ETS1参与调节上述过程。结论  miR-222通过靶向下调ETS1,促进肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。

     

miR-135b通过靶向FOXO1促进子宫内膜癌细胞的增殖

目的探讨miR-135b在子宫内膜癌中的表达及对子宫内膜癌细胞增殖的作用的机制。方法运用RT-PCR的方法检测22 对子宫内膜癌组织及相应的癌旁组织中的miR-135b 和FOXO1 的表达;运用RT-PCR 的方法检测JEC、Ishikawa、HEC-1-B、 RL-952这4种子宫内膜癌细胞株中miR-135b和FOXO1的表达。分别转染miR-135b的模拟物抑制物于子宫内膜癌细胞株,通 过RT-PCR检测转染的效果,通过MTT增殖试验检测对子宫内膜癌细胞增殖的影响。通过RT-PCR的方法检测FOXO1 mRNA 的变化,Western blotting 检测在FOXO1 蛋白的变化。结果miR-135b 在子宫内膜癌组织中较对应的癌旁组织表达增高（P< 0.05）, FOXO1在子宫内膜癌组织中较对应的癌旁组织表达降低（P<0.05）。荧光定量PCR显示子宫内膜癌细胞中miR-135b与 FOXO1表达趋势成负相关。miR-135b能促进子宫内膜癌细胞增殖（P<0.05）。上调miR-135b能够降低FOXO1 mRNA和蛋白 的表达（P<0.05）,下调miR-135b能够提高FOXO1 mRNA和蛋白的表达（P<0.05）。结论miR-135b在子宫内膜癌的发生发展 中发挥重要的作用,其部分分子机制可能是通过调控靶基因FOXO1而发挥作用。     

miR-375通过抑制KLF4促进前列腺癌细胞的迁移和侵袭

目的 探讨miR-375在前列腺癌(PCa)细胞中的表达、作用及机制.方法 培养细胞,转染质粒,Transwell分析PCa细胞的迁移和侵袭;qPCR分析miR-375、KLF4 mRNA在PCa细胞中的表达;Western blot分析KLF4蛋白在PCa细胞中的表达;生物信息学分析miR-375的靶基因,双荧光素酶实验验证.结果 miR-375在PCa中高表达,抑制miR-375的表达显著抑制PCa细胞的迁移和侵袭;通过生物信息学分析miR-375的潜在靶基因含有KLF4,双荧光素酶实验验证KLF4为miR-375的靶基因;KLF4在PCa细胞中表达显著降低,抑制miR-375的表达能够显著促进KLF4蛋白的表达;进一步研究表明抑制KLF4表达可逆转miR-375抑制物对PCa细胞的迁移侵袭的抑制作用.结论 miR-375抑制KLF4的表达促进PCa的迁移和侵袭,发挥癌基因的作用;其可以作为PCa的治疗靶点,为PCa的治疗提供新的方向.