层粘连蛋白和纤维粘连蛋白在神经管畸形发生中的作用──…

给妊娠金黄地鼠灌服过量维生素Ａ酸后，在不同时间剖腹取胎，石蜡包埋，连续切片。用免疫组织化学方法，对神经上皮及其基膜，脊索和神经管周围间充质中的基质粘着分子──纤维粘连蛋白和层粘连蛋白进行定性，定位和半定量观察，结果显示，实验组各组胚胎的纤维粘连蛋白和层粘连蛋白的免疫组织化学染色均有不同程度的减弱。说明过量维生素Ａ酸可使神经上皮及其基膜和周围间充质中的纤维粘连蛋白和层粘连蛋白降低，从而干扰了神经上皮     

MAPKs信号转导蛋白在高温致神经管畸形中的表达

目的:探讨高温致畸中MAPKs激酶中的ERK1/2通路与JNK1/2通路蛋白表达及其作用,进一步揭示高温致畸机制。方法:在高温致金黄地鼠畸形的动物模型上,应用Western blotting技术检测对照组和高温组胚胎的丝裂原活化蛋白激酶ERK1/2及JNK1/2的表达及其磷酸化水平。结果:p-ERK1/2在对照组稳定表达;高温作用后p-ERK1/2表达与对照组相比活性降低,差异明显(P0.05);p-JNK1/2在对照组不表达,在高温组各时段均出现表达,并于高温作用后16h活性达最大值,与对照组差异明显(P0.05)。结论:高温可导致胚胎MAPKs信号转导通路中p-ERK1/2活性表达降低、p-JNK1/2活性升高,引起胚胎发育过程中细胞增殖和凋亡的失衡,从而导致胚胎先天缺陷的发生,这可能是高温致畸的一条重要途径。     

凝集素受体在叶酸,维生素C拮抗环磷酰胺致神经管畸形中的作用研究

为探讨凝集素受体在叶酸，维生素Ｃ防止歪磷酰酰胺致大鼠胚胎神经管畸形中的作用。方法：实验组和对照组孕鼠均于给环磷酰胺后２４小时剖腹取胎，常规石蜡包埋切片，用刀豆凝集素，花生凝集素和荆豆凝集素为分子探针作亲合组织杂色。对两组胚胎神经管的神经上皮，界膜及神经管周围间充质相应糖基进行定性，定位和半定一的比较观察。     

层粘连蛋白和纤维粘连蛋白在神经管畸形发生中的作用──免疫组织化学研究

给妊娠金黄地鼠灌服过量维生素Ａ酸后，在不同时间剖腹取胎，石蜡包埋、连续切片。用免疫组织化学方法，对神经上皮及其基膜、脊索和神经管周围间充质中的基质粘着分子——纤维粘连蛋白和层粘连蛋白进行定性、定位和半定量观察。结果显示，实验组各组胚胎的纤维粘连蛋白和层粘连蛋白的免疫组织化学染色均有不同程度的减弱。说明过量维生素Ａ酸可使神经上皮及其基膜和周围间充质中的纤维粘连蛋白和层粘连蛋白降低，从而干扰了神经上皮细胞的正常增殖、迁移、生理性死亡和细胞粘着过程。这是维生素Ａ引起神经管畸形的一个重要途径。     

多种维生素及微量元素对高温致神经管畸形的保护作用及其对纤维粘连蛋白和层粘连蛋白mRNA表达的影响

目的:探讨高温致神经管畸形(NTD)的因素及多种维生素和微量元素对NTD的保护作用。方法:实验孕鼠随机分为A组(孕前第8天开始灌服多种维生素及微量元素)、B组(孕后第1天开始灌服)和C组(不灌服)孕鼠高温处理。对各组胎鼠进行形态学观察,记录NTD发生率;用原位杂交技术检测纤维粘连蛋白(FN)和层粘连蛋白(LN)在神经上皮细胞及其周围间充质中的转录状况。结果:(1)各组鼠胚均出现不同类型的NTD,C组NTD发生率最高,为77.5%。(2)各组鼠胚神经上皮细胞及其周围间充质中见FN和LN mRNA阳性转录信号,C组明显弱于其他组。结论:FN和LN转录降低是NTD发生的重要因素之一,多种维生素及微量元素对高温致NTD有一定的保护作用。     

高温致神经管缺陷过程中凝集素受体变化的实验动物研究

妊娠金黄地鼠随机分为实验组和对照组,前者于受精后第８天置４２℃水浴中持续２０ｍｉｎ,后者置３７℃水浴中持续２０ｍｉｎ。分别于高温后８、１２、２４、４８ｈ剖腹取胎,石蜡包埋,连续切片。应用生物素标记的花生凝集素、刀豆凝集素、麦胚凝集和荆豆凝集素为分子探针作亲合细胞化学染色,对各期鼠胚神经上皮及其基膜、脊索和神经管周围间充质中相应受体糖基进行定性、定位和半定量观察。结果显示,正常胚胎神经上皮及其周围组     

aFGF在高温致神经管畸形中作用的免疫组织化学研究

在已建立的高温致神经管畸形的动物模型上，用免疫组织化学方法，对高温处理后的孕鼠之不同发育阶段的胚胎进行酸性成纤维细胞生长因子免疫组织化学染以，观察其在各期胚胎的神经上皮及春周围间充质，内界膜和脊索中的分布和变化。     

