X-刀治疗大鼠C6脑胶质瘤诱发的细胞凋亡

目的：观察X-刀治疗胶质瘤的作用，并探讨诱发细胞凋亡效应。方法：采用DNA琼脂糖凝胶电泳、超微结构观察及新兴的DNA片段末端标记方法对各组C6大鼠脑胶质瘤发生的细胞凋亡进行研究。结果：15、20及30Gy各组在治疗后24h内均出现明显的细胞凋亡，DNA末端标记法检测的结果不但与前述方法结果相符，还显示出其准确性高等特性。研究中还发现各治疗组均有坏死同时出现。结论：X-刀治疗后诱发细胞凋亡的同时还致细胞坏死，这种效应随剂量增加渐趋明显，构成SRS治疗胶质瘤发挥作用的两个方面。     

大鼠脑胶质瘤伽玛刀治疗机制的实验研究

目的研究大鼠脑胶质瘤伽玛刀治疗的机制，初步探讨胶质瘤细胞凋亡和坏死的发生规律。方法立体定向法制作C6大鼠脑胶质瘤模型18只，分为实验一、二组和对照组，实验组于肿瘤接种后21d行伽玛刀治疗，实验一组、实验二组照射剂量分别为9Gy、12Gy，治疗后1周行病理检查及流式细胞学检查测定肿瘤细胞的凋亡和坏死，分析凋亡率和坏死率与照射剂量的关系。结果实验组坏死特点明显不同于对照组，实验组可见肿瘤细胞凋亡。流式细胞学检查实验一、二组肿瘤细胞的凋亡和坏死明显高于对照组，随着照射剂量的增加，肿瘤的坏死增加、凋亡反而降低。结论肿瘤细胞的凋亡和坏死皆为伽玛刀治疗胶质瘤的作用机制．提高肿瘤细胞的凋亡具有重要临床意义。     

Ki-67和拓扑异构酶Ⅱα在脑胶质瘤中的表达及意义

目的检测脑胶质瘤中Ki-67和拓扑异构酶Ⅱα（TopoⅡα）的表达情况,并分析其表达强度与肿瘤病理分级的关系。方法采用免疫组织化学方法检测43例脑胶质瘤中Ki-67和TopoⅡα的表达情况。结果随着肿瘤病理级别的提高,Ki-67和TopoⅡ-α标记指数均增加,低级别组（Ⅰ、Ⅱ级）与Ⅲ级、Ⅳ级肿瘤之间的差异具有显著性意义（P〈0.05）。Ki-67与TopoⅡα表达呈显著正相关。结论Ki-67和TopoⅡα较准确地反映脑胶质瘤的增殖潜能和恶性程度,对判断脑胶质瘤患者的预后具有重要参考价值。     

端粒酶、Ki-67蛋白表达与脑胶质瘤恶性度的关系

目的　研究端粒酶表达在胶质瘤诊断中的意义 ,并与Ki 6 7蛋白表达比较 ,探讨其与胶质瘤恶性程度的关系和对胶质瘤临床诊断的价值。方法　用原位杂交技术及免疫组化技术检测了 6 5例脑胶质瘤 ,5例正常脑组织作对照。结果　 6 5例胶质瘤有 33例表达端粒酶 ,阳性率 5 1.0 % ,随着胶质瘤分级的升高 ,端粒酶表达强度增强 (P <0 .0 5 )。病理分级与端粒酶阳性表达有相关性 (r =0 .4 3,P <0 .0 1)。 6 5例胶质瘤中有 2 1例表达Ki 6 7,阳性率为 32 .3%。端粒酶与Ki 6 7表达间有相关性 (r=0 .2 8,P <0 .0 1)。结论　Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤端粒酶阳性率明显高于Ⅱ级的检出率 ,端粒酶能反映肿瘤的增殖程度和恶性度 ,端粒酶基因可以作为肿瘤诊断的标记物     

