雄黄可溶性砷和价态砷与小鼠急性毒性关系的研究

目的:观察单次ig给药不同批号的雄黄混悬液后小鼠的中毒反应及死亡情况,用于初步评价受试物毒性,探讨不同批号的雄黄中可溶性砷和价态砷与小鼠急性毒性间的关系。方法:对3个不同批号的雄黄进行总砷含量、可溶性砷和价态砷的测定,根据预试验结果确定不同批号雄黄的最高剂量。将不同批号的雄黄混悬液分别按0.85依次递减的比例单次ig给药,观察给药后各组小鼠中毒反应及死亡情况,连续观察14 d,通过SPSS统计软件分析得半数致死量(LD50)及其95%的可信区间。结果:3个批号的雄黄总砷含量分别为95.5%,96.0%,94.8%,可溶性砷分别为3.32%,5.23%,6.73%,价态砷分别为1.39%,3.26%,4.36%,测得LD50分别为2.069 g·kg-1,1.319 g·kg-1,1.100 g·kg-1。用2倍LD50的雄黄上清液给药,结果小鼠全部死亡。结论:雄黄的毒性存在于可溶性部分,可溶性砷和价态砷含量与小鼠急性毒性间呈高度相关关系,LD50与可溶性砷和价态砷呈负相关关系,即可溶性砷和价态砷含量越高毒性越大,与总砷含量的相关性差。     

原子荧光光谱法测定六神丸的总砷含量及其在人工肠液中的可溶性砷含量

目的:建立六神丸(蟾酥,雄黄,麝香等)中总砷的测定方法,研究六神丸在人工肠液中可溶性砷含量。方法:采用原子荧光光谱法。结果:六神丸在人工肠液中的可溶性砷仅占总砷含量的10.5%左右,在短时间内达到溶出平衡,而且人工肠液中的胰蛋白酶对砷的溶出有促进作用。结论:原子荧光光谱法测定六神丸中总砷的方法操作简便,定量准确。     

不同产地雄黄及其炮制品中二硫化二砷和可溶性砷含量比较

目的:比较研究不同产地雄黄及其炮制品中主成分As2S2及可溶性砷盐As2O3的含量差异。方法:采用2010年版《中国药典》雄黄项下的滴定法测定不同产地雄黄及其炮制品中As2S2的含量,采用AFS-230E型原子荧光光度计检测上述样品中可溶性砷盐As2O3含量。结果:不同产地的雄黄及其炮制品中As2S2,As2O3含量存在显著差异。雄黄炮制后,炮制品中As2S2含量均提高,As2O3含量均明显降低。除吉林和江苏2个产地的的雄黄及其炮制品中As2S2含量<90.0%,其余样品均符合药典规定;且雄黄炮制品中As2O3含量均能控制在1.7 mg.g-1以下。结论:研究结果可为指导雄黄临床合理用药提供参考依据。     

六神丸和雄黄诱导子宫内膜癌细胞凋亡和DNA损伤的机制

目的:比较经典名药六神丸和雄黄(As_4S_4)对子宫内膜癌细胞JEC的抗肿瘤作用及其机制。方法:原子吸收法测定六神丸与As_4S_4中砷(As)的溶解度;噻唑蓝(MTT)比色法比较六神丸与As_4S_4对细胞增殖的抑制作用,细胞迁移实验比较六神丸与As_4S_4对细胞迁移的抑制作用;磷脂酰丝氨酸蛋白抗体/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)双染结合流式细胞术比较六神丸与As_4S_4对细胞凋亡的影响,蛋白免疫印迹法(Western blot)比较六神丸与As_4S_4对凋亡和DNA损伤相关蛋白的影响。结果:原子吸收法测定结果显示六神丸的As溶出量为17. 4%,As_4S_4的As溶出量仅为1. 6%。但在相同As含量的情况下,与As_4S_4组比较,六神丸3,10 mg·L~(-1)组的细胞存活率明显降低(P0. 05),六神丸0. 25,0. 5,1 mg·L~(-1)组早期凋亡率明显增高(P0. 05),六神丸1 mg·L~(-1)组细胞迁移率明显下降(P0. 05),六神丸1 mg·L~(-1)组剪切的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved Caspase-3),剪切的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-7(cleaved Caspase-7),剪切的聚ADP核糖聚合酶(cleaved PARP)以及磷酸化的组蛋白(p-H2AX),磷酸化的检测点激酶2(p-CHK2),人共济失调毛细血管扩张症突变激酶(ATM)蛋白表达水平升高(P0. 05),人共济失调毛细血管扩张症Rad3相关激酶(ATR)蛋白表达水平降低(P0. 05),而Caspase-3和Caspase-7蛋白表达水平无明显改变。结论:在等As剂量下,六神丸与As_4S_4均能抑制JEC细胞的增殖和迁移,诱导细胞凋亡和DNA损伤,但六神丸的效果优于As_4S_4,提示中药复方六神丸中还有其他成分协同As共同参与抗肿瘤作用。     

