腺苷预处理对氧糖剥夺/复氧糖诱导的星形胶质细胞及脂质运载蛋白-2表达的影响

目的:探讨在氧糖剥夺/复氧糖(OGD/R)情况下腺苷预处理对体外培养星形胶质细胞的影响和脂质运载蛋白-2(LCN-2)表达的影响及其意义。方法:原代培养的大鼠星形胶质细胞随机分为腺苷预处理对照组(Ado-treated control)、对照组(Control)、实验组(ADO/R)和模型组(OGD/R)。用MTT法检测各组细胞活力,ELISA检测各组OGD/R后细胞培养基中乳酸脱氢酶(LDH)的浓度,免疫荧光及免疫印迹检测各组LCN-2的相对表达。结果:腺苷预处理对照组与对照组的细胞活力、LDH浓度和LCN-2的表达量均无明显差别。与腺苷预处理对照组、对照组相比,模型组细胞损伤程度和LCN-2的表达量均明显升高。与模型组相比,实验组细胞损伤程度和LCN-2的表达量均明显降低。结论:腺苷可以通过减少LCN-2的释放明显改善OGD/R所引起的星形胶质细胞的损伤,从而增强脑组织对缺血再灌注损伤的耐受。     

羟基红花黄色素 A 对糖氧剥夺/复糖复氧后星形胶质细胞保护作用及其机制研究

目的:探讨糖氧剥夺/复糖复氧(OGD/R)状态下羟基红花黄色素A(HSYA)对星形胶质细胞(Ast)的保护作用及其机制。方法:分离小鼠原代Ast,实验设置为正常对照组、模型组和HSYA处理组。MTT、LDH检测Ast活力;免疫荧光检测GFAP蛋白表达;RT-PCR和Western blot检测C3、S100A10、PTX3极化指标;RT-PCR和ELISA法检测TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10炎症因子表达;氧化检测试剂盒检测CAT、SOD、GSH-Px、RNS、ROS、MDA含量;Western blot检测GFAP、p-NF-κB(p65)、p-STAT3、Nrf2、HO-1蛋白表达。结果:Ast经OGD/R处理后被激活且形态发生改变;同时A1型Ast增加,TNF-α、IL-1β、IL-6等炎症因子及RNS、ROS、MDA表达升高;A2型Ast降低,CAT、SOD、GSH-Px降低。HSYA可减轻OGD/R状态下Ast的形态异常,减少A1型Ast,同时减少炎症因子分泌以及RNS、ROS和MDA含量,降低p-NF-κB(p65)和p-STAT3表达;增加IL-10分泌和CA...     

氧糖剥夺诱导原代大鼠星形胶质细胞miR-21的表达变化

目的研究原代大鼠星形胶质细胞氧糖剥夺不同时间miR-21的表达,探讨miR-21是否参与了缺氧缺血性脑损伤后星形胶质细胞的活性变化。方法原代大鼠星形胶质细胞随机分为正常组和氧糖剥夺组,分别培养3、6、9和12h。CCK-8法检测各组星形胶质细胞的活力,real-time PCR方法检测各组星形胶质细胞miR-21的表达。结果氧糖剥夺组miR-21的表达水平随培养时间延长呈先升高后降低的动态变化,3h开始高于对照组水平(P<0.05),6h达高峰(P<0.05),随后下降,9h与对照组无差异(P>0.05),12h显著低于对照组(P<0.05)。氧糖剥夺不同时间星形胶质细胞活力变化与miR-21的变化趋势一致。结论 miR-21可能参与了缺氧缺血性脑损伤后星形胶质细胞的活性变化,发挥促增殖和抗凋亡的作用。     

氧糖剥夺诱导原代大鼠星形胶质细胞增殖反应中microRNA-125b的表达变化

目的研究氧糖剥夺诱导原代大鼠星形胶质细胞增殖过程中microRNA-125b的表达,探讨microRNA-125b是否参与了缺氧缺血性脑损伤后星形胶质细胞的增殖。方法原代大鼠星形胶质细胞随机分为正常组和氧糖剥夺组,分别培养3、6和9h。EdU掺入法检测各组星形胶质细胞的增殖,real-timePCR方法检测各组星形胶质细胞microRNA-125b的表达。结果氧糖剥夺组microRNA-125b的表达水平随培养时间延长呈先升高后降低的动态变化,3h开始高于对照组水平(P0.05);6h达高峰(P0.01),随后下降,9h与对照组无差异(P0.05)。氧糖剥夺不同时间星形胶质细胞增殖变化与microRNA-125b的变化趋势一致。结论 miroRNA-125b可能参与缺氧缺血性脑损伤后星形胶质细胞的增殖。     

