地塞米松对谷氨酸升高海马神经元胞内[Ca~(2+)]i作用的影响

为了研究谷氨酸致痫和人工合成的糖皮质激素地塞米松抑痫作用的细胞内机制,本文在ＥＰＣ ９ 光电联合检测系统上用Ｆｕｒａ ２ 阳离子检测法观察了地塞米松对谷氨酸引起的培养乳鼠海马神经细胞内［Ｃａ２＋ ］ｉ 的影响。结果：（１）谷氨酸引起海马神经元内［Ｃａ２＋ ］ｉ 显著升高,ＥＧＴＡ（５ ｍ ｍ ｏｌ／Ｌ）耗竭细胞外钙后,谷氨酸升钙作用消失,给予氯化钙（１ ｍ ｍ ｏｌ／Ｌ）后其升钙作用恢复：Ｖｅｒａｐａｍ ｉｌ（１０ μｍ ｏｌ／Ｌ）对谷氨酸升钙作用无明显的影响,ＭＫ ８０１（１０ μｍ ｏｌ／Ｌ,ＮＭ ＤＡ 受体特异性非竞争性阻断剂）可明显阻断谷氨酸的升钙作用。（２）地塞米松（１００ μｍ ｏｌ／Ｌ）作用２ ｈ 明显抑制了谷氨酸（２００ μｍ ｏｌ／Ｌ）的升钙作用,地塞米松（１００ μｍ ｏｌ／Ｌ）＋ 放线菌酮（１０ μｍ ｏｌ／Ｌ,蛋白合成抑制剂）共同作用２ ｈ,再加入谷氨酸,则地塞米松的抑制作用消失,地塞米松（１００ μｍ ｏｌ／Ｌ）作用２ ｍ ｉｎ 对谷氨酸（２００ μｍ ｏｌ／Ｌ）的升钙作用无明显影响。本实验结果提示,谷氨酸通过ＮＭ ＤＡ 受体介导的外钙内流升高了海马神经元胞内［Ｃａ２＋ ］ｉ,地塞米松可能通过基因组机制抑制了谷氨酸的这种升     

大麻素CB_1受体活化对神经病理性疼痛大鼠脊髓背角嘌呤能P2X_2受体表达的抑制作用

目的:观察脊髓背角大麻素CB_1受体(CB_1R)在坐骨神经缩窄性损伤(CCI)所致的神经病理性疼痛中的作用及其对嘌呤能P2X_2受体表达的调节。方法:7~8周龄SD大鼠分为4组:(1)sham组;(2)CCI组;(3)CP55940+CCI组;(4)AM251+CP55940+CCI组。分别于CCI术前1 d,术后1、3、5、7、10、14 d测定热缩足反射潜伏期(TWL);免疫印迹技术检测各组大鼠损伤侧L_4~L_6段脊髓背角P2X_2受体表达。结果:CCI术后大鼠出现热痛敏,TWL明显缩短;鞘内给予非选择性大麻素受体激动剂CP55940可明显延长CCI大鼠TWL(P0.05);预先鞘内注射CB_1R拮抗剂AM251(0.05 mg/kg)可显著降低CP55940的镇痛效果(P0.05)。免疫印迹实验结果显示:CCI大鼠脊髓背角P2X_2受体在术后7、14 d表达明显增加(P0.05);鞘内给予CP55940可显著降低P2X_2受体表达(P0.05),而预先给予AM251可降低CP55940抑制P2X_2受体表达的效应(P0.05)。结论:脊髓背角CB_1受体激活对CCI所致的神经病理性疼痛具有良好的镇痛作用,其镇痛效应可能与抑制CCI大鼠嘌呤能P2X_2受体表达有关。     

急性给予ApoE4升高大鼠皮层神经元内静息[Ca~(2+)]i

目的研究载脂蛋白E(ApoE)对大鼠皮层神经元内游离钙离子水平[Ca2+]i的影响。方法用激光共聚焦显微镜(LSCM)和Fluo-3/AM荧光探针标记检测皮层神经元钙信号瞬间动态变化;用N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体阻断剂MK-801观察ApoE4对其影响。结果ApoE4可以呈时间及浓度依赖性升高神经元内静息[Ca2+]i(P<0.01或P<0.05),MK-801可以部分阻断ApoE4所致的静息[Ca2+]i升高(P<0.05或P<0.01);而ApoE3无影响。结论急性给予ApoE4能升高神经元内静息[Ca2+]i,NMDA受体的激活可能参与了ApoE4所致的胞内钙信号改变与其神经毒作用。     

