系统性红斑狼疮患者外周血CD4~+和CD8~+细胞端粒长度及端粒酶活性的研究

目的:探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血CD 4+、CD 8+和CD 19+细胞端粒长度和端粒酶活性变化及其在发病中的作用。方法:用免疫磁珠法,从外周血单个核细胞分离CD 4+、CD 8+和CD 19+淋巴细胞,提取细胞蛋白后,用PCR为基础的端粒酶测定法(T e lom eric repeats am p lification protoco l,TRAP)测定端粒酶活性;Sou thernB lot测定细胞端粒长度。结果:SLE患者CD 4+、CD 8+和CD 19+细胞端粒酶活性均高于正常对照,但只有CD 19+细胞端粒酶活性与正常对照相比差异有显著性(P<0.05)。SLE患者CD 4+和CD 8+淋巴细胞的端粒长度均较正常对照明显缩短,CD 19+淋巴细胞的端粒长度无明显缩短。结论:SLE患者CD 19+细胞端粒酶活性显著增高,维持了细胞端粒长度;而CD 4+和CD 8+细胞端粒酶活性可能不足以维持由于细胞分裂所导致的细胞端粒缩短。     

SLE患者CD4~+和CD8~+T淋巴细胞CD70的表达

目的了解SLE患者T淋巴细胞CD70 mRNA及其蛋白的表达情况,探讨CD70在SLE发病机理中的作用。方法用定量RT-PCR方法测定15例活动期、15例非活动期SLE患者和l5例正常人对照组外周血CD4+CD8+T淋巴细胞CD70 mRNA转录水平。用流式细胞仪检测各组的CD4+CD70+T/CD8+CD70+T淋巴细胞阳性率。结果活动期、非活动期SLE患者CD4+T淋巴细胞CD70 mRNA转录水平高于正常对照组,且活动期SLE患者CD4+T淋巴细胞的CD70mRNA转录水平高于非活动期SLE患者(P0.05)。活动期、非活动期SLE患者CD8+T淋巴细胞CD70 mRNA转录水平与正常对照组比较差异无统计学意义(P0.05)。活动期、非活动期SLE患者外周血CD4+CD70+T淋巴细胞阳性率高于正常对照组,且活动期SLE患者CD4+CD70+T淋巴细胞阳性率明显高于非活动期SLE患者(P0.05)。活动期、非活动期SLE患者CD8+CD70+T淋巴细胞阳性率与正常对照组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论 CD4+T淋巴细胞CD70的过度表达在SLE的发生发展中可能起作用,并且CD70过度表达可以作为SLE疾病活动的一个指标。     

腺性膀胱炎患者周围血淋巴细胞端粒长度的测定及意义

目的探讨腺性膀胱炎的发生原因.方法采用流式细胞术原位杂交法(Flow Fish)检测23例腺性膀胱炎患者(实验组)外周血淋巴细胞端粒长度.采用相同性别、年龄的配对健康人作为对照组,培养细胞作为内对照.结果实验组和对照组外周血淋巴细胞端粒长度(Q-FISH值):实验组为0.09±0.02,对照组为0.07±0.02;两者相比有非常显著性差异(P<0.01).结论腺性膀胱炎患者外周血淋巴细胞端粒长度明显大于对照组,由此推断腺性膀胱炎患者存在端粒酶活性增强的可能性.     

CD19和CD27标记系统性红斑狼疮患者外周血B细胞的亚群分析

目的研究系统性红斑狼疮（SLE）外周血中B淋巴细胞亚群的分化状态及其与体液免疫的关系。方法选择SLE患者32例,SLEDAl分为≥10分组和〈10分组;健康献血者14例作为对照。采用流式细胞仪检测研究对象外周血中CD19^＋CD27^-、CD19^＋CD27^＋和CD19^＋CD27^＋＋细胞,并分析各亚群比例、CD19平均荧光强度的差异和体液免疫的关系。结果两组SLE患者与正常对照相比,CD19平均荧光强度明显降低。SLEDAI≥10分组的CD19^＋CD27^＋＋细胞比率较正常对照明显升高。SLEDAI〈10分组的CD19^＋CD27^-细胞较正常对照明显升高,CD19^＋CD27^＋细胞明显降低。IgG与浆母细胞比率呈正相关。CD19^＋CD27^＋＋细胞比率在抗dsDNA抗体阳性组较阴性组明显升高。结论SLE患者外周血CD19^＋CD27^＋及CD19^＋CD27^＋＋亚群存在异常,可能与SLE患者体内的体液免疫异常有关,并在其中发挥重要作用。     