Mettl9基因过表达促进氧糖剥夺大鼠离体星形胶质细胞损伤

目的:探讨甲基转移酶样蛋白9(Mettl9)基因过表达对氧糖剥夺(OGD)大鼠离体星形胶质细胞损伤的影响及机制.方法:体外原代培养SD大鼠大脑皮层星形胶质细胞,建立OGD诱导的星形胶质细胞损伤模型.实验分为正常对照(Con)组、慢病毒空载体转染(NC)组、慢病毒重组载体pLenti6.3-Mettl9转染组(Mettl...     

腺苷对大鼠缺氧/复氧星形胶质细胞的保护作用

目的:明确在正常状态和缺氧状态,不规则趋化因子(FKN)对脑细胞是否有损害作用;腺苷是否可以抑制FKN的作用。方法:原代培养大鼠星形胶质细胞,分为正常组、模型组和腺苷组。模型组细胞接受8 h缺氧/24h复氧处理;腺苷组细胞在缺氧前24 h加入150μmol/L腺苷后再进行8 h缺氧/24 h复氧处理。采用ELISA法检测各组FKN的相对表达量,MTT法检测各组细胞存活率。结果:与正常组相比,星形胶质细胞在缺氧/复氧后,细胞明显肿胀坏死,有大量的FKN释放。与模型组相比,腺苷组可明显降低缺氧/复氧损伤时FKN的释放,且细胞水肿坏死较轻;正常组、模型组、腺苷组在缺氧8 h/复氧24 h后细胞活力(OD值)分别是0.759、0.119和0.504。结论:腺苷预处理可使缺氧/复氧后星形胶质细胞FKN的释放减少,从而起到神经保护作用。     

TNFα刺激的星形胶质细胞条件培养液对海马神经元的兴奋作用(英文)

为了探讨肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNFα)刺激的星形胶质细胞对神经元的作用,本研究将体外纯化培养的大鼠海马星形胶质细胞,用反相高效液相法测定TNFα刺激后细胞培养液内谷氨酸的含量;将TNFα刺激后的星形胶质细胞条件培养液(astrocytic conditioned medium,ACM)作用于培养的海马神经元,运用免疫细胞化学方法和图像分析技术研究神经元NF-κBp65和谷氨酸的表达。结果表明:(1)TNFα可明显促进星形胶质细胞释放谷氨酸,(2)ACM作用1 5 min即可诱导神经元NF-κBp65的核表达,30 min达高峰,180 min恢复至对照水平,(3)ACM作用60 min可使谷氨酸免疫反应阳性神经元平均光密度明显升高,持续至240 min。提示,TNFα刺激的星形胶质细胞可通过释放谷氨酸等可溶性物质使神经元快速激活、兴奋性升高。     

睡眠剥夺后GFAP在大鼠视交叉上核星形胶质细胞的表达

为探索大鼠视交叉上核星形胶质细胞对睡眠剥夺及睡眠恢复的反应,本研究采用水环境小平台法建立大鼠睡眠剥夺模型,12只大鼠随机分为睡眠剥夺24h组,睡眠剥夺24h后恢复睡眠3h组,大平台对照组和正常单独饲养组,每组3只。用免疫组化的方法检测神经胶质酸性蛋白(GFAP)在视交叉上核的表达变化。结果如下:睡眠剥夺后GFAP在视交叉上核表达明显增强,睡眠恢复后表达降低。以上结果提示:星形胶质细胞可能参与睡眠的调节。     

天麻素对缺血缺氧大鼠星形胶质细胞MCP1表达的影响

目的:通过建立新生大鼠缺血缺氧脑损伤(HIBD)模型和体外星形胶质细胞系TNC1细胞糖氧剥夺(OGD)模型,从体内体外探索天麻素(GAS)对星形胶质细胞缺血缺氧损伤后单核细胞趋化因子1(MCP1)表达的影响。方法:将星形胶质细胞TNC1随机分为对照组(control)、糖氧剥夺组(OGD)、糖氧剥夺+天麻素(OGD+G)。将3 d新生SD大鼠随机分为假手术组(sham)、缺血缺氧脑损伤模型组(HIBD)、HIBD模型+天麻素干预组(HIBD+G)。使用免疫荧光双标染色和Western Blot检测各组细胞及大鼠左侧损伤皮质半暗区MCP1的表达变化。结果:体外免疫荧光染色和Western Blot结果显示,与control组相比,OGD组TNC1细胞MCP1表达明显增加(P<0.05),GAS可减轻OGD损伤后MCP1的表达(P<0.05);体内免疫荧光双标染色和Western Blot结果也显示：GAS干预显著降低了HIBD后星形胶质细胞MCP1的表达(P<0.05)。结论:GAS可以通过降低星形胶质细胞MCP1的表达对HIBD发挥保护作用。     

