Ro25-6981对缺血再灌注大鼠脑室下区神经干细胞增殖的影响

目的:探讨N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体亚单位NR2B特异性拮抗剂Ro25-6981对缺血再灌注大鼠脑室下区神经干细胞增殖的影响及可能的机制。方法:线栓法制作大鼠大脑中动脉栓塞2 h再灌注模型,随机分成假手术组、缺血再灌注对照组和Ro25-6981干预组。免疫组织化学显色观察脑室下区巢蛋白和增殖细胞核抗原(PCNA)阳性细胞数,行免疫印迹对缺血侧脑组织脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白表达水平进行定量分析。结果:缺血再灌注后脑室下区巢蛋白和PCNA阳性细胞较假手术组增加,而Ro25-6981干预组巢蛋白和PCNA阳性细胞较缺血再灌注对照组减少。缺血再灌注损伤促进了缺血侧脑组织BDNF蛋白的表达,Ro25-6981干预下调了缺血侧脑组织BDNF蛋白的表达。结论:NMDA受体亚单位NR2B能促进脑室下区神经干细胞的增殖,可能与调节BDNF表达有关。     

NDRG2对成年大鼠室管膜下区神经干细胞增殖的影响

目的:探讨NDRG2(N-myc downstream regulated gene 2)对成年大鼠侧脑室室管膜下区(subventricular zone,SVZ)神经干细胞增殖的影响。方法:成年雄性Sprague-Dawley大鼠20只,随机分为对照组(n=10)、实验组(n=10)两组。实验组给予侧脑室注射过表达NDRG2的腺病毒,对照组给予侧脑室注射腺病毒空载体。采用Brd U免疫荧光染色法检测细胞增殖情况,Tunel染色检测细胞凋亡情况。结果:Brd U染色结果显示:实验组大鼠侧脑室室管膜下区Brd U阳性细胞显著少于对照组(P0.05);Tunel染色提示:两组大鼠侧脑室室管膜下区凋亡的细胞数未见明显差异(P0.05)。结论:上调NDRG2在成年大鼠脑内的表达,会抑制其侧脑室室管膜下区神经干细胞的增殖,但不影响其细胞的存活。     

电针促进大鼠脊髓缺血再灌注损伤后内源性神经干细胞增殖

目的 探讨电针(electroacupuncture,EA)对大鼠脊髓缺血再灌注损伤(spinal cord ischemia/reperfusion injury,SCIRI)后内源性神经干细胞(endogenous neural stem cells,eNSCs)的保护作用及分子机制.方法 成年雄性SD大鼠40只,按照随机数字表法分为五组:假手术组(Sham)、缺血再灌注组(IR)、缺血再灌注+XAV939组(IR+XAV939)、缺血再灌注+电针刺激组(IR+EA)、缺血再灌注+电针刺激+XAV939组(IR+EA+XAV939).造模成功后,IR+XAV939组和IR+EA+XAV939组在损伤后30min立即腹腔注射Wnt/β-catenin信号通路抑制剂XAV939(20mg/kg),其余组注射等容量2％DMSO.IR+EA组和IR+EA+XAV939在损伤后第二天给予电针刺激(30min/次),连续5天.术后第7天,Tarlov评分评价大鼠后肢运动功能,免疫荧光检测eNSCs标记蛋白巢蛋白(nestin)表达,Western blot检测β-连环蛋白(β-catenin)、nestin蛋白表达.结果 SCIRI后,脊髓eNSCs增加,nestin和β-catenin蛋白表达增加;EA刺激后,eNSCs增生更明显,nestin和β-catenin蛋白表达增多,EA对缺血后的脊髓具有保护作用;XAV939抑制了 β-catenin蛋白表达,同时抑制了eNSCs增殖,逆转了EA的保护作用.结论 EA通过激活Wnt/β-catenin通路促进大鼠SCIRI后eNSCs的增殖.     

NMDA受体亚单位在离体大鼠海马神经干细胞中的表达

为了研究早期离体培养的胎鼠海马神经干细胞(NSCs)中NMDA受体亚单位NR1、NR2A和NR2B的表达,分离、培养、传代孕18～19d胎鼠海马NSCs,对NSCs进行nestin和分化鉴定。通过免疫荧光反应和RT-PCR法检测原代培养、传代1次、传代2次的NSCs中NMDA受体亚单位NR1、NR2A和NR2B的蛋白和mRNA表达。结果显示,从孕18～19d的胎鼠大脑海马分离培养出的NSCs,NMDA受体亚单位NR1、NR2A和NR2B的免疫荧光反应均呈阳性,这三种受体亚单位的mRNA在海马NSCs上均被检测到。上述结果提示,离体培养的胎鼠早期海马NSCs能稳定表达NMDA受体亚单位NR1、NR2A和NR2B。     

