柔红霉素对人晶体上皮细胞生长抑制和角膜内皮细胞毒性试验研究

目的：研究柔红霉素对体外培养人晶体上皮细胞增殖的抑制作用和对角膜内皮细胞的毒性，探索使用柔红霉素预防后发障的适宜浓度，方法：第三代人晶 皮细胞接种于24孔培养板内，24h后加入不同浓度柔红霉素作用10min后，吸出药物并冲洗后再培养48h，细胞计数，原代培养角加入膜内皮细胞，加入不同浓度柔红霉素作用10min，观察细胞生长形态学变化，结果：柔红霉素依浓度梯度抑制晶体上皮细胞增殖，其LD50为4．9ug/ml，10ug/ml以下浓度对角膜内皮细胞无损害，结论：柔红霉素有可能作为预防后发障的辅助药物之一，选择适宜浓度是防止其对其他组织产生毒性的关键。     

维生素E琥珀酸酯对人晶状体上皮细胞增殖的影响

目的研究维生素E琥珀酸酯(vitamin E succinate,VES)对体外培养的人晶状体上皮细胞(HLECs)增殖的影响。方法人晶状体上皮细胞株HLECs-B3以VES刺激24h、48h、72h、96h,VES浓度为5μg/ml、10μg/ml和20μg/ml,用MTT比色法测定VES对细胞增殖的抑制作用;以流式细胞仪分析细胞周期。结果VES对人晶状体上皮细胞的增殖具有显著的抑制作用,表现为时间和剂量依赖关系。并且将细胞周期阻滞于G0/G1期。结论VES对体外培养的人晶状体上皮细胞的增殖具有抑制作用,为临床筛选防治后发性白内障的药物提供依据。     

外源性细胞周期蛋白激酶抑制因子p21基因对人晶状体上皮细胞周期的影响

目的 研究细胞周期蛋白激酶抑制因子p21基因转染对人晶状体上皮细胞(1ens epithelial cells,LEC)周期调控的影响,在基因水平探讨防治后发性白内障的可能性。方法 构建含人p21基因真核表达的载体质粒pcDNA3／p21,采用基因转染技术将质粒DNA转染至永生性人LEC系HLE-B3,使用流式细胞仪观察细胞生长和周期的变化,并采用逆转录聚合酶链式反应方法检测p21mRNA的表达;分别采用免疫组化和免疫印迹(western blotting,WB)方法检测p21蛋白的表达。结果 体外构建的载体质粒pcDNA3／p21经酶切鉴定含有人p21基因全长cDNA片段。基因转染后细胞HLE—B3经传代培养,48h后出现缓慢生长且部分细胞漂浮死亡的现象,G1期细胞明显增多。与对照细胞比较,转染后细胞的p21mRNA表达明显增多;p21蛋白表达明显增强,在经筛选的阳性克隆细胞中WB方法可检测到相对分子质量为21000的阳性蛋白带。结论 外源性p21基因可在人LEC系HLE．B3中过度表达,并对细胞周期调控产生抑制作用。基因转染抑制LEC增殖可能成为防治后发性白内障的新途径。     

转染Zn2+诱导表达反义bcl-2基因对人视网膜色素上皮细胞的影响

目的:观察转染Zn2 诱导表达的反义bcl-2 基因对人视网膜色素上皮(RPE)细胞的影响。方法:培养的正常RPE细胞与转染反义bcl-2 RPE细胞采用免疫组化,克隆形成试验、MTT,流式细胞仪,TUNEL分别予以观察。结果:转染后RPE细胞细胞骨架角蛋白表达阳性;硫酸锌诱导表达的安全剂量为160μmol/L;诱导表达反义bcl-2 RPE大部分细胞bcl-2 表达为阴性,部分弱阳性;在第10d细胞克隆形成率分别为(4.65±0.043)%与(4.85±0.085)%(P >0.05),诱导表达反义bcl-2 的RPE生长曲线在5d后表现为低增生率(P <0.01);柔红霉素作用后G2期细胞由9.9%增加至30.4%;180μg/L柔红霉素作用反义bcl-2转染组TUNEL阳性细胞可见典型凋亡小体。结论:转染可诱导表达的bcl-2 基因的RPE细胞可以进行细胞凋亡的后续研究。     

柔红霉素预防后囊膜混浊的研究

目的研究体外细胞培养中柔红霉素对各类晶体上皮细胞增殖的抑制作用及有效浓度,为后囊膜混浊的药物预防提供新线索。方法传代培养的牛、兔、人晶体上皮细胞经０．５、２．５、５．０、７．５、１０．０μｇ／ｍｌ柔红霉素３７℃孵育１０分钟后,观察细胞生长情况;用药后４８小时,采用Ｇｉｅｍｓａ染色－比色法检测细胞吸光值,并分别求得柔红霉素对三种晶体上皮细胞的半数抑制浓度（ＬＤ５０）。结果柔红霉素对体外培养牛、兔、人晶体上皮细胞的增殖均有显著抑制作用,呈浓度依赖性改变。对于人晶体上皮细胞,０．５μｇ／ｍｌ柔红霉素已有显著抑制效应,７．５μｇ／ｍｌ基本发挥最大作用。牛、兔、人晶体上皮细胞的ＬＤ５０值分别为０．４９、４．３０和４．０６μｇ／ｍｌ。结论柔红霉素低浓度短时间作用能有效抑制体外培养晶体上皮细胞的增殖,通过进一步在体研究,可能成为预防后囊膜混浊的理想药物。     

