鸡胚后脑内背侧抑制性轴突导向蛋白的表达与23C10阳性神经元的发育相关

目的:初步探讨背侧抑制性轴突导向蛋白即draxin在鸡胚后脑23C10阳性神经元发育过程中的作用。方法:应用免疫组化检测不同发育阶段正常鸡胚后脑内draxin蛋白的表达与23C10阳性神经元及其轴突的发育情况;应用活组织切片与draxin-AP融合蛋白体外孵育的方法,检测23C10阳性神经元及其轴突是否具有与draxin蛋白在体外直接结合的能力。结果:HH18-26发育阶段的鸡胚后脑内,draxin蛋白主要分布在基底节的封套层内;在相同的发育阶段,23C10阳性神经元则在后脑基底节封套层内形成并与周围结构形成大量的轴突联系;大量23C10阳性神经元及其轴突具有与draxin蛋白在体外直接结合的能力。结论:鸡胚后脑内draxin蛋白参与调控早期23C10阳性神经元的形成及其与其他细胞间的轴突投射。     

背侧抑制性轴突导向蛋白的敲减对鸡胚后脑内23C10阳性神经纤维投射的影响

目的 探讨敲减鸡胚后脑内背侧抑制性轴突导向蛋白（draxin）的表达对23C10阳性神经纤维投射特性的影响。 方法 以碱性磷酸酶（ALP）融合蛋白与HH21~22阶段鸡胚后脑活组织切片体外孵育为对照组,以draxin-ALP融合蛋白与HH21~22阶段鸡胚后脑活组织切片体外孵育为实验组,每组10例,检测鸡胚后脑内的23C10阳性神经纤维是否具有与draxin直接结合的能力;以鸡胚后脑内空白质粒电穿孔组为对照,以针对draxin表达的小干扰RNA（siRNA）表达载体质粒电穿孔为实验组,每组18例,观察敲减draxin的效果,以及是否引起鸡胚后脑内23C10阳性神经纤维投射特性的改变。 结果 HH21~22阶段鸡胚后脑活组织切片内,大部分draxin阳性信号与23C10阳性神经纤维重叠;应用电穿孔方法导入draxin的siRNA敲减质粒后,draxin相对表达量显著降低（P<0.05）;HH25~26阶段的鸡胚后脑内,电穿孔一侧的23C10阳性神经纤维的背侧区域内投射纤维分布分散（P<0.05）。 结论 鸡胚后脑发育过程中,draxin可以与23C10阳性神经纤维直接结合,且其在鸡胚后脑内23C10阳性神经纤维成束投射的形成过程中发挥重要的调控作用。     

背侧抑制性轴突导向蛋白对鸡胚脊髓背侧中间神经元发育的影响

目的:探讨在鸡胚脊髓发育早期背侧抑制性轴突导向蛋白(draxin)对脊髓背侧中间神经元(dorsal in-terneurons,dI)迁移特性的影响。方法:应用免疫组织化学的方法观察鸡胚脊髓dI的发育特性;应用电穿孔的方法在鸡胚一侧脊髓内过表达draxin,观察draxin过表达后对鸡胚脊髓内dI神经元发育特性的影响。结果:随着胚胎的发育,鸡胚脊髓内dI3中间神经元首先在脊髓背侧区形成并逐渐向腹侧迁移,而dI2、dI4和dI6中间神经元没有形成明显的腹侧迁移特性;鸡胚脊髓内分别过表达分泌型和跨膜型draxin时,dI3中间神经元的腹侧迁移延迟,且在跨膜型draxin过表达时其受影响程度较高;而dI2、dI4和dI6中间神经元的迁移未受到明显影响。结论:Draxin参与鸡胚脊髓内dI3中间神经元腹侧迁移的调节。     

