小青龙汤含药血清对ASMC ET-1分泌水平和ECE基因表达的影响

目的:进一步观察小青龙汤含药血清对ASMC ET-1分泌水平和ECE基因表达的影响。方法:实验分6组,正常组(10%正常对照组血清)、模型组(组胺加10%正常对照组血清)、小青龙汤高剂量组(组胺加10%小青龙汤高剂量组血清)、小青龙汤中剂量(组胺加10%小青龙汤中剂量组血清)、小青龙汤低剂量组(组胺加10%小青龙汤低剂量组血清)、地塞米松组(组胺加10%地塞米松组血清),每组8孔。采用ELISA法测定小青龙汤含药血清对ASMC ET-1分泌水平;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定ASMC内皮素转换酶(ECE)的基因表达。结果:与模型组比较,小青龙汤低剂量组含药血清对ASMCET-1分泌水平有显著性差异(P<0·05);小青龙汤高、中剂量组及地塞米松组均有极显著性差异(P<0·01)。与模型组比较,小青龙汤低剂量含药血清对ASMC内皮素转换酶(ECE)基因表达有显著性差异(P<0·05);小青龙汤高剂量组及地塞米松组均有极显著性差异(P<0·01)。结论:小青龙汤抑制哮喘大鼠平滑肌分泌ET-1是小青龙汤影响哮喘大鼠气道重建的途径之一。     

小青龙汤对哮喘大鼠气道结构重建的影响

目的:通过观察小青龙汤对气道结构重建的影响,探讨其治疗哮喘的作用机制。方法:SD雄性大鼠40只,随机分为4组:哮喘组(A组)、小青龙汤组(B组)、地塞米松组(C组)、正常组(D组),每组10只。每组动物连续灌胃雾化1个月后留取病理组织,采用计算机图像分析系统测定气管和支气管平滑肌、粘膜、基底膜的厚度,并剥取其气管平滑肌匀浆后,用ELISA法测定其内皮素(ET-1)的水平。结果:治疗组大鼠气管平滑肌、粘膜、基底膜的厚度明显低于哮喘组大鼠(P<0.05),与对照组、正常组无明显差别(P>0.05);治疗组大鼠ET-1水平明显低于哮喘组(P<0.05)。结论:小青龙汤用于哮喘防治的有效途径之一,可能是通过抑制气道平滑肌ET-1的分泌,改善哮喘大鼠气道结构重建。     

止哮汤对哮喘大鼠气道重塑及肺组织PCNA的影响

目的:观察止哮汤对哮喘大鼠气道重塑及肺组织增殖细胞核抗原(PCNA)的影响。方法:选用健康Wistar大鼠60只,雌雄不拘,体重(200±20)g,随机分为6组:正常对照组(A组),哮喘模型组(B组),地塞米松对照组(C组),中药低剂量组(D组)、中剂量组(E组)、高剂量组(F组)共6组,10只/组。利用卵蛋白加氢氧化铝复制哮喘大鼠模型,各组大鼠均经末次激发24 h后处死。取左肺在矢状面取材按常规方法作病理切片及HE染色。光镜下观察哮喘大鼠的气道改变;免疫组化法分别测定大鼠肺组织PCNA蛋白的表达。结果:模型组大鼠气道壁及气道平滑肌面积明显增厚,气道壁面积、气道平滑肌面积以及支气管平滑肌细胞数经支气管内周长标准化后,亦明显高于对照组,表明在哮喘急性加重期哮喘大鼠已出现了气道平滑肌的增殖和气道重建,证明了在哮喘急性期存在着气道重塑。正常对照组PCNA呈阴性表达,模型组PCNA表达呈强阳性,强于正常对照组;地塞米松组、中药各剂量组PCNA表达均弱于模型组;中药低剂量组强于地塞米松组;中药中、高剂量组则与地塞米松组无差异;中药中、高剂量组均弱于中药低剂量组;中药高剂量组与中药中剂量组表达无差异。结论:止哮汤可下调哮喘大鼠肺组织中PCNA的表达,减轻气道重塑,高、中剂量组疗效较好,与地塞米松效果相当。     

