黄连解毒汤方药3种方法提取液成分比较

目的 选择黄连解毒汤方药的提取工艺.方法 以小檗碱、黄芩素、栀子苷、总生物碱、总黄酮、1000D提取物为指标,采用半仿生提取法(SBE法)、醇提取法(AE法)、水提取法(WE法)进行比较研究.结果 6个指标综合评价Y值为:SBE液>AE法>WE液.结论 黄连解毒汤以采用SBE法提取为佳.     

黄连解毒汤及配伍成分的降脂及抗动脉粥样硬化作用

目的:对黄连解毒汤在降脂及抗动脉粥样硬化的作用进行综合考查,探讨黄连解毒汤及其配伍成分在降脂及抗动脉粥样硬化研究上应该进一步深化的课题。方法:对近10年来的研究状况进行总体回顾,结合最新研究成果,系统阐述黄连解毒汤在降脂及抗动脉粥样硬化方面的直接和潜在的优势及作用机制。结果:临床和实验研究方面的数据表明,黄连解毒汤不仅能降低肝细胞中胆固醇的浓度,而且能治疗引起冠状动脉粥样硬化的危险因素如高血压等疾病。方中各组成成分也具有直接或间接的降脂和抗动脉粥样硬化的作用。结论:黄连解毒汤具良好的降脂和抗动脉粥样硬化的研究前景,需要用现代科学的研究手段进行深入研究,以期扩大其临床应用范围。     

黄连解毒汤及其不同配伍组方成分溶出变化研究

目的利用高效液相色谱法建立了黄连解毒汤(黄连、黄芩、黄柏、栀子)水提物的指纹图谱分析方法,结合黄连解毒汤16个全排列,评价不同配伍组方对黄连解毒汤成分溶出的影响。方法 HPLC法,反相C18柱,体积流量为1.0 mL/min,UV检测器(λ=254 nm),流动相为甲醇-水(含0.1%醋酸),梯度洗脱。结果分析、比较黄连解毒汤及其不同配伍组方的高效液相图谱,黄芩与黄连、黄柏配伍产生沉淀使生物碱溶出降低;黄芩与栀子配伍使环烯醚萜类成分溶出降低,但四药配伍溶出增加为112.6%;不同配伍组合黄酮类成分溶出增加降低不尽相同,但四药配伍增加为480.7%。结论 方法全面准确可靠,可作为黄连解毒汤体外成分分析研究的依据。     

黄连解毒汤交叉配伍对氧自由基清除作用的研究

目的：观察黄连解毒汤交叉配伍对活性氧自由基的清除作用。方法：用化学发光法研究了黄连解毒汤交叉配伍对Ｈ２Ｏ２及由碱性邻苯三酚体系产生的Ｏ２＾－清除作用,并观察了黄连解毒汤交叉配伍ｐＨ值变化。结果：黄连解毒汤及交叉配伍提取液对Ｈ２Ｏ２及Ｏ２＾－均具有清除作用,而且黄连解毒汤全方与单味药及交叉配伍相比较,其清除作用最强。黄连解毒汤交叉配伍其ｐＨ值变化不大。结论：黄连解毒汤具有抗氧化作用。     

黄连解毒汤中指标性成分药动学与药效学相关性的初步研究

目的:研究黄连解毒汤中指标性成分在火热证脑缺血损伤模型大鼠的时量关系与抗火热证脑缺血效应的相关性。方法:火热证电凝法建立局灶性脑缺血模型,给药组,假手术组。给药组大鼠复制火热证脑缺血模型成功后灌胃给予黄连解毒汤,按0.083,0.25,0.5,0.75,1,2,3,4,6,8,12,24 h时间点取血,测定各指标性成分在大鼠体内的药时变化,绘制药-时曲线;取模型组,给药组,假手术组0.083,0.25,0.5,1,2,3,4,6,8,12,24 h时间点的脑组织,测定脑组织中白细胞介素(IL-6),肿瘤坏死因子(TNF-α)的变化,绘制时-效曲线。结合药时曲线和时效曲线,评价黄连解毒汤指标性成分在黄连解毒汤治疗火热证脑缺血疾病中所发挥的作用。结果:黄连解毒汤指标性成分的药动学行为不同;药效实验表明3种指标性成分的起效时间不同,持续时间亦不相同;黄连解毒汤的抗火热证缺血性脑损伤作用与其指标性成分的血药浓度密切相关。结论:黄连解毒汤全方能发挥抗火热证缺血性脑损伤作用,其作用的强弱与方中主要指标性成分在体内的含量相关,且各主要指标性成分发挥效应的时效存在差异。其对火热证脑缺血的保护作用机制可能与其抗炎作用相关,与传统中医上认为的黄连解毒汤有清热解毒的功效相一致。     