系统性红斑狼疮患者外周血CD4+CD25+T细胞亚群的初步研究

目的研究系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血中CD4+CD25+T细胞亚群的比率改变.方法采用微量全血三色标记法,以流式细胞技术检测SLE患者外周血CD4+、CD4+CD25+、CD4+CD25+CD45RO+T细胞亚群,分析阳性细胞百分率和平均荧光强度(Mean fluorescence intensity,MFI).结果SLE患者外周血中CD4+T细胞百分率,活动期(29.29%±8.86)%和非活动期(29.55±8.96)%均低于正常对照(37.41±3.29)%(P均＜0.05);CD4+CD25+T细胞百分率SLE活动期(10.30±5.60)%显著高于正常对照(5.39±1.43)%(P＜0.05),非活动性SLE病人组(5.63±2.49)%和正常组差异无显著性(P＞0.05);CD4+CD25+CD45RO+T细胞百分率SLE活动期(3.96±3.51)%显著高于正常对照(1.39±0.63)%,非活动期(0.75±0.66)%显著低于正常对照(P均＜0.05).平均荧光强度分析表明SLE患者组和正常组的CD25和CD45RO抗原密度差异并无显著性(P均＞0.05).结论SLE患者外周血中存在CD4+CD25+及CD4+CD25+CD45RO+T细胞亚群比率异常增高,且与病情活动性相关.     

蕈样肉芽肿患者HLA-DR、LFA-1、ICAM-1、CD4和CD8抗原的表达

目的:探讨蕈样肉芽肿(MF)患者外周血淋巴细胞和皮损中人白细胞DR抗原(HLA-DR)、淋巴细胞功能相关抗原1(LFA-1)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)、分化群抗原4、8(CD4、CD8)抗原表达及其意义。方法:应用流式细胞仪和免疫组化技术检测15例MF患者的外周血和皮损HLA-DR、LFA-1、ICAM-1、CD4、CD8抗原的表达并与正常人相比较。结果:MF患者外周血HLA-DR 、LFA-1 及ICAM-1 淋巴细胞比正常对照增高(P均<0.01);MF患者外周血CD4 淋巴细胞较正常对照下降(P<0.001);MF患者皮损中HLA-DR 细胞、CD4 细胞、CD8 细胞及LFA-1 、ICAM-1 细胞的表达均比正常对照增高。结论:MF患者外周血淋巴细胞和皮损HLA-DR和LFA-1、ICAM-1、CD4、CD8抗原表达普遍存在异常,与MF的发病密切相关。     

流式-原位杂交方法在中国骨髓衰竭综合征患者端粒长度检测中的应用

目的 评估流式-原位杂交(Flow-FISH)方法在中国骨髓衰竭综合征(BMF)患者端粒长度检测中的应用价值.方法 采用Flow-FISH方法检测8例中国BMF患者外周血单个核细胞端粒长度和其中3例再生障碍性贫血(AA)患者的粒细胞端粒长度,并分别与相应年龄、性别的正常对照值进行比较.采用Southern blot方法检测3例患者外周血有核细胞端粒长度,并与其Flow-FISH检测结果进行比较.结果 8例患者中,有5例患者的外周血单个核细胞端粒长度较正常人缩短;其中3例AA患者外周血单个核细胞和粒细胞端粒长度较正常人的缩短程度均不一致.3例同时行Flow-FISH和Southern blot检测的患者中有2例检测结果一致.结论 Flow-FISH方法可用于中国BMF患者端粒长度的检测.     

