c-myc反义核苷酸在治疗血液系统恶性肿瘤中的应用进展

反义核苷酸用于治疗恶性肿瘤是近十年来基因治疗的热点 ,反义核苷酸应用的基础在于反义核苷酸已从原来天然的形态经人工修饰加工 ,成为有实用价值的寡聚核苷酸 ,其中硫代磷酸寡核苷酸 (PS- ODN)和甲基磷酸酯寡聚核苷酸 (MP- ODN)是两种研究最多 ,并已开始用于临床的 ODN。成为治疗血液系统恶性肿瘤方面颇有应用前景的手段。现就 c- myc反义核苷酸在血液系统恶性肿瘤方面的应用作一综述。1　 c- myc原癌基因与急性白血病、恶性淋巴瘤等的关系已知在造血系统恶性肿瘤中 ,c-myc常异常激活 ,75 % Burkitt型淋巴瘤伴有 t(8;14) (q2 4;q32 )…     

反义核苷酸抑制端粒酶活性与肿瘤的治疗

反义技术是根据碱基互补原则 ,用人工合成或生物体自身表达的特定序列的短片段核苷酸与靶基因或其ｍＲＮＡ配对结合 ,阻断靶基因表达的技术。自 1978年 ,Ｚａｍｅｃｎｉｃｋ等首次用反义技术抑制病毒基因表达获得成功后 ,其应用前景就日益广阔。现主要用于分子生物学基础研究 ,肿瘤、遗传病、病毒感染的基因治疗 ,动、植物品种的改良等。1　反义技术的基本作用机制[1]1 1　阻碍转录过程1 1 1　反义寡核苷酸渗入基因组特异区域 ,形成三股螺旋ＤＮＡ或环状ＤＮＡ。1 1 2　反义寡核苷酸对转录因子的圈套作用。1 2　阻碍翻译过程　反义寡核苷酸…     

端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对人胃癌细胞株的影响

目的观察端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对人胃癌细胞株的作用。方法用端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸与人胃癌细胞株共同温育一定时间后,观察细胞形态变化,检测细胞DNA含量的分布,测定端粒酶活性。结果端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能诱导人胃癌细胞凋亡,抑制端粒酶活性,在形态学上表现为细胞膜起泡、染色质固缩、核碎裂、凋亡小体形成;电泳呈凋亡特征性Ladder带;流式细胞仪分析显示,在G1期前出现亚二倍体凋亡峰,端粒酶活性抑制。结论端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能抑制端粒酶活性,诱导胃癌细胞凋亡,从而抑制胃癌细胞的增殖。     

反义寡聚核苷酸及其在医药领域的进展

本文概要介绍了反义技术的基本概念和原理,较全面地阐述了反义寡聚核苷酸的种类,作为药物的优点、作用机制,以及药理学研究和药用开发现状。     

ERK反义核苷酸在癌痛中的作用及机制研究

目的：研究ERk反义核苷酸在癌痛中的作用及机制探讨。方法：随机选择年龄、体重、身体状态等无明显差异的大鼠90只,并随机均分为假手术组、正常对照组、癌痛组各30例,根据试验前注射ERK反义核苷酸将癌痛组大鼠均分为癌痛对照组和ERK组。人工合成ERK反义寡核苷酸（ ASODNs）,建立癌痛动物模型,对比分析ASODNs干预癌痛动物模型及指标变化情况。结果：假手术对大鼠的脊髓背角内pERK阳性神经元数量和行为学指标影响较小,与正常对照组相比差异不明显,无统计学意义,P＞0．05。假手术组与癌痛对照组相比,行为学指标及pERK阳性神经元数量明显增加,差异具有统计学意义,P＜0．05。癌痛对照组与ERK组大鼠相比,提前注射ASODNs可明显降低行为学指标及pERK阳性神经元数量,差异具有统计学意义,P＜0．05。结论：分析可知,ASODNs可明显降低癌症导致的疼痛,应继续二期临床研究,查看研究结果,分析作用机制,在允许情况下应用于临床。     

反义技术在造血系统疾病研究中的应用

<正> 反义技术是根据碱基互补的原理,用人工合成或生物体生成的与目标靶的DNA或RNA序列特定互补的短核苷酸片段,抑制或封闭基因表达的技术方法。反义技术能够较好地抑制和封闭目的基因的表达,干扰复制、转录和翻译,为肿瘤的基因治疗和基因功能的研究提供了强有力的工具。1978年,Zamecnik和Stephenson首次发现反义RNA能抑制Rous肉瘤病毒在培养细胞中的增殖,展示了反义核酸作为基因水平治疗药物的潜力。1990年美国的基因工程新闻将反义技术列为9O年代十大热点生物技术之一。反义技术在临床应用方面取得了重大进展,目前已有4种反义     