离体培养人神经干细胞中NMDA受体亚单位NR2A和NR2B的表达

目的:研究早期离体培养的人胚胎海马神经干细胞(NSCs)中NMDA受体亚单位NR2A和NR2B的表达。方法:取胎龄8～12周人胚脑海马,进行NSCs分离、培养、传代和鉴定。通过免疫细胞化学和RT-PCR等方法检测传代1次和2次的人胚胎海马NSCs中NMDA受体亚单位NR2A和NR2B的蛋白和mRNA表达。结果:自孕8～12周人胚脑海马分离培养的NSCs,NMDA受体亚单位NR2A和NR2B免疫细胞化学反应呈阳性,这两种受体亚单位的mRNA均被检测到。结论:体外培养的早期人胚胎海马NSCs能稳定表达NMDA受体亚单位NR2A和NR2B。     

大鼠肠缺血-再灌注损伤中FGFR2表达的规律

目的观察酸性成纤维细胞生长因子受体2（acid fibroblast growth factor receptor,FGFR2）在肠缺血-再灌注损伤中表达规律。方法以大鼠肠系膜上动脉（SMA）夹闭造成肠缺血-再灌注损伤模型,并将动物随机分为假手术组（C组）、生理盐水对照组（R组）、改构体aFGF治疗组（F组）。除假手术组外,其余各组动物均于缺血45min后于2、6、12、24h活杀,取小肠组织标本,免疫组化和RT—PCR检测FGFR的表达规律。结果在正常大鼠,FGFR分布在小肠绒毛上皮细胞的肠腔侧、侧壁和小肠隐窝朝向隐窝腔的-侧的细胞膜上。缺血和再灌注的初期,FGFR的表达未发生明显变化,随着再灌注时间的延长逐渐增强。FGF使FGFR的表达有明显的增强和提前表达。缺血和再灌注使FGFRmRNA的表达迅速增加,在再灌注后6h达到高峰。F组FGFRmRNA的表达较R组相应时间点显著增加（P〈0．05）。结论FGFR在肠缺血-再灌注损伤的修复中起积极作用。     

神经干细胞移植治疗视网膜缺血再灌注损伤的研究进展

视网膜缺血再灌注损伤尚无理想的治疗手段。神经干细胞是具有自我更新、多向分化潜能的细胞群,能分化成神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。随着干细胞研究技术的不断发展,通过体外培养神经干细胞,移植整合入视网膜各层并定向诱导分化为目的细胞,有望重建视网膜功能。     

局灶性脑缺血再灌注损伤对成年大鼠脑内源性神经干细胞的影响

目的：研究局灶性脑缺血再灌注损伤（focal cerebral ischemic and reperfusion injury，fCIRI）对成年大鼠脑内源性神经干细胞（endogenetic neural stern cells，eNSCs）的影响。方法：采用线栓法模拟局灶性大脑中动脉阻塞（middle cerebreal artery occlusion，MCAO）制造成年大鼠fCIRI，持续脑缺血2h后再灌注。将动物随机分组为fCIRI组和假手术对照组。腹腔注射5溴脱氧尿嘧啶（5-bromo-2-deoxyuridine，BrdU）标记具有增殖活性的细胞。在不同时间点取脑，应用免疫组化（免疫荧光法）观察eNSCs的表达。结果：与假手术对照组比较，fCIRI组缺血损伤同侧的侧脑室下区（subventricular zone，SVZ）eNSCs数量明显增多（P〈0．01）。fCIRI后eNSCs的数量变化与时间呈正相关性（P〈0．01）。结论：fCIRI能促进激活成年大鼠脑eNSCs使其进行增殖。     

前脑缺血再灌流后大鼠海马NMDA受体亚单位NR2A和NR2B蛋白质表达的变化

用免疫组织化学和图像处理方法 ,观察分析了大鼠前脑缺血 15 min后再灌流 2 h～ 7d的海马结构各区域 NMDA受体亚单位 NR2 A和 NR2 B的表达变化规律及其差异 ,藉以探讨二者在缺血性脑损伤中的作用。结果显示 :( 1) NR2 A在 CA1 区和CA3 区的表达于再灌早期表现为小幅度下降 ( P<0 .0 5 ) ,此趋势在 CA3 区可以逆转 ;但在 CA1 区逐渐加剧 ,第 7d时降至 2 1% ,NR2 A在齿状回的表达几无改变 ;( 2 )与 NR2 A不同 ,再灌后 2 h,NR2 B在 CA1 区的表达即较对照组增高 ( P<0 .0 5 ) ,并持续到再灌后 2 4h,之后转而急剧下降 ,至第 7d仅余 11% ;在 CA3 区及齿状回 ,再灌后 6～ 48h,NR2 B的表达也较对照组增高 ( P<0 .0 5 ) ;在再灌后 72 h则恢复至对照组水平。结果提示 ,缺血性脑损伤后 NR2 A和 NR2 B表达变化的不同可能是造成 CA1 区、CA3区及齿状回缺血敏感性差异的一个重要原因     