小青龙汤干预哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖作用的研究

目的：探讨小青龙汤对哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖的作用机制。方法：40只清洁级雄性SD大鼠随机分为正常对照组、哮喘模型组、地塞米松组和小青龙汤组,每组10只。观察哮喘大鼠气道平滑肌形态学变化;采用SYBR Green Real Time PCR测定哮喘大鼠肺组织中ERK1、ERK2和Cyclin D1的mRNA表达变化。结果：哮喘模型组肺组织中ERK1、ERK2和Cyclin D1的mRNA表达显著高于正常对照组（P〈0.01）,小青龙汤组和地塞米松组肺组织中ERK1、ERK2和Cyclin D1的mRNA表达显著低于哮喘模型组（P〈0.01）。结论：小青龙汤抑制哮喘大鼠气道平滑肌细胞的增殖可能是通过抑制ERK1、ERK2的磷酸化和降低Cyclin D1的表达实现。     

补肺颗粒含药血清对哮喘气道平滑肌细胞及气道血管生成的影响研究

目的 观察中药补肺颗粒含药血清对哮喘小鼠支气管平滑肌细胞（ASMC）增殖以及气道血管生成的影响。方法 制备补肺颗粒含药血清,参照文献制备哮喘小鼠模型并分离ASMC,随机分为对照组、高剂量组和低剂量组,分别给予不含药血清、高剂量含药血清及低剂量含药血清加以培养,后测定ASMC增殖率,Western blotting测定ASMC血管内皮生长因子（VEGF）及内皮抑素（ES）的相对表达,RT-PCR检测ASMC VEGF mRNA及ES mRNA相对表达。结果 与对照组对比,高剂量组和低剂量组能显著降低ASMC增殖（P <0.01）,VEGF及内皮抑素的相对表达显著降低（P <0.05）,高剂量组的VEGF m RNA及ES mRNA的相对表达显著降低（P <0.01）。结论 补肺颗粒含药血清能有效抑制哮喘小鼠气道平滑肌细胞增殖,进而改善哮喘气道重塑状态。其作用机制可能与抑制VEGF及内皮抑素表达,调节气道血管生成有关。     

止哮汤对哮喘大鼠气道重塑及肺组织增殖细胞核抗原的影响

目的观察止哮汤对哮喘大鼠气道重塑及肺组织增殖细胞核抗原（PCNA）的影响。方法选用健康Wistar大鼠60只,随机分为6组：正常对照组,哮喘模型组,地塞米松对照组,中药低剂量组、中剂量组、高剂量组。利用卵蛋白加氢氧化铝复制哮喘大鼠模型,各组大鼠均经末次激发24h后处死。取左肺在矢状面取材按常规方法作病理切片及HE染色。光镜下观察哮喘大鼠的气道改变;免疫组化法分别测定大鼠肺组织PCNA蛋白的表达。结果模型组大鼠气道壁及气道平滑肌面积明显增厚,气道壁面积、气道平滑肌面积以及支气管平滑肌细胞数经支气管内周长标准化后,亦明显高于对照组（P〈0．05）。正常对照组PCNA呈阴性表达,模型组PCNA表达呈强阳性,强于正常对照组（JP〈0．05）;地塞米松组、中药各剂量组PCNA表达均弱于模型组;中药低剂量组强于地塞米松组（P〈0．05）;中药中、高剂量组则与地塞米松组无明显差异（P〉0．05）;中药中、高剂量组均弱于中药低剂量组（P〈0．05）;中药高剂量组与中药中剂量组表达无明显差异（P〉0．05）。结论止哮汤可下调哮喘大鼠肺组织中PCNA的表达,减轻气道重塑,高、中剂量组疗效较好,与地塞米松效果相当。     