反义技术在端粒酶研究中的应用

人类端粒是位于染色体末端的重复ＤＮＡ序列 (ＴＴＡＧＧＧ) ,具有维持染色体稳定的重要作用 ,端粒长短变化和稳定与细胞的衰老和癌变密切相关。端粒酶 (ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅ)是一种特殊的核糖核蛋白聚合酶 ,它能以自身的ＲＮＡ作为模板合成端粒弥补端粒丢失 ,对维持端粒长度 ,使细胞获得永生化起重要作用。根据目前已检测的癌组织标本的统计结果分析 ,恶性肿瘤组织端粒酶检出率高达 84%～ 95 % ,而良性肿瘤及正常组织的端粒酶检出率仅 4%左右 ,端粒酶与肿瘤之间的高度相关性使之成为目前肿瘤治疗研究的新热点 ,有着广阔的发展前景 (肿瘤的…     

原位杂交技术检测增殖细胞核抗原反义寡脱氧核苷酸对BIU—87细胞体外增殖的影响

运用原位杂交技术检测脂质体介导增殖细胞核抗原（PCNA）反义寡脱氧苷酸抑制人膀胱癌细胞BIU－87 PCNA mRNA的表达水平。结果表明脂质体介导PCNA反义寡脱氧核苷酸处理组中BIU－87细胞PCNA mRNA的表达水平明显低于对照组。结果提示脂质体介导PCNA反义寡脱氧核苷酸可抑制人膀胱癌细胞BIU－87体外增殖活性,其抑制作用可通过阻断PCNA蛋白表达来实现。     

端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对MGC-803胃癌细胞的影响

目的探讨端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸(antisense oligodeoxy nucleotides,ASODN)对MGC-803胃癌细胞端粒酶活性及细胞生长的影响。方法将实验分为正常对照组、端粒酶正义寡聚脱氧核苷酸(sense oligodeoxy nucleotides,SODN)组和不同剂量的ASODN组;脂质体介导的ASODN和SODN作用于MGC-803细胞后,分别采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)、酶联免疫吸附法(ELISA)、吖啶橙染色法、流式细胞术检测细胞的体外增殖、端粒酶活性、细胞形态、细胞凋亡和细胞周期的改变。结果转染48h后,终浓度为1、3及5μmol/L的ASODN对MGC-803细胞端粒酶活性及细胞的增殖均有抑制作用,与正常对照组比较差异显著(P<0.01),并呈一定剂量依赖性;流式细胞仪检测到凋亡峰,细胞被阻滞在G1/S期;吖啶橙染色后光镜下观察发现有典型的凋亡小体。结论以端粒酶RNA模板区为靶点的ASODN明显抑制MGC-803胃癌细胞的增殖,其机制可能是通过降低细胞的端粒酶活性而诱发细胞的凋亡,ASODN对胃癌的治疗具有重要价值。     

原位杂交技术检测增殖细胞核抗原反义寡脱氧核苷酸对BIU-87细胞体外增殖的影响

运用原位杂交技术检测脂质体介导增殖细胞核抗原(PCNA)反义寡脱氧核苷酸抑制人膀胱癌细胞BIU-87PCNA mRNA的表达水平.结果表明脂质体介导PCNA反义寡脱氧核苷酸处理组中BIU-87细胞PCNA mRNA的表达水平明显低于对照组.结果提示脂质体介导PCNA反义寡脱氧核苷酸可抑制人膀胱癌细胞BIU-87体外增殖活性,其抑制作用可通过阻断PCNA蛋白表达来实现.     

反义DNA技术研究进展及其在动物学研究中的应用

随着人类基因组计划的迅速推进．越来越多的基因被测序,对新基因功能的确定变得更为迫切：反义DNA技术由于它在多种生物体中的高效性、抑制基因表达的可逆性、相对的低成本和在疾病治疗上的潜力．在基因功能的研究中已受到了广泛的关注。在这篇章里,作总结了反义DNA技术的进展及其在动物学研究中的府用。     

超顺磁性氧化铁标记反义寡脱氧核苷酸探针在转染细胞磁共振成像中的应用

目的制备超顺磁性氧化铁(SPIO)标记的反义寡脱氧核苷酸(ASODN)探针,探讨其应用于转染细胞磁共振(MR)成像的可行性。方法采用化学交联法将SPIO标记于c-erbB2癌基因的ASODN制成ASODN探针,原子力显微镜检测探针形态,高效液相凝胶色谱法检测联接率和生物活性,聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测稳定性。将ASODN探针转染高表达c-erbB2癌基因的SK-Br3肿瘤细胞株,普鲁士蓝染色后于光学显微镜下观察细胞内铁分布,原子吸收光谱法测定细胞内铁含量,MR扫描观察细胞信号强度变化情况。结果制备的ASODN探针近似球形,粒径在25～40nm间,分散均匀,联接率为100%,仍保持原有生物活性,稳定性好。转染ASODN探针后的SK-Br3细胞胞浆内可见多少不等的蓝色铁颗粒,细胞内铁含量明显高于未转染ASODN探针的其他各组细胞(P均<0.01);MR扫描显示其信号强度最弱,信噪比值明显低于其他各组细胞(P均<0.05)。结论成功制备SPIO标记ASODN探针,该探针能有效进入SK-Br3细胞内,明显降低MR扫描下的转染细胞信号强度。     