六神丸及其成分蟾酥对K562/DOX细胞的增殖和MDR1基因表达的影响

目的:探讨传统中成药六神丸及其成分蟾酥对K562/DOX细胞的增殖和MDR1基因表达的影响。方法:采用中药血清药理学方法制备六神丸和蟾酥的含药血清,以MTT法检测六神丸以及蟾酥含药血清、阿霉素处理后K562/DOX细胞的抑制率;RT-PCR检测MDR1 mRNA表达;Western blot检测MDR1蛋白的表达。结果:与对照组相比,蟾酥和六神丸对K562/DOX细胞均有抑制作用;六神丸组MDR1 mRNA表达降低,MDR1蛋白表达下降;而蟾酥组、阿霉素组未有明显变化。结论:六神丸可能通过下调MDR1表达水平进而逆转K562/DOX细胞的耐药性,而其成分蟾酥作用不明显。     

高效液相-氢化物发生-原子荧光光谱法分析六神丸在大鼠肝脏中代谢的砷形态

目的:建立大鼠肝脏组织中四种砷形态的高效液相色谱-氢化物发生-原子荧光光谱(HPLC-HG-AFS)测定法,并用于大鼠灌胃给予六神丸后肝脏组织中砷形态研究.方法:乙酸-水(100:1)作为提取溶剂,采用超声或细胞破碎进行前处理,离心取上清,重复提取3次,合并上清液.采用Hamil-tonPRP-X100色谱柱,以17....     

雄黄中砷对大鼠脑组织单胺类神经递质及其代谢产物的影响

目的:探讨雄黄中砷对大鼠脑组织单胺类神经递质及其代谢产物的影响。方法:将32只4周龄Wistar大鼠随机分为4组,每组8只。以0.5%CMC-Na水溶液为混悬介质,实验组灌胃给予雄黄混悬液(0.3、0.9、2.7 g/kg),对照组给予等体积的0.5%CMC-Na,连续灌胃4 w。采用氢化物发生-冷阱捕集-原子吸收法测定脑组织中砷含量,高效液相色谱-电化学检测法测定脑组织中单胺类神经递质及其代谢产物含量。结果:随着雄黄灌胃剂量的增加,大鼠脑组织中砷含量逐渐增加,表明雄黄中的砷可通过血脑屏障在脑组织蓄积。雄黄染毒4 w后,与对照组比较,染毒组大鼠脑组织中NE、DOPAC和DA含量均有增加的趋势,而5-HIAA有降低的趋势。结论:雄黄中砷可在脑组织蓄积,对大鼠脑组织单胺类神经递质及其代谢产物产生影响,单胺类神经递质可能是雄黄毒性作用的靶点之一。     

原子荧光光谱法检测牛黄解毒片及其拆方可溶性砷的含量

目的:探讨牛黄解毒片配伍对有毒中药雄黄是否具有减毒作用及其可能减毒药味。方法:设立牛黄解毒片全方及其不同拆方组,分别用人工胃液或人工肠液处理,然后采用原子荧光光谱法测定并比较不同组可溶性砷的含量。结果:人工胃液或人工肠液处理后,牛黄解毒片全方组可溶性砷含量明显低于单味雄黄组(P<0.01);牛黄解毒片全方去甘草、黄芩、大黄组可溶性砷含量明显高于牛黄解毒片全方组(P<0.01)。结论:牛黄解毒片全方配伍对雄黄有减毒作用,并且甘草、黄芩、大黄是减毒的可能药味。     

