电针及去卵巢术对大鼠脑内催乳素释放肽的影响

目的 :通过观察去卵巢术和电针对大鼠脑内催乳素释放肽 (prolactinreleasingpeptide,PrRP)的影响 ,以进一步探讨PrRP是否参与生殖内分泌功能调节及其在电针调整雌性生殖内分泌功能异常中的作用。方法 :动物分为假手术组 (Sham)、去卵巢组 (OVX)和去卵巢 +电针组 (OVX+EA)。用放射免疫法 (RIA)测定电针前后去卵巢大鼠血清中催乳素 (prolactin ,PRL)含量的变化 ;免疫组化和RT PCR观察电针及去卵巢对大鼠脑内PrRP蛋白及mRNA表达的影响。结果 :OVX大鼠与Sham组相比 ,血清PRL水平、孤束核PrRP免疫阳性细胞数、终纹床核PrRP阳性纤维相对光密度值及延髓PrRPmRNA都显著降低 (P <0 .0 1或 0 .0 5) ;OVX +EA大鼠与OVX组相比 ,以上指标均显著升高 (P <0 .0 5)。结论 :PrRP可能参与雌性大鼠下丘脑 垂体 卵巢轴 (HPOA)的调节 ;电针对HPOA异常功能的调整作用 ,可能部分是通过脑内PrRP系统实现的     

电针调整去卵巢大鼠下丘脑—垂体—卵巢轴异常 功能的生化机制

目的：观察电针对去卵巢大鼠脂肪、肝脏和及职组织芳香化酶（雌激素合成酶）活性的影响。方法：以去卵巢大鼠为实验动物模型,用改进的放射酶学法和雌二醇（E2）放射免疫分析,测定脑组织和外周脂肪组织、肝组织中芳香化酶的活性及血E2的水平。结果：去卵巢术后3－4个星期,大鼠脂肪组织、肝组织和脑组织 中的酶活性稍有升高的趋势,但无统计学差异。经电针后,脂肪和肝中的组织芳香化酶活性显著提高（P＜0．01）。同时血E2水平也比针前明显升高（P＜0．01）,而脑组织芳香化酶的活性只显示轻度升高,与针前比较,无统计学差异。电针处理后,正常组大鼠（INT）未观察到类似的变化。结论：电针可能有促进去卵巢大鼠脂肪组织和肝组织中芳香化酶活性的作用,使雄激素转化为雌激素增多,血E2水平提高。这可能是针刺调整下丘脑－垂体－卵巢轴异常功能的机制之一。     

脑内催乳素释放肽参与电针对围绝经期综合征大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴异常功能的调整

目的:在围绝经期大鼠模型上,研究脑内催乳素释放肽(prolactin releasing peptide,PrRP)在电针调整下丘脑-垂体-卵巢轴(hypothalamus-pituitary-ovary axis,HPOA)异常功能中的作用,以进一步探讨针刺治疗妇女围绝经期综合征的神经内分泌机制。方法:采用切除双侧卵巢的大鼠围绝经期模型(HPOA功能异常模型),随机分为去卵巢组(OVX)、去卵巢电针组(OVX+EA);再用正常SD大鼠作为对照,分成正常组(INT)和正常电针组(INT+EA)。OVX+EA和INT+EA组接受“中极”“关元”和双侧“子宫”、单侧“三阴交”电针处理,每日1次,每次30 min,连续3 d。用放射免疫法测定外周血的雌二醇(E2)和黄体生成素(LH)含量;并用免疫组织化学法和实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)方法观察延髓和下丘脑PrRP蛋白及mRNA的表达。结果:OVX组的延髓孤束核(NTS)和腹外侧网状核(VLRN)免疫阳性细胞数、终纹床核(BST)阳性纤维相对光密度、延髓和下丘脑PrRP mRNA含量显著降低(P<0.01)。OVX+EA组延髓的PrRP mRNA含量比OVX组显著增加(P<0.01);同时,各个核团的PrRP免疫阳性物质均增加(P<0.01或P<0.05);OVX+EA组血清E2水平比OVX组升高(P<0.05),而LH水平却降低(P<0.05)。但INT+EA组与INT组相比无明显的变化。结论:电针效应具有多环节、多靶点的特点。PrRP作为一种新的神经肽或神经激素,参与了电针调整HPOA功能异常的作用。这可能是电针治疗妇女围绝经期综合征的神经内分泌机制之一。     