背侧抑制性轴突导向蛋白的表达与鸡胚脊髓神经嵴细胞迁移的空间及时间相关性

目的:探讨正常鸡胚脊髓发育过程中背侧抑制性轴突导向蛋白的表达时间和表达部位与鸡胚脊髓神经嵴细胞迁移过程的相关性。方法:应用原位杂交、免疫组织化学等方法,观察鸡胚脊髓内背侧抑制性轴突导向蛋白的表达时间和表达部位及神经嵴细胞迁移路径,同时比较两者在时间和空间分布上的相关性;应用免疫组织化学、电穿孔的方法在正常鸡胚一侧脊髓内过表达背侧抑制性轴突导向蛋白,观察背侧抑制性轴突导向蛋白过表达对鸡胚脊髓内神经嵴细胞迁移的影响。结果:正常鸡胚脊髓发育过程中,背侧抑制性轴突导向蛋白的表达时间早于神经嵴细胞开始迁移的时间。背侧抑制性轴突导向蛋白表达由颅侧向尾侧呈节段性分布,而神经嵴细胞在节段性分布的背侧抑制性轴突导向蛋白之间进行迁移;电穿孔过表达背侧抑制性轴突导向蛋白引起相邻部位神经嵴细胞迁移路径的异常。结论:背侧抑制性轴突导向蛋白的表达时间和表达部位与脊髓神经嵴细胞的迁移密切相关。     

不同发育时期鸡胚脊髓内背侧抑制性轴突导向蛋白的表达和神经嵴细胞迁移之间的相关性

目的 探讨不同发育时期的鸡胚脊髓内背侧抑制性轴突导向蛋白（draxin）表达与神经嵴迁移之间在空间分布上的相关性。方法 选
取HH 15-16、HH19-20阶段鸡胚各10只,应用原位杂交、免疫组织化学等方法,观察各阶段鸡胚脊髓内draxin的表达部位及神经嵴细胞迁移路
径,同时比较两者在空间分布上的相关性;应用活组织切片与碱性磷酸酶标记的draxin融合蛋白（draxin-AP）体外孵育的方法,检测迁移路
径内的神经嵴细胞是否具有与draxin蛋白直接结合的能力。结果 随着发育时间的推移,鸡胚脊髓内draxin的表达和神经嵴迁移都具有明显的
由颅侧向尾侧渐进性分布的特性,且draxin的表达部位位于神经管背侧、顶板和背侧生皮肌节之间,这些部位恰均位于神经嵴迁移路径的周围;
同时迁移路径内的神经嵴细胞具有与draxin蛋白体外直接结合的能力。结论 draxin表达在神经嵴迁移路径周围且部分神经嵴具有与draxin蛋白
体外直接结合的能力,推测draxin可能在鸡胚脊髓神经嵴迁移过程中发挥重要的调节作用。     

背侧抑制性轴突导向蛋白抑制鸡胚脊髓神经嵴细胞的迁移

目的:初步探讨背侧抑制性轴突导向蛋白(draxin)在鸡胚脊髓神经嵴细胞迁移过程中的作用。方法:应用神经嵴细胞特异性标记物HNK-1免疫组化染色检测不同发育阶段正常鸡全胚脊髓神经嵴细胞迁移特性;鸡draxin表达载体质粒转染COS7细胞株,收集上清作为条件培养液。分别用含draxin的条件培养液处理体外培养的鸡全胚和鸡胚脊髓神经管,观察在体和离体条件下draxin对脊髓神经嵴细胞迁移特性的影响。结果:HH12-13到HH18-19阶段正常鸡胚脊髓发育过程中,神经嵴形成明显的从头侧到尾侧的渐进性、节段性迁移特性;draxin对体外培养的全胚和神经管内神经嵴细胞的迁移均具有明显抑制性调控作用。结论:Draxin抑制早期鸡胚脊髓神经嵴细胞的迁移。     

鸡胚海马AChE阳性神经元的分布及发育

用乙酰胆碱酯酶组织化学法观察了14、16、18、20d胚龄的鸡海马中乙酰胆碱酯酶阳性神经元的分布和发育。实验表明，海马前区、隔海马区、海马背内侧区、海马背外侧区、背海马、旁海马区中，从16d胚龄开始出现乙酰胆碱酯酶阳性神经元，这些阳性神经元随胚龄增加发生迁移，形态由圆形到多形，胞体由小变大，密度也发生变化。乙酰胆碱酯酶阳性反应神经元可分为强阳性、中等阳性及弱阳性三种。随胚龄增加，海马大部分区域阳性反应由弱到强，16、18d胚龄反应最强，20d胚龄反应减弱。本文对此变化的意义进行了探讨，认为乙酰胆碱酯酶在鸡胚海马发育的一定阶段具有神经营养因子的作用。     