基于高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法的大鼠口服纳米雄黄后体内砷形态分析

目的对大鼠口服雄黄与纳米雄黄后血清、肝、肾、脾中三价砷[As(III)]、五价砷[As(V)]、一甲基砷酸(MMA)、二甲基砷酸(DMA)4种砷形态进行定量分析,比较两组大鼠体内砷形态的差异。方法 SD大鼠分别ig给予800 mg/kg的雄黄与纳米雄黄,28 d后采集血清及各组织样本,经前处理后采用高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法(HPLC-ICP-MS)测定生物样本中砷形态含量并进行比较。结果 4种砷形态在大鼠血清和肾脏样本中均被检出,肝脏中检出了3种,脾脏中检出了2种;各砷形态在纳米雄黄组中的含量明显高于雄黄组。结论纳米化提高了雄黄的生物利用度,更多的砷被吸收进入体内并发生代谢转化,这可能导致纳米雄黄肝、肾等毒性增加。     

HPLC-ICP-MS法研究5种含雄黄中成药的可溶性砷及其形态

目的采用高效液相色谱-电感耦合等离子质谱(HPLC-ICP-MS)联用技术分析6种不同价态砷,对雄黄及5种不同处方含雄黄复方制剂中可溶性砷的形态进行研究。方法可溶性砷分别以不同提取溶剂和不同提取方法为37℃人工胃液恒温振荡、0.16%盐酸溶液超声、甲醇-水(1∶1)超声及甲醇-水(1∶1)快速溶剂萃取(ASE)等提取样品中可溶性砷,采用ICP-MS方法分析可溶性砷总量;HPLC-ICP-MS分析可溶性砷的形态。结果雄黄及含雄黄复方制剂的酸可溶性砷总量仅占样品总含砷量的0.12%～2.70%;不同提取溶剂可溶性砷形态为3价和5价两种已知形态砷;酸可溶性砷中3价和5价砷之和与酸可溶性砷总量随中药复方制剂不同而呈现不同比例关系。结论雄黄及其复方制剂的酸可溶性砷远远小于其总含砷量,复方制剂中其他成分的存在可能会对可溶性砷中有毒形态溶出产生抑制作用。     

六神丸外敷治疗痛风急性发作临床观察

目的观察六神丸外敷治疗痛风关节肿痛的临床疗效。方法将60例患者随机分为治疗组和对照组各30例。治疗组应用六神丸调食醋外敷局部,对照组不予外敷治疗。结果治疗组的红和痛的缓解均优于对照组。     

六神丸中麝香酮和胆酸的含量测定

目的:测定六神丸中麝香酮和胆酸的含量,考察六神丸中天然麝香和牛黄的质量。方法:采用气相色谱法测定麝香酮含量,色谱条件:采用HP50+石英毛细管色谱柱(30m×0.53mm,1μm),火焰离子化检测器(FID),检测器:190℃,以N2为载气,柱温为165℃,进样口为150℃。采用高效液相色谱法测定胆酸含量,色谱条件:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-0.15%磷酸水溶液(39:61)为流动相;检测波长为192nm。结果:麝香酮和胆酸分别在23.90～1195.00μg/mL(r=0.9997,n=6)和0.20512～4.1024mg/mL(r=0.9999,n=11)范围内呈良好线性关系,平均回收率分别为99.64%(RSD=2.00%,n=6)和98.25%(RSD=1.06%,n=6)。结论:2种方法都能准确测定六神丸中麝香酮和胆酸的含量,其结果可一定程度上体现六神丸中天然麝香和牛黄的质量。     

蟾酥质量研究及其药理临床应用进展

阐述了蟾酥的药来源、化学成分、质量研究如定性,定量分析、化学模式识别和强心升压、抗原休克、改善血流变学及抗微生物、抗肿瘤等药理作用,同时综述了蟾酥制剂在临床的广泛应用。     