脊髓缺血再灌注损伤对大鼠水通道蛋白4表达的影响

目的:在整体水平研究脊髓缺血再灌注损伤对大鼠水通道蛋白4表达水平的影响.方法:SD大鼠72只随机分为空白组、假手术组和SCⅡ组,每组24只.建立大鼠脊髓缺血再灌注损伤模型,并于1、3、5、7天四个时间点分别处死6只.BBB评分评价神经功能,Western blot和免疫荧光方法检测AQP4的表达情况.结果:空白对照组和假手术组在不同时间点的BBB评分均为21分,SCⅡ组的BBB评分在1天时最低,随时间推移逐渐增加,3天明显优于1天(P＜0.05),5天明显优于3天(P＜0.05),5天明显优于7天(P＜0.05).Western blot在34 kD及43 kD分子量处可见特异性条带,SCⅡ组早期AQP4的表达水平显著下降,即在1、3、5、7天四个时间点AQP4的表达显著低于空白对照组和假手术组,但呈逐渐增加趋势;在7天仍显著低于正常空白组和假手术组(P＜0.05).免疫荧光检测AQP4的表达变化趋势与Western blot的检测结果相似.结论:SCⅡ存在AQP4低表达,这可能是造成SCⅡ神经功能障碍的重要原因.     

The olfactory conditioning in the early postnatal period stimulated neural stem/progenitor cells in the subventricular zone and increased neurogenesis in the olfactory bulb of rats

The olfactory memory acquired during the early postnatal period is known to be maintained for a long period, however, its neural mechanism remains to be clarified. In the present study, we examined the effect of olfactory conditioning during the early postnatal period on neurogenesis in the olfactory bulb of rats. Using the bromodeoxyuridine-pulse chase method, we found that the olfactory conditioning, which was a paired presentation of citral odor (conditioned stimulus) and foot shock (unconditioned stimulus) in rat pups on postnatal day 11, stimulated the proliferation of neural stem/progenitor cells in the anterior subventricular zone (aSVZ), but not in the olfactory bulb, at 24 h after the conditioning. However, the number of newborn cells in the olfactory bulb was increased at 2 weeks, but not 8 weeks, after such conditioning. Neither the exposure of a citral odor alone nor foot shock alone affected the proliferation of neural stem/progenitor cells in the aSVZ at 24 h after and the number of newborn cells in the olfactory bulb at 2 weeks after. The majority of newborn cells in the olfactory bulb of either the conditioned rats or the unconditioned rats expressed the neural marker NeuN, thus indicating that the olfactory conditioning stimulated neurogenesis in the olfactory bulb. These results suggest that olfactory conditioning during the early postnatal period temporally stimulates neurogenesis in the olfactory bulb of rats.     

去大脑皮质血管对成年大鼠侧脑室室管膜下层神经干细胞增殖的影响

目的:研究去大脑皮质血管对成年大鼠侧脑室室管膜下区(subependymal ventricular zone,SVZ)干细胞增殖的影响。方法:成年大鼠随机分为正常组和模型组,通过免疫组织化学的方法检测去大脑皮质血管后成年大鼠侧脑室前角、中央部、下角室管膜下BrdU标记细胞。结果:去皮质血管后大鼠侧脑室各部SVZ的BrdU阳性细胞的数目明显增多,去大脑皮质血管15d、30d大鼠侧脑室各部外侧壁和前角上壁SVZ的BrdU阳性细胞核计数均明显多于正常组。结论:去大脑皮质血管损伤可诱导大鼠脑内侧脑室室管膜下细胞的增殖。     

