不同产地玄参内生真菌种群结构的比较分析

目的研究不同产地玄参内生真菌的种群结构差异。方法通过形态和分子手段相结合的方式对来自浙江磐安、陕西安康、湖北武穴、湖南邵东、四川达州和安徽亳州共6个产地的玄参进行内生真菌的分离、鉴定及种群结构分析。结果共分离得到3 052株内生真菌划分为153个形态型,经分子系统学分析,共划分为84个分类单元,分属于25个属,其中间座壳属、镰刀菌属、黑孢属、链格孢属、茎点霉属、棒孢属、附球菌属、枝孢属为6个产地内生真菌共有属,各产地的优势属不同。相似性分析表明,不同产地玄参内生真菌的组成结构上存在差异。Shannon-wiener多样性指数及Simpson指数分析表明浙江磐安产地玄参内生真菌多样性较高,四川达州产地的多样性稍低。结论系统研究玄参内生真菌的多样性与群落结构,阐明内生真菌在植物组织中的分布规律,可为玄参内生真菌的开发利用提供基础资料和科学依据。     

莪术内生真菌的分离与鉴定

目的：从药用植物莪术地下器官分离内生真菌,并进行初步鉴定.方法：采用马铃薯葡萄糖培养基（PDA）为分离培养基,查氏培养基和促孢培养基为真菌鉴定培养基,经形态观察进行鉴定.结果：从莪术根、根茎和块根中获得24株内生真菌,分属8个属;且莪术不同部位内生真菌的数量、种类及分布存在差异.     

牡荆内生真菌的分离与鉴定

目的 探讨牡荆内生真菌类群在不同器官中分布的多样性及其与生态环境的关系.方法 利用PDA培养基进行牡荆内生真菌的分离、纯化,根据菌落的形态特征并结合真菌的5.8S和ITS序列进行菌株鉴定.结果 从牡荆中共分离到内生真菌97株,鉴定为6目8科10属12种,其中从野生牡荆中获得内生真菌60株,鉴定为6目7科9属9种,从栽培牡荆中获得内生真菌37株,为3目3科5属7种.结论 牡荆内生真菌具有多样性,不同地理环境和组织类型的牡荆内生真菌在数量和种群组成上存在差异.     

水仙内生真菌的分离鉴定及聚类分析

目的 分离纯化水仙根茎中的内生真菌,并进行菌群组成及其多样性分析。方法 采用表面消毒、划线法从水仙鳞茎和根中分离内生真菌,基于形态学特征和核糖体转录间隔区（ITS-rDNA）序列分析,对分离株进行分类鉴定;以内生真菌的多样性指数（H）和均匀度指数（E）为指标,分析水仙内生真菌的菌群组成及其多样性。结果 共分离到18株内生真菌,其中16株来自根部,2株来自鳞茎,分别占总分离菌株的88.89%和11.11%。PCR扩增其中14株真菌ITS-rDNA,得到大小约500 bp片段,用BLAST软件对其测序结果进行相似性比对,发现4株为青霉属Penicillium,相似性95%～99%;3株为曲霉属Aspergillus,相似性99%～100%;3株为喙枝孢属Rhinocladiella,相似性为99%;其他4株分别为木霉属Trichoderma、链格孢属Alternaria、赤霉属Gibberella和镰孢霉属Fusarium,相似性都为99%。青霉菌为水仙内生真菌优势菌属。通过构建系统发育树发现这14株内生菌明显分为2大类群,Shannon多样性指数为1.778,均匀度为0.913 7。结论 水仙内生真菌菌群组成具有一定程度的多样性和差异性。     

川芎内生真菌的分离与鉴定

目的:探讨川芎内生真菌类群与川芎品种和产地的关系。方法:采用平板分离法分离川芎的内生真菌,采用点植法对分离菌株进行分类鉴定。结果:从6个产地的川芎根茎样品共获得内生真菌50株,经形态观察分类鉴定为1纲、3目、4科、13属。结论:不同产地及不同品种川芎的内生真菌在数量、分布、种群及其组成存在差异,推测川芎内生真菌种群可能和川芎的特定生境有关。     