中药材重金属元素及其与指标性成分相关性分析

通过第四次全国中药资源普查试点工作从11个省份收集到12种共525批中药材,依据2015年版《中国药典》中关于Pb,Cd,As,Hg,Cu 5种重金属元素和各种中药材指标性成分测定方法,分别对525批中药材样品的重金属元素和指标性成分含量进行检测,运用SPSS 22.0软件分析不同部位中药材重金属含量相关性和单一中药材指标性成分与重金属元素之间的相关性。结果表明,根类及根茎类中药材中Pb,As,Cu,Cd这4种金属元素之间相互呈显著正相关,全草类中药材中Pb,As,Cu,Hg这4种金属元素之间相互呈显著正相关,而以女贞子为例的果实类中药材和以侧柏叶为例的叶类中药材中只有3种金属元素之间存在显著正相关,Cu和Pb之间存在负相关,说明根及根茎类中药材和全草类中药材中重金属元素的协同效应要高于果实类和叶类中药材。丹参的指标性成分丹参酮类与重金属As,Hg之间存在显著正相关,推测与丹参中丹参酮类成分和As离子生成配合物有关,具体的金属配合物发挥作用的机制需要进一步深入研究。     

不同相对截留分子量聚醚砜超滤膜精制黄连解毒汤效果的研究

目的 以黄连解毒汤(黄连、黄柏、黄芩和栀子)为研究对象,探讨采用不同相对截留分子量聚醚砜超滤膜处理后高分子物质和指标性成分变化规律以及药理作用差异,为优选黄连解毒汤超滤工艺研究提供依据.方法 逐级用pes-5w、pes-3w、pes-2w、pes-6k的超滤膜处理黄连解毒汤离心液,测定不同膜处理后渗透液和离心液中高分子物质(果胶和蛋白质)和药用指标性成分(栀子苷、黄芩苷、巴马汀和小檗碱)的质量分数及其对嗜铬细胞瘤(PC-12细胞)缺血缺氧的保护和改善作用.结果 随着膜相对截留分子量的降低.各级渗透液的高分子物质的质量分数不同程度地降低;指标性成分的质量分数除黄芩苷逐级降低外,其他都呈升高趋势;pes-3w的综合指标性成分质量分数最高;药理实验证明pes-5w渗透液对PC-12细胞缺氧缺血有很好的改善作用.结论 pes-Sw超滤膜既能有效去除非药用成分或药用性较差的物质,又能保留有效成分,适合于黄连解毒汤的精制.     

黄连解毒汤对神经细胞保护作用活性成分的筛选

目的:探讨黄连解毒汤及其主要成分小檗碱、黄芩苷、巴马汀、栀子苷对过氧化氢(H2O2)、谷氨酸(Glu)所致神经细胞损伤的影响.方法:制备H2O2,Glu损伤入神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)、小鼠神经母细胞瘤细胞(Neuro-2a)模型,设正常对照、模型、黄连解毒汤、小檗碱、黄芩苷、巴马汀及栀子苷组,筛选浓度为7.812 5,15.625,31.25,62.5,125,250,500 mg·L-1,应用MTT法检测药物对损伤后细胞增殖的影响.结果:黄连解毒汤能够促进SH-SY5Y细胞增殖,适当浓度的栀子苷能够促进SH-SY5Y,Neuro-2a细胞增殖,并对H2O2,Glu损伤的SH-SY5Y细胞有保护作用,对H2O2损伤的Neuro-2a也具有保护作用.结论:栀子苷可能为黄连解毒汤对神经细胞保护作用的有效成分.     