肝细胞生长因子对培养的人晶状体上皮细胞增生及移行作用的研究

目的研究肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)对体外培养的人晶状体上皮细胞(hu-man lens epithelial cells,HLECs)增生及移行的作用。方法在无血清培养液培养的HLECs中分别加入不同浓度的HGF(2.5、5、10、20、40、50、100μg/L),MTT法测定促细胞增生的情况;流式细胞仪分析细胞周期;HLECs损伤愈合模型,观察不同浓度HGF(10、20、50μg/L)处理24h后HLECs的移行情况。结果HGF浓度处于10、20、40、50μg/L时对HLECs具有促增生作用(P<0.05或P<0.01),增生率分别为10.5%、30.2%、28.3%和11.1%;当浓度为20μg/L作用24h能达到最大促增生效果(P<0.01),增生率为29.6%;HGF通过促进细胞G0向G1的转化来促进细胞的增生;HGF可明显促进HLECs的移行,其移行能力分别为22.1%(10μg/L)、57.7%(20μg/L)和208.6%(50μg/L)。结论HGF可促进HLECs的增生和移行,是HLECs的有丝分裂原和强有力的促移行因子。     

西洋参茎叶总皂甙对培养人胚视网膜色素上皮细胞增生的影响

目的 研究西洋参茎叶总皂甙(PQS)对人视网膜色素上皮细胞(RPE)增生的抑制作用。方法 通过活细胞计数法与MTT比色法分别检测不同质量浓度(10μg／ml～500μg／ml)PQS和PQS(200μg／ml)在不同作用时间(6～120h)对RPE增生及代谢的影响。结果 PQS组细胞增殖受抑制，细胞生存率下降，400μg／ml抑制作用最强；其抑制效应在6h出现，72h达高峰。结论 PQS可能通过阻滞钙通道、干扰RPE代谢对RPE增殖具有剂量和时间依赖方式的抑制作用。     

环孢素A对晶状体上皮细胞的影响

目的 观察环孢素A（CsA)对体外培养的牛晶状体上皮细胞（BLEC）增殖的影响。方法 对培养牛晶状体上皮细胞采用^3H-TdR掺入法及MTT法，研究不同质量浓度CsA(1-16μg/ml)作用24h和72h对牛晶状体上皮细胞增殖有抑制作用。且呈剂量依赖性，24h50%抑制质量浓度（IC50）为10.37μg/ml，72hIC50为6.61μ/ml。CsA引起细胞形态学改变的主要特点是细胞胞浆内大量空泡形成，且随药物剂量增大，细胞形态改变越明显。结论 一定剂量的CsA可抑制体外培养的牛晶状体上皮细胞的增殖，为预防后囊混浊提供了新途径。     

CTGF反义寡核苷酸对人晶状体上皮细胞转分化的探讨

目的:探讨结缔组织生长因子反义寡核苷酸对体外培养人晶状体上皮细胞(HLECs)合成CTGF与α-SMA表达的影响。方法:测定CTGF反义寡核苷酸对体外培养HLECs的转染率;应用CTGF反义寡核苷酸直接转染第3代HLECs进行细胞生长曲线的测定;采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)检测细胞CTGF和α-SMAmRNA水平。结果:直接导入法反义寡核苷酸进入较慢,但72h未出现细胞毒性。CTGF-ASON直接导入法培养细胞72h后可见对细胞增殖抑制作用。直接导入法处理48h后,TGF-β1刺激能显著增加CTGF以及α-SMAmRNA的表达,但却可被CTGF-ASON直接导入法所抑制,而错义寡核苷酸却没有这种作用。结论:CTGF反义寡核苷酸直接转染HLECs能抑制TGF-β1诱导的CTGF与α-SMA表达上调,提示阻断CTGF可能是防治后发性白内障的有效手段。     

