人结肠癌相关成纤维细胞对结肠癌Lovo细胞生物学行为的影响

目的探讨人结肠癌相关成纤维细胞（CAF）对结肠癌Lovo细胞增殖、黏附、迁移和侵袭等生物学行为的影响。方法收集人结肠CAF及正常成纤维细胞（NF）条件培养基,建立结肠CAF、NF与Lovo细胞间的共培养模型,以无血清培养基处理的Lovo细胞作为空白组．进行细胞增殖、黏附、迁移及Transwell侵袭能力检测。结果Lovo细胞与结肠CAF共培养后。增殖48和72h反映细胞增殖的吸光度（A）值分别为（0．667±0．059）和（0．709±0．030）,明显高于空白组[（0．574±0．031）和（0．593±0．031）]和NF组[（0．597±0．036）和（0．652±0．029）],差异均有统计学意义（P〈0．01）;黏附细胞的A值为（0．588±0．067）,也明显高于空白组（0．226±0．039）和NF组（O．375±0．059）,差异也均有统计学意义（P〈O．01）;12h和24h细胞迁移率分别为（35．2±8．7）％和（64．6±7．1）％,明显高于空白组[（14．7±3．6）％和（26．3±10．3）％]和NF组[（14．1±7．3）％和（35．2±9．8）％]（P〈O．01）;透膜细胞数为（56．2±4．8）个,多于空白组的（14．6±2．2）个和NF组的（22．9~4．5）个（P〈O．01）。结论人结肠CAF具有增强结肠癌Lovo细胞增殖、黏附、迁移和侵袭的能力。     

脯氨酸一谷氨酸一亮氨酸富集蛋白1对甲状腺癌细胞增殖和周期的影响及其机制

目的探讨脯氨酸-谷氨酸-亮氨酸富集蛋白1(PRELP1)对甲状腺癌细胞增殖和周期的影响及其机制。方法采用蛋白质印迹法(Western blot)分析人甲状腺正常细胞系NTHY-ORI 3-1、甲状腺癌细胞CAL-62细胞和SW579细胞PRELP蛋白表达水平;采用对照组和PRELP1过表达慢病毒感染甲状腺癌细胞CAL-62细胞, 建立对照组和PRELP1组细胞。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、克隆形成实验和体外移植瘤实验分析两组细胞的增殖情况;采用流式细胞数分析两组细胞周期和凋亡变化;采用Western blot分析增殖、周期和凋亡相关蛋白表达水平。组间比较采用t检验。结果甲状腺癌细胞CAL-62细胞和SW579细胞PELP1蛋白表达水平(1.72±0.12、2.24±0.22)明显高于人甲状腺正常细胞系NTHY-ORI 3-1(1.10±0.16), 差异有统计学意义(t=7.628、10.390, P<0.05)。对照组细胞48 h吸光度值(1.91±0.05)明显高于PRELP1 KD组(1.22±0.06), 差异有统计学意义(t=20.660, P<0.05)。...     

人工气腹对结肠癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨腹腔镜结直肠癌手术人工气腹的安全性与可行性。方法:(1)实验分组为对照组,对照+用药组,CO2组,CO2+用药组,He组,He+用药组(PD98059);(2)用MTT法测定细胞增殖数;(3)用丫啶橙/溴乙啶(AO/EB)双荧光染色检测细胞凋亡率;(4)软琼脂克隆形成试验测定单个细胞增殖能力;(5)用免疫组化法测定结肠癌细胞中HIF-1α和VEGF的表达。结果:CO2气腹作用后人结肠癌细胞LS-174T增殖能力高于对照组、He组。He组细胞凋亡率高于CO2组和对照组,CO2、He人工气腹作用后结肠癌细胞中HIF-1α和VEGF阳性表达率高于对照组。PD98059药物组细胞生长速度、增殖能力及HIF-1α和VEGF的阳性表达率均低于相应处理组。结论:CO2气腹可促进结肠癌细胞LS-174T生长,He气腹可相对抑制其生长,PD98059可抑制结肠癌细胞的生长。     