“黄连解毒汤”体外抗内毒素作用的实验研究

目的 :黄连解毒汤是治疗急性感染性疾病的一个有效药物 ,为证实其抑菌作用机理。方法 :以黄连解毒汤提取液 ,采用显色基质偶氮法进行体外抗内毒素的实验研究。结果 :黄连解毒汤有较显著的减毒作用 ,关于电镜下观察到其作用机制 ,是以破坏降解内毒素形态的直接方式而不是对内毒素活性的暂时性抑制。结论 :该药物不仅通过提高网状内皮系统的吞噬功能 ,加速内毒素的廓清来发挥作用 ,其对细菌毒素的直接中和亦为其主要的作用方式。     

基于代谢组学技术的黄连解毒汤配伍规律研究

目的:研究黄连解毒汤组方中君、臣、佐、使药的配伍规律.方法:取雄性Wistar大鼠54只,分为空白组、模型组、黄连组、黄连-黄芩组、黄连-黄芩-黄柏组、黄连解毒汤组;模型组和各给药组于大鼠背部皮下注射2,4-二硝基苯酚( 25 mg·kg-1大鼠体质量)造模;各给药组干造模前30 min ig给予黄连、黄连-黄芩、黄连-黄芩-黄柏、黄连解毒汤1次(分别为7.2,12,16.8,24 g生药/kg大鼠体质量);收集造模后1,3,5,7,13,22 h各时间点的尿液,尿液样品进UPLC-TOF/MS检测分析,质谱数据采用MarkerLynx XS软件统计分析,并采用主成分分析法(PCA)和正交偏最小二乘-判别分析法(OPLS-DA)对获得的数据进行处理.结果:在得分图中,黄连组与模型组混为一组,黄连-黄芩组与模型组较接近,离空白组较远,黄连-黄芩-黄柏组与模型和空白组显著聚类区组,并且与空白组较接近,黄连解毒汤组与模型组和空白组显著聚类区组,与它们的距离相当;同时黄连、黄连-黄芩、黄连-黄芩-黄柏和黄连解毒汤各给药组分别对33,15,36,40个生物标志物具有干预作用,综合评价各实验组对热病证候的整体代谢和生物标志物的干预作用,结果黄连解毒汤全方作用最好,黄连-黄芩-黄柏次之,黄连作用第三,黄连-黄芩的干预作用最弱.结论:黄连作为方中君药发挥主要的药理作用,黄柏和栀子作为佐使药也发挥了其各自的作用,但黄芩作为臣药的地位有待商榷.     

黄连解毒汤中小檗碱在脑缺血模型大鼠体内药动学与药效学相关性研究

目的研究黄连解毒汤中小檗碱在脑缺血损伤模型大鼠体内的药动学过程及其与黄连解毒汤抗脑缺血作用的相关性。方法实验分为假手术组和模型组,模型组以电凝法制备局灶性脑缺血模型。两组大鼠均ig给予黄连解毒汤(10.0 g/kg),分别于给药后0.083、0.25、0.5、1、2、3、4、6、8、12、24 h眼眶取血,HPLC法测定小檗碱在大鼠血浆中的变化,绘制药-时曲线;测定模型组和假手术组大鼠给药后不同时间点血浆中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平,结合小檗碱的药-时曲线和时-效曲线,比较相同剂量的黄连解毒汤给药后小檗碱在假手术组及模型组大鼠体内的药动学参数的差异以及模型组给药后的药效学指标变化,评价小檗碱在黄连解毒汤治疗脑缺血疾病中的作用。结果小檗碱在模型组大鼠体内吸收迅速、代谢快、维持时间长,表现出其体内较强的循环性特点。与假手术组相比,局灶性脑缺血大鼠给予黄连解毒汤后,对小檗碱吸收充分,血中MDA水平显著降低,时-效曲线呈现双峰现象。造模后大鼠血清SOD活性降低,黄连解毒汤能提高SOD至正常水平,模型组大鼠的时-效曲线也出现双峰现象。结论黄连解毒汤抗缺血性脑损伤作用可能与小檗碱在体内的水平有关,黄连解毒汤抗缺血性脑损伤作用与其升高SOD水平、降低MDA水平有关。     