反义核酸药物的研究和应用

介绍了反义核酸药物的概念、作用机制特点、治疗肿瘤遗传缺陷和抗病毒方法的临床应用及使用中存在的问题。     

端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对HL-60细胞生长的作用

目的：观察端粒酶反义寡聚脱氧核着酸对急性髓细胞白血病细胞株HL-60的作用、方法：采用台盼蓝排斥法进行药物敏感试验,流式细胞仪测定凋亡细胞含量结果：端粒酶反义寡聚脱氧核着酸对HL-60细胞有生长抑制作用,作用具有序列特异性及剂量依赖性．流式细胞仪检测到凋亡峰,含量为28．8％．无关寡聚核着酸片段无此作用．结论：端粒酶对维持白血病细胞的生长可能起十分重要的作用,它有可能成为白血病治疗的新靶点．     

反义核酸在肿瘤研究中的应用

利用反义核酸对肿瘤进行反义基因治疗是九十年代兴起的一项治疗肿瘤的新技术。反义核酸可用来调控肿瘤细胞某些异常基因的表达 ,阻断细胞内异常信号的传导 ,使瘤细胞进入正常分化轨道或引起瘤细胞凋亡。随着各国学者的深入研究 ,反义核酸技术已日趋成熟 ,目前已在不同水平 (细胞、动物和临床前期 )上对多种肿瘤使用了这项技术 ,并取得了可喜的成果。但是同时也存在着许多问题有待解决。1　反义核酸的种类及作用机制　　用于基因治疗的反义核酸大致分为三类 :一类是将特异的反义基因连到特定的表达载体上 (质粒、病毒 ) ,导入靶细胞直接转录…     

反义寡聚核苷酸治疗支气管哮喘的实验研究

目的探讨反义寡聚核苷酸治疗支气管哮喘的可能性及效果。方法根据小鼠IL-5cDNA序列设计合成反义寡聚核苷酸片段,用T4噬菌体多核苷酸激酶标记反义寡聚核苷酸的5′端,观察硬脂胺(SA)脂质体对反义寡聚核苷酸的转染效率的影响。用卵蛋白和氢氧化铝复制哮喘模型。用聚酰纤维分离小鼠脾T淋巴细胞进行体外培养并导入由阳离子脂质体携带的不同浓度的反义寡聚核苷酸,观察其对T淋巴细胞合成IL-5的影响。采用酶联免疫吸附(ELISA)法测定细胞培养上清液中IL-5浓度。结果SA脂质体能显著提高反义寡聚核苷酸的转染效率,1∶15m/m(反义寡聚核苷酸和SA脂质体质量比)时转染效率最佳,提高反义寡聚核苷酸转染效率12倍。未经卵蛋白刺激的正常鼠和哮喘鼠T淋巴细胞培养上清液中未测到IL-5,经卵蛋白刺激后,T淋巴细胞培养上清液中IL-5含量明显增高。导入不同浓度的反义寡聚核苷酸(10、20及30μmol/L)后,脾T淋巴细胞合成IL-5明显降低,细胞培养上清液中IL-5含量由(44.60±6.23)pg/ml分别降低到(30.70±7.362)、(17.20±6.181)和(8.16±2.34)pg/ml,抑制IL-5合成百分率分别为31.17%、61.43%和81.7%。结论反义寡聚核苷酸可明显抑制IL-5的合成,且呈明显的量效关系。支持其通过抑制致敏小鼠T淋巴细胞IL-5的转录而抑制其合成,为反义基因治疗哮喘提供了依据     

c-myc反义寡核苷酸对胃癌MKN-45细胞株增殖的影响

目的 观察c—myc反义寡核苷酸对胃癌MKN-45细胞株增殖的抑制作用。方法 用四甲基偶氮唑盐法评价脂质体介导c-myc反义寡核苷酸对细胞增殖的影响,免疫细胞化学ABC方法检测转染后c—myc蛋白表达;荧光显微镜观察细胞凋亡;流式细胞仪分析细胞凋亡。结果 c-myc基因反义寡核苷酸转染MKN-45细胞后,可以显著抑制细胞增殖,其抑制作用具有剂量依赖性;流式细胞仪分析结果显示,转染后能诱导胃癌细胞凋亡,Go／G1期细胞增多;免疫细胞化学显示c—myc蛋白水平明显降低,阳性表达率为64．9％±5.68％。结论 c-myc基因反义寡核苷酸能明显抑制胃癌MKN-45细胞增殖、诱导细胞凋亡和下调c-myc蛋白水平。     

反义核酸技术在肿瘤基因治疗中的研究

反义核酸技术，己在越来越广泛的领域得到应用。近年来，其在肿痛、病毒感染、血管性疾病和遗传性疾病等方面的治疗取得一些实验结果，为恶性肿瘤和其他疾病的治疗提供了新的途径。本文针对反义核酸技术的作用机制、肿瘤基因治疗的实验研究及应用前景进行了较为详尽的阐述。相信随着对基因功能研究的广泛开展和基因治疗研究的深入，反义核酸技术必将成为一种有力的工具，为恶性肿瘤的治疗做出巨大贡献。