#br# 鸡源Wnt3a融合蛋白表达载体的构建及其对鸡胚脊髓神经前体细胞增殖和轴突形成的影响

目的 构建鸡源Wnt3a 融合蛋白真核表达载体 (pCAG-MCs-Wnt3a-EGFP),并探讨其在鸡胚脊髓发育过程中超表达后对神经前体细胞增殖及轴突形成的影响。 方法 利用分子生物学手段,提取鸡胚脊髓总RNA并获得Wnt3a片段,将其克隆到pCAG-MCs-EGFP载体中构建pCAG-MCs-Wnt3a-EGFP表达载体。在鸡胚发育至2.5～3d (E2.5～E3) 时,利用鸡胚活体电转技术将pCAG-MCs-Wnt3a-EGFP（实验组）和pCAG-MCs-EGFP（对照组）质粒分别转入鸡胚脊髓,E4时取材切片,每组5个胚胎组织,采用免疫荧光染色技术检测Wnt3a和增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白表达变化分析Wnt3a与细胞增殖间的关系,根据载体自发绿色荧光蛋白（GFP）观察脊髓神经前体细胞轴突生成情况。 结果 pCAG-MCs-Wnt3a-EGFP表达载体基因测序结果与Gene bank中基因序列一致,将pCAG-MCs-Wnt3a-EGFP导入鸡胚脊髓中发现绿色荧光。在脊髓组织切片水平上,免疫荧光染色结果表明,Wnt3a在鸡胚脊髓中能够超表达。Wnt3a超表达后,与对照组比较,含有轴突的神经元数量明显减少(n=3, P<0.01),而PCNA 的表达量显著增加(n=3, P<0.01)。 结论 成功构建了鸡源性Wnt3a 融合蛋白真核表达载体,并证实Wnt3a在鸡胚发育过程中促进神经前体细胞的增殖并抑制轴突的形成。     

Neuritin蛋白的纯化及其对PC12细胞和鸡胚DRG神经元生长的影响

目的:纯化毕赤酵母表达的Neuritin蛋白,通过观察其对PC12细胞和鸡胚背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)的作用,研究其神经生物学功能。方法:采用镍离子金属螯合亲和层析法纯化Neuritin蛋白,Bradford法对纯化的Neuritin蛋白进行定量,然后加入到PC12细胞和DRG的培养液中,通过观察PC12细胞突起的生长情况和细胞形态的变化,研究其促进细胞突起生长的功能;通过观察鸡胚DRG的神经纤维生长情况,研究其促进DRG神经纤维生长活性;通过观察鸡胚背根神经节的裂解时间,研究其阻止细胞退化和凋亡的活性。结果:纯化后的Neuritin蛋白经SDS-PAGE电泳显示,获得11 kDa左右的唯一蛋白条带,即Neuritin蛋白;Bradford定量法计算出其浓度为490μg/ml。纯化的Neuritin蛋白加入到PC12细胞培养液中,PC12细胞长出突起,发生类神经元样改变;鸡胚DRG培养液中加入Neuritin蛋白后,长出神经纤维,裂解时间也延长,并与浓度呈正相关。结论:毕赤酵母表达的Neuritin蛋白得到有效纯化,纯化的Neuritin蛋白能促进细胞突起的生长,阻止细胞的退化和凋亡,延长细胞的存活时间,这为进一步研究neuritin的功能及作用机制奠定了良好的实验基础。     

鸡胚发育过程敲减神经型钙粘蛋白表达对视顶盖神经元迁移及神经丝蛋白的影响

目的 阐明鸡胚发育过程神经型钙黏蛋白（N-cadherin）在中枢神经系统中的作用及其对神经丝蛋白(NF)表达的影响。 方法 鸡胚正常培养到第3天（E3）,采用鸡胚带壳开窗培养方法,取出3～4ml蛋清,开窗培养至E5,将N-cadherin干扰载体pGPU6-GFP-neo-N-cadherin-shRNA通过活体电转基因技术导入视顶盖,电转后继续培养到E12,每组收集3个胚胎,取材,固定,包埋,切片后进行荧光免疫组织化学分析相关蛋白的表达。结果 鸡胚发育过程,敲减N-cadherin表达影响神经元迁移,被敲减的细胞主要停留在室管膜区,在N-cadherin受到抑制表达的区域,NF的表达也受到抑制,其表达明显减弱。 结论 N-cadherin的抑制表达可导致神经元的迁移发生紊乱,影响NF的表达。     

The expression profile of the tumor suppressor gene Lzts1 suggests a role in neuronal development