黄连解毒汤对UC小鼠的抗炎作用、入血成分测定及其作用靶点的虚拟筛选

考察黄连解毒汤(HLJD)对小鼠溃疡性结肠炎(UC)的作用,测定入血成分以及虚拟筛选入血成分的作用靶点,分析作用机制。将60只Balb/c小鼠随机分成空白组、模型组、美沙拉秦组(0.3 g·kg^-1)以及HLJD高、中、低剂量组(24.66,12.33,6.17 g·kg^-1)。除空白组外,各组小鼠自由饮用2.5%葡聚糖硫酸钠溶液诱导UC,同时HLJD组和美沙拉秦组小鼠灌胃给予相应药物,连续7 d。每日观察小鼠,进行疾病活动指数(DAI)评分。实验末,HE染色观察小鼠结肠病理变化,ELISA测定结肠组织中IL-1β,IL-6和TNF-α含量,UPLC-Q-TOF-MS测定入血成分。通过PharmMapper反向对接筛选入血成分的作用靶点,通过TTD,OMIM,GeneCards数据库检索UC疾病靶点,选取成分靶点和疾病靶点的交集作为HLJD治疗UC的作用靶点。利用STRING数据库进行GO和KEGG富集分析。利用Discovery Studio将入血成分与排名靠前的作用靶点进行分子对接。结果显示,与空白组相比,模型组小鼠DAI显著上升(P<0.05),镜下可见炎症细胞数量和浸润程度明显增加。与模型组相比,HLJD组小鼠DAI显著降低(P<0.05),炎症细胞数量和浸润程度减轻。模型组IL-1β,IL-6和TNF-α水平显著升高(P<0.01),HLJD组炎症因子水平显著降低(P<0.05)。经UPLC-Q-TOF-MS鉴定10个入血成分。网络药理学分析结果显示,作用靶点主要富集在对有机物、化学物质、含氧化合物的反应等129条生物过程,以及IL-17,TNF,hepatitis B等16条信号通路。分子对接结果显示,黄柏内酯、巴马汀和小檗碱可通过氢键等形式与CASP3和MMP9靶点结合。综上所述,HLJD可减轻DSS诱导的UC小鼠结肠黏膜炎症浸润和黏膜损伤,其作用机制可能与黄柏内酯、巴马汀和小檗碱等入血成分作用于CASP3,MMP9等靶点,进而调控IL-17,TNF等信号通路有关,最终可降低结肠组织IL-1β,IL-6和TNF-α水平发挥抗炎作用。     

Bioanalysis and Pharmacokinetics of Eight Active Components from Huanglian Jiedu Decoction in Rat Plasma by LC-ESI-MS/MS Method

Objective To develop a sensitive and rapid liquid chromatography-electrospray ionization-tandem mass spectrometry(LC-ESI-MS/MS) method for the simultaneous determination of wogonin, coptisine, berberine, palmatine, jatrorrhizine, phello-dendrine, magnoflorine, and wogonoside in rat plasma and to evaluate the pharmacokinetic characteristics of Huanglian Jiedu Decoction(HJD). Methods LC separation was performed on an Acquity HSS T3 column(100 mm × 2.1 mm, 1.8 μm) using gradient elution with the mobile phase consisting of acetonitrile and 0.1% formic acid water. The detection was accomplished by using positive electrospray ionization in multiple-reaction monitoring mode. Plasma samples were pretreated by protein precipitation. Results The method showed a good linearity over a wide concentration range(r2 0.99). The lower limits of quantification were 0.20 ng/mL for coptisine and phellodendrine, 0.48 ng/mL for berberine, 0.10 ng/mL for jatrorrhizine, 0.32 ng/mL for magnoflorine, 0.30 ng/mL for palmatine, and 4.80 ng/mL for wogonin and wogonoside, respectively. The intra- and inter-day precision of the analytes was less than 12.11%, while the accuracy was between-14.46% and 4.86%. The mean recovery of all the analytes ranged from 93.10% to 110.91%. Conclusion This validated method offers the advantages of high sensitivity. It is successfully applied to evaluating the pharmacokinetic properties of HJD.     