蟾酥药材和饮片(蟾酥粉)的质量标准研究

蟾酥为蟾蜍科动物中华大蟾蜍Bufo bufo gargarizans或黑眶蟾蜍B.melanosticus耳后腺及皮肤腺分泌物的干燥加工品。蟾酥粉为蟾酥的酒制加工品。该研究针对现行蟾酥标准局限性和存在问题,结合前期研究,构建改进的蟾酥药材整体质量控制方法和标准,包含采用优化的薄层鉴别方法进行定性鉴别;采用【含量测定】项下的色谱条件建立HPLC特征图谱;完善一测多评法的相对校正因子,并将其用于38批蟾酥药材中蟾蜍甾的含量测定,制定合理含量限度。在此基础上,参照药材拟修订方法,对不同批蟾酥粉进行【性状】、【鉴别】(薄层鉴别)、【特征图谱】、【检查】(水分)和【含量测定】等检测项研究,起草蟾酥粉的质量标准。该研究为完善《中国药典》2020年版蟾酥的质量标准提供参考。     

蟾酥总蟾蜍甾烯对H22荷瘤小鼠的抗肿瘤作用及组织中代谢物的初步分析

目的:评价蟾酥总蟾蜍甾烯(total bufadienolides from toad venom,TBFs)对H22荷瘤小鼠的肿瘤抑制作用,同步对体内组织中的代谢物进行初步分析.方法:采用HPLC和LC-MS对制备的受试药TBFs的化学组成进行表征;采用灌胃和腹腔注射2种方式给予H22荷瘤小鼠高、中、低3个剂量的受试药,给药后第13天处死,剥取瘤组织,称重,计算抑瘤率;同时取心、肝、脾、肺、肾各脏器组织,采用HPLC和LC-MS对其中的药物进行初步分析.结果:在对照品对照,在线紫外吸收光谱和质谱数据的基础上,明确了受试药TBFs的化学组成,以日蟾毒它灵、沙蟾毒精、蟾毒它灵、酯蟾毒精、华蟾毒它灵、蟾毒灵、华蟾酥毒基和酯蟾毒配基为主.与空白对照组比,灌胃给予TBFs对H22荷瘤小鼠的体重无影响,低(5 mg· kg-1),中(10 mg·kg-1),高剂量组(20 mg·kg-1)的抑瘤率分别为14.76％,16.38％,10.32％;腹腔注射给予TBFs,与空白对照组比,中、高剂量组在给药第5天时体重增加较慢,第13天时恢复正常;低(1.5mg· kg-1),中(3 mg·kg-1),高剂量组(6 mg·kg-1)的抑瘤率分别为17.30％,19.80％,40.95％,呈一定的剂量依赖性.小鼠心、肝、脾、肺、肾脏器组织HPLC分析表明,肝组织中存在蟾蜍甾烯类成分,LC-DAD-MS初步推测其中的11个化合物.结论:灌胃给予TBFs对H22荷瘤小鼠肿瘤生长有一定的抑制趋势,但作用不明显;腹腔注射则展示了显著性抑瘤作用,同时给药初期也表现了一定的毒性反应;肝组织中推测的蟾蜍甾烯类化合物为进一步研究其体内代谢途径奠定基础.     

Acute toxicity of Schizolobium parahyba aqueous extract in mice

The herbal extract of Schizolobium parahyba leaves is used commonly in the Brazil central region to treat snakebites. This study evaluates the acute toxicological effects of Schizolobium parahyba aqueous extract in mice 24 h after intraperitoneal administration. Acute toxicity was evaluated using biochemical, hematological and histopathological assays. Alterations in the levels of transaminases, bilirubin, albumin and prothrombrin time were observed, and these are likely to occur due to hepatic injury, which was confirmed by light microscopy. Liver histopathological analysis revealed the presence of lymph plasmocitary inflammatory infiltrate, but no other histopathological alterations were observed in any of the other organs analysed. The data confirm the low toxicity of the extract of Schizolobium parahyba and provide a model for the selection of a dose that does not cause injuries in the organism. Copyright © 2009 John Wiley & Sons, Ltd.     