黄芪甲苷可抑制炎性诱导星形胶质细胞激活及炎症反应

背景：星形胶质细胞在中枢神经系统疾病的病理中起着重要作用。星形胶质细胞的表型变化及功能改变,提示其可能是中枢神经系统疾病的有效治疗靶点。前期研究证实,黄芪甲苷可以抑制脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的星形胶质细胞炎性反应,其是否可以通过Notch-1及其下游信号通路调控星形胶质细胞表型和功能,尚不清楚。目的：探讨黄芪甲苷对炎性诱导的星形胶质细胞激活及炎症反应的影响及可能机制。方法：体外培养新生C57BL/6小鼠大脑皮质星形胶质细胞,CCK-8法检测星形胶质细胞活力确定黄芪甲苷及Notch活性抑制剂DAPT的最适浓度;然后将星形胶质细胞分为5组：PBS组、LPS组、LPS+黄芪甲苷组、LPS+DAPT组和LPS+DAPT+黄芪甲苷组,ELISA法检测炎性因子分泌水平,Griess法检测一氧化氮水平,用Transwell小室将星形胶质细胞与脾脏单个核细胞共培养,观察CD4 T细胞的迁移情况,免疫荧光染色检测星形胶质细胞活化标志物GFAP、星形胶质细胞的A1标记物C3、A2标记物S100A10以及信号通路相关Notch-1、Jag-1的表达,Western blot...     

激活的星形胶质细胞分泌的TNF-α与癫痫发作的相关性

目的：探讨星形胶质细胞在癫痫发病中的作用。方法：选用肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激及TNF-α反义寡核苷酸阻断后马桑内酯(CL)刺激纯化培养的海马星形胶质细胞,将上述两种条件培养基提取液(ACM)分别注入正常大鼠侧脑室,观察动物行为与脑电图的变化;用免疫细胞化学方法检测大脑皮质与海马中生长抑素(SS)表达水平的改变。结果：侧脑室注射TNF-α刺激后的条件培养基提取液可引起大鼠Ⅲ级癫痫样发作及典型的尖波、棘波、棘一慢波癫痫样脑电图表现,侧脑室注射TNF-α反义寡核苷酸阻断后由马桑内酯刺激的条件培养基提取液,大鼠无癫痫样行为发生。结论：激活的星形胶质细胞分泌的TNF-α可诱导大鼠癫痫发作。     

渗透压改变与星形胶质细胞水通道蛋白9表达的关系

目的:探讨渗透压对星形胶质细胞水通道蛋白9(AQP9)表达的影响.方法:通过H-E显色观察渗透压改变(对照组、低渗组和高渗组)对细胞形态的影响,台盼蓝染色评价细胞活力的变化,免疫细胞化学、原位杂交研究星形胶质细胞AQP9及其mRNA的表达变化.结果:对照组细胞形态、活力、AQP9及其mRNA的表达在各时间点均无明显变化.低渗培养导致细胞水肿,细胞活性下降,AQP9及其mRNA的表达水平明显高于对照组,并随低渗作用的增强和时间的延长而上调.高渗作用可导致细胞皱缩,细胞活性下降,AQP9及其mRNA表达在12 h内持续增加后下降,至24 h后仍高于对照组.结论:低渗液作用下AQP9及其mRNA的表达上调,作为一种病理性适应反应参与了胶质细胞水肿的形成.高渗作用早期(约12 h内),AQP9的表达上调对高渗型细胞脱水起到重要的代偿作用.     

天麻素对M1型小胶质细胞中TNF-α和CD86表达的影响

目的:研究天麻素(Gastrodin)对脂多糖(LPS)诱导激活的M1型小胶质细胞标记物肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和CD86表达的影响.方法:将BV2小胶质细胞随机分为对照组(control)、脂多糖组(LPS)和脂多糖+天麻素组(LPS+G),利用LPS诱导BV2细胞激活并向M1型转化,使用免疫荧光双标染色和We...     

