邵阳市2009年流感流行病毒核酸检测结果分析

目的对疑似流感疫情标本进行核酸检测、明确感染因子,为邵阳市流感的防控提供科学依据。方法采用RT-PCR法及Real-Time RT-PCR法对可疑咽拭子标本进行流感病毒核酸分型检测。结果 958份可疑咽拭子标本中有483份流感病毒核酸阳性,阳性率50.42%,其中季节性甲型（甲1亚型/甲3亚型）流感核酸阳性107份,占11.17%;乙型流感核酸阳性13份,占1.36%;甲型H1N1核酸阳性363份,占37.89%.7-24岁年龄段H1N1检测阳性率为73.83%。60岁以上年龄段阳性率仅为1.38%。结论 2009年邵阳市检出的流感流行病毒株以甲型H1N1流感病毒为主。Real-Time RT-PCR技术是流感疫情临床病例诊断可靠的快速诊断方法。     

荧光定量PCR方法快速检测人博卡病毒的研究

目的建立特异、快速、灵敏的、用于人博卡病毒核酸检测的荧光定量PCR方法。方法对博卡病毒的ns1基因应用Clustal W软件进行序列同源性比对,在保守区设计特异性引物和TaqMan探针,并对荧光PCR反应条件进行优化,验证方法的特异性,并将该方法与国际上通用的针对人博卡病毒ns1基因和np基因的普通PCR方法进行灵敏度比对;同时将该方法应用于疑似患者临床标本检测。结果该方法针对ns1基因进行扩增,对人博卡病毒核酸检测有高度特异性,与副流感1、2、3型,甲型、乙型流感病毒,呼吸道合胞病毒,腺病毒,冠状病毒229E、OC43,偏肺病毒以及鼻病毒等均无交叉反应。检测的灵敏度均比国际上通用的扩增ns1基因及np基因的PCR方法高10倍。用该方法从144份急性上呼吸道感染患者咽拭标本中检出了2份博卡病毒阳性,从病毒核酸提取至检测完成仅需3 h左右;用普通PCR仅能检出1份阳性标本,且耗时需5 h左右。结论该研究建立的TaqMan荧光定量PCR是一种快速检测人博卡病毒特异、敏感的方法,适用于临床早期诊断。     

RT-PCR对青岛市小学生乙型流感病毒Victoria系暴发的检测

目的分析青岛地区乙型流感暴发的流行病学特征,探讨RT-PCR方法对乙型流感病毒暴发的诊断价值,并对疫情控制措施做出评价。方法采集暴发性疫情流感样病例的咽拭子,采用QIAGEN试剂盒提取病毒RNA,RT-PCR方法分别扩增甲型和乙型流感病毒核酸的特异片段,然后,对核酸检测阳性标本采用狗肾传代细胞(MDCK)细胞培养,红细胞凝集抑制试验对培养的病毒进行鉴定和分型。结果采集的18份咽拭子中15份乙型流感病毒核酸检测呈阳性,但甲型流感病毒未检出;15份乙型流感病毒核酸阳性标本经MDCK细胞培养,9份标本发生细胞病变,经鉴定和分型,毒株均属于乙型流感病毒Victoria系。结论 RT-PCR方法对乙型流感病毒暴发的检测具有快速、敏感和高度特异性的特点,WHO推荐的2008-2009年流感疫苗成分中乙型流感病毒株(B/Florida/4/2006)为Yamagata系,而青岛地区暴发的流感为乙型流感病毒Victoria系,提示在今后决定我国疫苗成分时是否应考虑地区流行的特点。     

甲型H1N1流感病毒real-time RT-PCR检测方法的研究与应用

[目的]建立一种特异、灵敏、快速的Real-Time RT-PCR方法用于检测甲型H1N1流感病毒核酸.[方法]采用WHO所推荐的引物与探针序列,对Real-Time RT-PCR反应体系和反应条件进行调整优化,检测该方法的特异性和灵敏度.并对疑似甲型H1N1流感病例咽拭子标本进行检测.[结果]该方法对甲型H1N1流感病毒的检测的灵敏度达10-7(HA滴度为1:128),可从疑似甲流感患者咽拭子中直接检测流感病毒核酸,从病毒核酸提取至完成检测仅需2.5 h左右.[结论]建立的TagMan探针法Real-Time RT-PCR是一种检测甲型H1N1流感病毒的快速、特异、敏感的新方法,适合于基层疾控机构及医院开展甲型H1N1流感的应急检测.     