针刺对雌性大鼠垂体雌激素受体mRNA表达和血雌二醇水平影响的研究

本文采用RNA点杂交、放射免疫测定（RIA）和计算机图像处理技术研究电针（EA）对雌性大鼠垂体组织雌激素受体mRNA（ERmRNA）及血中雌二醇（E2）水平的影响。实验动物随机分成四组：正常组（INT）正常电针组（NT＋EA）去卵巢组（OVX）和去卵巢电针组（OVX＋EA）。结果表明，OVX血雌二醇（E2）水平明显低于INT（P＜0．01）。OVX杂交斑点灰度低于INT（P＜0．01）；OVX＋EA血E2含量明显高于OVX（P＜0．01）。OVX＋EA杂交斑点灰度高于OVX（P＜0．01）；INT＋EA血E2水平及杂交斑点的灰度与INT比较无显著差异。结果提示，电针可能通过提高去卵巢大鼠体内E2水平，影响垂体雌激素ER的基因表达，这可能是电针调整下丘脑-垂体-卵巢轴异常功能的机制之一。     

去卵巢大鼠HPOA功能自然代偿过程中GnRH的异位表达及电针处理对其的影响

目的在切除卵巢后的"围绝经期"大鼠模型上,探讨下丘脑-垂体-卵巢轴(hypothalamus-pituitary-ovary axis,HPOA)功能低下时,机体的自然代偿过程中,下丘脑室旁核(paraventricular nucleus,PVN)促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone,GnRH)的异位表达及电针处理对代偿过程的影响。方法动物分为正常组(INT)、去卵巢组(OVX)、自然代偿组(OVX3M组、OVX4M组、OVX5M组、OVX6M组)以及去卵巢加电针组(OVX EA)。用HE染色的方法观察大鼠阴道脱落细胞的变化,用放射免疫分析(radioimmunoassay,RIA)的方法观察外周血雌二醇水平的变化,用免疫组织化学的方法观察GnRH在PVN的表达,以及免疫荧光双标结合激光共聚焦显微镜的观察方法观察GnRH与促肾上腺激素释放激素(corticor-tropin-releasing hormone,CRH)在PVN的共存。结果去卵巢4个月时大鼠阴道涂片出现成熟脱落细胞;4个月时血E2水平明显升高,6个月时几乎稳定在正常水平的一半左右;正常组与去卵巢组大鼠PVN未发现有GnRH免疫阳性物质的表达;去卵巢加电针组以及切除卵巢后3~6个月自然代偿组的大鼠在PVN都分别有GnRH的表达;GnRH与CRH在PVN共存于同一个神经元中。结论GnRH在PVN中的异位表达,并与CRH共存于同一神经元中,可能是机体对HPOA功能异常的自然代偿;而电针处理可能提前启动了这一自然代偿机制,从而发挥对大鼠因去卵巢术而引起的HPOA功能异常的调整作用。     

电针命门穴对去势骨质疏松模型大鼠肾上腺雌激素受体ERαmRNA表达的影响

目的研究电针命门穴对去卵巢骨质疏松模型(OVX)大鼠肾上腺功能的影响。方法造模成功的雌性SD大鼠18只,随机分为假手术组、模型组、电针组,每组6只。大鼠处死后,用放免法测各组大鼠血清中雌二醇(estradiol,E2)水平,荧光定量PCR(探针法)检测各组大鼠肾上腺ERαmRNA表达。结果模型组与假手术组比较,血清E2水平明显下降,有显著性差异(P0.05),电针组血清E2水平有一定升高,与模型组比较,无统计学意义(P0.05);模型组肾上腺ERαmRNA表达强于假手术组,有统计学意义(P0.05),电针组肾上腺ERαmRNA表达降低,与模型组相比,有显著性差异(P0.05)。结论去卵巢后,大鼠肾上腺可起代偿作用,电针能提高去卵巢骨质疏松大鼠血清雌激素水平,并影响大鼠ERα在肾上腺的表达。     