小青龙汤与表面激素吸入对哮喘大鼠气道结构重建作用的实验研究

目的：观察小青龙汤对哮喘大鼠气道结构重建作用的影响。方法：将大鼠40只，随机分为4组：模型组、小青龙汤组、普米克令舒组、正常组，每组10只。每组动物连续灌胃并雾化2月后留取病理组织，制作病理切片，采用计算机图像分析系统测定其气管和支气管平滑肌、黏膜、基底膜的厚度；并剥取其气管平滑肌，匀浆后，用ELISA法测定内皮素-1（ET-1）的水平。结果：各组气道壁厚度变化的比较，小青龙汤组、普米克令舒组、正常组与模型组比较，差异有非常显著性意义（P〈0．01）。小青龙汤组与正常组、普米克令舒组比较，差异无显著性意义（P〉0．05）。各组气管平滑肌ET-1水平比较，小青龙汤组、普米克令舒组、正常组与模型组比较，差异有非常显著性意义（P〈0．01）；小青龙汤组与正常组、普米克令舒组比较，差异无显著性意义（P〉0．05）。结论：小青龙汤与普米克令舒均可能通过抑制哮喘大鼠气管平滑肌细胞分泌ET-1，从而达到防治气道结构重建的作用。     

马鞭草苷通过NF-κB/MAPK信号通路干预支气管哮喘大鼠气道炎症、气道平滑肌细胞增殖及RhoA表达的研究

目的:探究马鞭草苷对支气管哮喘大鼠气道炎症、气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖、RhoA表达及NF-κB/MAPK信号通路的影响.方法:72只健康雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、地塞米松组和马鞭草苷高、中、低剂量组,每组12只.除对照组外,其余大鼠采用卵清白蛋白致敏法制备支气管哮喘模型,各组大鼠于模型制备成功次日开始...     

平喘I号对呼吸道合胞病毒哮喘小鼠TNF-a ET-1影响的研究

目的：观察平喘Ⅰ号对呼吸道合胞病毒（RSV）感染引起BALB/c小鼠哮喘模型血清中肿瘤坏死因子-a（TNF-a）、内皮素-1（ET-1）含量的影响,探讨其治疗哮喘发作的作用机制。方法：72只BALB/c小鼠随机分成6组,随机分为正常对照组、模型对照组、地塞米松组、平喘Ι号低、中、高剂量组,每组12只。予RSV致敏,除正常对照组和模型对照组用等量生理盐水外,其余各组用相应药物干预。末次激发48h后取血清采用ELISA法测定各组TNF-a和ET-1含量。结果：与正常对照组比较,哮喘模型组小鼠血清TNF-a、ET-1含量明显增高（P〈0.01）。与模型对照组比较,平喘I号各剂量组和地塞米松组均可降低哮喘小鼠血清中TNF-a和ET-1水平（P〈0.01或P〈0.05）,其中平喘I号高剂量组与地塞米松组水平接近。结论：平喘Ⅰ号能降低哮喘小鼠血清TNF-a、ET-1含量,并具有量效关系。由此推测,通过降低血清中TNF-a和ET-1水平,从而减轻气道炎症反应和气道组织的重构,是平喘Ⅰ号治疗哮喘的作用机制之一。     

麻芍平喘汤对哮喘模型大鼠气道重塑的干预作用

目的:观察麻芍平喘汤对哮喘大鼠肺组织转化生长因子β1(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA蛋白)的影响,初步探讨麻芍平喘汤防治哮喘气道重塑的可能作用机制。方法:采用10%卵白蛋白加氢氧化铝干粉10 mg致敏和激发,建立哮喘大鼠气道重塑模型,将70只大鼠随机分为正常组、模型组、麻芍平喘低剂量组、麻芍平喘中剂量组、麻芍平喘高剂量组、地塞米松组、阳和平喘组,造模成功后,采用麻芍平喘汤、地塞米松和阳和平喘汤进行干预,干预结束后,HE染色法观察气道病理切片,肺功能测定仪测定用力呼气肺活量(FVC)、0.3 s用力呼气容积(FEV0.3)、最大呼气流量(PEF)与0.3 s用力呼气容积占用力呼气肺活量的比值(FEV0.3/FVC),RT-PCR法检测TGF-β1mRNA、α-SMA mRNA在肺组织中的表达。结果:模型组大鼠FVC、FEV0.3、PEF明显低于正常组(P0.01),FEV0.3/FVC值明显高于正常组(P0.01)。各给药组大鼠FVC、FEV0.3、PEF均有改善(P0.05);模型组大鼠肺组织TGF-β1mRNA、α-SMA mRNA蛋白表达水平明显高于正常组,各给药组灰度值低于模型组(P0.01),麻芍平喘高剂量组和阳和平喘组与地塞米松组比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论:麻芍平喘汤能够改善肺功能,降低TGF-β1、α-SMA的蛋白表达,抑制支气管平滑肌增生,减轻气道壁厚度,从而减轻气道炎症,延缓气道重塑。     