可溶性血管内皮生长因子受体1基因转染结肠癌Lovo细胞的实验研究

目的研究人可溶性血管内皮生长因子受体1（sFlt-1）基因转染结肠癌Lovo细胞后对其细胞生长及培养上清液VEGF含量的影响。方法使用脂质体介导方法把含sFlt-1基因的重组质粒pcDNA3-sFlt-1转染Lovo细胞,通过RT-PCR及ELISA法鉴定sFlt-1的表达,MTT比色法及ELISA法检测该蛋白对Lovo细胞生长及VEGF含量的影响。结果pcDNA3-sFlt-1成功转染Lovo细胞．ELISA法检测到转染后培养上清液中sFlt-1蛋白的表达．MTT实验显示此培养上清液可抑制Lovo细胞的生长．转染后2、14、21和28d细胞培养上清的抑瘤率分别为（23．92±9．16）％、（13．98±10．21）％、（22．54±11．92）％和（33．43±9．34）％,与未转染组比较,差异均有统计学意义（P〈0．05,P〈0．01）;ELISA证实细胞培养上清中VEGF的含量降低,与未转染组比较,差异亦均有统计学意义（P〈0．05,P〈0．01）。结论将sFlt-1基因转染至结肠癌Lovo细胞后,可获得具有生物活性的sFlt-1蛋白．抑制癌细胞生长。     

脯氨酸-谷氨酸-亮氨酸富集蛋白1在甲状腺癌组织的表达及临床意义

目的探讨脯氨酸-谷氨酸-亮氨酸富集蛋白1在甲状腺癌组织中的变化, 及其表达水平与肿瘤增殖和转移的关系。方法选取2018年8月至2023年8月新乡医学院第一附属医院手术治疗的44例甲状腺癌临床样本作为研究对象, 对应得癌旁组织作为对照, 采用蛋白质免疫印迹分析癌旁组织和甲状腺癌组织中脯氨酸-谷氨酸-亮氨酸富集蛋白1蛋白的表达水平。同时分析细胞增殖标志物(细胞增殖抗原)、迁移标志物(基质金属蛋白酶)和上皮-间充质转化标志物(N-钙黏蛋白和波形蛋白)表达水平。并分析脯氨酸-谷氨酸-亮氨酸富集蛋白1敲降对甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。组间计量数据采用t检验。结果癌旁组织脯氨酸-谷氨酸-亮氨酸富集蛋白1表达水平(0.93±0.11)明显低于甲状腺癌组织(2.02±0.28), 差异有统计学意义(t=24.370, P<0.05)。癌旁组织细胞增殖抗原蛋白表达水平(1.01±0.29)明显低于甲状腺癌组织(2.48±0.12), 差异有统计学意义(t=19.070, P<0.05)。癌旁组织基质金属蛋白酶13表达水平(0.71±0.10)明显低于甲状腺癌组织(1.53±0.19)...     

靶向沉默Notch1基因对人膀胱癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨沉默Notch1基因对人膀胱癌细胞生物学行为的影响. 方法 将靶向Notch1的siRNA真核表达载体psiRNA Notch1-1转染膀胱癌细胞株T24和BIU-87,噻唑盐法、流式细胞术检测沉默Notch1后膀胱癌细胞生长、细胞周期和凋亡情况.RT-PCR和蛋白质印迹法检测转染前后Notch1基因mRNA和蛋白表达的变化. 结果 转染后72 h,T24和BIU-87细胞G0/G1期细胞比例明显增加,分别为(80.13±2.69)%和(69.44±2.41)%,与T24对照组(23.89±1.32)%和BIU-87对照组(24.63±1.68)%比较差异有统计学意义(P值均<0.05).转染后72 h,T24和BIU-87细胞凋亡率分别为(13.75±1.23)%和(8.72±1.01)%,与T24对照组(1.28±0.14)%和BIU-87对照组(1.01±0.27)%比较差异均有统计学意义(P值均<0.05).转染后24 h细胞生长明显受到抑制,该抑制作用持续到转染后96 h.转染后72 h,T24和BIU-87细胞中Notch1基因mRNA和蛋白表达明显下调(P<0.05). 结论 Notch1在膀胱癌细胞株中可能起致癌作用.沉默Notch1基因能够抑制膀胱癌细胞的增殖.     