黄连解毒汤合五味消毒饮治疗急性感染性心内膜炎的临床效果

目的：探讨黄连解毒汤合五味消毒饮对急性感染性心内膜炎（AIE）患者炎性反应状态的影响。方法：选取2017年1月至2018年6月邯郸市中心医院收治的AIE患者68例作为研究对象,按照入院顺序随机分为对照组和观察组,每组34例。2组均给予敏感抗生素治疗,观察组同时给予黄连解毒汤合五味消毒饮治疗。1周为1个疗程,2组均连续治疗4个疗程后进行临床疗效的观察。治疗后统计2组患者临床疗效,检测并比较2组治疗前后主要及次要症状、体征改善情况及血清炎性反应递质水平变化,记录并比较2组患者不良反应发生情况。结果：治疗后观察组临床治疗有效率为94.12%,较对照组的73.53%显著升高,差异有统计学意义（P<0.05）;与治疗前比较,治疗后2组临床症状较治疗前明显改善,且观察组改善效果优于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;2组血清白细胞介素-6（IL-6）、血清超敏C反应蛋白（hs-CRP）、血清降钙素原（PCT）、红细胞沉降率（ESR）水平均降低,观察组低于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。2组均未见严重不良反应发生。结论：黄连解毒汤合五味消毒饮可改善AIE患者临床症状,抑制机体炎性反应,且有良好的安全性,临床疗效显著优于常规西医治疗。     

黄连解毒汤自沉淀化学成分及其抗PC12细胞损伤研究

目的探讨黄连解毒汤(HJD)自沉淀制备条件,测定自沉淀主要成分量及自沉淀对PC12细胞损伤模型的保护作用。方法以提取时间和投水量为影响因素,确定自沉淀的制备工艺;采用HPLC法,测定自沉淀中黄芩苷、小檗碱、栀子苷、巴马汀、黄连碱、汉黄芩苷的量;采用CCK-8法评价HJD上清液、自沉淀对CoCl_2损伤的PC12细胞模型作用。结果在10倍量水回流提取30 min的煎煮条件下,干燥后HJD自沉淀质量约占上清液质量的10%,自沉淀中81.28%的成分为酸碱性化合物,其中黄芩苷占42.12%,小檗碱占31.17%,黄连碱占5.89%,汉黄芩苷占1.50%,巴马汀占0.60%,未检测到中性成分栀子苷。上清液、自沉淀对CoCl_2损伤的PC12细胞的EC50值分别28.25、19.58μg/m L。结论自沉淀制备工艺操作简单,重复性好,通过成分分析,得出自沉淀的形成机制以酸碱络合为主的假想;与上清液相比,自沉淀表现出较好的神经保护活性,为HJD的二次开发提供参考。     

黄连解毒汤对胰岛素抵抗大鼠骨骼肌IRS-1表达及酪氨酸磷酸化水平的影响

目的:观察黄连解毒汤对大鼠骨骼肌胰岛素受体底物1(IRS-1)表达及其磷酸化水平的影响,探讨其改善胰岛素抵抗的分子机制.方法:采用小剂量链脲佐菌素尾静脉注射加高糖高脂饲料喂养方法建立Wistar大鼠胰岛素抵抗模型,以黄连解毒汤干预治疗10周,检测血糖和血清胰岛素,用免疫沉淀和Western印迹方法检测黄连解毒汤治疗后胰岛素抵抗大鼠骨骼肌组织内IRS-1蛋白表达水平和酪氨酸磷酸化水平的改变.结果:黄连解毒汤治疗后,胰岛素抵抗大鼠肌肉组织内IRS-1表达较模型组增加,IRS-1酪氨酸磷酸化水平较模型组显著增加.结论:黄连解毒汤提高胰岛素抵抗大鼠骨骼肌组织IRS-1蛋白表达和酪氨酸磷酸化水平,这可能是其降血糖并改善组织胰岛素敏感性的机制之一.     