白藜芦醇预处理对星形胶质细胞氧糖剥夺/再复氧损伤后活化及炎症反应的影响

目的 探讨白藜芦醇预处理对体外氧糖剥夺/再复氧(OGD/R) 损伤后星形胶质细胞活化及炎症反应的影响。方法 征集20只新生SD大鼠（生后24 h内）,将其原代分离培养的大脑皮层星形胶质细胞行氧糖剥夺150 min,再复氧培养24 h。实验分为正常组(Nor)、对照组(Ctrl) 和白藜芦醇预处理组(Res)。 CCK-8法检测细胞活力,5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷（EdU）法检测细胞增殖,免疫荧光染色法检测胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、S100β蛋白表达,Western blotting 检测GFAP、S100β、波形蛋白(vimentin)、白细胞介素（IL）-10、β干扰素（IFN-β）、肿瘤坏死因子α(TNF-α）和 IL-1β蛋白表达,ELISA法检测IL-10、IFN-β、TNF-α和IL-1β蛋白含量。结果 CCK-8法检测结果显示,随着白藜芦醇浓度（5、20、40 μmol/L）的增高,细胞活力逐渐增高,且与对照组差异有显著性（P<0.01）,以40 μmol/L组细胞活力最强。之后随白藜芦醇浓度(80、100 μmol/L) 的增高,细胞活力显著降低,以100 μmol/L组细胞活力最弱 (P<0.05)。EdU检测显示,在OGD/R损伤后,对照组和白藜芦醇组显著高于正常组EdU阳性细胞比例(P<0.01),而白藜芦醇组显著低于对照组 (P<0.01)。免疫荧光染色、Western blotting和ELISA法显示,对照组和白藜芦醇组GFAP、S100β、vimentin、IL-10、IFN-β、TNF-α和IL-1β 蛋白表达或含量显著高于正常组(P<0.05),但白藜芦醇组除 IL-10 和IFN-β蛋白表达或含量较对照组增高外,其余均低于对照组(P<0.05)。结论 白藜芦醇预处理可抑制 OGD/R 后体外星形胶质细胞的活化,并减轻炎症反应。     

慢性高眼压大鼠视网膜胶质细胞TNF-α及其受体的表达

目的： 通过研究大鼠慢性高眼压模型视网膜胶质细胞TNF-α及其受体的表达，探索胶质细胞在青光眼视网膜神经节细胞损伤中的作用机制。方法: 用结扎上巩膜静脉联合术后球结膜下注射5-Fu的方法建立大鼠慢性高眼压模型。在模型建立后1月，做眼球冰冻切片，行免疫组织化学染色，在激光共聚焦显微镜下观察视网膜TNF-α-GFAP、TNF-α-OX42 、TNFR-1-GFAP以及TNFR-1-NeuN的双标染色情况。结果: 结扎上巩膜静脉联合术后结膜下注射5-Fu可诱导较长时间稳定高眼压，4周内6只高眼压眼眼压均大于22 mmHg；正常大鼠视网膜未见明显TNF-α以及TNF-R1阳性染色，1个月高眼压大鼠TNF-α在视网膜的表达高于正常对照组，并且有TNF-α-GFAP、TNF-α-OX42的共表达；在慢性高眼压情况下，TNF-R1在视网膜内层的表达也高于正常对照组，并且在视网膜内层有TNF-R1与 GFAP的共表达，但TNF-R1与神经节细胞层NeuN（神经元特异性核蛋白）没有共表达。结论: 在慢性高眼压情况中，活化的视网膜胶质细胞来源的TNF-α可能在神经节细胞损伤中发挥重要作用。     

髓样细胞激活受体2调控氧糖剥夺/复氧模型小鼠小胶质细胞向M2型极化

目的 探讨TREM2调控氧糖剥夺/复氧(OGD/R)模型小鼠小胶质细胞向M2型极化的机制.方法体外培养N9小胶质细胞系,采用TREM2过表达慢病毒(LV-TREM2)转染N9细胞,空载病毒LV-scramble作为对照组,并建立OGD/R模型.将OGD/R细胞随机分为OGD/R组、OGD/R+LV-scramble组和...     