阳和汤体外对大鼠成骨细胞及破骨细胞增殖的影响

目的探讨阳和汤含药血清对成骨细胞、破骨细胞的影响作用。方法 SD大鼠连续7 d灌胃阳和汤,腹主动脉采血,制备含药血清。分离并培养原代成骨细胞、成骨细胞株UMR106、原代破骨细胞、破骨前体细胞RAW264.7。随机分为阳和汤含药血清低剂量组、中剂量、高剂量,空白血清组,各组加入相应含药血清进行培养,分别于24、48、72h收获细胞,采用MTT法测定药物对细胞增殖的影响;比色法测定破骨细胞TRAP酶活性。结果阳和汤含药血清中剂量、高剂量组在24、48、72h均能提高成骨细胞的增殖率,与空白血清组比较有显著差异;阳和汤含药血清低剂量组在48、72h也能明显提高细胞增殖率,与空白血清组比较有显著差异;阳和汤含药血清低剂量组对破骨前体细胞RAW264.7增殖率24、48、72h均没有影响,与空白血清组比较差异均无统计学意义;阳和汤含药血清中、高剂量组破骨前体细胞RAW264.7增殖率均低于空白血清组,24、48、72h比较差异有统计学意义;阳和汤含药血清低剂量组对破骨细胞的TRAP活性24、48 h影响不大,但72h TRAP活性低于空白血清组;阳和汤含药血清中、高剂量组48、72h破骨细胞TRAP活性均显著低于空白血清组。结论阳和汤能抑制体外培养的破骨前体细胞增殖,降低破骨前体细胞TRAP活性,对成骨细胞的增殖有促进作用。     

桑苏二陈汤加味干预支气管哮喘大鼠模型细胞因子的研究

目的：运用＂桑苏二陈汤加味＂治疗哮喘发作期Wistar大鼠模型,观察治疗前后大鼠一般生活状态、细胞因子等指标的变化,探讨桑苏二陈汤加味对哮喘发作期的疗效及作用机制,为临床应用桑苏二陈汤加味治疗哮喘提供实验依据。方法：雄性Wistar大鼠90只按随机数字表分为6组：空白组,桑苏二陈汤加味高剂量组、中剂量组、低剂量组,定喘汤组,模型组,每组15只。大鼠哮喘模型参照吕国平[1]等介绍的方法复制。观察治疗前后大鼠一般生活状态变化;测定大鼠血清中的ET-1、IL-1、IL-6、TNF-α、NO含量。结果：与空白组比较,模型组大鼠ET-1？IL-1？IL-6？TNF-α、NO含量显著升高,提示哮喘炎症存在。与模型组比较,治疗组炎症有减轻,ET-1、IL-1、IL-6、TNF-α、NO含量下降。与定喘汤组比较,桑苏二陈汤加味高、中剂量组ET-1、IL-1、IL-6、TNF-α、NO含量升高（P〈0.01）,桑苏二陈汤加味低剂量组无统计学意义。桑苏二陈汤加味高中低剂量组比较,低剂量组较高、中剂量ET-1、IL-1、IL-6、TNF-α、NO含量降低（P〈0.05,P〈0.01）。结论：桑苏二陈汤加味低剂量组能显著降低哮喘大鼠血清中TNF-α、ET-1、IL-1、IL-6、NO含量,有效控制气道炎症,从而改善气道重塑。     

何氏加味定喘汤对慢性支气管炎大鼠内皮素-1及肺组织形态学的影响

目的观察何氏加味定喘汤对慢性支气管炎模型大鼠血清、肺组织匀浆中ET-1及肺、支气管组织‘病理形态的影响。方法慢性支气管炎大鼠模型随机分为：模型对照组、止嗽合剂组、何氏加味定喘汤组（高、中、低剂量）。灌胃给药20d。监测大鼠血清、肺组织匀浆中ET-1含量,观察肺及支气管组织病理切片。结果模型组大鼠血清、肺组织中ET-1明显升高（P〈0．05）。何氏加味定喘汤3个剂量组及阳性对照组血清中ET-1明显降低（P〈0．05或P〈0．01）,正常对照组无明显病理形态学改变,模型组病理损害显著。结论何氏加味定喘汤可降低慢性支气管炎大鼠ET-1的含量,改善支气管、肺组织损伤程度。     

