c-jun反义核酸对自体移植静脉内膜增生的影响

目的:观察反义c-jun核酸对自体移植静脉内膜增生的影响。方法:选择20只SD大鼠,等分为实验组和对照组,均行自体颈外静脉、颈总动脉移植手术,实验组移植静脉周围和血管吻合口周围应用反义c-jun核酸凝胶涂布;对照组仅行凝胶涂布。术后周取出移植血管,分2别行病理学、免疫组织化学检测移植血管内膜厚度,内膜平滑肌细胞数及增殖细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen,PCNA)、脱氧核糖核酸和α-肌动蛋白等反映血管平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecell,VSMC)增殖情况和表型转换的指标的表达情况。结果:移植静脉术后动脉化,管壁增厚,但转染c-jun反义核酸组移植血管内膜厚度(实验组和对照组均数差值为-20.7170,P<0.01)及VSMC实验组和对照组比较t值为-13.011,P<0.01)(增殖均较对照组减少,PCNA(实验组和对照组均数差值为-19.2310,P<0.01)和DNA(实验组和对照组比较值为F55.000,P<0.01)阳性表达情况亦较对照组明显减少,α-肌动蛋白的表达较对照组升高(实验组和对照组比较q值为5.503,P<0.01)。结论:反义c-jun核酸可抑制VSMC的表型转化及细胞分裂而减少VSMC的增殖,从而有效的抑制移植静脉内膜的过度增生。     

c-jun反义核酸对自体移植静脉内膜增生的影响

目的：观察反义c-jun核酸对自体移植静脉内膜增生的影响。方法：选择20只SD大鼠，等分为实验组和对照组，均行自体颈外静脉、颈总动脉移植手术，实验组移植静脉周围和血管吻合口周围应用反义c-jun核酸凝胶涂布；对照组仅行凝胶涂布。术后2周取出移植血管，分别行病理学、免疫组织化学检测移植血管内膜厚度，内膜平滑肌细胞数及增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)、脱氧核糖核酸和α-肌动蛋白等反映血管平滑肌细胞(vascular smooth musclecell，VSMC)增殖情况和表型转换的指标的表达情况。结果；移植静脉术后动脉化，管壁增厚，但转染c-jun反义核酸组移植血管内膜厚度(实验组和对照组均数差值为-20．7170，P&;lt;0．01)及VSMC(实验组和对照组比较t值为-13．011，P&;lt;0．01)增殖均较对照组减少，PCNA(实验组和对照组均数差值为-19．2310，P&;lt;0．01)和DNA(实验组和对照组比较F值为55．000，P&;lt;0．01)阳性表达情况亦较对照组明显减少，α-肌动蛋白的表达较对照组升高(实验组和对照组比较q值为5．503，P&;lt;0．01)。结论：反义c-jun核酸可抑制VSMC的表型转化及细胞分裂而减少VSMC的增殖，从而有效的抑制移植静脉内膜的过度增生。     

纤维蛋白胶外支架转染PCNA基因反义寡核苷酸预防移植静脉再狭窄

背景:前期研究成果,纤维蛋白胶不仅是一种良好的非限制性、生物可降解血管外支架,能够预防移植静脉内膜和中膜增生,而且是一种良好的药物缓释系统,能够提高血管外膜基因转染效率.目的:验证应用纤维蛋白胶外支架转染PCNA基因反义寡核苷酸预防移植静脉再狭窄的作用.方法:建立兔颈外静脉颈总动脉旁路移植模型,随机分为模型组、纤维蛋白胶支架组、纤维蛋白胶联合反义PNCA组.后两组分别给予纤维蛋白胶和纤维蛋白胶与携带PCNA反义寡核苷酸腺病毒的混合物于静脉桥外周均匀喷洒.结果与结论:移植后第28天模型组静脉移植物内膜和中膜增生明显,纤维蛋白胶外支架组静脉移植血管内膜和中膜增生程度明显减少(P < 0.01),纤维蛋白胶联合反义PNCA组内膜和中膜增生程度明显少于纤维蛋白胶外支架组(P < 0.05).纤维蛋白胶联合反义PNCA组PCNA基因mRNA及蛋白表达明显减少纤维蛋白胶外支架组(P < 0.05),纤维蛋白胶外支架组表达明显弱于模型组(P < 0.05).提示血管外膜反义PCNA转染可进一步抑制移植静脉管壁PCNA表达,纤维蛋白胶外支架联合反义PCNA对移植静脉内膜和中膜增生有协同抑制作用.     

