反义周期蛋白B1基因抑制HT29细胞的增殖

用ＤＮＡ重组技术将人类ｃｙｃｌｉｎＢ１基因的全长ｃＤＮＡ，反向插入到真核表达载体ｐＸＪ４１－ｎｅｏ的ＢａｍＨ１位点，得到ｃｙｃｌｉｎＢ１基因的反义ＲＮＡ表达载体ｐＡＳ－Ｂ１。利用ＤＮＡ磷酸钙共沉淀方法，将ｐＡＳ－Ｂ１转染进ＨＴ２９细胞。在含有Ｇ４１８的培养基中，挑选出独立的细胞克隆。利用ｃｙｃｌｉｎＢ１ｃＤＮＡ作探针，Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交鉴定出一株内源性ｃｙｃｌｉｎＢ１ｍＲＮＡ受到抑制的细胞株ＨＴＢ１。比较ＨＴＢ１与对照细胞ＨＴ２９发现，ｃｙｃｌｉｎＢ１的反义ＲＮＡ明显抑制ＨＴ２９细胞的增殖，细胞内３Ｈ－ＴｄＲ参入量减少。流式细胞光度术分析，处于Ｇ１期细胞比率的升高与Ｓ期、Ｇ２＋Ｍ期细胞数量的下降都十分显著。     

反义Id基因转染HT29细胞后TGF—α,βmRNA表达的研究

为了探讨Ｉｄ基因的反义核酸对ＨＴ２９细胞生长和增殖的作用，本研究用反义的Ｉｄ基因要人结肠癌细胞株ＨＴ２９细胞后，发现ＨＴ２９细胞的生长受到抑制，＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入率及软琼脂集落形成明显降低，ＴＧＦ－ＲＮＡ表达降低，而ＴＧＦ－βｍＲＮＡ升高上述结果初步表明，Ｉｄ基因的反义核酸可抑制ＨＴ２９细胞的 增殖，为结直肠癌的基因治疗提供了一种新的可能的途径，ＴＧＦ－αｍＲＮＡ在转染后变化的相互关系有待进一步探     

反义Id基因转染HT29细胞后TGF─α、βmRNA表达的研究

为了探讨Ｉｄ基因的反义核酸对ＨＴ２９细胞生长和增殖的作用。本研究用反义Ｉｄ基因转染人结肠癌细胞株ＨＴ２９细胞后，发现ＨＴ２９细胞的生长受到抑制，３Ｈ－ＴｄＲ掺入率及软琼脂集落形成能力明显降低，ＴＧＦ－αｍＲＮＡ表达降低，而ＴＧＦ－βｍＲＮＡ升高。上述结果初步表明，Ｉｄ基因的反义核酸可抑制ＨＴ２９细胞的生长和增殖，为结直肠癌的基因治疗提供了一种新的可能的途径，ＴＧＦ－α、βｍＲＮＡ在转染后表达变化的相互关系尚有待进一步探讨     

APP基因转染SK-N-SH细胞中阿尔兹海默病相关基因表达水平的变化

目的探讨淀粉样前体蛋白(APP)表达对AD相关基因表达水平的影响。方法构建APP基因的真核表达质粒,并转染人神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH细胞,实时定量PCR法检测转染细胞中SIRT1、Tau、PS1、PS2及Apo E4的表达水平变化。结果成功构建了APP基因的真核表达载体,相对于空载体转染组,转染24、48 h时APP基因的过表达对SK-N-SH中SIRT1基因的表达具有明显的抑制作用(P0.01、P0.05);对Apo E4的表达水平有一定的上调作用(P0.001)。转染24、48 h时,PS2基因的表达水平均有一定的上调,但均未发现差异有统计学意义(P0.05)。转染24 h时,对PS1有上调趋势,但差异无统计学意义(P0.05),转染48h时,则有下调作用(P0.05)。对Tau,转染24 h时有明显的上调作用(P0.001),但转染48 h时,则有下调趋势,差异无统计学意义(P0.05)。相对于空载体转染组,APP基因转染组的细胞活力显著降低。结论 APP基因的过表达对SK-N-SH细胞中SIRT1基因的表达具有明显的抑制作用;对Apo E4、PS2的表达水平有一定的上调作用,对Tau、PS1的表达水平有上调和下调作用不一,表明这些基因之间存在密切关系和对AD病理机制影响的复杂性,这为揭示不同AD相关基因之间的相互影响及调控机制提供一定的实验证据。     