HMGB1在高温致金黄地鼠神经管畸形神经上皮细胞中的表达变化

为了探讨高温致神经管畸形(NTDs)作用的分子机制,为预防人类NTDs的发生提供理论依据,本研究在高温致金黄地鼠NTDs模型的基础上,研究HMGB1在高温致金黄地鼠NTDs神经上皮细胞中的表达变化。将孕鼠随机分为实验组和对照组,分别于水浴处理后8、16、24、40、64 h(相当于胚龄第8、8.5、9、9.5、10.5 d)处死孕鼠,剖腹取鼠胚,制备石蜡切片,应用免疫荧光染色技术检测NTDs发生过程中HMGB1在神经上皮细胞中的表达变化。结果显示:对照组和模型组孕鼠在水浴处理后8、16、24h,HMGB1免疫阳性产物分布于鼠胚神经上皮细胞和周围间充质细胞的胞浆中;水浴后40、64 h,HMGB1表达部位出现了由胞浆向胞核的转移;高温处理后,HMGB1在实验组各期胚胎神经上皮细胞内的表达均比对照组减弱。上述结果提示,HMGB1的表达变化与神经管发育密切相关,其表达降低是高温致神经管畸形发生的重要途径之一。     

PCP通路在神经管畸形发生中的作用和研究进展

神经管畸形（neural tube defects,NTDs）是由神经管闭合缺陷形成的一种严重的先天畸形,其病因包括环境因素和遗传因素。动物模型中的研究显示汇聚延伸（convergent extension,CE）在神经管形成过程中起到重要作用,而PCP途径（planar cell polarity pathway,PCP）对汇聚延伸这一形态学事件的发生起必要的作用。     

Nestin在高温致畸神经管的表达及多种维生素和微量元素对神经管畸形的保护作用

本研究旨在探讨高温致神经管畸形(NTD)中巢蛋白(nestin)的表达规律及多种维生素和微量元素对NTD的保护作用。孕鼠随机分为实验组和对照组。实验组又进一步分为3组,A组:孕前第8d开始灌服多种维生素和微量元素;B组:孕后第1d开始灌服;C组:不灌服。孕鼠分别于孕第8d高温处理,对照组不灌服多种维生素和微量元素,也不进行高温处理。对以上各组胎鼠进行形态学观察,计算神经管畸形发生率;利用免疫荧光染色观察nestin在胚胎不同发育时期的神经上皮细胞中的表达规律。结果显示,在实验组中,C组神经管畸形发生率最高,为77.5%;各组鼠胚神经上皮细胞胞质中nestin呈阳性染色,实验C组的染色明显弱于其它组;不同发育阶段各组染色强度不同。结果提示,nestin低表达是神经管畸形发生的重要因素,多种维生素和微量元素对高温致神经管畸形有保护作用。     

层粘连蛋白和纤维粘连蛋白在过量维生素A酸致心脏畸形中的作用： …

维生素Ａ酸是常见的一类化学致畸因子，可引起各种心脏畸形，如主动脉骑跨，室间隔缺损等，实验采用免疫组织化学方法观察层粘连蛋白和纤维连蛋白在心脏正常和异常发育过程 的分布和变化规律，以探讨过量维生素Ａ酸致心脏畸形发生的机理。结果显示：心内膜垫形成之前，心内膜细胞基底面呈层粘连蛋白和纤维粘连蛋白阳性，当内膜细胞转化为内膜垫细胞时，其基底面的粘连蛋白和纤维粘连蛋白消失，心胶质和心肌膜中层粘连蛋白，纤维粘连     

高温致金黄地鼠神经管畸形中细胞凋亡的组织学观察

为研究细胞凋亡与高温致神经管畸形的关系，采用核固红－结晶紫染色方法和电镜技术，观察高温后胚胎发育变化。结果显示，高温后８ｈ胚胎发育迟滞，神经管延迟闭合或不闭合，胚胎各段尤期是头部的神经上皮和周围间充质的细胞凋亡比对照组增多，其超微结构改变为染色质浓缩，边聚，核膜皱缩，微绒毛消失并出现异常的包质突起；１６ｈ后细胞凋亡明显增多，胞质内出现了大量空泡，凋亡小体增多；     

