去甲斑蝥素增强马法兰抗骨髓瘤作用机制研究

目的 研究去甲斑蝥素联合马法兰对多发性骨髓瘤细胞增殖与凋亡的影响及其作用机制.方法 去甲斑蝥素单独或联合马法兰给药后,MTT法观察对人多发性骨髓瘤细胞U266株生长的抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡率,Westernblotting检测核因子-κB P65 (NF-κB P65)、NF-1cB抑制因子IκBα、磷酸化IBα(p-IκBα)、survivin、Bcl-2和Bax蛋白表达的影响.制备多发性骨髓瘤小鼠模型,观察去甲斑蝥素及其与马法兰联合给药对肿瘤生长的抑制作用.结果 去甲斑蝥素能增强马法兰的细胞毒和诱导细胞凋亡作用.与马法兰单独给药组比较,联合给药组使U266细胞核NF-κB P65和胞浆p-IκBα的表达量分别由113±0.08、0.83±0.08降至0.26±0.02、0.090±0.002;马法兰对IκBα的表达无影响,但去甲斑蝥素能促进IκBα的表达,二者合用能显著促进胞浆IκBα的表达;与马法兰单独给药组比较,联合给药组survivin和Bcl-2的表达量分别由1.03±0.10、0.72±0.05降至0.52±0.04、0.06±0.01,而Bax由0.29±0.03升至0.75±0.06.体内实验也证实去甲斑蝥素能增强马法兰的抗肿瘤作用.结论 去甲斑蝥素通过抑制NF-κB/p-IκBα途径,调节下游信号分子survivin、Bcl-2和Bax的表达,增强马法兰的抗骨髓瘤作用.     

去甲斑蝥素诱导食管癌细胞凋亡作用研究

目的：探讨去甲斑蝥素诱导食管癌细胞凋亡的作用及机制。方法：对去甲斑蝥素作用后细胞凋亡及增殖的变化进行流式细胞术分析,通过免疫细胞化学技术对用药前后凋亡相关基因（Fas、bcl-2、caspase8）的表达情况进行检测。结果：去甲斑蝥素对人食管癌细胞凋亡具有诱导作用,能够诱导Eca-109细胞发生形态改变。从流式细胞仪分析的结果中可知,在DNA组方图上,食管癌Eca-109细胞出现了典型的亚二倍体峰即凋亡峰,同时细胞周期中的分布也出现了明显的变化。根据显示的免疫细胞化学结果,食管癌Eca-109细胞在经过去甲斑蝥素作用后,Fas、caspase8蛋白表达出现明显升高（P〈0.05）,而bcl-2蛋白表达则出现显著降低（P〈0.05）。结论：去甲斑螫素对食管癌Eca-109细胞增殖具有抑制作用并且能够诱导其凋亡,该作用的实现可能与下调bcl-2蛋白表达和上调Fas、caspase8蛋白表达有关。     

去甲斑蝥素诱导肿瘤干细胞凋亡作用研究

目的探究去甲斑蝥素(NCTD)对肿瘤干细胞促凋亡作用。方法分别以UMUC-3膀胱癌和Hep G2肝癌细胞为研究对象,通过无血清、低吸附、单克隆的方法筛选肿瘤干细胞(CSC),实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测CSC干性标志物表达变化,MTS法检测NCTD及紫杉醇(PTX)对CSC的抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡。结果 2种细胞经筛选获得成球生长细胞克隆,其干性基因NANOG、OCT4、ABCG2、CD133、CD34表达明显升高,释放入含血清培养基后干性基因表达下调。经筛选所得的CSC对PTX高度耐药,但对NCTD耐药性低。NCTD可诱导CSC凋亡,但对干性基因表达没有显著影响。结论 NCTD诱导凋亡杀伤CSC,但对CSC分化没有显著影响。     