siRNA沉默Livin基因表达对肝癌细胞HepG2生物学行为的影响

目的：研究应用siRNA沉默Livin基因表达后肝癌细胞HepG2的生物学功能变化。方法：用脂质体lipofectamineTM2000将携带Livin基因的siRNA载体转染至HepG2细胞内,RT—PCR、Westernblot检测转染前后Livin基因mRNA和蛋白质的表达改变;流式细胞技术（FCM）和TUNEL检测转染前后肝癌细胞凋亡变化。结果：RT—PCR及Westernblot检测发现转染siRNA后Livin基因的mRNA和蛋白质表达均明显下降（P〈0．05）;FCM检测发现实验组、阴性对照组和空白组肝癌细胞HepG2在G1期所占比例分别是（58．994-1173）％、（41．85±2．82）％、（41．25±1．24）％,实验组与其他两组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）;TUNEL技术检测表明实验组肝癌细胞HepG2凋亡数目明显增加,细胞凋亡率为（67．56±2．56）％,凋亡率明显高于阴性对照组（27．21±12．58）％和空白组（14．09±5．16）％（P〈0．05）。结论：在肝癌细胞HepG2中,Livin基因沉默具有诱导肝癌细胞凋亡、抑制肝癌细胞生长的作用。【关键词】癌,肝细胞·肝癌细胞,HepG2·siRNA·基因,Livin     

慢病毒介导的NOB1基因沉默对人结肠癌细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨RNA干扰技术沉默人NOB1基因对人结肠癌RKO细胞增殖和凋亡的影响。方法设计靶向NOB1基因的小干扰RNA（siRNA）,构建NOB1基因特异性的RNA干扰慢病毒载体,感染RKO细胞,并设置阴性对照组。实时定量PCR和Westemblot分别检测两组细胞NOB1mRNA及蛋白的表达情况;CellomicsArrayScanVTIHCS高内涵分析仪检测感染细胞的增殖和克隆形成能力;流式细胞术检测细胞周期及凋亡的变化：裸鼠成瘤实验检测0NOB1-siRNA对肿瘤的抑制作用。结果NOB1-shRNA慢病毒感染RKO细胞3d后．与阴性对照组比较．NOB1mRNA和蛋白的表达明显降低,克隆形成数减少,而细胞凋亡数增加（均P〈0．05）。裸鼠成瘤实验结果显示,NOB1．shRNA感染组裸鼠移植瘤体积为（405±102）mm3,小于阴性对照组的（870±165）mm3（P〈0．05）。结论通过RNA干扰方式沉默NOB1基因的表达．有望作为抑制结肠癌发展的有效手段。     

人工气腹对结肠癌细胞增殖影响的实验研究

目的研究不同气腹介质对人结肠癌细胞株LS-174T在体外及裸鼠体内增殖的影响，探讨腹腔镜结直肠癌手术的安全性。方法（1）细胞计数法绘制LS-174T细胞株生长曲线。（2）免疫组织化学检测细胞株HIF-1α、VEGF的表达。（3）丫啶橙／溴乙啶（AO／EB）双荧光染色检测细胞凋亡率。（4）流式细胞仪检测细胞周期的变化：（5）体内实验测量各组裸鼠实体肿瘤的重量及体积。结果体外试验中，经模拟CO2气腹作用后人结肠癌细胞LS-174T生长速度高于对照组，CO2、He人工气腹作用后结肠癌细胞中HIF-1α和VEGF的阳性表达率高于对照组，CO2组高于He组。He组细胞凋亡率高于CO2组和对照组。体内实验：CO2气腹组裸鼠移植瘤平均瘤重和瘤体积较免气腹组、He气腹组明显增高。结论裸鼠CO2气腹可促进结肠癌细胞LS-174T的生长，而He气腹促进肿瘤生长的能力较弱。     

沉默 Notch-1 基因影响人膀胱癌 RT4 细胞生物学行为的体外实验研究

目的：研究沉默 Notch-1 基因对人膀胱癌 RT4 细胞增殖、凋亡、侵袭和上皮间质转化等生物学行为的影响。方法： 设计并构建 Notch-1 shRNA,选取 RT4 细胞作为研究对象分别进行转染。实验细胞分为 Notch-1 阴性对照组（shRNA NC）, Notch-1 干扰组（Notch-1 shRNA）。细胞转染 48 h 后,MTT 法检测细胞增殖水平变化;Transwell 检测细胞侵袭力的改变;流式细胞术检测细胞凋亡水平情况;RT-PCR 和 Western blot 检测凋亡相关蛋白（Bax、Bid、Bcl-2）及上皮间充质转化（EMT） 因子（E-cadherin、N-cadherin、Vimentin）在 mRNA 和蛋白水平上的改变。结果：与 shRNA NC 组相比,Notch-1 shRNA 组细胞增殖率明显下降（t =4.629,P =0.010）,侵袭力减弱（t = 8.193,P=0.001）,细胞凋亡率明显升高（t= –18.441,P<0.001）,Bad（t = –12.521,P<0.001 ;t = –6.983,P =0.002）、Bid（t = –9.231,P<0.001 ;t= –8.871,P=0.001）、E-cadherin（t= –13.457,P<0.001 ;t= –5.610,P=0.005）mRNA 和蛋白表达量增多,Bcl2（t=10.651,P<0.001 ;t=6.973,P=0.002）、N-cadherin（t=6.505,P<0.001 ;t=10.132,P=0.001）、Vimentin（t=9.135,P<0.001 ;t =5.630,P =0.005）mRNA 和蛋白表达量显著降低。结论：沉默 Notch-1 的表达能够抑制人膀胱癌 RT4 细胞的增殖和侵袭迁移,促进其细胞凋亡,其机制可能与诱导 Bad、Bid、E-cadherin,抑制 Bcl2、N-cadherin、Vimentin 的表达有关。     