吗啡依赖大鼠背根节神经元胞体的光镜和电镜定量研究

在吗啡依赖条件下 ,观察了脊髓 板层发生轴突终末侧支生芽和建立新突触的背根节神经元的胞体是否出现相应的形态变化。应用光镜体视学方法 ,结合电镜观察和测量 ,比较吗啡依赖组与对照组背根节体积及其神经元胞体、胞核、核仁、粗面内质网和线粒体的体积变化。结果显示 :吗啡依赖组背根节体积与对照组比较未发现差异 ,背根节内的亮、暗两类神经元的胞体、胞核、核仁体积以及胞质内粗面内质网和线粒体体积也无显著性差异。结果表明 ,吗啡对大鼠背根节神经元胞体的形态结构没有明显的影响     

大鼠坐骨神经切断后Robo2在脊髓及背根节的表达变化

目的:研究坐骨神经损伤后Roundabout 2(Robo2)在成年大鼠背根节和脊髓的表达变化。方法:健康成年雌性SD大鼠坐骨神经切断后分别存活3～28d,取其L_(4～6)背根节(DRG)和脊髓;利用RT-PCR和免疫组织化学技术检测Robo2在上述组织中的表达变化。图像分析技术对阳性细胞的灰度值进行测定。结果:正常DRG感觉神经元表达Robo2 mRNA和蛋白质,脊髓前角运动神经元不表达。坐骨神经切断后3 d DRG内Robo2表达增加,7～14 d达高峰,21～28 d恢复到正常水平。结论:坐骨神经切断可导致DRG内Robo2的表达上调,可能与早期的感觉轴突再生有关。     

大麻素受体2参与神经病理性疼痛的研究进展

神经病理性疼痛(Neuropathic Pain)是由于躯体感觉系统产生疾病或受到者损伤后,机体受到的有害或者无害的刺激被病理性的放大后所致.周围神经性痛是起源于周围神经系统受到机械创伤、代谢性疾病、神经化学毒物等影响.而中枢神经性痛一般都是由于脊髓损伤、中风或者多发性硬化引起的[1].然而到目前为止,神经病理性痛确切的发病机制仍不清楚,临床上治疗神经病理性疼痛的措施仍停留在对于原发疾病或损害的处理上,而现有的一些药物治疗(如阿片类药物、抗抑郁药和抗惊厥药物等),存在疼痛缓解不足或一些有害的副作用,药物用量受到限制,治疗效果一直不佳.近年来有研究表明大麻素受体2 (cannabinoid receptor 2,CB2)在选择性激动剂激活下能够有效地抑制急性、炎性疼痛而不产生中枢神经系统的副作用[2-5],因此其可能作为未来治疗神经病理性疼痛的一个治疗靶点.关于大麻素受体2在神经病理性疼痛中的作用的报道也越来越多,本文对其近几年的研究进展综述如下.     

CB_1受体对坐骨神经损伤导致的神经痛及背根节HCN2通道表达的调节作用

目的:观察大麻素CB_1受体在坐骨神经缩窄性损伤(CCI)所致的神经痛中的作用及其对背根节HCN2通道表达的调节。方法:7~8周龄SD大鼠分为4组:(1)Sham组(假手术组);(2)CCI组;(3)CP55940+CCI组;(4)AM251+CP55940+CCI组。采用von Frey测痛仪测定各组大鼠神经损伤侧机械缩足阈值(MWT);免疫印迹技术检测损伤侧L_4~L_6背根节HCN2通道表达。结果:CCI术后1 d即形成稳定的机械痛敏,MWT降低;鞘内给予大麻素受体激动剂CP55940(0.05 mg/kg)可显著升高CCI大鼠MWT(P0.05);预先鞘内注射CB_1R拮抗剂AM251(0.05 mg/kg)可明显阻断CP55940的镇痛效果(P0.05)。免疫印迹实验结果显示,CCI大鼠损伤侧L_4~L_6背根节CB_1受体、HCN2通道表达明显增加(P0.05);鞘内给予CP55940可显著降低HCN2表达(P0.05),AM251可明显抑制CP55940降低HCN2表达的效应(P0.05)。结论:背根节CB_1受体激活对CCI所致的神经痛具有良好的镇痛作用,其镇痛效应可能与抑制CCI大鼠背根节HCN2通道表达有关。     

大麻素-CB1/CB2受体系统对多巴胺神经元调节作用及其与帕金森病发生的研究进展

<正>大麻类植物是最早认识的成瘾性植物之一,其活性化合物称为大麻素。在哺乳动物体内存在内源性大麻素系统(endogenous cannabinoid system,ECS)包括内源性大麻素、大麻素受体、大麻素配体以及几种合成、运输和降解它们的酶和蛋白质组成的系统。现已发现的内源性大麻类物质有花生四烯酸乙醇胺(anandamide)、2-AG、nnoladin ether和Virod-     