β-榄香烯抗肝癌的促凋亡机制研究

目的：研究中药莪术提取物β-榄香烯对人肝癌HepG2 细胞增殖抑制及诱导凋亡,以及小鼠肝癌H22 荷瘤小鼠凋亡相关蛋白表达的作用。方法:体外培养人肝癌HepG2 细胞,MTT 法检测β-榄香烯对细胞增殖的影响,Annexin V-FITC/PI 双染检测细胞凋亡。通过建立H22 小鼠肝癌荷瘤模型,观察β-榄香烯对荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用及凋亡相关蛋白的表达。结果：β-榄香烯对HepG2 细胞具有抑制增殖的作用,呈剂量和时间的依赖性;Annexin V-FITC/PI 法检测到早期凋亡细胞。不同实验组对荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用程度不同,各药物浓度组Caspase-3 蛋白均上调（P<0.05）,P65 蛋白均下调。结论：β-榄香烯可有效抑制人肝癌HepG2 细胞的增殖,其抑制癌细胞增殖的途径是通过诱导细胞发生凋亡,并且与上调凋亡相关蛋白Caspase-3、下调NF-κB P65 相关。     

去甲斑蝥素对人肝癌HepG2细胞凋亡的影响

目的：探讨去甲斑蝥素对HepG2细胞凋亡的影响。方法：采用形态学观察和流式细胞分析技术。结果：去甲斑蝥素作用HepG2细胞后,凋亡小体形成,凋亡率增加。结论：去甲斑蝥素诱导HepG2细胞凋亡。     

去甲斑蝥素抑制人骨肉瘤U2OS细胞生长及其机制研究

目的：探讨去甲斑蝥素抑制人骨肉瘤U2OS细胞生长的作用及其分子机制,为开发抗骨肉瘤新药提供实验基础。方法：以不同浓度的去甲斑蝥素处理骨肉瘤U2OS细胞,应用MTT法检测细胞生长抑制率,用Bliss法计算IC50值,通过流式细胞术和Hoechst33258荧光染色检测细胞凋亡,Caspase-3、8、9活性检测试剂盒检测其活性。结果：5、10、20、40、80μg/mL的去甲斑蝥素明显抑制骨肉瘤U2OS细胞生长并呈剂量依赖关系,48h的IC50值为26.15μg/mL;20μg/mL去甲斑蝥素作用12、24、48h诱导U2OS细胞的凋亡率分别为：7.8%、26.3%和43.9%,并出现明显的凋亡特征性形态变化;去甲斑蝥素处理U2OS细胞48h后Caspase-3、8、9的活性明显增强。结论：去甲斑蝥素可通过激活Caspase级联活化而抑制骨肉瘤U2OS细胞生长并诱导凋亡。     

去甲斑蝥素杀伤HeLa细胞机制研究

目的研究去甲斑蝥素(NCID)杀伤肿瘤细胞的机制。方法用流式细胞光度术测量 NCTD 对细胞 DNA 复制的作用;用同步化 HeLa 细胞检测 NCTD 作用的时相性;间接免疫荧光显示胞质微管结构的改变及与 M 期阻滞、细胞死亡的相关性。结果 NCTD 不抑制细胞 DNA 复制,不杀伤 G_1期、S 期细胞;5、10μg/ml时,使胞质微管改变、M 期阻滞、畸形率升高,强烈杀伤 HeLa 细胞。2μg/ml 时,不杀伤细胞,仅促进增殖。结论 NCTD 具有刺激细胞增殖和杀伤肿瘤细胞的双向作用,并呈剂量依赖性。临床应用须达到足够剂量方有抗癌效果。     

去甲斑蝥素诱导人肝癌Huh7细胞凋亡和周期阻滞的机制研究

目的 研究去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)对人肝癌Huh7细胞毒性及作用机制.方法 10～100μmol/L去甲斑蝥素干预人肝癌Huh7细胞后,甲基噻唑蓝法检测去甲斑蝥素对Huh7的细胞毒性;46μmol/L去甲斑蝥素干预人肝癌Huh7细胞后,倒置显微镜下观察Huh7细胞的形态学变化,流式PI染色法...     