纤维蛋白胶外支架转染PCNA基因反义寡核苷酸预防移植静脉再狭窄

背景：前期研究成果,纤维蛋白胶不仅是一种良好的非限制性、生物可降解血管外支架,能够预防移植静脉内膜和中膜增生,而且是一种良好的药物缓释系统,能够提高血管外膜基因转染效率。目的：验证应用纤维蛋白胶外支架转染PCNA基因反义寡核苷酸预防移植静脉再狭窄的作用。方法：建立兔颈外静脉颈总动脉旁路移植模型,随机分为模型组、纤维蛋白胶支架组、纤维蛋白胶联合反义PNCA组。后两组分别给予纤维蛋白胶和纤维蛋白胶与携带PCNA反义寡核苷酸腺病毒的混合物于静脉桥外周均匀喷洒。结果与结论：移植后第28天模型组静脉移植物内膜和中膜增生明显,纤维蛋白胶外支架组静脉移植血管内膜和中膜增生程度明显减少（P〈0.01）,纤维蛋白胶联合反义PNCA组内膜和中膜增生程度明显少于纤维蛋白胶外支架组（P〈0.05）。纤维蛋白胶联合反义PNCA组PCNA基因mRNA及蛋白表达明显减少纤维蛋白胶外支架组（P〈0.05）,纤维蛋白胶外支架组表达明显弱于模型组（P〈0.05）。提示血管外膜反义PCNA转染可进一步抑制移植静脉管壁PCNA表达,纤维蛋白胶外支架联合反义PCNA对移植静脉内膜和中膜增生有协同抑制作用。     

纳米粒子介导Egr-1 DNA酶转染抑制移植静脉内膜增生

背景:应用基因防治移植血管狭窄、闭塞现已被普遍公认,但如何增加其转染效率现已成为焦点及热点问题。目的:观察以纳米粒子为载体的外源性Egr-1 DNA酶局部转染对移植静脉内膜增生的影响。方法:构建Egr-1DNA酶,应用聚乳酸聚乙醇酸共聚物和聚乙烯醇包载Egr-1 DNA酶,制备纳米级粒子混合物。建立自体静脉移植模型210只,随机分成3组,转基因组转染以纳米粒子为载体的Egr-1 DNA酶,空载体组单纯转染纳米粒子包载的空载体,对照组不予特殊处理。结果与结论:转基因组内膜中Egr-1基因的mRNA及蛋白产物表达较其他两组明显减少(P<0.05);在术后7,14,28d,转基因组内膜增生厚度较其他两组明显减少(P<0.01);转基因组血管平滑肌细胞凋亡百分比较其他两组明显增高(P<0.05)。结果表明Egr-1DNA酶的表达能有效抑制自体移植静脉内膜的增生及促进血管平滑肌细胞凋亡。     

纳米粒子介导Egr-1 DNA酶转染抑制移植静脉内膜增生

背景：应用基因防治移植血管狭窄、闭塞现已被普遍公认,但如何增加其转染效率现已成为焦点及热点问题。目的：观察以纳米粒子为载体的外源性Egr-1 DNA酶局部转染对移植静脉内膜增生的影响。方法：构建Egr-1DNA酶,应用聚乳酸聚乙醇酸共聚物和聚乙烯醇包载Egr-1 DNA酶,制备纳米级粒子混合物。建立自体静脉移植模型210只,随机分成3组,转基因组转染以纳米粒子为载体的Egr-1 DNA酶,空载体组单纯转染纳米粒子包载的空载体,对照组不予特殊处理。结果与结论：转基因组内膜中Egr-1基因的mRNA及蛋白产物表达较其他两组明显减少（P〈0.05）;在术后7,14,28d,转基因组内膜增生厚度较其他两组明显减少（P〈0.01）;转基因组血管平滑肌细胞凋亡百分比较其他两组明显增高（P〈0.05）。结果表明Egr-1DNA酶的表达能有效抑制自体移植静脉内膜的增生及促进血管平滑肌细胞凋亡。     