登革病毒实时荧光PCR快速检测技术研究

目的建立Taqman MGB实时荧光PCR技术快速检测登革病毒。方法利用Taqman MGB技术,根据登革病毒3′端非编码区的一段高度保守序列,设计登革1~4型荧光PCR通用引物和TaqmanMGB探针,以登革热毒株作为标准,以乙脑毒株作对照,建立实时荧光PCR检测登革病毒的快速方法。并对8份ELISA法检测阳性的临床血清标本进行RT-PCR及荧光PCR扩增。结果RT-PCR检测8份临床血清标本,2份阳性,阳性率为25%。实时荧光PCR检测登革病毒cDNA灵敏度为0.17pg/μl,病毒液灵敏度为10-5TCID50,与乙脑病毒无交叉反应,检测8份临床血清标本,5份阳性,阳性率为62.5%。从RNA提取到检测结果仅需4h。结论Taqman MGB实时PCR检测方法快速、敏感性高、特异性强,可作为登革病毒的快速检测方法,应用于登革热的临床早期诊断。     

阜阳市2010～2013年流感病原学检测结果分析

目的了解流感病毒感染情况,动态观察流感病毒变异规律。方法使用RT-PCR或Real-time PCR方法对病例咽拭子标本进行流感病毒核酸检测,阳性标本再用MDCK细胞进行病毒分离培养,用红细胞凝集法和红细胞凝集抑制法鉴定病毒。结果 2010年1月～2013年12月共检测流感样病例标本2 723份,流感病毒核酸阳性359份,阳性率为13.18%。其中甲型H1N1、季节性H3、B型、A未分型的流感病毒核酸阳性分别为133份、54份、156份、16份,分别占流感病毒核酸阳性标本的37.05%、15.04%、43.45%、4.46%。5岁以下人群检出率最低,为7.69%。2012～2013年200份核酸阳性标本共分离出69株毒株,分离率为34.5%。结论 2010～2013年阜阳市流感流行以B型流感病毒和甲型H1N1病毒为优势病原,同时有季节性H3型流感病毒的存在。     

一起B型流感疫情的快速检测

目的：采用荧光定量RT-PCR法对疑似流感疫情标本进行快速检测,为疫情中病原体的确定提供快速准确的实验室依据。方法：采集疑似流感人员咽拭子分泌物标本,用荧光定量RT-PCR法快速检测标本中是否存在流感病毒核酸。同时接种MDCK细胞进行分离培养、分型鉴定。结果：共采集标本26份,H5亚型禽流感及甲型流感病毒荧光定量RT-PCR结果均为阴性。取其中10份进行B型流感病毒荧光定量RT-PCR检测,有7份阳性。26份标本中共有13份分离出病毒株,经鉴定均是B型流感病毒。结论：荧光定量RT-PCR法准确快速的检测出流感病原体,并且比组织培养敏感性要高,为疫情的处理提供了及时正确的指导方向。     

胶体金法与病毒分离鉴定在流感诊断中的比较

[目的]比较流感病毒胶体金法快速诊断试剂盒与病毒分离鉴定方法在临床诊断应用中的优劣。[方法]采集临床流感样病人(ILI)鼻拭子标本,分别使用流感病毒胶体金法快速诊断试剂盒及病毒分离鉴定方法予以检测。[结果]2006年1月—2007年3月对851份样本进行现场快速检测,流感抗原阳性标本189份,阳性率为22.21%,其中A型为164份,B型为25份。在851份鼻拭子标本中分离到133株流感病毒株,其中125份为流感快速检测阳性标本。流感胶体金法快速检测试剂的灵敏度为93.98%,特异度为91.09%。[结论]采用胶体金法流感快速诊断试剂对早期流感样病人进行检测,能及时区别流感与其他上呼吸道感染,在临床诊治和流感爆发疫情处理上具有重要意义。     

亳州市2013年甲型H1N1流感病毒基因分析

目的分析亳州市2013年一所学校流感暴发疫情甲型H1N1流感病毒基因及抗原变异情况。方法从132名具有流感症状的学生当中随机采集10份标本,用Realtime RT-PCR方法鉴定甲型H1N1流感病毒,对阳性标本接种MDCK细胞,分离流感病毒,并对甲型H1N1流感病毒株进行血凝素（HA）作基因测序,分析基因及氨基酸位点变异情况。结果 10份标本中Realtime RT-PCR鉴定有8份为甲型H1N1流感病毒核酸阳性,病毒分离培养6份阳性,并对其进行基因测序,HA基因与疫苗株同源性为98.4%,HA基因氨基酸变异分析显示,有多个位点发生变异。结论此次暴发的甲型H1N1流感病毒的基因组HA序列与我国及其他国家的甲型H1N1流感病毒具有较高的同源性,HA基因氨基酸序列发生变异情况,需密切关注甲型H1N1的流行状况。     