Background : Neuronal circuit assembly comprises a number of developmental processes that ultimately underlie function. Identifying the molecular events that dictate these processes can give key insights into how neuronal circuit formation is coordinated. To begin to identify such molecular mechanisms, we have analysed the expression of a candidate gene of entirely unknown function within the nervous system. Here we reveal the spatial and temporal distribution of Lzts1 in mouse and chick embryonic spinal cord and propose potential biological functions. Results: Lzts1 mRNA is transiently expressed at the border of the ventricular and mantle zones in subsets of sensory and motor spinal neurons. The protein is localized to the cell body, axon, and trailing process of motor, commissural, and dorsal root neurons during development. Conclusions: Taken together, the spatial and temporal distribution of Lzts1 is consistent with a potential function(s) in cell cycle regulation, axon growth or guidance, and/or migration of neurons. Developmental Dynamics 241:984–994, 2012. © 2012 Wiley Periodicals, Inc.     

Influence of adrenocorticotropic hormone on the growth of isolated neurons in culture

The present study reports the influence of adrenocorticotropic hormone (ACTH) on the development of cultured neurons from chick embryo cerebral hemispheres. Cultures were initiated in serum-supplemented medium and then transferred to serum-free hormonally-defined medium containing various concentrations of ACTH1--24. The effects of ACTH on the light microscopic features, metabolic activity and permeation properties were examined. The results demonstrate that ACTH exerts a trophic action on the neurons.     

不同鼻咽癌细胞株对鸡胚尿囊膜模型血管生成影响的比较研究

目的比较不同鼻咽癌细胞株在鸡胚尿囊膜模型上促进血管生成能力的差异。方法选用6日龄鸡胚,开窗后分别种植5-8F、6-10B及CNE-2三种鼻咽癌细胞株,三种细胞株细胞数为2×106/鸡胚者各一组,细胞数为5×105/鸡胚者各一组,另一组为对照组（PBS）,每组10个鸡胚。孵育6日后,统计分析新生血管数及血管面积/鸡胚面积比。结果种植细胞数为5×105/鸡胚时,5-8F、6-10B细胞部分鸡胚有移植瘤形成,CNE-2细胞鸡胚均未见成瘤。种植细胞数为2×106/鸡胚时,三种鼻咽癌细胞株均可100%成瘤,其新生血管数依次递减,分别为（38.7±2.50）、（33.5±4.43）、（29.7±2.71）,差异有统计学意义（P〈0.05）;血管面积/鸡胚面积比分别为（22.2±2.18）%、（18.7±2.45）%、（16.9±2.62）%,均高于对照组的（9.5±1.86）%,差异有统计学意义（P〈0.05）,且5-8F面积比高于其他两种细胞株（P〈0.05）。结论鼻咽癌5-8F、6-10B及CNE-2三种细胞株在鸡胚尿囊膜模型上血管生成能力依次减弱,实验研究可根据实际情况选用。     

The effect of cAMP signaling on the longitudinal extension of spinal sensory neurons in the chicken embryo

Developing sensory axons grow into the spinal cord in a three‐step process: the axons extend toward and into the cord, then branch rostrally and caudally to establish a longitudinal pathway, and finally grow into the grey matter. This study investigated regulation by cAMP of the longitudinal extension of this pathway within the spinal cord. The cAMP pathway was pharmacologically altered in chicken embryos to determine its effects on the establishment of the longitudinal extension of the dorsal funiculus. A forskolin‐induced increase in cAMP in ovo inhibited longitudinal growth by sensory afferents. Furthermore, blocking cAMP activation of protein kinase A (PKA) in ovo with H‐89 substantially increased longitudinal extension. These results demonstrate a specific role for the cAMP/PKA pathway in the initial longitudinal spinal afferent growth in the chicken embryo.     

The effect of nerve growth factor on developing primary sensory neurons of the trigeminal nerve in chick embryos

Summary The response to nerve growth factor (NGF) of two sensory neuron populations of the trigeminal nerve was studied in chick embryos. NGF promoted neuronal survival and cellular hypertrophy in the Gasserian ganglia with minimal effect on the neuron population of the mesencephalic trigeminal nucleus. NGF induced prolific neurite outgrowth from cultured Gasserian ganglia, in contrast, cultured mesencephalic trigeminal neurons remained refractory to NGF treatment.The apparent lack of response of mesencephalic trigeminal neurons to NGF may be explained either by their derivation from placodal material rather than from the neural crest, or their lost sensitivity to NGF due to interaction with the local environment in the central nervous system.