自体移植静脉模型中环氧化酶2表达及其与移植静脉狭窄的关系

背景:环氧化酶2是与炎症反应密切相关的酶,其表达程度可能与移植静脉的狭窄相关。目的:观察环氧化酶2在移植静脉中的表达情况,分析环氧化酶2的表达与移植静脉血管狭窄的相关性。方法:实验分为2组,实验组在建立兔自体颈外静脉-颈总动脉移植模型后应用环氧化酶2抑制剂干预,对照组建模后正常喂养,于静脉移植后2,8,12周观察移植静脉血管壁增生情况及血管中环氧化酶2表达的差异。结果与结论:术后各移植静脉均保持通畅。正常静脉无明显环氧化酶2表达,移植静脉环氧化酶2表达明显增高。实验组移植静脉中环氧化酶2mRNA表达较对照组低,移植静脉内膜及中膜增厚程度也低于对照组。结果表明,环氧化酶2在移植静脉中出现明显的表达增高,抑制移植静脉中环氧化酶2的表达可以减缓移植静脉血管壁的增生。     

分米波对家兔移植静脉内皮细胞及内膜增生影响的研究

目的：探讨分米波对移植静脉内皮细胞及内膜增生的影响。方法：构建家兔自体股静脉—股动脉移植模型，实验组对手术部位行分米波照射，对照组空白对照。分别于移植术后1、2、4周取移植静脉行亚硝酸银染色观察内皮细胞覆盖情况：HE及弹力纤维染色观察内膜、中膜及外膜厚度：增殖细胞核抗原（PCNA）免疫组化染色观察管壁细胞增殖情况：透射电镜观察超微结构变化。结果：与对照组相比，实验组内皮细胞修复较快，肌—内皮连接重建快，PCNA染色阳性细胞数目较少，血管内膜及中膜增生程度较轻，差异有显著性意义（P〈0．01）。结论：分米波能促进移植静脉内皮细胞的修复，减轻内膜的增生。     

人内皮型一氧化氮合成酶基因转染桡动脉的表达

目的:桡动脉作为血管桥材料在冠状动脉旁路移植术中具有重要作用,但血管桥痉挛一直是困扰桡动脉移植的难题.实验通过腺病毒载体介导的人内皮型一氧化氮合成酶基因(AdCMVeNOS)转染人桡动脉,体外培养后检测人内皮型一氧化氮合成酶基因的表达,观察其对内膜增生的影响.方法:①实验于2005-03104在解放军沈阳军区总医院完成.实验用Enos-Ad由该院麻醉科张铁铮主任惠赠.桡动脉来自15例冠状动脉旁路移植手术患者剩余桡动脉.将桡动脉横切成5 mm血管环,采用随机数字表法分为3组,对照组、空载腺病毒液感染组、内皮型一氧化氮合酶基因转染组,每组8份.空载腺病毒液感染组、内皮型一氧化氮合酶基因转染组桡动脉血管环分别置于空载腺病毒液和AdCMVeNOS溶液中1 h,取出后体外培养14 d.应用多聚寡核苷酸探针和高敏感标记技术检测外源性基因内皮型一氧化氮合酶mRNA的表达:免疫组织化学染色方法检测内皮型一氧化氮合酶蛋白的表达:苏木精-伊红染色及弹性纤维染色后,应用计算机图像分析系统检测桡动脉内膜、中膜增生情况.结果:①3组培养的桡动脉在14 d后有新内膜形成和显著的中膜增厚,内皮型一氧化氮合酶基因转染组内膜厚度及内膜/中膜厚度比值低于对照组(P＜0.01),空载腺病毒液感染组与对照组差异无显著性(P＞0.05).②培养14d后,内皮型一氧化氮合酶基因转染组内膜和中膜可检测到内皮型一氧化氮合酶mRNA和蛋白质表达,对照组及空载腺病毒液感染组未见明显表达.结论:腺病毒载体介导的人内皮型一氧化氮合成酶基因成功转染体外培养桡动脉中并有效表达,内皮型一氧化氮合酶基因具有防治体外培养桡动脉内膜增生的作用.     