荧光定量PCR法快速检测海南省流感样病例样本的结果与分析

[目的]探讨荧光定量PCR检测方法在海南流感病毒检测中的意义. [方法]随机抽取该省流感监测点流感样病例的咽拭子标本459份和当年1起流感暴发标本共14份,应用荧光定量RT-PCR和常规病毒分离方法进行平行检测. [结果]对于473份流感样病例的咽拭子标本,用荧光定量RT-PCR法检测出阳性结果98份,阳性率20.7%;MDCK细胞培养及病毒分离鉴定出阳性结果46份,阳性率9.7%. [结论]荧光定量RT-PCR方法能在短时间内快速检测流感病毒,并且操作简便、特异性强、灵敏度高.所以荧光定量RT-PCR方法可作为海南省流感样病例的一种快速检测手段,为该省流感疫情的快速检测和疫情处置提供科学的实验室依据.     

荧光定量RT-PCR在快速检测流感病毒A型和B型上的应用研究

[目的]探讨荧光定量RT-PCR在流感病毒快速检测上的意义。[方法]收集疑似流感样本20例,分别用定量RT-PCR技术和鸡胚分离培养方法进行检测。[结果]26份标本中定量RT-PCR检测阳性率为57.7%（15/26）,鸡胚分离培养检测的阳性率为26.9%（7/26）。两者的阳性率有统计学差异。[结论]荧光定量RT-PCR方法在检测流感病毒方面具有快速、操作方便、特异性强、灵敏度高优点。因此可以作为一种快速流感病毒检测的诊断方法。     

急性呼吸道感染患者220例非细菌性病原体流行特征分析

目的了解2011年3月—2012年2月北京市丰台区急性呼吸道感染非细菌性病原谱构成及其流行特征,为该区呼吸道传染病的预防控制以及临床诊断、治疗提供实验室依据。方法随机采集哨点医院发热门诊就诊的急性呼吸道感染病例咽拭子标本220例,利用多重实时-聚合酶链反应、聚合酶链反应(RT-PCR、PCR)方法进行流行性感冒(流感)病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、肠道病毒、博卡病毒、偏肺病毒、冠状病毒、鼻病毒和腺病毒9种病毒性病原体的检测和支原体检测,并进行统计分析。结果从220份咽拭子标本中共检出125份阳性标本,阳性率为56.82%。其中有6份标本为双重感染,阳性率较高的为流感病毒(65/131,49.62%)、支原体和副流感病毒(均为26/131,19.85%)。其他病原体的检出率均小于5%。不同病原体检出在季节分布上存在差异:流感病毒冬季检出率最高,支原体秋季检出较多,而副流感病毒感染的高峰期发生在夏季,病原体检出率在季节分布上总体呈现冬季(12—2月)较高,夏季较低的特点。不同性别间病原体检出率无统计学差异。发病3 d内采集的标本流感病毒检出率高于3 d后采集的标本,而支原体相反。结论北京市丰台区急性呼吸道感染非细菌性病原体主要为流感病毒、支原体和副流感病毒。在对急性呼吸道感染病例的诊断治疗中应考虑到不同病原体的高发季节。     

北京市朝阳区2005～2006年流感病原学监测分析

[目的]分析朝阳区2005~2006年度流感监测的病原学检测结果,及时掌握流感流行信息,为制定流感防制方案提供科学依据。[方法]对哨点医院和集体发热疫情进行监测采样,采用细胞培养法和鸡胚接种法分离流感病毒并进行分型鉴定。[结果]自2005年11月~2006年4月共采集流感样咽拭子标本204份,检出流感病毒106株,其中甲1型24株,乙型82株,阳性检出率分别为22.6%和77.4%;流感疫情共涉及到本区26家单位,其中从22所小学发热疫情中分离到流感病毒。流感细胞培养法和鸡胚双腔法的阳性分离率分别为51.96%（106/204）和7.55%（4/53）。[结论]引起本地区流感疫情的流感病毒为乙型和甲1型;流行高峰主要在2006年3~4月;流感病毒易发生变异,而导致在中小学生人群中流行并引起集体发热;细胞培养法较鸡胚接种法更灵敏、阳性分离率更高;应加强流感的全年监测。     

