早期乳腺癌患者外周血CK19 mRNA阳性循环细胞检测及其临床意义

 目的　探讨早期乳腺癌患者外周血CK19 mRNA阳性细胞检测的临床意义及其预后价值。方法　应用RT-PCR检测50例早期乳腺癌患者、24例良性乳腺病变患者及20名健康体检志愿者外周血有核细胞CK19 mRNA的表达,并根据基因标志物结果随访。结果　早期乳腺癌患者术后辅助治疗前外周血有核细胞CK19 mRNA阳性率40.0 %（20／50）,与良性乳腺疾病患者[12.5 %（3／24）]及健康体检志愿者[5 %（1／20）]比较,差异均有统计学意义（P＝0.018,P＝0.004）;外周血有核细胞CK19 mRNA阳性率与患者年龄、月经状况、TNM分期、肿瘤大小、淋巴结转移状况、病理分化、激素受体状况、Her-2、血清CA153、血清CEA水平异常升高无关（P＞0.05）;20例外周血有核细胞CK19 mRNA阳性的患者中有11例随访期出现转移复发（P＝0.002）,中位无瘤生存期明显缩短（P＝0.007）。结论　CK19 mRNA可以作为循环肿瘤细胞基因标志物。检测CK19 mRNA阳性循环肿瘤细胞,可能作为早期乳腺癌术后判断复发转移的辅助指标。     

CK19作为微转移癌检测基因标志的假基因干扰及解决方法

基因标志的选择是微转移得到正确检出的关键。细胞角蛋白家族中的ＣＫ19(ｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ 19)作为上皮组织来源的组织特异性标志 ,是文献报道中检测微转移应用最多的基因标志 ,但研究报道结果不同 ,甚至相反。本研究目的在于验证ＲＴ ＰＣＲ方法检测ＣＫ19基因表达时存在的假基因干扰[1] ,并通过方法优化解决假基因干扰问题 ,从而建立适于临床应用的乳腺癌微转移检测方法。一、材料与方法1.标本选取和处理 :(1)阴性对照样本 :正常献血员外周血 18份 ,抗凝后经密度梯度离心分离单个核细胞 ;非上皮性肿瘤患者的淋巴结 12例。 (2 )阳性…     

hMAM mRNA和CK19 mRNA联合检测乳腺癌骨髓微转移

目的：检测乳腺癌患者骨髓中的human mamglobin（hMAM）mRNA和CK19 mRNA表达,探讨乳腺癌患者早期骨髓微转移与临床病理学因素的关系.方法：采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR一步法）法检测骨髓组织中hMAM mRNA和CK19 mRNA的表达.结果：102例乳腺癌患者骨髓hMAM mRNA、CK19 mRNA表达阳性者分别为37.3%和56.9%,均高于良性乳腺疾病患者骨髓组织中的表达（P=0.043,P=0.002）.两者的阳性表达率与肿瘤大小、临床分期和组织学分级呈显著相关,P值分别为0.000、0.001、0.020、0.003、0.031和0.001;与淋巴结转移状况、年龄和月经状况无关,P值分别为0.101、0.255、0.111、0.110、0.492和0.187.结论：乳腺癌微转移与肿瘤大小、临床分期和组织学分级有关,hMAM mRNA和CK19 mRNA均可作为检测乳腺癌骨髓微转移标志,且两者间存在一致性.     

乳腺癌患者骨髓中MUC1 mRNA的检测及其临床意义

目的:探讨乳腺癌患者骨髓中MUC1mRNA的表达及其临床意义。方法:应用RT-PCR技术检测75例乳腺癌患者、15例乳腺良性病变患者和8位健康人骨髓中的MUC1mRNA表达,并分析MUC1mRNA表达与临床病理因素和相关分子指标(Ki67、p53和VEGF)的关系。结果:75例乳腺癌患者中,32例检测出MUC1mRNA阳性表达,阳性表达率为42·7%(32/75)。乳腺良性病变患者和健康人骨髓中未检测到MUC1mRNA表达。MUC1mRNA阳性表达与乳腺癌临床分期、腋窝淋巴结转移和ER状况有关,P<0.05;与年龄、肿瘤大小和PR表达状况差异无统计学意义,P>0.05;与乳腺癌组织中Ki67、p53和VEGF表达均无相关。结论:MUC1mRNA可作为检测乳腺癌患者骨髓微转移的分子指标之一。骨髓微转移的检测可为乳腺癌患者的治疗和预后判断提供帮助。     