WTX 慢病毒载体及其稳转结肠癌细胞株Lovo/WTX-EGFP 的建立

目的：构建抑癌基因WTX慢病毒载体,建立稳定转导WTX的结肠癌Lovo/WTX-EGFP细胞株,为研究WTX在结肠癌中的作用机制提供有效工具。方法：通过Gateway技术构建WTX慢病毒载体pLV.Ex3d.null-EF1A>WTX>IRES/EGFP并通过菌落PCR筛选鉴定,将其与辅助质粒pLV/helper-SL3,PLV/helper-SL4,PLV/helper-SL5共转染293FT细胞包装慢病毒并在荧光显微镜下行滴度值测定。用WTX慢病毒载体转导结肠癌Lovo细胞株,并通过多次挑克隆培养建立稳定表达WTX的Lovo/WTX-EGFP细胞株。结果：Gateway技术构建的慢病毒载体pLV.Ex3d.null-EF1A>WTX>IRES/EGFP经鉴定完全正确;慢病毒包装48 h后视野下可见清晰绿色荧光表达,病毒滴度为5×107 TU/mL。慢病毒载体成功转导Lovo细胞,经qPCR及Western blot检测WTX表达水平明显升高;通过多次挑克隆培养成功建立了稳定转导WTX的Lovo/WTX-EGFP细胞株。结论：通过Gateway技术可成功构建WTX慢病毒载体并获稳定转导WTX的Lovo/WTX-EGFP细胞株,为研究WTX在结肠癌中的作用机制提供了实验基础。     

MBD1 RNA干扰对胰腺癌细胞株BxPC-3生长影响的实验研究

目的 观察阻断MBD1表达后对胰腺癌细胞生长增殖的影响,探讨MBD1在胰腺癌发生发展中的作用.方法 采用RNA干扰技术,构建MBD1-siRNA重组质粒,脂质体介导转染人胰腺癌细胞株BxPC-3,RT-PCR和Western印迹检测转染前后MBD1 mRNA与蛋白的表达变化,MTT法检测转染前后BxPC-3细胞的生长曲线,将细胞接种于裸鼠,观察转染前后胰腺癌细胞体内移植瘤的生长情况.结果 转染siRNA-MBD1质粒后胰腺癌细胞株BxPC-3 MBD1的mRNA与蛋白表达水平明显降低.MTT法检测细胞的生长曲线,发现转染组较转染空质粒组和未转染组生长明显缓慢(P<0.01);体内实验显示,将转染前后的细胞接种于裸鼠,转染组移植瘤生长速度明显较其他两组减慢(P<0.01),RT-PCR检测移植瘤MBD1mRNA表达的变化,转染组中未能测到明显的MBD1表达.而转染组中CDH1、Rb等抑癌基因mRNA的表达明显高于转染空质粒组和未转染组.结论 通过RNA干扰技术,可在转录和翻译水平降低MBD1在胰腺癌细胞株BxPC-3中的表达,并能抑制肿瘤细胞的生长,但其作用机制尚不清楚,MBD1介导的转录抑制作用可能在胰腺癌的发生发展过程中起到重要的作用.     