红花籽粕对小鼠的急性毒性及抗溃疡性结肠炎作用研究

目的 评价红花籽粕(红花Carthamus tinctorius的种子经过压榨提取红花籽油后的副产品)对小鼠的急性毒性及抗溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)作用。方法 C57BL/6小鼠ig不同剂量的红花籽粕,7 d后计算脏器指数,采用苏木素-伊红(HE)染色观察肝、脾、肾组织病理变化,测定血清中肝功能、肾功能及血脂水平,以评价红花籽粕的急性毒性。建立葡聚糖硫酸钠(dextran sulphate sodium,DSS)诱导的UC小鼠模型,每天记录小鼠体质量,测定疾病活动指数(disease activity index,DAI)评分、结肠长度以及脏器指数,采用HE染色和阿利新蓝-过碘酸雪夫(AB-PAS)染色评价结肠组织病理学变化,采用qRT-PCR和Western blotting检测结肠组织中炎症和黏膜屏障相关因子表达。结果 急性毒性实验中,与对照组比较,红花籽粕组小鼠脏器指数、血液生化指标没有显著差异,脏器病理切片也未见异常。红花籽粕对DSS诱导的UC小鼠具有较好的保护作用,可以显著改善体质量减轻、DAI评分升高、结肠长度缩短等临床症状(P<0.01),减轻结肠组织病理损伤,抑制肠道炎症细胞的浸润,保护杯状细胞,提高紧密连接蛋白和黏蛋白的表达(P<0.05、0.01、0.001),改善肠道屏障完整性。结论 红花籽粕具有较高的安全性,且对DSS诱导的UC小鼠具有显著的治疗作用。     

精黄片治疗急性菌痢的临床观察与实验研究

为探讨具有清热燥湿、攻里通下作用的中成药精黄片对急性细菌性痢疾的临床疗效及作用机理,用精黄片治疗痢疾110例,并与用西药抗生素治疗的102例作对照观察。又将精黄片与黄连素在相同实验条件下作抑菌与杀菌试验,结果,两组临床疗效比较无显著性差异。实验室结果为精黄片与黄连素均有抑制细菌繁殖的作用。可能实际抑菌效果精黄片较黄连素更好。     

胃肠安丸对葡聚糖硫酸钠诱导溃疡性结肠炎小鼠的治疗作用及机制

目的探讨胃肠安丸对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导溃疡性结肠炎小鼠的治疗作用及机制。方法SPF级C57BL/6小鼠60只,除正常对照组小鼠外,其余小鼠均给予2.5%DSS水溶液,自由饮用7 d制备溃疡性结肠炎模型,模型评价后再随机分为模型组、美沙拉嗪组及胃肠安丸高剂量组、中剂量组、低剂量组。胃肠安丸低、中、高剂量组分别给予0.015、0.03、0.06 g/(kg·d)胃肠安丸混悬液0.5 mL灌胃,1次/d;美沙拉嗪组给予0.52 g/(kg·d)美沙拉嗪混悬液0.5 mL灌胃,1次/d;正常对照组和模型组给予等体积纯水灌胃,均连续干预10 d。对比各组小鼠疾病活动指数(DAI)评分、结肠长度,用HE染色观察小鼠结肠组织病理形态学变化,用流式细胞术检测脾组织中Treg、Th17、CD4^+、CD8^+细胞百分比,ELISA法检测血清细胞因子TNF-α、IL-6、IL-8、IL-10、CRP水平。结果药物干预过程中,各组小鼠体质量均逐日增加,腹泻、便血、体质量下降等症状逐日缓解,与模型组相比,美沙拉嗪组和胃肠安丸高剂量组能更快地缓解上述症状,2组DAI评分逐日下降(P<0.05)。药物干预结束后,与模型组比较,胃肠安丸高剂量组和美沙拉嗪组小鼠结肠较长(P<0.05),结肠组织充血、间质水肿及炎性细胞浸润较轻,CD4^+、CD8^+、Treg细胞百分比及血清IL-10水平较高(P<0.05),Th17细胞百分比及血清TNF-α、IL-6、IL-8、CRP水平较低(P<0.05)。结论胃肠安丸对DSS诱导的小鼠肠道黏膜损伤有一定的修复作用,其作用机制可能与恢复Treg/Th17免疫平衡以及调节相关细胞因子水平有关。