内源性大麻素含量升高可激活脊髓背角星形胶质细胞并导致机械性触诱发痛

目的:观察丁高大鼠鞘内大麻素水平后实验动物的疼痛行为学变化及脊髓背角星形胶质细胞的激活状态,探讨内源性大麻素参与触诱发痛的可能机制。方法:成功建立大鼠鞘内置管模型后,分别鞘内注射外源性大麻素2-AG、大麻素受体激动剂CP55940、大麻素水解酶抑制剂JZL195。使用Von-frey纤维丝观察给药后不同时间点大鼠机械性缩足反射阈值的变化,运用共聚焦显影观察脊髓背角星形胶质细胞的激活状态。结果:(1)鞘内注射2-AG、CP55940、JZLl95后1 d即产生明显的触诱发痛(P0.01)并至少持续到给药后第21 d(P0.001);(2)鞘内注射2-AG、CP55940和JZLl95后第5 d即有明显的星形胶质细胞激活(P0.01),并可持续到给药后第21 d(P0.01)。结论:升高鞘内大麻素水平可能通过激活星形胶质细胞导致触诱发痛。     

糖皮质激素快速抑制ATP引起的HT-4细胞[Ca~(2 )]i升高

目的 :糖皮质激素 (ＧＣ)是体内一类重要的调节分子 ,其作用机制复杂而多样 ,既包括被普遍认同的基因组机制 ,又有以起效快速 (潜伏期从数秒至数分钟 )为特点的非基因组作用方式。本室在ＰＣ1 2细胞(大鼠嗜铬细胞瘤 )中的研究表明 ,ＧＣ可通过百日咳毒素 (ＰＴＸ)敏感的Ｇ蛋白 -蛋白激酶Ｃ(ＰＫＣ)途径快速抑制烟碱引起的 [Ｃａ2 ]ｉ升高。为进一步研究ＧＣ的快速作用机制及其普遍性 ,本研究观察了ＧＣ对ＡＴＰ引起的ＨＴ - 4细胞 (小鼠神经细胞系 ) [Ｃａ2 ]ｉ升高的影响 ,并研究了其中的信号转导途径。方法 :本研究利用荧光指示剂Ｆｕｒ…     

体外获得高纯度大鼠背根神经节神经元的原代培养

目的：建立一种切实可行的胚胎大鼠背根神经节神经元培养及纯化方法。方法：用显微解剖获取足够数量的胚胎大鼠背根神经节,通过胰蛋白酶+EDTA消化、交替使用NB培养基与加入了5-氟-2-脱氧尿嘧啶核苷酸/尿苷的抗有丝分裂NB培养基等方法,在体外获得纯化的背根神经节神经元,采用神经丝蛋白免疫细胞化学染色法与DAPI染核的方法鉴定并测定神经元的纯度。结果：获得的背根神经节神经元在体外生长良好,纯度可达到96%以上。结论：本实验方法可以获得大量高度纯化的大鼠背根神经节神经元。     

1,8-桉叶素对背根神经节内P2X3受体介导神经病理痛的作用

目的:探讨1,8-桉叶素对大鼠背根神经节(DRG)神经元P2X3受体介导神经病理痛的作用。方法:建立大鼠坐骨神经慢性压迫性损伤模型(CCI)。SD大鼠随机分为假手术(Sham)组,坐骨神经慢性压迫性损伤(模型组,CCI)组、低剂量1,8-桉叶素治疗组、高剂量1,8-桉叶素治疗组、二甲亚砜对照组。检测大鼠术后7、14 d机械缩足反射(MWT)及热缩足反射潜伏期(TWL),观察大鼠行为学变化。免疫组织化学和原位杂交观察神经病理痛大鼠第4~5腰(L_(4-5))DRG神经元P2X3受体表达变化。结果:术后第7和14天,模型组大鼠MWT和TWL明显低于假手术组,低、高剂量治疗组较模型组明显升高,二甲亚砜组与模型组比较无差别;L_(4-5)DRG内P2X3受体表达模型组明显高于假手术组,低、高剂量治疗组较模型组均明显降低,二甲亚砜组与模型组比较无明显区别。结论:1,8-桉叶素抑制CCI大鼠L_(4-5)DRG神经元P2X3受体过表达,从而缓解神经病理性疼痛症状。     

Alteration of dorsal root ganglion P2X3 receptor expression and function following spinal nerve ligation in the rat