TNF基因转染后分泌不同水平TNF的LAK细胞克隆增殖能力和杀？…

在逆转录病毒介导下将ＴＮＦ基因转染入小鼠ＬＡＫ细胞中，采用Ｇ４１８抗性筛选和有眼稀释法，将ＬＡＫ细胞克隆化，并筛选出３株分泌不同水平ＴＮＦ的ＬＡＫ细胞克隆。结果表明，这３株ＬＡＫ细胞克隆分泌的ＴＮＦ水平、增殖能力和杀伤生均显著高于对照组ＬＡＫ细胞。而高分泌株的ＬＡＫ细胞克隆，其增殖能力和杀伤活性最高；中分泌株次之；低分泌株相对较低。抗ＴＮＦ单抗可显著抑制此３株ＬＡＫ细胞体外杀伤活性，表明基杀伤活性     

高迁移率族蛋白B1基因的克隆及其与神经管发育的相关关系

目的:构建神经管cDNA文库,寻找神经管发育相关基因。方法:提取E8.5 d金黄地鼠神经管总RNA;SMART技术构建神经管cDNA噬菌体表达文库;重组噬菌体PCR鉴定。将出现频率很高的重组噬菌斑,经质粒转化、酶切鉴定和DNA序列分析,证实为高迁移率族蛋白B1基因(HMGB1)。将HMGB1 cDNA片段回收、纯化,制备探针;Northern杂交检测不同发育阶段神经管中HMGB1 mRNA的表达变化。结果:构建的HMGB1cDNA片段含有完整的cDNA序列。Northern杂交显示:随胚胎发育,神经管HMGB1 mRNA表达量逐渐增加,E10 d增加最为明显,E12 d仍处于较高水平;而8.5 d高温致畸胚神经管,HMGB1 mRNA表达量较对照组明显减少。结论:HMGB1基因的表达与神经管发育及高温致神经管畸形的发生密切相关。     

转人B7.2基因的L929细胞对T细胞增殖和分泌IL-10的作用

应用RT-PCR法,从由LPS刺激的人的DC细胞中抽提mRNA,扩增获得编码人B7.2分子的cDNA,并将其克隆到PMD18-T载体,经PCR、酶切及测序进行鉴定确证,进而构建PEGZ-term-B7.2的真核表达载体。脂质体法共转染包装细胞293T,用含有完整病毒颗粒的293T细胞的上清感染L929细胞,经Zeocin筛选,建立稳定表达人B7.2分子的L929基因转染细胞株。并证实了B7.2基因转染细胞能有效地促进T细胞的体外增殖和促进IL-10的分泌。     

免疫组化和原位杂交技术联合检测sFLK-1片段基因转染后的表达

血管内皮细胞生长因子 (vascularendothelialcellgrowthfactor,VEGF)与其受体Flt 1、FLK 1/KDR的相互作用是调控肿瘤血管形成的关键 ,阻断VEGF与相应受体的结合成为目前抗肿瘤血管形成生物学治疗的热点。本文将转染至肿瘤细胞系S180和B16的外源基因sFLK 1片段接种到纯系小鼠BABL/C和C5 7的皮下 ,观察转染后基因分别在蛋白质和mRNA水平上的表达特点。1　材料与方法1.1　材料及试剂　细胞株 :B16 sFLK 1fragment、S180 sFLK 1fragment、B16 空载体、S180 空载体为本实验获得。各相应对照亲代细胞株为本研究室保存。纯系B…     