三氧化二砷诱导C6胶质瘤细胞凋亡实验研究

目的：研究三氧化二砷（As2O3）在体外是否具有抗鼠胶质瘤作用,并对其作用机制进行初步探讨。方法：应用不同浓度As2O3,且在不同时间点分别处理C6胶质瘤细胞株及原代培养的正常鼠神经胶质细胞,采用甲基噻唑基四唑（MTT）法,观察As2O3对C6胶质瘤细胞株及正常鼠神经胶质细胞生长的影响,以透射电镜、Hoechst33342和碘化丙啶（PI）双重荧光染色检测两种细胞凋亡的形态变化,并用异硫氰酸荧光素（FITC）标记的Annexin-V和PI双标记法通过流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果：MTT法发现,As2O30.5～8.0μmol/L的浓度均可显著抑制C6胶质瘤细胞株的生长,而对正常原代神经胶质细胞株的抑制作用较弱。经As2O3作用后,透射电镜、Hoechst33342/PI双染荧光均观察到C6胶质瘤细胞发生了显著的凋亡形态改变;运用Annexin-V-FITC/PI双标记法在流式细胞仪检测显示,随As2O3浓度的增大和时间的延长,C6胶质瘤细胞株的凋亡率明显上升,而正常神经胶质细胞的凋亡率要明显小于C6胶质瘤细胞株。结论：As2O3在体外可显著抑制C6胶质瘤细胞株生长,其机制与诱导肿瘤细胞凋亡有关,且凋亡率随As2O3作用的时间和剂量的增加而增加。但As2O3对正常神经胶质细胞生长的抑制作用较弱,提示As2O3抑制细胞生长的作用具有一定的选择性。     

大鼠树突状细胞疫苗治疗脑胶质瘤的实验研究

目的研究树突状细胞疫苗对C6荷瘤大鼠的免疫治疗效应,并比较免疫治疗策略的异同。方法将成年健康SD大鼠40只平均分为4组,分别经RN A致敏和C6冻融抗原致敏的DC免疫以及对照组经未致敏D C和R PM I1640免疫,采用LD H试剂盒检测CTL的体外杀伤活性。建立大鼠C6脑胶质瘤颅内肿瘤模型,观察其生存期,并进行病理学检查。结果肿瘤RN A致敏的D C疫苗活性最强,与C6冻融抗原致敏的DC疫苗相比,CTL杀伤活性差异不显著(P>0.05),但与对照组相比,差异非常显著(P<0.01)。治疗组荷瘤大鼠生存时间与对照组相比,差异非常显著(P<0.01);两治疗组之间差异不显著(P>0.05)。治疗组肿瘤生长明显抑制。结论C6冻融抗原和肿瘤细胞R NA致敏的树突状细胞疫苗均是有效的免疫治疗方法。     

C6大鼠胶质瘤模型及其在脑胶质瘤治疗研究中应用的缺陷

C6细胞是大鼠经化学致癌剂N-亚硝基甲脲体内诱发产生的脑胶质瘤细胞。具有较典型的人脑胶质瘤组织学特点。大鼠脑内立体定向接种C6细胞建立的动物模型。因成瘤高，动物手术死亡率低。所以广泛应用于脑胶质瘤治疗的研究中。国外研究发现，来源于非纯种大鼠的C6细胞具有有强的免疫原性；其主要组织相容性基因复合体中存在与大鼠是异源性的基因；C6细胞接种于大鼠体内引发强烈的免疫排斥反应可使肿瘤不能持续生长甚至自行消退，因此混淆了治疗所产生的效应。尤其当用于免疫和基因免疫治疗的研究时，存在较大缺陷。     

冷冻治疗对大鼠C6脑胶质瘤细胞凋亡和p21表达的影响

目的研究冷冻治疗对大鼠C6脑胶质瘤细胞凋亡及其调控机制的影响。方法建立C6大鼠脑胶质瘤动物模型,于冷冻治疗后第15天留取标本,以末端标记法(TUNEL)、流式细胞仪(FCM)检测肿瘤细胞凋亡,以免疫组化技术检测p21蛋白的表达。结果冷冻可诱导C6大鼠脑胶质瘤细胞凋亡,上调p21的表达,二者呈显著正相关(P<0.01)。FCM分析显示G1峰前出现典型的亚二倍体峰。结论诱导细胞凋亡可能是冷冻杀伤脑胶质瘤细胞的另一重要机制;p21基因可能参与了这种细胞凋亡的调控。     

大鼠脑胶质瘤的形态学观察

目的探讨大鼠脑胶质瘤的形态学特征。方法雄性SD大鼠20只,体重150～250克。立体定向注射10μl含有约1×106个C6细胞的混悬液于鼠脑右侧尾状核内,建立鼠脑胶质瘤模型。术后第25天处死大鼠,立刻取脑,制作病理切片,HE及免疫组织化学染色,光镜下观察。结果20只大鼠均有脑胶质瘤,其中星形细胞瘤Ⅱ级(6只)、星形细胞瘤Ⅲ级(8只)、星形细胞瘤Ⅳ级(3只)及少突胶质细胞瘤Ⅱ～Ⅳ级(3只)。免疫组织化学染色检测S-100蛋白均为阳性。结论C6细胞移植产生的鼠脑胶质瘤,其恶性程度不一致。     