Ndrg2对培养大鼠神经干细胞增殖和分化的影响

目的:检测Ndrg2在培养大鼠神经干细胞(NSCs)中的表达情况,探索改变Ndrg2表达对NSCs增殖和分化的影响。方法:用免疫细胞化学染色和Western Blot法检测Ndrg2在培养NSCs中的表达;利用AAV-Ndrg2过表达病毒及LV-Ndrg2-RNAi干扰病毒感染大鼠NSCs后,通过BrdU掺入实验观察干预Ndrg2表达后NSCs增殖的变化,利用神经元标记物Tuj1和星型胶质细胞标记物GFAP的免疫细胞化学染色分析NSCs的分化情况。结果:Ndrg2高表达于大鼠NSCs中;与对照组(感染病毒空载体)相比,上调Ndrg2表达可显著增加BrdU~+和Tuj1~+细胞数(P0.05),但GFAP~+细胞数目无明显变化(P0.05);相反,下调Ndrg2表达可减少BrdU~+细胞数(P0.05),但不影响Tuj1~+和GFAP~+细胞数(P0.05)。结论:Ndrg2表达于大鼠NSCs,它可正性调控NSCs的增殖并促进NSCs向神经元分化。     

大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经干细胞

为了观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为神经干细胞(NSCs)的能力,本研究通过贴壁法培养大鼠BMSCs,体外培养扩增纯化后,在细胞传代时用含有表皮生长因子(EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、N2、B27的DMEM/F12的培养液制成细胞悬液,并进行诱导,观察诱导后细胞的形态及生长情况,用免疫荧光检测形成的细胞球的巢蛋白(nestin)的表达情况;形成的细胞球在含10%血清的培养液中进一步分化。结果显示:BMSCs在含EGF、bFGF、N2、B27的培养液中,逐渐形成nestin表达阳性的细胞球,在含血清的培养液中能分化为神经元样细胞、星形胶质样细胞及少突胶质样细胞。本研究结果提示经纯化的BMSCs能分化为NSCs,并具有进一步分化的能力。     

成年和老年大鼠局灶性脑缺血后脑室下区细胞的增殖分化

目的：比较老年和成年大鼠局灶性脑缺血后脑室下区（SVZ）神经干细胞的增殖与分化。方法：制作大脑中动脉梗死模型,用免疫组化法检测SVZ的5-溴脱氧尿核苷（BrdU）、神经元核抗原（NeuN）及胶质纤维酸性蛋白（GFAP）阳性细胞数的变化。结果：SVZ的BrdU阳性细胞在正常组和假手术组成年大鼠明显多于老年大鼠。实验组成年和老年大鼠均在缺血后增加,28d时仍高于正常水平,但成年大鼠各时间点均明显高于老年大鼠。在新生细胞中部分细胞是Brdu／NeuN或BrdU／GFAP双标细胞,但老年大鼠Brdu／NeuN双标细胞明显少于成年大鼠。结论：大鼠脑缺血激活SVZ神经干细胞增殖能力,成年大鼠明显强于老年大鼠,且新生细胞分化为神经元的比例也明显高于老年大鼠。     

用组织块法培养成年和老年鼠神经干细胞

目的　探索体外培养扩增成年及老年动物室管膜下区 (SVZ)神经干细胞的实用方法。方法　取 8、14及 2 4三个月龄SD大鼠SVZ组织块置含bFGF的DMEM/F12 +B2 7培养液培养 ,Nestin免疫组化法鉴定细胞表型。结果　各月龄的SVZ组织块均能长出Nestin阳性的神经小球及神经干细胞 ,培养 7～ 10天产生的神经球最多 ,神经干细胞状态最佳。结论　用含bFGF的培养基培养成年和老年大鼠SVZ组织块能产生较多的神经干细胞 ;此法是一种具有实用价值的培养、扩增神经干细胞的手段。     

肢体缺血后处理促进缺血性脑损伤大鼠内源性神经干细胞的增殖

背景：远程肢体缺血预处理应用到脑缺血-再灌注损伤领域的研究已有一些报道,但肢体缺血后处理应用于该领域报道很少。 目的：观察肢体缺血后处理对缺血性脑损伤大鼠侧脑室旁神经干细胞增殖的影响。 方法：利用改良线栓法制作局灶性脑缺血大鼠模型,将30只造模成功的SD大鼠随机分为实验组和对照组,每组15只。实验组行远程肢体缺血后处理,对照组不做处理。2组大鼠分别于造模后5,10,15 d处死取脑,处死前1 d每隔8 h腹腔注射50 mg/kg 5-嗅脱氧尿嘧啶核苷1次,共3次。应用免疫组织化学方法检测梗死灶区大鼠脑组织5-嗅脱氧尿嘧啶核苷阳性细胞数。 结果与结论：与对照组比较,实验组脑再灌注损伤程度呈现不同程度减轻,行为学评分降低(P < 0.05)。实验组各时间点梗死灶周边皮质的5-嗅脱氧尿嘧啶核苷阳性细胞数明显多于对照组(P < 0.05)。提示局灶性脑缺血造模后的肢体缺血后处理可以改善大鼠行为学表现,促进了内源性干细胞的激活增殖,对缺血性脑损伤有保护作用。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：