内皮型一氧化氮合酶基因转染对血管损伤后新生内膜增生的影响

背景:一氧化氮能够抑制血管平滑肌细胞的迁移和增殖,而一氧化氮合酶是其合成的关键酶,有关一氧化氮合酶基因体内转染对平滑肌细胞及动脉粥样硬化血管损伤后内膜增生影响少有报道。目的:观察内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)基因体内局部转染对动脉粥样硬化大鼠血管损伤后新生内膜增生的抑制作用。方法:建立动脉粥样硬化Wistar大鼠颈动脉球囊损伤模型,建模后随机分成空白对照组、AdCMV-lacz对照组和AdCMV-eNOS组,分别将PBS,AdCMV-lacz和AdCMV-eNOS体内转染至以上3组大鼠的损伤血管壁。转染2周后培养并鉴定损伤局部平滑肌细胞,并用RT-PCR法检测各组损伤及转染后血管平滑肌细胞eNOS mRNA的表达,同时观察转染后不同时期新生内膜增生的影响。结果与结论:AdCMV-eNOS组的颈总动脉血管平滑肌细胞可表达eNOS mRNA。3组大鼠转染后1和3个月,AdCMV-eNOS组内膜/中膜面积比值低于空白对照组和AdCMV-lacz对照组(P<0.01)。结果显示,eNOS基因体内转染损伤后血管可以抑制血管新生内膜增生,减少再狭窄发生率。     

Nitric oxide synthase gene therapy: progress and prospects

NOS gene therapy has been the focus of extensive research as dysfunction of this enzyme has been implicated in several cardiovascular diseases. Research has concentrated on comparing the effect of gene delivery of NOS isoforms (eNOS, iNOS and nNOS) in healthy and diseased animal models on intimal hyperplasia, restenosis, vascular tone and ischemia-reperfusion injury. Most results demonstrate therapeutic benefits following vascular gene delivery of all NOS in pre-clinical models of cardiovascular disease. eNOS has been shown to have particular promise as it promotes re-endothelialisation and inhibits intimal hyperplasia in injured blood vessels. The ultimate goal is to translate the benefit of NOS gene therapy in animal models into clinical practise. To develop NOS gene therapy for clinical use further work needs to be undertaken to improve delivery systems and vectors to minimise detrimental side-effects and enhance positive treatment outcomes. This review focuses on current research on NOS gene therapy in cardiovascular disease and identifies the next steps that would be necessary to lead to clinical trials.     

内皮型一氧化氮合酶基因转染对血管损伤后新生内膜增生的影响

背景：一氧化氮能够抑制血管平滑肌细胞的迁移和增殖,而一氧化氮合酶是其合成的关键酶,有关一氧化氮合酶基因体内转染对平滑肌细胞及动脉粥样硬化血管损伤后内膜增生影响少有报道。目的：观察内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase,eNOS）基因体内局部转染对动脉粥样硬化大鼠血管损伤后新生内膜增生的抑制作用。方法：建立动脉粥样硬化Wistar大鼠颈动脉球囊损伤模型,建模后随机分成空白对照组、AdCMV-lacz对照组和AdCMV-eNOS组,分别将PBS,AdCMV-lacz和AdCMV-eNOS体内转染至以上3组大鼠的损伤血管壁。转染2周后培养并鉴定损伤局部平滑肌细胞,并用RT-PCR法检测各组损伤及转染后血管平滑肌细胞eNOS mRNA的表达,同时观察转染后不同时期新生内膜增生的影响。结果与结论：AdCMV-eNOS组的颈总动脉血管平滑肌细胞可表达eNOS mRNA。3组大鼠转染后1和3个月,AdCMV-eNOS组内膜/中膜面积比值低于空白对照组和AdCMV-lacz对照组（P〈0.01）。结果显示,eNOS基因体内转染损伤后血管可以抑制血管新生内膜增生,减少再狭窄发生率。     