自贡市2009年流感哨点医院检测结果分析

[目的]了解自贡市流感病毒感染状况,为制定预防和控制流感措施提供依据。[方法]采集2009年6～12月自贡市流感哨点医院流感样病人的咽拭子标本,分别用实时荧光Real-time PCR与逆转录聚合酶连反应(RT-PCR)方法对甲型H1N1、季节性流感A(H1N1)亚型、季节性流感A(H3N2)亚型和乙型流感病毒的RNA进行检测。[结果]收到的327例流感样患者的咽拭子标本中,检出甲型H1N1流感119例,阳性率36.4%、季节性流感A(H1N1)亚型阳性16例,阳性率4.9%;季节性流感A(H3N2)亚型阳性4例,阳性率1.2%;未检出乙型流感病毒。甲型H1N1流行时间分布:9月开始流行,当月检出阳性率为38.9%,11月达到顶峰,10月、11月、12月甲型H1N1流感检出的阳性率分别为34.4%、64.5%、29.5%。[结论]自贡市2009年流感流行以甲型H1N1流感为主,流行在11月达到高峰,12月甲型H1N1流感疫情出现明显下降趋势,流感防控取得阶段性成果;季节性流感以A(H1N1)和A(H3N2)亚型为主,无乙型流感发生。     

平顶山市1起中学内甲型H1N1流感暴发的调查

[目的]了解平顶山市实验高级中学甲型H1N1流感发病情况。[方法]对平顶山实验高级中学的17例疑似甲型H1N1流感学生进行调查,并采集咽拭子和鼻拭子标本用实时荧光PCR方法检测H1N1流感病毒核酸。[结果]2009年9月18-27日,平顶山实验高级中学确诊15例甲型H1N1流感,罹患率为0.64%（15/2 346）。男生罹患率为16.92%（11/65）,女生罹患率为4.59%（4/87）,差异有统计学意义（P〈0.05）。[结论]这是1起由甲型H1N1流感病毒引起的暴发。     

2005～2009年内蒙古地区流行性感冒病原监测结果分析

[目的]分析内蒙古地区流感病毒的变化情况,为制定防控措施提供科学依据。[方法]对2005年10月至2009年3月呼和浩特市和包头市6个哨点医院暴发疫情时采集流感样病例咽拭子标本进行流感病毒分离鉴定。[结果]2005-2009年合计采集流感样病例样本2 997份,分离流感病毒354株,阳性检出率为11.81%。分离的流感病毒毒株中,季节性A（H1N1）亚型207株,占58.47%;乙型147株（99株为Victoria系,48株为Yamagata系）,占41.53%。其中,2005-2006年度季节性A（H1N1）亚型与B型同时存在,2006-2007年度、2008-2009年度都以季节性A（H1N1）为主要流行株,2007-2008年监测期间以B型为主要流行毒株。[结论]内蒙古地区2005-2009年流感主要流行毒株是季节性A（H1N1）亚型和乙型。     

石河子市2009～2010年流行性感冒病毒核酸检测结果分析

[目的]对石河子市2009年9月～2010年3月流行期流感病毒进行核酸检测及分析,了解石河子市流感流行情况.[方法]采集流感样病例的咽拭子用逆转录一聚合酶链反应（PCR法）检测流感病毒.[结果]2009年9月～2010年3月共检测1所哨点医院流感样标本385份,检出流感病毒84份,阳性率为21.82％,其中甲型H1N1...     

新型冠状病毒RNA核酸的检测方法研究及应用

[目的 ]　研究和建立引起严重的急性呼吸道综合征 (SARS)的新型冠状病毒RNA核酸的检测方法。　 [方法 ]　使用一步法巢式逆转录聚合酶链扩增法 (RT -PCR)。　 [结果 ]　采自临床留观、疑似和临床诊断病人的 10 46份咽漱液 /咽拭子样品中 ,3份样品SARS冠状病毒RNA核酸为阳性 ;在 482份血清样品中 ,有 5份为阳性。　 [结论 ]　一步法巢式RT -PCR能检测患者急性期咽漱液 /咽拭子和血清样品中的新型冠状病毒RNA核酸 ,但样本采集的时间和咽漱液 /咽拭子采集的质量直接影响检测结果     

2006-2007年营口市流行性感冒监测结果分析

[目的]了解营口市流感主要流行毒株及流行规律。[方法]采用流感样病例的咽拭子标本进行流感毒株分离及鉴定,对流感样病例报告进行分析。[结果]2006年10月至2007年3月哨点医院共报告门诊病例168898例,流感样病例3004例,占1．78％。全年共采集流感样病例咽拭子325份,分离毒株7株,经鉴定均为甲3型。[结论]营口地区流感11月份进入流行高峰,持续到第二年3月。与辽宁省全省流感发病情况基本吻合。     

深圳市某小学1起乙型流行性感冒局部暴发疫情的调查

目的了解1起乙型流行性感冒（流感）的暴发源，采取有效控制措施。方法进行现场流行病学调查，取患者咽拭子、急性期血清做抗体检测及病毒分离。结果总发病病例37例，罹患率5．78％，病例主要症状是发热，咳嗽、咽痛、全身酸痛、头痛、流涕等。对10名发热病人样品PCR法检测结果均为B型流感。结论证实为1起乙型流行性感冒局部暴发。