川乌植物内生真菌的分离和分类鉴定

目的从川乌植物的根和茎中分离内生真菌,并进行分类鉴定。方法经显微形态观察进行内生真菌的分类鉴定。结果川乌植物根和茎中分离获得61株内生真菌,归属为2纲,5目,6科,17个属。结论川乌植物不同部位内生真菌的数量、组成与种群分布存有差异;从川乌植物中分离内生真菌尚属首次报道。     

温莪术内生真菌的分离及其分类鉴定

目的 对温莪术不同部位内生真菌进分离和分类鉴定.方法 采用内生菌常规分离法对健康温莪术根、茎和叶的内生真菌进行了分离和鉴定.结果 从温莪术中分离得到了99株内生真菌,经鉴定为21属,其中根部42株涉及11属,茎部12株涉及4属,叶部45株涉及12属.结论 温莪术的不同部位内生真菌的数量、分布和种群存在差异.     

药用植物三尖杉内生真菌的分离鉴定及抗菌活性

目的：研究药用植物三尖杉Cephalotaxus fortunei内生真菌的分离鉴定及抗菌活性。方法：用组织培养方法从野生三尖杉的根、茎、叶中分离内生真菌,采用滤纸片扩散法对分离得到的内生真菌的代谢产物做抑菌活性研究。结果：分别从三尖杉根、茎、叶中共分离得到30株内生真菌;抑菌活性研究显示,有20株内生真菌的代谢产物至少对1种靶标菌有抑制活性,占总分离菌株的66.7%,其中菌株CFEF013对所有靶标菌均有抑制作用;经形态学和分子生物学鉴定,对7株具有较强抑菌活性的菌株分属镰孢菌属Fusarium 4株,壳囊孢属Cytospora 1株,拟盘多毛孢属Pestalotiopsis 1株,毛霉菌属Mucor 1株。结论：药用植物三尖杉内生真菌种类具有一定的多样性,内生真菌代谢产物抑菌活性良好。     

桃儿七地下茎内生真菌的分离和鉴定

目的：探索甘肃兴隆山桃儿七内生真菌的多样性和丰度,为鬼臼毒素的获取方式提供新途径,保护濒危药用植物桃儿七资源。方法：采用组织块培养法从一株桃儿七地下茎中分离纯化内生真菌,利用分子鉴定和常规的形态学方法对重复出现的4株内生真菌进行分类鉴定。结果：本研究采用组织块内生菌分离方法分离纯化了20株内生真菌,鉴定的4株菌分别是赭曲霉Aspergillus ochraceus,Eucasphaeria capensis,布氏白僵菌Beauvetia brongniaritii和镰孢菌Fusarium sp.。结论：内生真菌的多样性和丰度与桃儿七的生境有关,甘肃兴隆山桃儿七内生真菌优势属为Aspergillus,Eucasphaeria,Beauvetia和Fusarium。     

无花果内生真菌分离鉴定及其活性研究

目的:分离和鉴定无花果Ficus carica植物内生真菌,并对其进行活性筛选。方法:采用形态学方法对分离菌株进行鉴定,以金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白菜黑斑病菌、苹果腐烂病菌、小麦赤霉病菌、草莓枯萎病菌、青霉菌为测试菌对分离得到的植物内生真菌进行抗菌活性实验。结果:从健康的无花果植物的根、茎、叶中分离共获得61株内生真菌。属于5纲,7目,12科,20属。抗菌活性试验表明有40株内生真菌具有抗菌活性,占总内生真菌的65.57%。结论:无花果植物内生真菌多样性丰富,具有很好的研究和应用价值。     

玄参田小地老虎的为害及防治研究

目的:通过对玄参田小地老虎Agrotis ypsilon的为害调查及药剂防治研究,为综合防治提供依据.方法:田间调查和药剂防治试验.结果:玄参田的小地老虎发生及危害程度与前茬作物有关,以前茬为烟草和玉米的受害严重,平均受害率分别达到12.43%,15.68%.药剂防治试验结果表明10%高效氯氰菊酯乳油2 000倍液,40%毒死蜱乳油1 500倍液防治效果较好,防效分别是92.53%,91.69%.结论:在玄参苗期喷施10%高效氯氰菊酯乳油或40%毒死蜱乳油能有效防治小地老虎的为害.     