超声辐照对兔移植静脉内膜增生的影响

目的 观察超声辐照对移植静脉内膜增生的影响,以期寻找防治内膜增生的新方法.方法 将32只实验兔随机分为超声辐照组和对照组,每组16只,建立兔自体颈内静脉移植替代颈总动脉模型.对照组仅常规术后处理,超声辐照组术后当天至第7天使用超声（2.190 W/cm2,0.8 MHz）辐照移植血管段,于术后第2、4周分别使用彩色多普勒超声和数字减影血管造影观察两组移植血管的通畅率;光、电镜观察两组移植静脉的组织形态学改变;增殖细胞核抗原（PCNA）免疫组织化学染色观察两组血管内膜平滑肌细胞（SMC）的增殖情况.结果 术后第4周,对照组、超声辐照组通畅率分别为87.5%及93.8%,两组比较差异无统计学意义（P〉0.05）;超声辐照组内膜厚度减少35%,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）;超声辐照组术后第2、4周PCNA阳性细胞数均明显低于对照组（5.7±0.5 vs.16.1±1.5,15.1±2.6 vs.50.2±5.3）,两组比较差异有统计学意义（P〈0.05）.结论 在兔自体静脉移植模型上,超声辐照可以降低SMC的增殖,减轻内膜增生.因而,超声辐照可考虑作为一种防治静脉移植后再狭窄的治疗方法.     

静脉内皮细胞功能和组织形态与高脂血症的关系

背景：自体静脉移植是临床治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病的常用手段，明确其在移植前的基础病变，将为进一步研究移植静脉的保护，降低移植静脉的再狭窄奠定基础。 目的：观察冠状动脉粥样硬化性心脏病的独立影响因素高脂血症对可用于移植静脉内皮功能和组织形态的影响。 设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2005-04/10在解放军第二军医大学附属长海医院全军心脏外科重点实验室完成。 材料：选用成年雄性健康家兔50只，按随机数字表法分为对照组和高脂血症模型组，每组25只。 方法：对照组予以普通饮食，每只每日喂饲基础饲料100～120g，饮水不限。高脂血症模型组予以高脂饮食，即除普通饮食外，每只每日加喂胆固醇1g。 主要观察指标：分别在实验前和喂养2，4，8，12周末，采集血样本，获取颈内静脉标本，检测血脂水平；观察颈内静脉内皮型一氧化氮合酶蛋白表达、一氧化氮生成量和组织形态变化。获取静脉标本前应用超声多普勒检测颈内静脉和颈动脉血流，并观察其管壁厚度、管腔内径以及有无脂质或粥样硬化斑块等。 结果：①高脂血症模型组家兔高脂喂养8周末血脂水平高于实验前及对照组（P〈0．01），并稳定于此较高水平，同时出现颈动脉脂质斑块。②高脂血症模型组家兔高脂喂养8，12周末颈内静脉内皮型一氧化氮合酶蛋白表达水平、一氧化氮生成量低于实验前及对照组（P〈0．05），可见内皮剥脱，弹力纤维明显减少甚至消失，未见泡沫细胞和粥样斑块。 结论：高脂血症可导致静脉内皮功能不全和组织形态学异常，但若将其作为桥血管材料移植到动脉系统，将会严重影响移植静脉的重塑，甚至导致移植静脉再狭窄。     

转染血小板源性生长因子-B干扰性小RNA防治兔血管再狭窄的实验研究

目的：观察血小板源性生长因子-B（PDGF-B）mRNA特异性dsRNA对兔血管内膜增生的抑制作用。方法：建立兔髂动脉再狭窄模型：构建PDGF-B干扰性小RNA（siRNA）表达载体并转染兔髂动脉内膜，观察血管内膜表达增殖细胞核抗原（PCNA）；DPDGF—B mRNA的变化；形态测量内膜厚度和内膜面积。结果：PDGF-B siRNA显著抑制血管平滑肌细胞表达PCNA、PDGF-BmRNA和内膜增生。结论：构建的PDGF-B siRNA可抑制实验性血管再狭窄。