CK19mRNA监测乳腺癌血行微转移的对照研究

目的：探讨乳腺肿瘤患者在不同时期癌微转移的可能性。方法：用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）方法对实验组60例乳腺癌患者外周血细胞角蛋白19（CK19）进行了检测。并以术后30例乳腺良性疾病和30例健康人作对照组。结果：实验组60例中,CK19阳性数分别为术前54例;术后综合治疗后19例、6个月～8个月复查23例,阳性率分别为90．0％、31．7％和38．3％;对照组30例乳腺良性疾病患者中,1例CK19阳性,阳性率为3．3％,正常健康人中无CK19阳性。两组比较有统计学意义（P〈0．01）,而治疗后与术后6个月～8个月复查的两组之间无显著性差异（P〉0．05）,其中40例有淋巴结转移的患者CK19阳性率为97．5％（39／40）,无淋巴结转移的20例患者CK19阳性率为75．0％（15／20）,两组比较有统计学意义（P〈0．05）。结论：CK19RT-PCR可以早期监测乳腺肿瘤患者发生血行微转移,提示CK19可作为一种较好的辅助诊断指标,为乳腺肿瘤进一步治疗提供依据,对治疗方案的选择和疗效评估有较大的意义,帮助综合判断预后。     

乳腺癌患者外周血CK19表达临床意义的分析

目的:探讨乳腺癌患者外周血CKl9的表达及其临床意义.方法:采用流式细胞术检测50例乳腺癌患者化疗前后外周血CK19的表达;22例乳腺良性病变患者及健康人20名作为正常对照.结果:乳腺癌患者外周血CK19的表达与正常对照组相比较,差异有统计学意义,P<0.05.肿瘤的大小、腋窝淋巴结及TNM分期与外周血CK19的表达有关(P<0.05).结论:应用流式细胞术检测外周血CK19的表达可作为-临床监测、指导辅助治疗和判断预后的参考指标.     

非小细胞肺癌患者外周血CK19 mRNA的表达及与临床的关系

目的：研究非小细胞肺癌（NSCLC）患者外周血中细胞角蛋白19（cytokeratin 19，CK19）mRNA的表达变化及与临床的关系。方法：采用逆转录多聚酶链反应（RT—PCR）法进行外周血CK19mRNA表达的测定。结果：NSCLC组患者外周血CK19mRNA的阳性率为60．7％。显著高于良性病变组的3．3％和健康对照组的0（P〈0．01）；Ⅲ和Ⅳ期NSCLC患者的阳性率显著高于Ⅰ和Ⅱ期患者的阳性率（P〈0．05）；而不同病理类型NSCLC患者外周血CK19mRNA阳性率之间无显著性差异（P〉0．05）。结论：外周血CK19mRNA的检测有助于我们对NSCLC患者的病情、预后和治疗进行判断．且这并不受病理分型的影响。     

CK19在乳腺癌外周血中表达的意义

[目的]研究外周血中CK19与原发性乳腺癌病理特征和分期的相关性。[方法]用RT_PCR法检测32例乳腺癌患者外周血中CK19的表达。常规病理检查32例患者的脉管瘤栓状况、分期 ,用Fish精确检验法检验其差异。[结果]CK19与脉管瘤栓形成或软组织浸润具有明显相关性 (P<0.05) ,与分期呈正相关。[结论]采用RT_PCR检测乳腺癌患者外周血中肿瘤细胞具有高灵敏度 ,对乳腺癌的治疗具有重要应用价值。对乳腺癌血道微转移灵敏 ,可作为临床判断预后的参考指标。     