神经细胞黏附分子1和骨调蛋白在神经管畸形中的变化

目的初步探究神经细胞黏附分子1和骨调蛋白在神经管畸形中的变化。方法20只健康成年SD孕大鼠随机分为正常对照组和神经管畸形实验组,每组10只。通过胃饲维甲酸建立胚胎大鼠神经管畸形模型,检查了神经管畸形鼠体重的变化;用HE染色观察神经管畸形鼠神经管结构的变化;通过Western blot分析神经管畸形鼠组织中神经细胞黏附分子1和骨调蛋白的变化。结果神经管畸形鼠形态偏小,体质量为(0.34±0.45)g,明显低于正常对照组(0.53±056)g。胚胎鼠在第9天神经管处于未闭合状态,在第11天已完全闭合。胚胎第9天和11天神经管畸形大鼠的神经细胞黏附分子1比正常组表达均明显增加(P0.01)。骨调蛋白在胚胎第9 d神经管畸形大鼠中的表达比正常明显增高(P0.01),但在胚胎第11天的表达与正常相比没有差异(P0.05)。结论神经细胞黏附分子1和骨调蛋白的变化可能与神经管畸形形成有密切关系。     

高温致金黄地鼠神经管畸形的上调表达基因筛选及其鉴定

目的:筛选高温致金黄地鼠神经管畸形的上调表达基因,探讨其分子生物学机制。方法:通过抑制性消减杂交技术获得消减产物,转化大肠杆菌DH5α,构建高温致金黄地鼠胚胎神经管畸形的消减cDNA文库;联合蓝白斑和菌落PCR方法筛选含插入片段的阳性克隆,进行测序和同源性分析,并经Northern杂交技术检测基因的表达。结果:成功构建高温致金黄地鼠胚胎神经管畸形的消减cDNA文库,其中2个克隆插入片段的基因序列与小鼠磷酸甘油酸酯激酶(Pgk-1)同源。Northern杂交证实该基因在高温致畸胚胎神经管的表达较其在同龄正常胚胎神经管明显升高。结论:Pgk-1的上调表达可能与高温致神经管畸形密切相关。     

高温致神经管畸形动物模型的建立及其形态发生的研究

将妊娠第８ｄ的金黄地鼠腹部置４２℃水浴２０ｍｉｎ，建立了一个致畸率高、致死率低、效果稳定、操作简便的高温致畸动物模型，并在此模型上，探讨了高温致ＮＴＤ的形态发生机理。结果表明：高温有明显的胚胎毒和致畸作用，且与高温值和持续时间明显相关。     

层粘连蛋白和纤维粘连蛋白在过量维生素A酸致心脏畸形中的作用:免疫组织化学研究

维生素A酸是常见的一类化学致畸因子,可引起各种心脏畸形,如主动脉骑跨、室间隔缺损等.实验采用免疫组织化学方法观察层粘连蛋白和纤维粘连蛋白在心脏正常和异常发育过程中的分布和变化规律,以探讨过量维生素A酸致心脏畸形发生的机理.结果显示:心内膜垫形成之前,心内膜细胞基底面呈层粘连蛋白和纤维粘连蛋白阳性;当内膜细胞转化为内膜垫细胞时,其基底面的层粘连蛋白和纤维粘连蛋白消失,心胶质和心肌膜中层粘连蛋白、纤维粘连蛋白免疫组化染色明显增强;心内膜垫形成并融合后,其染色又明显减弱.给孕鼠灌服过量的维生素A酸18小时后,各时间组胚胎心脏的心内膜、心胶质、心肌膜的层粘连蛋白和纤维粘连蛋白均出现了不同程度的减弱.这说明层粘连蛋白和纤维粘连蛋白是内膜垫细胞粘着和迁移的主要介导物质,维生素A酸抑制其两者的合成是引起心脏畸形的一个重要途径.     

波形蛋白与层粘连蛋白在人胚早期神经管中的表达

目的观察层粘连蛋白（LN）和波形蛋白（Vim）在人胚早期神经管发育中的表达变化,探讨人胚神经管发育早期细胞微环境的特点。方法收集早期人胚23天和45天标本8例,分别用LN和Vim抗体对人胚标本的组织切片行免疫组织化学ABC法染色。图像分析不同观测指标阳性细胞的积分光密度值,结果用t检验进行统计分析。结果人胚发育早期,LN和Vim在神经管的神经上皮层、中间层和边缘层的神经细胞胞中表达。在神经管发育到23天时,LN的积分光密度值（1258．17±635）比Vim的积分光密度值（2611．34±502）低（P〈0．05）。结论在人胚早期,神经管的细胞基质成分以Vim为主,LN为辅,可能对神经干细胞的发育有重要作用。     

碱性成纤维细胞生长因子及其受体在神经管畸形发生中作用的研究

用免疫组织化学方法研究了碱性成纤维细胞生长因子及其受体在正常受体在正常金黄地鼠和过量维生素Ａ酸致大鼠胚胎神经管及其周围间充质中,实验组在服药２２小时后,上述各部位碱性成纤维细胞生长因子及其受体含量均明显减少。说明碱性成纤维细胞生长因子及其受体的含量均明显减少。说明碱性成纤维细胞生长因子及其受体与神经管正常发生密切相关：其含量的减少可能是过量维生素Ａ酸致神经管有机制之一。