电针对青春期多囊卵巢综合征大鼠下丘脑和卵巢组织中性激素受体表达的影响

目的:观察电针对青春期多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠下丘脑和卵巢组织中性激素受体表达的影响。方法:产前注射双氢睾酮(DHT)诱导青春期PCOS大鼠模型。将青春期PCOS大鼠随机分为模型组(M组)、电针组(EA组)和假针刺组(SA组)。选用年龄匹配的正常大鼠作为正常对照组(N组)。观察各组大鼠从出生后第4～7周的动情周期。出生后第36日，给予EA组电针治疗，给予SA组假电针治疗，均治疗25 min,连续治疗5 d后休息2 d,重复该治疗过程至大鼠出生后第49日。同期M组和N组仅给予布袋固定25 min。观察大鼠卵巢的形态学变化，以及下丘脑和卵巢中雄激素受体(AR)、孕激素受体(PR)、雌激素受体(ER)的蛋白表达。结果:电针可以明显改善青春期PCOS大鼠动情周期的紊乱和卵巢多囊形态。4组大鼠下丘脑和卵巢中AR、ER蛋白表达总体比较，差异有统计学意义(P<0.05);M组下丘脑和卵巢中AR蛋白表达高于N组(P<0.05),ER蛋白表达低于N组(P<0.05);EA组下丘脑和卵巢中AR蛋白表达低于M组(P<0.05),ER蛋白表达高于M组(P<0.05);SA组...     

电针镇痛的累积效应与脑内孤啡肽前体和前阿黑皮素基因表达的关系

目的:探讨累加电针治疗神经源性痛大鼠的作用机制。方法:Wistar大鼠随机分为正常对照组,慢性压迫性损伤(CCI)组,CCI+EA2(天)D组,CCI+EA2(周)W组,去卵巢(OVX)+CCI组,OVX+CCI+EA2D组,OVX+CCI+EA2W组。去卵巢大鼠在手术后每天颈部皮下注射D-半乳糖,连续45天造成神经记忆损伤。结扎坐骨神经造成慢性神经疼痛模型,电针双侧"足三里"-"阳陵泉"穴1次/D,分别电针2D、2W。用RT-PCR的方法检测下丘脑前阿黑皮素(POMC)mRNA和海马、下丘脑孤啡肽前体(PPPNOC)mRNA的表达。结果:与正常对照组比,CCI组下丘脑POMC mR-NA表达水平显著升高(P<0.05),海马及下丘脑PPNOC mRNA表达水平也显著升高(P<0.05)。与CCI组比,CCI+EA2W组POMC mRNA表达水平进一步显著上调(P<0.05),而PPNOC mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。在OVX+CCI动物上,与OVX+CCI组比,OVX+CCI+EA2W组下丘脑POMC的表达量明显上调(P<0.05),而OVX+CCI+EA2D和OVX+CCI+EA2W海马PPPNOC mRNA的表达显著下调(P<0.05),但后两组下丘脑PPPNOC mRNA的表达无显著变化(P>0.05)。结论:电针对慢性神经痛大鼠的累积性镇痛效应与下丘脑POMC mRNA表达的上调和海马PONC mRNA表达的下调密切相关;记忆损伤可减弱电针上调下丘脑POMC基因的表达。     

坤泰胶囊对环磷酰胺致卵巢储备功能低下大鼠卵巢GDF-9、Egr-1的影响

目的:观察预防性应用坤泰胶囊对环磷酰胺致卵巢储备功能低下大鼠血清性激素FSH、LH、E2、AMH水平的影响以及对卵巢GDF-9(生长分化因子9)、Egr-1(早期生长反应基因)基因及蛋白表达的影响,探讨坤泰胶囊对环磷酰胺致卵巢储备功能低下大鼠的治疗作用及作用机制。方法:将60只12周龄SD雌性大鼠随机分为空白组、环磷酰胺模型组(模型组)、坤泰胶囊组(分设高中低剂量)、结合雌激素组。空白组正常喂养;模型组用环磷酰胺腹腔注射法建立卵巢储备功能低下大鼠模型~([1]);各给药组于造模同时分别给予不同剂量的坤泰胶囊及结合雌激素片灌胃。实验期间观察大鼠行为学改变,行阴道涂片观察大鼠动情周期的变化;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠血清性激素AMH及FSH、LH、E2水平变化;光镜下观察卵巢形态与卵泡数;实时荧光定量(RT-PCR)检测大鼠卵巢GDF-9、Egr-1m RNA表达水平的变化;免疫组化法检测大鼠卵巢GDF-9、Egr-1蛋白表达水平的变化。结果:坤泰胶囊能够降低模型大鼠体内性激素FSH、LH的水平,升高E2及AMH水平,并且能够增加大鼠卵巢中GDF-9、EGR-1蛋白及m RNA表达,修复大鼠受损的卵巢组织结构,改善卵巢血供,减少卵泡闭锁,提高成熟卵泡存在数量,改善大鼠动情周期及行为学变化。结论:预防性应用坤泰胶囊,可有效提升卵巢敏感性,治疗效果与西药结合雌激素片无明显差异。     