无假基因干扰的CK19 RT-PCR方法检测乳腺癌外周血微转移

目的:以CK19为基因标志检测乳腺癌患者外周血中播散的肿瘤细胞,并对其临床意义进行评价。方法:采用优化的无假基因干扰的RT-PCR方法检测乳腺癌患者外周血有核细胞的CK19mRNA表达。结果:1)方法可靠性验证:检测30例正常人外周血CK19mRNA表达,结果无假阳性;将乳腺癌细胞系MCF-7以1∶107与正常外周血有核细胞混合,检测CK19mRNA表达,结果无假阴性。2)检测乳腺癌41例,外周血肿瘤细胞阳性检出率26.8%(11/41);乳腺癌患者外周血肿瘤细胞阳性率在患者不同年龄、肿瘤大小、临床分期、组织学分级、ER和PR状态的各组间差异无显著性(P>0.05);淋巴结转移阳性病例外周血肿瘤细胞检出率(38.1%)明显高于淋巴结转移阴性组(15.0%),虽然统计学差异不具有显著性(P=0.10),但提示淋巴结转移阳性的患者肿瘤细胞血行播散的危险性有增加的趋势。结论:以CK19为基因标志采用RT-PCR方法检测乳腺癌患者外周血中的肿瘤细胞可能是乳腺癌有意义的预后指标,可以为治疗方案的选择、治疗疗效的评价及外周血干细胞移植联合大剂量化疗适应证筛选提供重要依据。     

非小细胞肺癌患者外周血CK19 mRNA检测临床意义的探讨

目的:应用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)法检测肺癌外周血中的表达情况,并探讨其表达的临床意义。方法:用RT-PCR法检测98例肺癌患者外周血CK19 mRNA表达。结果:NSCLC组患者外周血CK19 mRNA的阳性率为77.55%(76/98),显著高于良性病变组的3.57%(1/28)和健康对照组的0,χ2=73.68,P<0.05;Ⅱ期〔87.50%(35/40)〕和Ⅲ期〔88.89%(24/27)〕NSCLC患者的阳性率显著高于Ⅰ期〔54.84%(17/31)〕患者的阳性率,χ2=13.453,P<0.05;淋巴结转移阳性和阴性患者的外周血中CK19 mRNA阳性率分别为89.55%(60/67)和51.61%(16/31),差异有统计学意义,χ2=17.523,P<0.05;而不同病理类型NSCLC患者外周血CK19mRNA阳性率之间差异无统计学意义,χ2=0.414,P>0.05。结论:肺癌患者外周血中CK19 mRNA表达较高可能与肺癌转移有关,检测CK19 mRNA对于早期判断患者转移和复发有一定的临床意义。     

宫颈癌患者淋巴结CK19 mRNA的检测及其临床意义

背景与目的：采用RT—PCR技术检测CK19（cytokeratin 19）mRNA的转录，可在部分恶性肿瘤患者中检测到常规病理学方法不能检测到的隐性微转移。本研究旨在检测宫颈癌患者盆腔淋巴结组织特异性标志物（CK19mRNA）的表达，并探讨其临床意义。方法：采用RT—PCR技术检测Ⅰ～Ⅱ期宫颈癌患者盆腔淋巴结CK19 mRNA的转录。生存曲线用Kaplan—Meier转录。生存率比较采用Log—rank检验。结果：32例宫颈癌患者共检测淋巴结标本206枚，经常规病理组织学方法检测到24枚淋巴结有癌转移，阳性率为12％（24／206）；经RT—PCR法检测到44枚淋巴结表达CK19 mRNA，检出率为21％（44／206）。RT—PCR法与常规病理组织学方法比较，差异有显著性（P〈0．01）。常规HE染色阴性的182枚淋巴结中，29枚检测到CK19mRNA的特异性条带，微转移的检出率为15．9％（29／182）。低分化患者的淋巴结CK19检出率为87．5％（7／8）显著高于中～高分化患者的检出率33．3％（8／24）（P〈0．05）。而淋巴结CK19的检出率与年龄、临床分期、组织学类型、宫颈肿瘤大小、肌层浸润深度、宫旁浸润、脉管癌栓均无明显关系（P〉0．05）。淋巴结CK19 mRNA阳性患者的4年无瘤生存率为58％；而淋巴结CK19 mRNA阴性患者的4年无瘤生存率为76．5％，差异无显著性（P〉0．05）。结论：与传统的病理组织学比较，采用RT—PCR技术检测CK19 mRNA转录能显著提高淋巴结微转移的检出率，预后判断有待增大病例数进一步研究。     