IFN—γ对IL—2基因转染B16细胞治疗肿瘤的增强作用

本实验在完成ＩＬ－２基因转染瘤苗的基础上，探索了重组ＩＦＮ－γ对其效果的增强作用。结果表明，ＩＬ－２基因转染使Ｂ１６细胞成瘤性显著降低；小鼠经ＩＬ－２基因修饰的Ｂ１６细胞免疫后，对接种的亲代Ｂ１６细胞有保护作用；ＩＬ－２基因转染的Ｂ１６细胞对接种亲代Ｂ１６细胞的小鼠有一定的治疗作用，与重组ＩＦＮ－γ联合应用后，治疗作用加强。上述结果表明，佐以合适的重组细胞因子，有可能提高单基因转染瘤苗的作用，是一条值得探索的途径     

对小鼠脾脏B淋巴细胞活化过程中CD23表达的研究

用流式细胞计技术研究了ＣＤ２３在新制备的小鼠脾肘Ｂ细胞的表达及Ｂ细胞活化过程中ＣＤ２３表达的变化，发现脾脏Ｂ细胞形成ＣＤ２３＾＋和ＣＤ２３＾－两个主要细胞群，ＣＤ２３＾＋细胞主要存在于浮力密度较高的小Ｂ细胞群中，而ＣＤ２３＾－Ｂ细胞则主要为浮力密度较低的大Ｂ细胞。用细菌脂多糖刺激新制德的脾脏Ｂ细胞，可诱导ＣＤ２３表达的丢失。脾脏Ｂ细胞受细菌脂多糖刺激后细胞逐渐增大，在最初２４ｈＣＤ２３的表达提高，     

B7—1（CD80）基因的克隆及其在小鼠黑色素瘤细胞中的表达

应用ＲＴ－ＰＣＲ技术从人Ｂ淋巴瘤细胞系Ｒａｊｉ中克隆到Ｂ７－１（ＣＤ８０）ｃＤＮＡ，并经测序证实，将其插入至真核表达载体ｐＬＸＳＮ中，用脂质体转染小鼠黑色素瘤细胞Ｂ１６，Ｇ４１８筛选，并经流式细胞仪检测，得到了细胞表面表达Ｂ７－１的重组克隆。ＰＣＲ从其基因组ＤＮＡ中扩增到Ｂ７－１基因，提示Ｂ７－１ ｃＤＮＡ已整合至宿主细胞的基因组ＤＮＡ中，本文为研究Ｂ７－１在肿瘤免疫中所起的作用奠定了基础。     

三尖杉酯碱对HL60细胞动粒蛋白B基因表达的影响

为了了解三尖杉酯碱对白血病细胞杀伤的分子机制，用间接免疫荧光，免疫印迹，分子杂交和点杂交的方法探讨了ＨＴ的抗急性粒细胞白血病ＨＬ－６０效应和动效 ／着丝粒蛋白这间的关系。     

白细胞介素-1β及肿瘤坏死因子-α对脑损伤后胶质细胞c-fos mRNA表达的影响

本研究用分子杂交技术观察了白细胞介素-1β及肿瘤坏死因子-α对脑损伤后及培养的胶质细胞c-fosmRNA表达的影响。结果发现：脑损伤后损伤周围组织c-fosmRNA表达圣动态变化：1h后增加170％．12h后增加30％，24h后增加130％。发现白细胞介素-1β和肿瘤坏死因子-α能显著增加脑损伤后12h及24hc-fosmRNA的表达；当培养的胶质细胞中加入此二者后1hc-fosmRNA表达明显增加，12h后有所下降。又发现同时加入此二者时，c-fosRNA表达增加更加显著。以上结果提示；白细胞介素-1β和肿瘤坏死因子-α能影响脑损伤后胶质细胞c－fosmRNA的表达，它们对胶质细胞的作用可能与c-fos基因有关。