去甲斑蝥素干扰HL-60肿瘤细胞周期及其机制研究

目的明确去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)对肿瘤细胞周期的影响,进一步阐明NCTD的抗肿瘤作用机制。方法体外培养HL-60细胞,NCTD作用后采用3H-TdR掺入实验检测DNA复制;流式细胞术检测细胞周期进程;Western blotting检测细胞周期调控蛋白Cdk1、Cyclin B1、Cdc 25c表达变化。结果不同浓度(16~128μmol/L)NCTD作用于HL-60细胞12 h后,DNA复制受到抑制,细胞周期出现明显的S期累积,并呈剂量依赖性趋势;同时观察到G2/M的阻滞,且调控G2/M周期进程的调节蛋白Cdk1、Cyclin B1及Cdc 25C蛋白表达下调。结论 NCTD可抑制HL-60细胞DNA复制、下调周期调控蛋白从而干扰肿瘤细胞的周期进程。     

去甲斑蝥素诱导K562细胞凋亡的影响

目的:探讨去甲斑蝥素(NCTD)对人白血病细胞株K562细胞增殖的抑制作用。方法:用流式细胞仪测定NCTD对K562细胞体外培养过程中细胞毒性、细胞凋亡及细胞周期的影响。结果:NCTD对K562细胞有较强的增殖抑制作用;在作用24小时后达到凋亡高峰;24小时各浓度NCTD作用后,G_1期细胞百分数均减少,S期与G_2+M期细胞百分数均增加,呈现G_2+M期阻滞现象。结论:NCTD可诱导K562细胞凋亡,抑制瘤细胞分裂增殖,且有明显的时间和剂量效应。     

去甲斑蝥素N-乳糖酰壳聚糖纳米粒的制备及其特性研究

目的 合成N-乳糖酰壳聚糖作为肝靶向载体,制备去甲斑蝥素纳米粒.方法 通过碳二亚胺缩合法制备N-乳糖酰壳聚糖,并以之为载体,采用离子诱导法制备去甲斑蝥素N-乳糖酰壳聚糖纳米粒,以粒径分布、包封率、载药量为综合指标,正交试验设计优化载药纳米粒的制备工艺,并考察其体外释放特性.结果 合成的N-乳糖酰壳聚糖的取代度为8.92%,优化工艺制备的N-乳糖酰壳聚糖载药纳米外观圆整,平均粒径(118.7±8.84)niB,包封率(57.92±0.40)%,载药量(10.38±0.06)%,其体外释药遵循Higuchi方程.结论 半乳糖修饰壳聚糖载药纳米粒具有良好的缓释特性.     

去甲基斑蝥素纳米粒肠道吸收的体内外相关性研究

目的 考察去甲基斑蝥素壳聚糖纳米粒(NCTD-CS-NP)的体外释放以及其在体、离体肠吸收特征,并建立三者之间的相关性.方法 采用离子诱导交联法制备NCTD-CS-NP,动态透析法考察其体外释药动力学;以去甲基斑蝥素(NCTD)水溶液为对照,采用大鼠离体外翻肠法与在体同流法研究纳米粒制剂在大鼠小肠区段内的吸收规律;并对体外释放、离体及在体肠吸收进行相关性研究.结果 NCTD与NCTD-CS-NP在大鼠小肠部位的吸收速率常数(K_a)依次为:十二指肠>空肠>回肠>结肠;两种剂型在十二指肠的K_a分别为15.69、29.16 h~(-1),纳米粒制剂的吸收显著好于水溶液;同一剂型,不同质量浓度药物的大鼠小肠部位的吸收速率之间无显著影响(P>0.05),均符合一级吸收动力学过程;离体小肠外翻吸收的趋势与在体吸收一致.仅K_a稍有降低,二者呈现良好的相关性(r=0.999 4).结论 壳聚糖纳米粒有利于药物释放,可有效促进NCTD在肠黏膜的吸收;NCTD在肠道中上部吸收明显,药物质量浓度对吸收速率尤显著影响;NCTD体外释药、在体、离体肠吸收三者之间相关性良好.     