非小细胞肺癌患者外周血细胞角蛋白19 mRNA表达的临床意义

细胞角蛋白19(cytokeratin19,CK19)mRNA仅在上皮源性的细胞内转录,正常外周血中无上皮源性细胞。因此,如果在外周血中检测到CK19 mRNA的转录,则提示上皮源性肿瘤细胞已进入外周血中。我们应用RT-PCR技术检测了非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者外周血中的CK19 mRNA的表达状况。一、资料与方法1.一般资料:2001年1月至2004年6月间,经病理和细胞学证实的住院NSCLC患者109例,男性58例,女性51例,平均年龄56.8岁(37～72岁)。采血前患者均未行任何抗     

细胞角蛋白19基因扩增及过度表达的研究

目的: 建立荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测CK19基因表达水平,探讨其在乳腺癌诊断和治疗监测中的应用.方法: 建立FQ-PCR法,并以β2-微球蛋白为内对照测定30名健康女性体检者、30例良性乳腺疾病患者和91例乳腺癌患者外周血中CK19的表达.结果: CK19表达水平在正常对照组和良性乳殚腺疾病组间差异无显著性意义(P>0.05),乳腺癌组均高于前两组(P<0.05),B2-微球蛋白在三组间差异无显著性意义(P>0.05).91例乳腺癌患者阳性率为49.5%,良性乳腺疾病组为0.CK19表达与患者年龄和肿瘤大小和类型无关(P>0.05),与乳腺癌临床分期、组织学分级以及腋淋巴结转移相关(P<0.05).结论: .FQ-PCR技术是高度灵敏、高度特异的快速定量检测CK19方法,可有效监测乳腺癌的诊断、疗效、转移和预后.     

细胞角蛋白19mRNA在非小细胞肺癌外周血中的表达及其对微转移的临床意义

目的通过检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血CK19 mRNA的表达,探讨其对外周血微转移的意义。方法 NSCLC患者170例,肺良性疾病患者20例和健康志愿者20例作为对照,均在治疗前抽取外周血,通过RT-PCR法检测CK19 mRNA的表达,结合随访资料和生存时间进行分析。结果 NSCLC患者的CK19 mRNA阳性率为46.5%(79/170),对照组为5%(2/40),差异有统计学意义(P<0.01)。外周血CK19 mRNA阳性患者的远处转移发生率为32.4%(24/74),高于阴性患者的发生率(17.1%,14/82;P<0.05)。全组无瘤生存时间为37个月,外周血CK19 mRNA阳性组和阴性组的无瘤生存时间分别为30个月和45个月(P=0.003)。结论 CK19 mRNA是一种检测NSCLC外周血微转移的较好方法,对判断病程发展和指导临床治疗具有重要意义,是预测复发转移和预后不良的辅助指标。     

宫颈癌患者外周血中CK19 mRNA和HPV16 mRNA基因的检测及其意义

目的：检测宫颈癌患者外周血标本中的组织特异性标志物(CK19 mRNA)与宫颈癌相对特异性标志物(HPV16 mRNA)的表达。方法：采用RT-PCR技术检测了Ⅰb～Ⅱb期宫颈癌患者的外周血标本30例。远处转移宫颈癌患者8例，妇科良性疾病患者16例，健康人9例：结果：30例外周血标本中3例扩增出CK19的特异性条带，检出率为10．0％(3／30)。远处转移患者CK19检出率为8／8，良性病变患者为0／16，健康者为0／9。30例宫颈癌患者中有10例患者术后宫颈癌标本的免疫组化HPV E6和(或)原位杂交为阳性，均未检测到HPV16 mRNA(0／10)；8例远处转移患者的检出率为12．5％(1／8)，妇科良性病变患者和健康者的检出率分别为0／16和0／9。结论：CK19 mRNA作为宫颈癌患者外周血的检测标志物显示了较好的敏感性和特异性。HPV16 mRNA的检出率较低，临床价值有待进一步研究。     