siRNA 干扰雄激素受体相互作用蛋白 HSPBAP1对人前列腺癌 PC3细胞恶性表型的影响

目的：探讨siRNA干扰雄激素受体相互作用蛋白HSPBAP1对前列腺癌PC3恶性表型的影响。方法 siRNA干扰PC3细胞HSPBAP1的表达,检测细胞增殖、克隆形成、细胞周期及迁移和侵袭的变化。结果 siHSPBAP1组与对照组相比,增殖能力、克隆形成能力、迁移和侵袭能力显著减弱（ P ＜0．05）, G0／G1期细胞数增多,S期和G2／M期细胞数显著减少（ P ＜0．05）。结论干扰HSPBAP1能够抑制前列腺癌PC3细胞的恶性表型。     

siRNA靶向抑制GHR对人结肠癌SW480细胞增殖的影响

目的利用小分子干扰RNA(siRNA)技术抑制人结肠癌SW480细胞人生长激素受体(GHR)基因的表达,观察GHR基因沉默对SW480细胞增殖的影响。方法设计特异性siRNA,构建针对人GHR真核质粒的表达载体(pcDNATM6.2-GW/EmGFP-siRNA-GHR),用电转染法转染人结肠癌SW480细胞,培养48~72 h后,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性;Western Blot检测GHR蛋白表达;实时荧光定量PCR(qPCR)方法检测GHRmRNA水平变化。结果转染siRNA后,与对照组相比,转染组细胞增殖速率、GHR的蛋白表达量、GHRmRNA水平均明显降低(均P<0.05)。结论构建的pcDNATM6.2-GW/EmGFP-GHRsiRNA能有效地下调SW480细胞中GHR的表达,从而抑制SW480细胞的增殖。     

Sulforaphane inhibits growth of a colon cancer cell line

Objective The consumption of cruciferous vegetables has a protective effect on the development of colorectal cancer. The phytochemical Sulforaphane is an isothiocyanate found almost exclusively in cruciferous vegetables. We have studied the effect of Sulforaphane on cell proliferation of an HT‐29 colon cancer cell line. Materials and methods HT‐29 colon cancer cells were cultured in 96‐well microtitre plates. Sulforaphane (in concentrations ranging from 0.01 to 0.1 mmol) were added to the wells. Cell proliferation was measured using the colourimetric assay technique. Results The proliferation of colon cancer cells was significantly reduced by Sulforaphane at concentrations of ≥0.02 mmol. Conclusion These findings may help explain the epidemiologically proven protective effect of vegetables against colon cancer.     

肠癌SW-620肿瘤细胞SP亚群研究

目的 观察肠癌细胞株SW-620中肿瘤干细胞相关的SP(side population)亚群比例,分选出相关的SP和NSP细胞,并鉴别相关的SP是否具有干细胞某些生物学特性.方法 制备SW-620细胞悬液,经Hoechst33342和PI染色(其中对照组同时加入拮抗剂维拉帕米),流式细胞仪分析SP亚群.通过流式细胞仪分选出肠癌细胞株SW-620中SP细胞.克隆形成实验和噻唑蓝(MTT)实验检测SP和NSP细胞增殖能力的差异.裸鼠体内成瘤对比实验验证SP细胞和NSP细胞致瘤性.结果 SP亚群占SW-620细胞的1.0%左右,维拉帕米阻断后减少为0.01%左右.流式细胞仪分选出SP细胞7.5×105个,大部分为NSP细胞.克隆形成实验和MTT证实SP细胞和NSP细胞增殖能力有差异.裸鼠体内成瘤实验发现:1×105个SP细胞可以致裸鼠成瘤,1×105个NSP细胞及以下数量级别细胞不能致裸鼠成瘤.结论 人肠癌细胞株SW-620中存在SP亚群细胞,维拉帕米可抑制染料外排而明显减少SP细胞的比例.可以通过流式细胞仪分选出SP细胞,通过克隆形成实验和MTT实验检测SP和NSP细胞增殖能力有差异.裸鼠成瘤对比实验证实SP比NSP细胞更具致瘤性.     

脂氧合酶抑制剂NDGA对HT-29结肠癌细胞诱导凋亡的研究

目的:探讨脂氧合酶抑制剂NDGA在体外对结肠癌HT-29细胞株生长抑制、凋亡影响。方法: 应用MTT法绘制生长曲线;倒置相差显微镜观察细胞形态变化;扫描电镜观察细胞的超微结构变化, 检测凋亡小体;流式细胞仪检测细胞凋亡、细胞周期变化。结果:不同浓度NDGA处理HT-29结肠癌细胞,随着药物浓度加大,细胞形态变圆,体积缩小,从瓶壁上逐步脱落,肿瘤细胞凋亡率逐步上升,癌细胞阻滞于G0／G1期。应用扫描电镜可见凋亡小体形成。结论:NDGA对结肠癌HT-29细胞具有抑制生长、诱导凋亡作用,凋亡率随药物浓度加大逐步升高。具有剂量依赖效应。