玄参组织培养及炼苗技术

目的:以玄参茎段、叶柄、带腋茎段和叶片为外植体,筛选出适宜的植株再生体系以及最佳的炼苗条件。方法:通过L_(16)(4~5)正交试验研究玄参不同外植体、不同激素和不同浓度对丛生芽的诱导和增殖;采用单因素方差分析不同浓度激素对不定芽生根的诱导;同时选择不同基质、不同浇水周期和不同过渡方式对玄参生根苗炼苗关键技术的优选。结果:带腋茎段为最佳外植体,其次依次为茎段,叶片和叶柄;其在MS+6-苄氨基腺嘌呤(6-BA) 0. 5 mg·L~(-1)+萘乙酸(NAA) 0. 2 mg·L~(-1)中不定芽诱导率和芽增殖倍数分别为100%和9. 84;适宜不定芽生根的培养基为1/2 MS+吲哚-3-丁酸(IBA) 0. 2 mg·L~(-1),生根率100%,根数为39. 45条;就基质而言,以营养土-蛭石-珍珠岩(5∶2∶1)为移栽基质,可保持基质中肥力、透气性与保水性适当搭配;浇水周期选择每2 d浇1次水,过渡方式为室内炼苗20 d,室外遮阴大棚炼苗10 d后移栽大田,成活率可达到95%以上。结论:建立玄参无性快速繁殖体系,为提供玄参高效、快速、稳定的植株再生,优质的种苗繁育以及适宜的炼苗条件提供了有效途径。     

玄参中环烯醚萜类化合物的研究进展

环烯醚萜类化合物是玄参主要活性成分之一,根据化学结构将其分为环烯醚萜苷和非苷环烯醚萜两大类。并以环烯醚萜苷类化合物的生物合成过程为基础,推测脱羧环烯醚萜苷途径为玄参中环烯醚萜苷类主要生物合成途径。相关研究表明,哈巴苷、哈巴俄苷和桃叶珊瑚苷等成分在抗脑缺血、降血糖、保护心肌细胞等方面发挥重要作用,但仍有大部分环烯醚萜类成分的药理作用并不明晰。通过对玄参中环烯醚萜类化学成分的种类、生物合成技术以及药理作用的相关文献进行综述,为玄参环烯醚萜类化合物的开发应用提供参考。     

中心复合设计-效应面法优化玄参的炮制工艺

目的:优选玄参的炮制工艺条件。方法:采用中心复合设计-效应面法,以浸泡时间、蒸制时间、干燥温度为考察因素,哈帕苷、哈帕俄苷、肉桂酸变化率的总评归一值(OD)为指标,进行中心复合设计试验,并用多元线性回归及二项式拟合建立指标与因素间的数学模型,预测玄参的最佳炮制工艺。结果:最佳工艺为浸泡19 min,蒸制1.2 h,干燥温度49℃。预测值与实测值偏差均<2.65%。结论:采用中心复合设计-效应面法优化的玄参炮制工艺稳定可行,结果可靠,为玄参的质量标准研究提供实验依据。     

基于高通量测序的玄参根部转录组学研究及萜类化合物合成相关基因的挖掘

该研究应用新一代测序技术Illumina HiSeq~(TM)4000在转录水平上对药用植物玄参根部进行测序,结合生物信息学方法开展基因功能注释和SSR位点搜索。通过测序,共获得65 602 036条原始序列。利用生物信息学软件拼接和组装序列,获得73 983条unigene,平均长度823 bp。序列同源性比较表明,56 389条unigene与其他物种具有不同程度的同源性。通过Swiss-Prot,GO,KEGG,COG比对注释,发现520条编码玄参次生代谢途径关键酶基因和191个相关转录因子。利用MISA软件在所有unigenes中共搜索到11 659个SSR位点,重复类型以二核苷酸为主。该研究所获得的参与次生代谢的关键基因可为研究玄参药用成分的生物合成和调控机制奠定基础,获得的大量SSR位点为后续研究玄参种质鉴定及遗传多样性研究提供参考。     