冷冻治疗大鼠C6脑胶质瘤的实验研究

目的研究冷冻治疗对大鼠C6脑胶质瘤的增殖抑制作用及其机制。方法建立大鼠C6脑胶质瘤模型，60只载瘤大鼠随机均分为对照组和治疗组。治疗组实施冷冻治疗后免疫组化检测P27Kipl蛋白的表达，磁共振检测肿瘤体积变化，并观察动物生存期。对照组未实施冷冻治疗。结果与对照组比较，冷冻治疗可上调P27Kip1蛋白的表达，对照组为（4.81±0.72）％，治疗组为（28.84±3.56）％，P〈0.05；缩小肿瘤体积，对照组为（292.97±19.13）mm^3，治疗组为（76.37±10.22）mm^3，P〈0.05；延长动物生存期，对照组为（37.00±1.55）d。治疗组为（57.00±3.16）d，P〈0.05。P27Kip1蛋白阳性表达率和荷瘤鼠生存期呈正相关（r=0.836，P〈0.05）；同体积呈负相关（r=-0.696，P〈0.05）。结论冷冻治疗可抑制大鼠C6脑胶质瘤的增殖，延长动物生存期，其机制同上调P27Kip1蛋白的表达有关。     

槲皮素对大鼠脑胶质瘤抑瘤作用的体内实验研究

目的观察槲皮素及顺铂对大鼠脑胶质瘤生长的抑制作用,初步探讨其作用机制。方法将30只颅内接种C6胶质瘤细胞的SD大鼠随机分为3组:分别给予顺铂、槲皮素及对照治疗7 d,观察各组肿瘤生长情况,于接种后17 d处死各组大鼠,收集肿瘤标本进行肿瘤大小、HE染色及电镜观察,并通过免疫组化检测肿瘤组织增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达。结果顺铂组[(66.2±5.9)mm3]、槲皮素组[(59.6±5.4)mm3]肿瘤体积低于对照组[(101.1±9.6)mm3]槲皮素组优于顺铂组(t=10.61,P<0.01),槲皮素组、顺铂组肿瘤抑制率分别为41.3%、34.8%。光镜观察槲皮素组、顺铂组肿瘤细胞密度降低,电镜显示有细胞凋亡。PCNA免疫组化结果显示槲皮素组(42.2%±5.1%)、顺铂组(50.0%±6.7%)肿瘤PCNA表达减少,与对照组(79.6%±8.6%)相比,具有统计学差异(F=416.12,P<0.01),两两比较,槲皮素组治疗效果优于顺铂组(q=55.25,P<0.01)。结论槲皮素和顺铂均可显著抑制大鼠颅内C6胶质瘤细胞生长,其机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡和抑制肿瘤细胞增殖有关。     

大鼠骨髓基质细胞移植治疗胶质瘤的实验研究

目的将Wistar大鼠骨髓基质细胞体外移植入C6胶质瘤大鼠模型，观察其生物学特性及大鼠存活状态。方法建立C6载瘤模型和骨髓基质细胞移植治疗模型；待术后生长至3w和4w时行MRI检测；不同时间段内大鼠脑标本行免疫组化染色。结果骨髓基质细胞移植组模型平均生存时间为4．03w；对照组平均生存时间为3．88w；且其平均肿瘤体积与对照组无明显差异。大鼠体内移植体外培养5月余的骨髓基质细胞未发现肿物生成。骨髓基质细胞包绕在胶质瘤周围，对胶质瘤细胞有定向靶向作用。结论骨髓基质细胞对胶质瘤有定向靶向作用，可以安全的作为生物载体转染目的基因治疗胶质瘤。     

大鼠骨髓基质细胞移植治疗胶质瘤的实验研究

目的将Wistar大鼠骨髓基质细胞体外移植入C6胶质瘤大鼠模型,观察其生物学特性及大鼠存活状态。方法建立C6载瘤模型和骨髓基质细胞移植治疗模型;待术后生长至3w和4w时行MRI检测;不同时间段内大鼠脑标本行免疫组化染色。结果骨髓基质细胞移植组模型平均生存时间为4.03w;对照组平均生存时间为3.88w;且其平均肿瘤体积与对照组无明显差异。大鼠体内移植体外培养5月余的骨髓基质细胞未发现肿物生成。骨髓基质细胞包绕在胶质瘤周围,对胶质瘤细胞有定向靶向作用。结论骨髓基质细胞对胶质瘤有定向靶向作用,可以安全的作为生物载体转染目的基因治疗胶质瘤。     