One subtype of ATP-gated ion channel, the P2X₃ receptor, is expressed primarily on peripheral sensory neurons. While it is known that P2X₃ receptors can participate in certain forms of nociceptive signaling, their involvement in neuropathic pain transmission is not known. We have examined the expression and function of P2X₃ receptors in a rat spinal nerve ligation model of neuropathic pain. Fourteen days following L5/L6 spinal nerve ligation, the corresponding dorsal root ganglia (DRG) were removed from animals exhibiting mechanical allodynia, and these were studied using immunohistochemical and electrophysiological techniques. Using a polyclonal antibody to label the P2X₃ receptor, a significant reduction in neuronal P2X₃ immunoreactivity was observed in the ipsilateral (injured) L5 and L6 DRG following nerve ligation. In vitro electrophysiological analysis of acutely isolated DRG neurons revealed a similar decrease in functional P2X₃-containing receptors. In small diameter (22–25 μm) neurons, a significant reduction in the number of cells exhibiting a response to α,β-meATP was observed. However, a subset of small diameter neurons retained P2X₃ responses of equal amplitude to those recorded from naive and sham control DRG neurons. Interestingly, P2X₃ immunoreactivity and P2X₃-like responses were also detected in a subset of larger diameter (50 μm) neurons and the number and amplitude of these responses were unchanged after spinal nerve ligation. These results suggest that, while there appears to be a decrease in fast desensitizing P2X₃ receptors following L5/L6 nerve ligation injury, certain subsets of small and large DRG neurons maintain normal P2X₃ receptor expression and function. These remaining receptors may provide a P2X₃ receptor-mediated component to neuropathic pain. Electronic Publication     

大鼠慢性背根节压迫诱致DRG大神经元兴奋性增强和I_h电流显著上调

目的:探讨大鼠CCD模型模拟的腰背痛诱致的DRG大神经元兴奋性改变及其离子通道机制。方法:建立大鼠慢性压迫腰膨大L4/L5 DRG的CCD模型,模拟临床常见的腰背痛的触诱发痛表现。制备整节L4/L5 DRG标本,应用全细胞膜片钳技术记录去极化电流刺激诱致的DRG大型神经元的兴奋性改变及其离子通道机制。结果:对直径50μm的健康的DRG大神经元进行全细胞膜片钳记录。结果显示:给予去极化方波电流刺激可以诱致CCD模型大鼠DRG大神经元呈现兴奋性增强的表现,具体表现为相同刺激强度的电流注射在CCD模型DRG大神经元上诱致的动作电位的频率显著高于对照组神经元。同样的细胞放电增强也见于给予细胞斜波电流刺激。进一步的机制研究分析显示CCD模型大鼠上DRG大神经元的I_h电流明显高于对照组大鼠。结论:CCD模型可以诱致DRG大神经元呈现超兴奋状态,该兴奋性增强的状态主要由I_h电流增强来介导,为认识神经损伤诱致的病理性痛觉敏化尤其是触诱发痛的神经机制提供了实验证据。     

二脱氧肌苷引发培养的背根神经节神经元的形态学改变

为探讨二脱氧肌苷(ddI)对培养的背根神经节(DRG)神经元的影响,我们对分散培养的胎鼠DRG神经元培养3d后,再分别以不同浓度的ddI(1μg/ml,5μg/ml,10μg/mll和20μg/ml)孵育3d。终止培养后,行微管相关蛋白2(MAP2)标记,用共聚焦激光扫描显微镜观察神经元胞体和突起的改变。结果表明,DRG神经元用ddI孵育3d,神经元突起的数目减少和长度变短,呈剂量依赖性,而神经元的直径则没有变化。本研究的结果表明,ddI可影响培养的DRG神经元突起的再生和生长。     

高糖对体外培养背根神经节神经元影响的研究进展

背根神经节神经元(DRGn)在糖尿病周围神经病变发展过程中起重要作用,近年来探讨高糖对体外培养背根神经节神经元(DRGn)的影响成为研究热点.高糖环境可致DRGn细胞凋亡;同时高糖环境下DRGn在氧化应激、膜受体mGluRs及TRPV1激活、DRGn/SCs共培养等方面均与正常培养基不同,具体机制仍需深入研究.     