白藜芦醇通过上调annexin A1表达促进氧糖剥夺/复氧大鼠小胶质细胞系向M2型极化

目的探索annexin A1(ANXA1)在白藜芦醇调控氧糖剥夺/复氧(OGD/R)大鼠小胶质细胞N9向M2型极化的作用。方法采用慢病毒LV-shAnxA1沉默N9细胞AnxA1表达,慢病毒LV-Scramble作为对照慢病毒,采用Western blot和RT-qPCR验证慢病毒感染效率。慢病毒转染3 d后构建N9细胞OGD/R模型,复氧24 h后采用白藜芦醇连续处理细胞24 h。分组如下:OGD/R(-)组、OGD/R(+)组、OGD/R(+)+Res组、OGD/R(+)+Res+LV-Scramble组、OGD/R(+)+Res+LV-shAnxA1。RT-qPCR和Western blot检测ANXA1、CD11b、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、精氨酸酶-1(Arg-1)、白介素-10(IL-10)mRNA和/或蛋白含量。免疫荧光观察ANXA1在细胞内分布情况。结果 OGD/R(+)+Res组ANXA1 mRNA和蛋白含量较OGD/R(+)组明显增多。OGD/R(+)组ANXA1蛋白主要分布在细胞核,而OGD/R(+)+Res组ANXA1蛋白主要分布在细胞质。有效抑制ANXA1表达后,OGD/R(+)+Res+LV-shAnxA1组ANXA1主要位于细胞核。与OGD/R(+)+Res组相比,OGD/R(+)+Res+LV-shAnxA1组CD11b蛋白含量明显增高(P0.01),TNF-α和IL-1βmRNA含量均明显增高(P0.001),而Arg-1和IL-10 mRNA含量均显著降低。结论白藜芦醇可通过上调ANXA1表达促进OGD/R鼠小胶质细胞系向M2型极化。     

中脑星形胶质细胞源性神经营养因子通过降低TNF-α和IL-1β保护脓毒症心肌损伤大鼠

目的研究中脑星形胶质细胞源性神经营养因子(MANF)在脓毒症中的作用并探究其可能的作用机制。方法构建MANF过表达大鼠,建立脓毒症心肌损伤模型,分为对照组、模型组和MANF组,每组10只。取大鼠血清和心肌组织,分别检测心肌损伤标记物CK和cTnI,观察心肌病理组织,检测氧化应激标志ROS和MDA生成量,采用Western blot法检测TNF-α和IL-1β蛋白的表达。结果 MANF组心肌组织损伤程度明显轻于模型组(P0.05);MANF组ROS和MDA生成量减少,TNF-α和IL-1β蛋白表达明显下降(P0.05)。结论 MANF通过降低TNF-α和IL-1β等炎症因子的释放,缓解脓毒症的心肌损伤。     

肿瘤坏死因子影响星形胶质细胞分泌神经生长因子的实验研究

为了探索肿瘤坏死因子 α对星形胶质细胞分泌神经生长因子的影响，本实验采取３ 种不同浓度的肿瘤坏死因子 α培养液分别施加于纯化培养的新生大鼠星形胶质细胞，作用２４、４８、７２ ｈ。随后用间接ＥＬＩＳＡ 法测定培养上清液中神经生长因子的含量。结果证明：不同浓度的肿瘤坏死因子 α作用不同时间后可不同程度地促进星形胶质细胞分泌神经生长因子。提示肿瘤坏死因子 α可以影响星形胶质细胞对神经生长因子的表达。     

硫化氢对氧糖剥夺/复氧神经元细胞自噬和凋亡的作用研究

目的　探讨外源性硫化氢（H2S）对氧糖剥夺／复氧（OGD/R）诱导的神经元细胞自噬和损伤的影响,明确H2S减轻大鼠脑缺血再灌注损伤的分子机制。 方法　以大鼠神经元PC12细胞为研究对象,采用经典的OGD/R诱导细胞损伤,硫氢化钠（NaHS）作为H2S的供体预处理后观察H2S对OGD/R诱导的细胞自噬抑制蛋白mTOR、AMPK及其磷酸化AMPK的影响。为明确AMPK在H2S调节PC12细胞自噬中的作用,采用AMPK过表达质粒进行干预,并观察其对H2S减轻PC12细胞损伤的影响。 结果　OGD/R处理的PC12细胞mTOR磷酸化水平降低、AMPK活性增强,NaHS预处理可部分逆转上述改变。而AMPK过表达后,可消除NaHS对OGD/R诱导的自噬和细胞凋亡的抑制作用。 结论　H2S可通过抑制AMPK活化,进而抑制缺血再灌注时大脑神经元过度的自噬和凋亡,最终减轻神经元损伤。