杜仲叶和果实中内生真菌的分离及抑菌活性

目的从杜仲Eucommia ulmoides叶和果实中分离具有抑菌作用的内生真菌。方法采用平板培养法从杜仲叶片和果实中分离内生真菌,通过对峙法和生长速率法考察这些内生真菌的抑菌活性,并通过HPLC法考察其具有代谢产生杜仲有效活性成分的能力。对具有良好抑菌效果和能够代谢杜仲活性成分的内生真菌进行ITS序列测定,鉴定其归属。结果从健康叶片和果实中分离到52株内生真菌,其中2个菌株的提取液中含有绿原酸,11个菌株至少对4种病原菌具有抑制作用,其中29号菌株(链格孢属Alternaria sp.)对芽孢杆菌Fusarium graminearum的抑制效果最好,其抑制率高达82.6%。通过与Gen Bank数据比对,这些内生真菌分别属于链格孢属Alternaria、黑孢属Niqrospora和座囊菌纲(Dothideomycetes)。结论从杜仲叶和果实中分离到11株具有抑菌作用的内生真菌,这些具有抑菌作用的内生真菌可用于生物制药和农业产业。     

玄参子芽分级标准研究

对全国玄参主产区子芽的长、粗和重3个形态指标进行检测,使用SPSS统计软件,通过聚类分析制定玄参子芽的质量分级标准。田间试验观测不同等级子芽玄参的植株生长情况及产量。田间试验表明,Ⅰ级玄参长势最好,产量最高,Ⅲ级玄参长势最差,产量最低。玄参药材中主要活性成分含量测定结果表明不同等级的子芽对药材的内在品质无明显影响。为保证高产及减少成本,玄参生产用子芽应控制在Ⅱ级以上。此方法制定的质量分级标准科学、可行,可作为玄参子芽的质量控制标准,为玄参规范化栽培提供依据。     

阳春砂仁根内生真菌解磷功能评价及分类学鉴定

目的对产自于云南的阳春砂仁根内生真菌进行分离、纯培养、解磷功能评价及分类学鉴定。方法通过PDA和MEA培养基分离砂仁根内生真菌,并纯化培养;利用无机磷源Pikovaskaia’s(PVK)固体和液体培养基筛选具有解磷功能的内生真菌,并通过生长圈直径、生物量、有效磷含量、pH值、磷酸酶活性来分析菌株解磷能力和解磷机制;通过核糖体18SPCR扩增,对具有解磷效果的菌株进行分子鉴定。结果研究发现,分离自阳春砂仁根部的24株内生真菌,有10株为深色有隔内生真菌(dark septate endophytes,DSE)。通过难溶性PVK固体培养基筛选发现,共有8株菌可形成解磷生长圈,其中JP-20和JP-23生长直径均大于9 cm,其次为JP-15,生长圈直径为6.06 cm;PVK液体培养基筛选结果显示,菌株JP-23具有较强的解磷效果,生物量显著高于可溶性磷源,液体基质中有效磷含量显著升高,pH明显下降,酸性磷酸酶活性增加。经分子鉴定,初步认定菌株JP-23为枝孢属Cladosporiumsp.菌株(GenBank:MK629004)。结论菌株JP-23可通过调节基质pH值和分泌酸性磷酸酶来分解、吸收难溶性磷源。为研究植物-微生物磷吸收作用机制及砂仁生态种植提供数据支持和理论依据。     

内生真菌HL-Y-3中小檗碱的分离鉴定

选用PDA培养基对黄连内生真菌进行分离,运用薄层色谱法和高效液相色谱法检测到菌株HL-Y-3可产小檗碱,菌丝中质量分数为9.313μg·g~(-1),形态学观察结合5.8S rDNA-ITS序列分析鉴定内生真菌HL-Y-3为交链孢属Alternaria sp.,采用薄层制备分离到小檗碱单体,质谱和核磁鉴定的结果表明小檗碱样品图谱与文献报道基本一致,确证分离到的生物碱为小檗碱,为小檗碱的开发利用提供了新的资源。