非小细胞肺癌患者骨髓CK19和LUNX mRNA的实时荧光定量检测和意义

目的 :检测非小细胞肺癌患者CK19mRNA和LUNXmRNA的表达情况,探讨其作为微转移检测分子标志物的可行性。 方法 :选择初治的非小细胞肺癌(NSCLC)患者62例,以肺部良性疾病10例作为对照组,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)和普通RT-PCR技术,检测肺癌、良性病变肺组织和骨髓的CK19mRNA和LUNXmRNA的表达。 结果 :肺癌和良性病变肺组织RT-PCR检测结果显示CK19mRNA和LUNXmRNA表达阳性率为100%;62例NSCLC患者骨髓标本FQ-RT-PCR检测结果显示,NSCLC患者中骨髓CK19mRNA表达阳性率45.2%(28/62),明显高于肺良性病变组10%(1/10)(P=0.037),NSCLC组骨髓LUNXmRNA表达阳性率38.7%(24/62)明显高于肺良性病变组0%(0/10)(P=0.017);骨髓CK19mRNA表达阳性率随病理分期升高,接近统计学意义(P=0.06),而与病理类型、肿瘤分化程度无关;骨髓LUNXmRNA表达阳性率随分期升高且有统计学意义(P=0.02),而与病理类型、肿瘤分化程度无关;骨髓CK19mRNA和LUNXmRNA表达明显相关(P<0.001)。 结论 :CK19mRNA和LUNXmRNA可作为检测非小细胞肺癌患者微转移特异、敏感的分子标志物,可能有助于早期诊断肺癌转移,从而指导临床分期和治疗。     

早期宫颈癌患者外周血CK19和CK20mRNA的检测及临床意义

目的:研究早期宫颈癌患者外周血中CK19、CK20mRNA的表达及其临床意义。方法:采用RT-PCR法术前检测250例ⅠA~ⅡA期宫颈癌患者和50例妇科良性肿瘤患者及18名健康自愿者外周血中CK19、CK20mRNA的表达,并分析其与临床病理因素的关系。结果:250例早期宫颈癌患者外周血中CK19、CK20mRNA的阳性表达率分别为36%和24%,而在妇科良性肿瘤中分别为3.0%和0%,18例健康自愿者无一例表达CK19、CK20mRNA阳性(P<0.01);CK19、CK20mRNA的单独阳性表达率除与脉管瘤栓显著相关外(P<0.01),与宫颈癌的预后因素如分期、分化、组织类型、淋巴结转移、肿瘤大小均无关(P>0.05),而CK19、CK20mRNA双阳性表达与淋巴结转移和脉管浸润及近期盆腔外的转移显著相关(P<0.01)。结论:外周血中CK19、CK20mRNA的表达可以作为检测早期宫颈癌微转移的生物学指标,但对预后的意义有待于进一步研究。     

食管癌放疗患者外周血CK19mRNA检测的临床意义

背景与目的肿瘤细胞在侵袭转移的早期阶段就可能进入血液循环,本研究检测食管癌根治性放疗前后外周血中循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTC)标记细胞角蛋白19(Cytokeratin 19,CK19)mRNA的表达,探讨其临床意义。方法收集72例食管癌患者根治性放疗前后外周血,应用巢式RT-PCR检测CK19 mRNA的表达,分析其与临床病理特征及两年无进展生存(progerssion-free survival,PFS)的关系。结果放疗前后CK19 mRNA阳性者分别占44.4%(32/72)与30.6%(22/72),差别无统计学意义(P=0.085)。放疗前后CK19 mRNA阳性与淋巴结转移相关(P值分别为0.037和0.031)。生存分析也表明放疗前后CK19 mRNA阳性与不良PFS有关(P值分别为0.040和0.001),Cox回归模型则进一步证实放疗后CK19 mRNA阳性是独立预后指标。结论放疗后外周血CK19 mRNA阳性可望成为食管癌根治性放疗预后判断的有效分子标记。