反义寡核苷酸逆转大鼠胶质瘤细胞多药耐药性的实验研究

目的探讨针对多药耐药基因(MDR-1)上特异位点的反义寡核苷酸对体外培养的大鼠胶质瘤细胞多药耐药性的逆转作用。方法根据MDR-1基因的碱基序列设计合成硫代修饰的寡核苷酸,通过阳离子脂质体介导转染胶质瘤耐药细胞,应用流式细胞仪、RT-PCR等方法,对转染后的耐药细胞进行P-170、MDR-1mRNA水平的检测;用MTT法对转染后的细胞进行化疗药物敏感性试验,评价寡核苷酸对多药耐药性的逆转效果。结果流式细胞结果显示转染后胶质瘤耐药细胞P-170表达明显低于转染前(P<0.05);RT-PCR可见转染后细胞的MDR-1mRNA水平减低;药物敏感性试验显示反义寡核苷酸转染后胶质瘤耐药细胞对化疗药物的敏感性增强(P<0.05),含有脂质体的转染体系组对化疗药物的敏感性显著高于不含脂质体的转染体系组(P<0.01)。结论特异序列的反义寡核苷酸能够明显抑制大鼠胶质瘤细胞的P-170表达和减低MDR-1mRNA水平,进而对胶质瘤细胞的多药耐药性产生明显的逆转作用;应用阳离子脂质体作为转染载体可显著提高转染效率。     

苯乙酸对胶质瘤C6细胞增殖和凋亡的影响

目的观察诱导分化剂苯乙酸（PA）对胶质瘤C6细胞增殖和凋亡的影响。方法体外培养胶质瘤C6细胞，用0、2．5、5．0和7．5mmol／L不同浓度的PA，分别在PA诱导24、48、72、96h后。甲基噻唑基四唑（MTT）比色法检测细胞增殖抑制率，进一步用免疫细胞化学检测胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达变化，末端脱氧核糖核酸转移酶介导的脱氧尿嘧啶核苷酸缺口末端标记（TUNEL）检测细胞凋亡。结果PA显著抑制c6细胞增殖，随药物浓度的增加和作用时间的延长，细胞增殖抑制率增加。PA作用后GFAP表达增强。随PA浓度和作用时间的增加，细胞凋亡率增加。结论PA对胶质瘤C6细胞有显著的增殖抑制和诱导凋亡作用，呈时间剂量依赖性。     

顺铂缓释剂瘤内治疗大鼠C6胶质瘤实验观察

观察顺铂缓释剂瘤内用药治疗大鼠Ｃ６胶质瘤的生物学效应。方法用几丁质做载体,与顺铂制成缓释剂型,进行瘤内植入治疗大鼠脑胶质瘤。结果瘤内给予１ｍｇ／ｍ＾２顺铂缓释剂无毒性,瘤内铂浓度比全身用药高２－５０倍,维持时间达１月以上,血铂浓度比全身用药低１０－６０倍,荷瘤鼠生存时间较单纯顺铂液瘤内或全身用药明显延长。     

Celecoxib诱导C6胶质瘤细胞凋亡的研究

目的探讨Celecoxib(塞来昔布)诱导C6胶质瘤细胞凋亡的作用。方法应用吖啶橙、透射电镜和流式细胞仪(FCM)检测方法。结果通过吖啶橙及电镜检查发现Celecoxib 50μmol／L组细胞凋亡明显多于12．5μmol／L组，FCM检测Celecoxib 50μmol／L组细胞凋亡为15．32％，12．5μmol／L组凋亡为5．83％，不同浓度的Celecoxib对C6胶质瘤细胞有增殖抑制及诱导凋亡的作用，凋亡随药物浓度增加而升高。结论Celecoxib对C6胶质瘤细胞呈剂量依赖性抑制及诱导凋亡的作用．对胶质瘤治疗有重要意义。     

骨髓间充质干细胞干预大鼠C6胶质瘤的试验研究

目的 探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)干预对大鼠脑胶质瘤C6细胞分化的影响及其相关机制.方法 采用Transwell小室共培养骨髓间充质干细胞及C6细胞,并以细胞计数法对C6细胞增值水平进行检测,以流式细胞术对C6细胞的细胞周期进行检测;以免疫荧光对波形蛋白(vimentin)的表达情况进行检测,以免疫组化法对胶质纤...