黄连解毒汤对脂多糖诱导的小鼠急性肾损伤治疗作用及机制

目的 研究黄连解毒汤对脂多糖诱导的小鼠急性肾损伤的作用及作用机制。方法 雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组和黄连解毒汤低、中、高剂量（50、100、150 mg/kg）组,每组8只。连续ig黄连解毒汤3 d,末次给药2 h后,ip脂多糖（10 mg/kg）建立急性肾损伤模型。检测血清中肌酐和尿素氮水平;苏木素-伊红（HE）和高碘酸-席夫（PAS）染色检测肾组织病理变化;免疫组化法检测肾组织B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 associated X protein,Bax）表达;TUNEL染色检测肾组织细胞凋亡情况;Western blotting检测肾组织磷酸酯酶与张力蛋白同源物（phosphatase and tensin homolog,PTEN）、磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K）、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、p-PI3K和p-Akt蛋白表达。结果 黄连解毒汤明显降低急性肾损伤小鼠血清中尿素氮及肌酐水平（P<0.0...     

穴位按压与犀黄丸合黄连解毒汤联合西药治疗急性乳腺炎随机平行对照研究

[目的]观察穴位按压与犀黄丸合黄连解毒汤联合西药治疗急性乳腺炎疗效。[方法]使用随机平行对照方法,将130例住院患者按随机数字表随机分为两组。对照组64例青霉素钠,320mg/次,3次/d,肌注。治疗组66例①穴位按压(膻中、乳根、乳中、肩井、少泽、前谷、太冲等),穴位适度利用点、按、揉、压、挤、捏等手法按压刺激,每穴操作1min,2次/d。②犀黄丸合黄连解毒汤(金银花15g,连翘10g,蒲公英包煎、当归各15g,乳香、没药、王不留行各10g,赤芍20g,瓜萎仁15g,通草10g;肝气不疏加郁金、百合各10g;气虚体弱加党参、白术各15g),1剂/d,水煎200mL,早晚分服;西药治疗同对照组。连续治疗2周为1疗程。观测临床症状、WBC、不良反应。治疗1疗程,判定疗效。[结果]治疗组痊愈60例,显效5例,有效0例,无效1例,总有效率98.50%。对照组痊愈64例,显效10例,有效0例,无效6例,总有效率90.60%。治疗组疗效优于对照组(P0.05)。两组白细胞水平均有改善(P0.01),治疗组改善优于对照组(P0.01)。[结论]穴位按压与犀黄丸合黄连解毒汤联合西药治疗急性乳腺炎,疗效满意,无副作用,值得推广。     

黄连解毒汤中13种活性成分的HPLC检测及其有效部位的筛选

目的建立黄连解毒汤(HJD)中13个活性成分黄柏碱、绿原酸、木兰花碱、京尼平苷、黄连碱、表小檗碱、药根碱、小檗碱、巴马汀、黄芩苷、汉黄芩苷、汉黄芩素、千层纸素A的HPLC检测方法,利用活性成分含量和比例筛选HJD有效部位。方法借助索氏提取器采用系统溶剂提取法将HJD水煎液冻干粉依次经石油醚、醋酸乙酯、正丁醇、纯净水提取并干燥后获得HJD不同极性部位,将残渣干燥后作为沉淀部位。采用Agilent 1260型高效液相色谱仪建立HJD中13种活性成分的HPLC检测方法,并对HJD及其不同极性部位中活性成分含量进行检测,筛选HJD有效部位。结果成功建立了稳定可靠的HPLC检测方法;HJD中各活性成分含量从高到低依次为京尼平苷、小檗碱、巴马汀、黄芩苷、汉黄芩苷、黄连碱、药根碱、表小檗碱、木兰花碱、黄柏碱、汉黄芩素、绿原酸、千层纸素A。与石油醚、醋酸乙酯、水和沉淀部位相比,HJD正丁醇部位中各活性成分总量最高且其比例与HJD全方相近,为HJD有效部位。结论成功建立了HJD中13个活性成分的HPLC检测方法,经筛选HJD正丁醇部位为HJD有效部位。