电针不同穴位对多囊卵巢综合征大鼠高雄激素血症及卵巢雄激素受体表达的影响

目的:观察电针不同穴位对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠高雄激素血症和卵巢雄激素受体(AR)表达影响的作用差异,探讨电针治疗PCOS的可能机制。方法:SD大鼠随机分为对照组、模型组、足三里组、关元组、三阴交组、综合组,每组10只。采用来曲唑灌胃诱导PCOS模型。足三里组、关元组、三阴交组电针干预相应穴位,综合组同时电针所有穴位,每次20min,每日1次,连续14d。治疗后测量大鼠体质量、卵巢质量,HE染色观察卵巢形态结构,酶联免疫吸附法检测血清性激素水平和性激素结合球蛋白(SHBG),计算游离雄激素指数(FAI),免疫组化法检测卵巢卵泡AR的表达。结果:与对照组相比,模型组大鼠体质量和卵巢质量明显增加(P0.01),血清睾酮(T)和FAI水平明显升高(P0.01),雌二醇(E2)和SHBG水平明显降低(P0.01),卵巢晚期卵泡AR蛋白表达增加(P0.05)。各电针组与模型组比较,体质量均明显减轻(P0.05),卵巢形态改善,T和FAI显著降低(P0.01),足三里组、关元组和综合组E2、SHBG明显升高(P0.01,P0.05),关元组卵巢质量明显降低(P0.01)。关元组和三阴交组晚期卵泡AR蛋白表达较模型组降低(P0.05,P0.01)。结论:电针不同穴位对PCOS大鼠高雄激素血症和卵巢多囊形态均有改善作用,不同穴位对PCOS大鼠的干预特点不同,临床可根据PCOS患者不同的临床表现选穴。     

电针对雌性去势大鼠行为学和下丘脑室旁核c-fos表达的影响

目的:观察电针对雌性切除卵巢(去势)大鼠行为学、血浆雌二醇(E2)及下丘脑室旁核c-fos表达的影响,探讨电针的抗抑郁效应及其机制。方法:SPF级SD雌性成年大鼠40只,随机分为正常对照组、去势组、电针组及美雌醇组。除正常对照组外大鼠均行双侧卵巢切除术。2周后,给予双侧内关、三阴交穴位电针干预处理2周。强迫游泳实验(FST)观察行为学变化;免疫组化观察下丘脑室旁核c-fos表达;放射免疫方法检测血浆E2、FSH及LH变化。结果:大鼠卵巢切除4周后,FST显示不动时间明显增加(P<0.01),挣扎时间减少(P<0.05);血浆中E2水平降低(P<0.05),FSH(P<0.01)和LH(P<0.05)水平明显升高。与去势组比,电针组及美雌醇组不动时间明显减少(P<0.01,P<0.05),挣扎时间增加(P<0.05,P<0.01),血浆E2水平明显升高(P<0.01),FSH(P<0.05,P<0.01)和LH(P<0.01,P<0.05)水平明显降低,室旁核c-fos阳性表达明显增强。结论:去卵巢后,可致大鼠行为学改变,表现为抑郁倾向;电针干预具有明显抗抑郁效应,调整下丘脑轴是其可能机制。     

纳洛酮及电针对雌性大鼠视前区GnRH释放的影响

本文用推挽灌流技术和特异性放射免疫分析法，测定大鼠视前区灌流液中GnRH和γβ-内啡肽的含量，以观察腹腔注射纳洛酮和电针对视前区GnRH和γβ-内啡肽释放的影响，结果表明，卵巢切除组大鼠GnRH的基础含量明显高于正常组大鼠（P＜0.02），腹腔注射纳洛酮30分钟后，卵巢切除组大鼠视前区GnRH含量比注射前明显升高（P＜0．01），而γβ-内啡肽含量未见明显改变，注射纳洛酮对正常组大鼠GnRH含量无明显影响。电针对卵巢切除组和正常组大鼠视前区GnRH及γβ-内啡肽含量均无明显影响，以上结果提示正常生理情况下，雌激素的反馈抑制可能是视前区GnRH释放的主要调节机制，巢卵切除后，雌激素的反馈机制被去除，中枢内阿片肽对视前区GnRH的释放抑制转为其主要的调节机制。     