特异性启动子LEP503介导的自杀基因系统对晶状体上皮细胞增殖的抑制作用

目的构建晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LEC)特异性启动子LEP503(lens epithelium gene product503)调控的Lenti-LEP503-HSV-tk-EGFP载体,观察慢病毒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶/丙环鸟苷系统(herps simplex virus thymidine kinase/ganciclov-ir,HSV-tk/GCV)自杀基因系统对人晶状体上皮细胞(HLEC)增殖的靶向性抑制作用。方法用RT-PCR方法从HLEC基因组中克隆LEP503启动子序列,构建单纯LEP503启动子调控HSV-tk基因表达的慢病毒载体Lenti-LEP503-HSV-tk-EGFP,同时构建广谱启动子巨细胞病毒(cytomegalo virus,CMV)调控的HSV-tk载体Lenti-CMV-HSV-tk-EGFP。将特异性表达载体Lenti-LEP503-HSV-tk-EGFP分别转入HLEC和Hela细胞,用荧光显微镜观察荧光强度,用RT-PCR方法评估相关蛋白的组织特异性表达。将Lenti-LEP503-HSV-tk-EGFP和Lenti-CMV-HSV-tk-EGFP分别转入HLEC,通过荧光显微镜观察EGFP的表达,用流式细胞仪及RT-PCR比较CMV与LEP503启动子介导下游靶基因HSV-tk的表达差异。结果 Lenti-LEP503-HSV-tk-EGFP能在HLEC中特异性表达,但Lenti-LEP503-HSV-tk-EGFP的表达效率明显低于Lenti-CMV-HSV-tk-EGFP。转染Lenti-LEP503-HSV-tk-EGFP的HLEC在20mg·L-1GCV作用48h后EGFP阳性细胞的形态发生明显变化;GCV作用24h后Lenti-LEP503-HSV-tk-EGFP转染HLEC较正常HLEC和Lenti-LEP503-HSV-tk-EGFP转染Hela细胞活性有明显抑制,且随时间的延长抑制效果逐渐增强。结论 LEP503启动子能介导HSV-tk基因在HLEC中特异表达,并介导HSV-tk/GCV自杀基因系统靶向性抑制HLEC增殖,但该启动子表达效率较低,所介导的HSV-tk/GCV系统对HLECs增殖的抑制效率低于CMV启动子。     

Treatment of retinal detachment of the course of retinopathy of prematurity

Cryo- and laser therapy of stage 3 have reduced, but not eliminated the occurrence of retinal detachment in stages 4a, 4b and 5 of ROP. In this disease the treatment of these stages is still the greatest challenge to the ophthalmologist. Therefore, the aim of this paper is to present our up-to-date possibilities of treatment of different kinds of retinal detachments in ROP, including segmental scleral buckling, encircling scleral buckling, scleral resection, vitrectomy and its modifications in ROP. Guidelines of surgery of retinal detachment in active stage 4 and 5 of retinopathy of prematurity have been described.     

Analysis of some of the possible neonatal risk factors of development of retinopathy of prematurity

PURPOSE: The aim of the study was to evaluate some of the possible risk factors for retinopathy of prematurity (ROP) treated with laser photocoagulation or cryocoagulation. MATERIAL AND METHODS: The study comprised 71 preterm infants with ROP needing treatment and 118 prematures without ROP or with ROP requiring no treatment, as a control group. All infants were born with gestational age < or = 32 weeks and birth weight < or = 1500g. The perinatal variables, including some of clinical data, the length of mechanical ventilation as well as continous positive airway pressure (CPAP), duration of total parenteral nutrition and some of laboratory data were analyzed, to evaluate their correlation with the development of ROP. RESULTS: Gestational age before 28 weeks (OR = 5.11), episodes of convulsiones (OR = 2.15), mechanical ventilation for more than 20 days (OR = 5.86) and > 30 days (OR = 7.47), CPAP for more than 5 days (OR = 4.15) and > 10 days (OR = 2.84), total parenteral nutrition for more than 10 days (OR = 7.84) and > 20 days (OR = 9.02) and elevated peak of alanine aminotransferase (AIAT) levels (OR = 3.17) were significant risk factors for ROP requiring treatment. CONCLUSIONS: The opthalmic examination for retinopathy of prematurity requiring laser photocoagulation or cryocoagulation should be obligatory for prematures born < or = 32 weeks of gestational age, with birth weight < or = 1500 g.The frequency of the consecutive ophthalmic examinations depends on the severity of prematurity and on the presence and intensification of the risk factors for ROP.     

角膜曲率的分析

目的：探讨我国人角膜曲率半径的正常值及不同性别、不同年龄的角膜曲率半径差异。方法：对10998只眼的角膜曲率进行检测，并按男、女10岁一组进行统计分析。结果：（1）K1为7.65mm,K2为7.71mm，平均K值为7.67mm。较眼科学正常值K:7.77mm短0.1mm。（2）K的平均值男性较女性的长0.1155mm。且女性各年龄段角膜曲率半径均男性的有不同程度的减短。（3）男女均随年龄的增长，角膜曲率半径大致呈递减趋势，即：角膜曲率半径与年龄成反比关系。（４）男女K1,K2之比，均随年龄增长而增长，即K1逐渐增长而增长，即　K1值逐渐增长，K2逐渐减短。结论：本文测定的角膜曲率较眼科文献中的提供的正常值短0.1mm，并且存在着年龄、性别上的差异。     

亟待新型早产儿视网膜病变动物模型的问世

早产儿视网膜病变（ROP）病因和发病机制尚不完全清楚,制约了其有效防治和相关研究的深入开展。尽管氧诱导视网膜病变动物模型为探索ROP复杂的病因和发病机制发挥了重要作用,但特异性较差,与人类ROP临床本质存在一定差异。因此,有必要对现有动物模型进行改良或建立新动物模型。通过更新观念、在多学科交叉中寻求突破,融合更多ROP危险因素,并结合新兴的转基因技术以及完善模型评价系统,建立科学的实验研究平台,为更好地开展ROP防治研究奠定基础。