ATP通过P2Y1受体引发脊髓背角星形胶质细胞[Ca2+]i升高和GFAP表达上调

目的 观察体外培养的背角星形胶质细胞P2Y1受体激活对其[Ca2 ]i的变化和GFAP表达的影响.方法 培养并纯化脊髓背角星形胶质细胞,采用免疫组织化学染色观察背角星形胶质细胞P2Y1受体及GFAP的表达,激光共聚焦技术观察星形胶质细胞[Ca2 ]i的变化.结果 体外培养的大鼠脊髓背角星形胶质细胞大多表达P2Y1受体;P2Y受体激动剂ATP、ADP、ADP-βs剂量依赖性促进星形胶质细胞[Ca2 ]i升高;10 μg/mL的ATP、ADP和ADP-βs显著增加胞内[Ca2 ]i,此作用可被特异性P2Y1受体拮抗剂MRS2179所阻断,并具量效关系.免疫组织化学染色结果显示,100 μg/mL的ATP、ADP和ADP-βs作用下,星形胶质细胞GFAP表达上升,此效应可被100 μg/mL的MRS2179所抑制.结论 体外培养的大鼠脊髓背角星形胶质细胞表达P2Y1受体;P2Y1受体介导了ATP、ADP及ADP-βs促进星形胶质细胞[Ca2]i升高和GFAP表达增强的过程.     

Distribution patterns of different P2x receptor phenotypes in acutely dissociated dorsal root ganglion neurons of adult rats

P2x receptors may be used to detect ATP release from tissues during physiological and pathological conditions. We used whole-cell patch clamp recordings to study the expression of P2x receptor phenotypes, their distribution patterns, and their sensitivity to alphabetamATP and suramin in dorsal root ganglion (DRG) neurons acutely dissociated from adult rats. Based on the onset and decay rates of 10 microM ATP-evoked currents, we showed three types of P2x currents: fast, slow, and mixed. Each of these P2x receptor phenotypes had a distinct distribution pattern among DRG neurons. The fast P2x currents were predominantly expressed in small-diameter, isolectin-B4 (IB4)-positive, and capsaicin-sensitive DRG neurons. The slow P2x currents were expressed in both small and medium DRG neurons, and about half of them were IB4 positive. The mixed P2x currents were also expressed in both small and medium-sized DRG neurons, and most of these neurons were IB4-positive neurons. The slow and mixed P2x current groups had both capsaicin-sensitive and -insensitive DRG neurons. All phenotypes revealed with 10 microM ATP could be inhibited by 30 microM suramin. All DRG neurons with fast or mixed P2x currents were also sensitive to 10 microM alphabetamATP, and alphabetamATP evoked currents similar to those induced by ATP. The group expressing slow P2x currents could be further divided into alphabetamATP-sensitive and -insensitive groups. Thus, the relationships among P2x receptor phenotypes, cell sizes, IB4 positivity, and capsaicin sensitivity are more complicated than previously thought, and different P2x receptors may be involved in both nociceptive and non-nociceptive functions.     

Modulation of P2X receptors in dorsal root ganglion neurons of streptozotocin-induced diabetic neuropathy

Painful diabetic neuropathy causes hyperalgesia and does not respond to commonly used analgesics such as non-steroidal anti-inflammatory drugs or opioids at doses below those producing disruptive side effects. In the present study, we examined the effect of P2X receptor antagonists, which are known to modulate the pain pathway, on mechanical hyperalgesia in streptozotocin (STZ)-induced diabetic mice. The paw withdrawal frequency measured by von Frey filaments, began to significantly increase 5 days after STZ injection and was maintained for more than 14 days. Intrathecal administration of P2X receptor antagonists (PPADS and TNP-ATP) inhibited the mechanical allodynia in diabetic mice. The levels of P2X₂ and P2X₃ receptors mRNA were significantly increased in diabetic mice at 14 days after the intravenous injection of STZ. These results suggest that the upregulation of P2X₂, P2X₃ and/or P2X_2/3 receptor in DRG neurons is associated with mechanical allodynia in STZ-induced diabetic mice.     

胎儿脊神经节发育过程中P2X3和降钙素基因相关肽受体的表达

目的:观察人胎儿脊神经节发育过程中P2X3和降钙素基因相关肽(CGRP)受体的表达变化,探讨在神经系统发育过程中P2X3和CGRP受体的作用和意义.方法:运用尼氏染色、ABC免疫组织化学显色的方法,观察胎儿脊神经节发育过程中P2X3和CGRP受体的表达规律.结果:在人胎儿脊神经节的神经元内P2X3和CGRP受体均有不同程度的表达.在胎儿第16～32周脊神经节中P2X3受体免疫阳性细胞数逐渐减少.在胎儿第16～32周脊神经节的神经元中CGRP受体阳性细胞数逐渐增多,阳性表达逐渐增强.结论:在胎儿脊神经节的发生、发育过程中,P2X3和CGRP受体呈不同程度的表达,表明其在神经系统的发育过程中发挥着重要的作用.