益气补肾止喘汤联合西药对小儿哮喘的疗效观察及对血清ET-1、NO、CEC水平的影响

目的:探讨益气补肾止喘汤联合西药对小儿哮喘的疗效及对血清ET-1、NO、CEC水平的影响。方法:选取2014年1月至2015年9月郑州市第一人民医院收治的小儿支气管哮喘患者158例,随机分为对照组和观察组,每组79例。对照组给予常规西药治疗,观察组在对照组的基础上联用益气补肾止喘汤,2组均连续治疗3个月。统计2组临床总有效率;比较2组治疗前后肺功能指标及血清ET-1、NO、CEC水平的变化;治疗后随访1年,比较2组哮喘发作情况。结果:观察组临床总有效率96.20%,显著高于对照组的75.95%,差异有统计学意义(P0.01);与治疗前比较,治疗后2组FVC、FEV1、FEV1/FVC、MMEF及PEF均显著增大,而血清ET-1、NO及CEC水平显著降低,且2组间上述各指标均,差异有统计学意义(P0.05或P0.01);随访显示,观察组患儿呼吸道感染次数、哮喘发作次数均较对照组患儿显著降低,哮喘发作持续时间显著缩短,差异有统计学意义(P0.01)。结论:益气补肾止喘汤联合西药治疗小儿哮喘,可显著降低ET-1、NO、CEC表达水平,减轻气道损伤,同时可改善患者肺功能并减少哮喘复发,疗效显著优于常规西药单用。     

六味地黄丸含药血清减弱高糖环境下肾系膜细胞的增殖和炎性因子表达

目的:观察六味地黄丸含药血清对高糖环境下培养的大鼠系膜细胞增殖和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响。方法:制备不同剂量大鼠六味地黄丸含药血清,并培养高糖诱导的大鼠系膜细胞。分别给予以下分组处理:空白(NG)组,高糖(HG)组,HG+对照血清组(10%对照血清),HG+低剂量组(2.5%六味地黄丸血清+7.5%对照血清),HG+中剂量组(5%六味地黄丸血清+5%对照血清),HG+高剂量组(10%六味地黄丸血清)。六味地黄丸含药血清处理24,48 h后,采用四甲基偶氮唑盐法和5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)掺入法观察系膜细胞活性和增殖的变化,使用ELISA检测细胞培养上清液中MCP-1和ICAM-1分泌量,RT-PCR法检测系膜细胞MCP-1和ICAM-1 mRNA表达。结果:与空白组比较,高糖组在培养的24,48 h内系膜细胞的增殖活性、上清液中MCP-1和ICAM-1的含量,MCP-1和ICAM-1 mRNA的表达显著上调(P0.01)。与高糖组比较,5%和10%六味地黄丸含药血清均能逆转上述变化(P0.05),且抑制作用呈一定的时间、剂量依赖关系。结论:高糖可致系膜细胞增殖活性和MCP-1和ICAM-1的表达上调,六味地黄丸可降低增殖活性,减少MCP-1和ICAM-1分泌,下调MCP-1和ICAM-1 mRNA表达,从而有利于延缓糖尿病肾病肾小球硬化的进展。     