去甲基斑蝥素的药学研究与临床应用进展

目的 综述近年来国内外关于去甲基斑蝥素的药学研究和临床应用进展。方法 分析和归纳了去甲基斑蝥素的抗肿瘤作用及机制探讨，肝损伤研究，新剂型研究及临床用于治疗原发性肝癌及慢性肝炎的文献报道。结果与结论 去甲基斑蝥素的研究主要集中在抗肿瘤活性和机制探讨及临床应用方面，而对其新剂型方面的研究尚存在较大空间。     

补骨脂素的植物雌激素作用及其机制探讨

目的:利用雌激素受体(ER)α,β阳性T47D细胞和子宫内膜癌Ishikawa细胞观察补骨脂素的雌激素样作用,并探讨其可能的作用机制。方法:以1×10^-8mol.L^-1雌二醇(E₂)为阳性对照药,利用MTT细胞增殖试验观察1×10^-5~1×10^-9mol.L^-1补骨脂素对T47D增殖的影响,同时观察1×10^-6mol.L^-1和1×10^-7mol.L^-1补骨脂素对Ishikawa细胞增殖的影响;以半定量RT-PCR法检测1×10^-6mol.L^-1和1×10^-7mol.L^-1补骨脂素对T47D细胞雌激素效应基因PR mRNA表达情况的影响;并以雌激素受体拮抗剂ICI 182,780为工具药进行干预。同时,通过流式细胞术检测1×10^-6mol.L^-1和1×10^-7mol.L^-1补骨脂素引起T47D细胞ER-α,ER-β含量的变化。结果:1×10^-5~1×10^-7mol.L^-1补骨脂素能够显著促进T47D细胞增殖;1×10^-6mol.L^-1和1×10^-7mol.L^-1补骨脂素对Ishikawa细胞增殖也有显著的促进作用;RT-PCR结果显示:1×10^-6mol.L^-1和1×10^-7mol.L^-1补骨脂素可使T47D细胞PR mRNA表达显著增加,表现出雌激素样作用,而且以上效应可被ICI 182,780拮抗。1×10^-6mol.L^-1和1×10^-7mol.L^-1补骨脂素还可诱导T47D细胞ER-α,ER-β表达明显增加。结论:补骨脂素具有植物雌激素作用,并且其作用是通过ER途径介导的。     

Study on the immunosuppressive effects of berbamine and its mechanism

The immunosuppressive effects of berbamine on murine immune functions were observed. The results showed that berbamine could significantly inhibit the proliferative response of spleen cells to ConA and LPS, reduce the amount of haemolytic plaque forming cells and also weaken the delayed type hypersensitivity (DTH) reaction and mixed lymphocyte reaction (MLR) induced by allogenic antigen. Furthermore, it showed that berbamine could decrease the ratio of CD4 positive cells to CD8 positive cells of spleen T lymphocytes by FACS assay which may be one of the mechanisms of the action of berbamine. © 1997 John Wiley & Sons, Ltd.     

多糖抗肝损伤作用及其机制研究进展

肝损伤是各种肝脏疾病共有的一种病理状态,其持续恶化会导致肝硬化、肝纤维化、肝癌。因此,寻找对抗肝损伤有效物质受到广泛关注。活性多糖广泛存在于植物、微生物、动物内,具有高效、低毒、副作用小的特点,已成为抗肝损伤天然药物制剂领域的研究热点,也取得了较多的进展。该文从抗肝损伤的多糖类型、肝损伤的发病类型及发病机制等方面对国内外相关文献进行归纳分析,并对多糖在抗肝损伤方面的开发利用前景进行了展望。研究结果显示,植物多糖、动物多糖和微生物多糖具有良好的抗肝损伤效应,主要通过抗自由基损伤、对抗肝细胞钙超载、调节线粒体功能等发挥抗化学性肝损伤功效,和通过调节细胞因子、抑制补体系统激活、抑制炎性介质产生、防止肝细胞凋亡等发挥抗免疫性肝损伤功效。可见多糖具有资源丰富、效应多样、作用靶点多、作用途径广等特性,是潜在的抗肝损伤药物制剂。     