下丘脑孤啡肽参与电针对去卵巢大鼠LH释放的影响

目的:在去卵巢大鼠模型上,观察下丘脑孤啡肽及其受体是否参与电针对黄体生成素(LH)超常释放的影响,进一步探讨电针作用的神经内分泌机制。方法:雌性SD大鼠随机分为假手术组、假手术加电针组、去卵巢组和去卵巢加电针组。采用放射免疫法(RIA)测定各组动物血清LH水平,免疫组化、Westernblot和RT-PCR观察电针对去卵巢大鼠下丘脑孤啡肽及其受体蛋白和mRNA表达的影响。结果:大鼠去卵巢后,下丘脑孤啡肽及其受体的表达均明显降低。电针处理后,去卵巢大鼠LH超常分泌受到明显抑制;基底下丘脑的内侧视前区、腹内侧核的孤啡肽免疫阳性神经元数目明显增加,正中隆起孤啡肽免疫阳性纤维也明显增加;基底下丘脑的孤啡肽mRNA表达上调。结论:①下丘脑孤啡肽及其受体可能参与LH分泌的调节;②孤啡肽可能参与了电针调整去卵巢大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴异常功能的神经内分泌机制。     

针刺干预对去卵巢大鼠血清胃饥饿素和骨密度的影响

目的:观察针刺对卵巢切除大鼠血清胃饥饿素(ghrelin)和骨密度的影响,探讨针灸治疗绝经后骨质疏松症的可能机制。方法:60只3月龄SD健康雌性大鼠,其中40只行双侧卵巢摘除术,20只做假手术,3个月后骨密度检测证实骨质疏松造模成功后各处死10只。剩余卵巢摘除大鼠随机分为模型组、针刺组、雌激素组,每组各10只。针刺组取①"关元""三阴交",②"肾俞""后三里",两组穴位交替电针治疗(连续波、2Hz、1～3mA),每次治疗20min,每日1次,连续治疗3个月。雌激素组于大鼠后腿部皮下注射苯甲酸雌二醇(0.1mg/kg),每周1次,连续3个月。应用骨密度仪测定腰椎及股骨骨密度,采用ELISA法检测血清ghrelin含量。结果:模型组大鼠血清中ghrelin的水平明显升高,骨密度值显著下降(均P<0.05);与模型组比较,针刺组和雌激素组血清中ghrelin的水平明显降低(P<0.05),同时骨密度值也有明显的提高(P<0.05);针刺组对ghrelin和骨密度的作用不及雌激素组(P<0.05)。结论:针刺干预能提高卵巢切除大鼠骨密度,下调血清ghrelin的水平,但整体作用不及雌激素。     

电针对雌激素调节生殖内分泌功能的作用及机制研究

目的:研究针刺对药物调节生殖内分泌功能的作用效应。方法:以去卵巢SD大鼠为模型,通过实时定量聚合酶链反应及酶联免疫吸附法分析正常组、模型组、针刺关元组、雌激素组(0.5 mg/kg)、针刺关元+小剂量雌激素组(0.25 mg/kg)下丘脑促性腺激素释放激素(GnRH)、G蛋白耦联受体54(GPR54)、肿瘤转移抑制因子(Kiss)-1、促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)mRNA的表达及外周血雌激素、皮质醇水平。结果:模型组与正常组相比,下丘脑GnRH、GPR54、Kiss-1 mRNA的表达明显增高(P<0.05),下丘脑CRHmRNA的表达明显降低(P<0.05),血清皮质醇及雌激素水平明显降低(P<0.05)。关元+小剂量雌激素组、雌激素组与模型组相比,GnRH、GPR54、Kiss-1 mRNA的表达明显降低(P<0.05),CRH mRNA的表达明显增高(P<0.05),血清皮质醇及雌激素水平增高(P<0.05)。关元组与模型组相比,GnRH mRNA的表达明显降低(P<0.05),GPR54、Kiss-1 mRNA的表达有降低的趋势(P>0.05),CRH mRNA的表达有增高的趋势(P>0.05),血清皮质醇及雌激素水平有增高的趋势(P>0.05)。结论:电针能促进小剂量雌激素对生殖内分泌功能的调节作用。