益气化瘀补肾方血清对兔关节软骨细胞增殖与Caspase3/7酶活性的影响

目的观察益气化瘀补肾方含药血清对体外培养的兔关节软骨细胞增殖与Caspase3/7酶活性的影响。方法取兔的膝关节软骨,将软骨细胞分离传代后,取第三代细胞,用10μg/L的IL-1β诱导正常软骨细胞退变,制备益气化瘀补肾方含药血清作为干预措施。益气化瘀补肾方组分别加入IL-1β及不同溶度（5%,10%,20%）益气化瘀补肾方含药血清培养液,对照组分别加入IL-1β及不同溶度（5%,10%,20%）空白血清培养液,分别培养24h、48h后,采用MTT比色法检测软骨细胞增殖。另取对数生长期第三代软骨细胞分为4组：正常软骨细胞＋20%空白血清;正常软骨细胞＋20%益气化瘀补肾方含药血清;IL-1β诱导软骨细胞＋20%空白血清;IL-1β诱导软骨细胞＋20%益气化瘀补肾方含药血清。每组6个复孔,每孔100μl,各组分别用相应的血清培养24h、48h后进行检测,采用Caspase3/7试剂盒检测各组软骨细胞的Caspase3/7酶活性变化情况。结果不同浓度的益气化瘀补肾方血清均能拮抗IL-1β抑制软骨细胞增殖;与正常软骨细胞＋20%空白血清组比较,IL-1β诱导软骨细胞＋20%空白血清组Caspase3/7酶活性升高,差异有统计学意义（P〈0.05）;与IL-1β诱导软骨细胞＋20%空白血清组比较,IL-1β诱导软骨细胞＋20%益气化瘀补肾方血清组Caspase3/7酶活性降低,差异有统计学意义（P〈0.05）;正常软骨细胞＋20%益气化瘀补肾方血清组的Caspase3/7酶活性与正常软骨细胞＋20%空白血清组和IL-1β诱导软骨细胞＋20%益气化瘀补肾方血清组差异无统计学意义（P〉0.05）。结论益气化瘀补肾方血清能拮抗IL-1β抑制软骨细胞增殖,下调软骨细胞Caspase3/7酶活性,从而抑制软骨细胞的凋亡。     

清肺饮对呼吸道合胞病毒感染大鼠血清白细胞介素-4、干扰素-γ及肺组织的影响

目的:观察清肺饮对呼吸道合胞病毒感染大鼠血清白细胞介素-4、干扰素-γ及肺组织影响。方法:42只SD大鼠被随机分成正常对照组、病毒感染模型组、中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组、和地塞米松对照组6组,大鼠在戊巴比妥钠腹腔注射麻醉下用呼吸道合胞病毒滴鼻吸入感染的方法建造病毒感染模型。采用荧光免疫试剂检测法,检测白细胞介素-4、干扰素-γ。观察肺组织病理学变化。结果:与正常对照组相比,病毒感染模型组大鼠白细胞介素-4升高、干扰素-γ下降,均有统计学差异(P0.05,P0.05),与病毒感染模型组比较,中药高、中、低剂量组及地塞米松组白细胞介素-4含量均明显减低(均P0.01),中药中、低剂量组干扰素-γ含量升高(P0.05,P0.01),地塞米松组干扰素-γ含量升高(P0.05)。清肺饮能减轻呼吸道合胞病毒感染大鼠肺泡壁增厚程度,减少炎症细胞浸润。结论清肺饮对呼吸道合胞病毒感染大鼠的血清白细胞介素-4有抑制作用、干扰素-γ有升高作用。清肺饮能减轻呼吸道合胞病毒感染大鼠肺组织损害程度。     

冰茶栓对星形胶质细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响

目的:应用血清药理学观察冰茶栓(BCS)对体外培养星形胶质细胞(Astrocyte AST)增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法:原代培养SD乳鼠大脑皮层AST,将纯化后的细胞经免疫细胞化学鉴定后,随机分为药物组(高、中、低剂量)和对照组,加入相应血清共培养48h后,MTT比色法观察AST的增殖情况,流式细胞仪检测AST的凋亡率和细胞周期的变化。结果:MTT结果显示,冰茶栓高、中剂量组较空白血清组细胞数量明显减少(P<0.01,P<0.05),低剂量组与空白血清组比较无显著差异;流式细胞仪检测结果显示,冰茶栓组细胞凋亡比例较对照组明显增加(P<0.01);冰茶栓组G1期细胞比例较对照组明显提高(P<0.01),S期和G2/M期细胞比例较对照组明显降低(P<0.01)。结论:冰茶栓对体外培养的星形胶质细胞增殖具有明显的抑制作用,并可诱导其凋亡,抑制其由G1期向S期和G2/M期的转化。