The protective effects of Propolis on hepatic injury and its mechanism

AbstractPropolis (PP) is a sticky substance that is collected from plants by honeybees. The purpose of this study was to investigate the protective effects of PP on hepatotoxicity induced by acetaminophen (AA, paracetamol) and the mechanism of its hepatoprotective effect. In rat hepatocyte culture, pretreatment with PP (1, 10, 100, 200 and 400 microg/mL, 24 h) significantly decreased the cytotoxicity of AA (0.5 mm) in a dose-dependent manner. In mice, pretreatment with PP (10 and 25 mg/kg, p.o., 7 days) also decreased the mortality and the incidence and severity of hepatic necrosis induced by AA (400 mg/kg, i.p.). After treatment with PP for 7 days, the hepatic enzyme activities of cytochrome P450 monooxygenases (P450s), UDP-glucuronyltransferase, phenolsulphotransferase (PST), glutathione S-transferase (GST) were measured in both rats and mice. In rats, PP (50 and 100 mg/kg, p.o.) decreased the activity of P4502E1, but significantly increased the activities of GST and PST. On the other hand, in mice treated with PP (10 and 25 mg/kg, p.o.), the activities of P4501A2, 2B1, 3A4 and 2E1 were dramatically inhibited, and the activity of PST was significantly enhanced. These results suggest that PP has a protective effect on hepatic injury, and that its effect may be explained by inhibition of phase I enzymes and induction of phase II enzymes.     

The diarrhoeogenic and antidiarrhoeal bidirectional effects of rhubarb and its potential mechanism

Aim of the study

The present study investigated the pharmacological effects of different extracts of rhubarb on intestinal function of mice, further to explore possible reasons for the adverse effects of long-term use of rhubarb as a purgative.

Materials and methods

The total extract of rhubarb (TR) was extracted with 60% ethanol and the total anthraquinones extract (TA), total tannins extract (TT) and remaining components extract (RC) of rhubarb were separated from TR using macroporous resin. The pharmacological effects of each extract on the intestinal function of mice were evaluated by defecation test and the antidiarrhoeal activity of rhubarb tannins as well as its mechanism was studied by different animal models and histopathological examination.

Results

Both TR and TA produced purgative activities, but the purgative activity of TA was stronger than that of TR. Successive administration of TT produced an antidiarrhoeal activity in a time- and dose-dependent manner. Besides, successive administration of RC showed no significant effect on the intestinal function of mice. The antidiarrhoeal activity of rhubarb tannins was confirmed directly for the first time and its mechanism was probable that rhubarb tannins generated protein-precipitating reaction to the gastrointestinal mucosa due to its protein-precipitating action.

Conclusions

The results confirmed that rhubarb had the diarrhoeogenic and antidiarrhoeal bidirectional effects due to the coexistence of anthraquinones and tannins. The bidirectional effects might be the reason or one of the reasons for the adverse effects of long-term use of rhubarb as a purgative.     

去甲斑蝥素脂质体的制备方法及理化性质研究

 目的筛选最佳去甲斑蝥素脂质体的制备方法并研究其理化性质。方法以包封率为测试指标,考察去甲斑蝥素脂质体的制备方法、药-脂比、胆固醇含量、荷电性、水相pH值、离子强度等因素,观察其显微结构并考察其粒径和粒度分布、体外释放特性及初步稳定性。结果采用薄膜分散法,药-脂比为1:20,磷脂-胆固醇比为2:1、水相介质pH为6.8的条件制备去甲斑螫素脂质体的包封率较高,可达47.5%。粒径约为360nm,体外释放度考察表明,在5h释放达到平衡,释放度为36.9%。在低温4℃条件下放置6个月,包封率和粒径基本没有变化。结论通过工艺和处方考察,优选出最佳的制备条件,制得的去甲斑蝥素脂质体包封率较高,比较稳定。