rhG-CSF动员对外周血淋巴细胞亚群和CD34+细胞的影响

目的:动态观察自体外周血造血干细胞移植患者经rhG-CSF动员过程中外周血及外周血造血干细胞(PBPC)中淋巴细胞亚群和CD34 细胞的变化,指导临床选择最佳采集时机。方法:对大剂量化疗(HDC)联合重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)动员的38例白血病和淋巴瘤患者,采用流式细胞术(FACS)测定其动员前后外周血及PBPC中的淋巴细胞亚群CD3、CD4、CD8、NK、CD19和造血干细胞CD34细胞含量的变化,同时用甲基纤维素半固体培养基进行CFU-GM培养来评价干细胞克隆生成能力。结果:动员后外周血淋巴细胞亚群CD3、CD4细胞含量均低于动员前(P<0.01),而动员后外周血中的CD34细胞含量明显高于动员前(P(0.05)。动员后第5天CD34含量达到最高峰。PBPC中CD4、CD4/CD8明显低于外周血(P<0.005),其他淋巴细胞亚群含量与外周血比较无明显变化。动员后外周血中CD34 细胞明显高于动员后,动员后PBPC中CFU-GM生成明显高于外周血(P<0.05),CD4/CD8比值严重倒置,B细胞恢复较快。结论:大剂量化疗联合rhG-CSF动员会使外周血淋巴细胞亚群发生不同程度的变化并明显增加外周血造血干细胞含量。     

骨髓增生异常综合征及进展期端粒和端粒酶变化

目的　探查端粒 (telomere)和端粒酶 (telomerase)在骨髓增生异常综合征 (MDS)患者的MDS期和转化为急性髓性白血病 (AML)期的变化和意义。方法　 8例患者 ,18个不同病期的标本 (外周血 11例 ,骨髓 7例 )被获得。Southern杂交放射性同位素探查端粒长度 ;末端重复放大程序(telomeicrepeatamplificationprotocol,TRAP)和定量PCR测定端粒酶。结果　MDS患者的端粒长度 (6 5 8kb± 2 81kb)较年龄匹配的正常人端粒长度 (9 73kb± 0 79kb)明显缩短 (P <0 0 5 )。与正常对照比较 ,8例患者中仅 1例端粒未缩短 ;其余 7例均缩短 ,其中 2例在MDS期尚正常 ,AML期时明显变短 ;另 5例患者在MDS期和AML期端粒均缩短。全部患者均可测得端粒酶 ,AML期的端粒酶活性(36 91± 2 0 5 2 )较MDS期的端粒酶活性 (2 0 49± 11 0 1)明显增加 (P <0 0 5 )。结论　MDS患者的端粒缩短和端粒酶活性增强的现象可能与病情进展有关 ,提示预后不良     

乳腺癌患者外周血CD4+CD25+与CD8+CD1 22+调节性T细胞水平变化及临床意义

目的 探讨乳腺癌患者外周血中CD4+ CD25+ 与CD8+ CD122+ 调节性T细胞(Tregs)的分布情况及临床意义.方法 采用流式细胞仪测定65例乳腺癌患者外周血中的CD4+ CD25+ 与CD8+ CD122+ 调节性T细胞水平,结果与18例正常健康人(正常对照组)对比.结果 乳腺癌患者外周血中的CD4+CD25+与CD8+CD122+调节性T细胞均显著高于对照组(P<0.01);且与乳腺癌的分期呈正相关.结论 乳腺癌患者外周血中具有免疫负调控功能的CD4+ CD25+ 与CD8+ CD122+ 调节性T细胞水平较高,可能与乳腺癌的病情及预后相关.     

CD4+ CD25+ CD127low/-T细胞在系统性红斑狼疮活动期患者中的表达

目的 检测调节性T细胞(Treg)的新旧标志,进一步探讨Treg细胞在系统性红斑狼疮(SLE)发病中的作用.方法 采用三色直接荧光素标记法和多参数流式细胞术检测29例SLE患者及24例正常对照组外周血CD4+ CD25+ CD127low/-T细胞、CD4+ CD25highT细胞及CD4+ CD25+FOXP3+T细胞的比例,同时检测外周血抗dsDNA等抗体及免疫球蛋白、补体等水平并进行相关分析.结果 SLE患者外周血CD4+ CD25+ CD127low/-T细胞与正常对照组差异无统计学意义(P＞0.05),CD4+ CD25+ FOXP3+T细胞[(2.1±1.2)%]及CD4+ CD25highT细胞[(0.8 ±0.4)%]与正常对照组[(1.8±0.8)%及(4.0±1.4)%]比较差异有统计学意义(P＜0.01);SLE组3种细胞占CD4+ CD25+T细胞的比例均明显低于正常对照组(均P＜0.01),CD4+ CD25+ CD127low/-T细胞、CD4+CD25+ FOXP3+T细胞及CD4+ CD25highT细胞分别占CD4+ CD25+T细胞的比例及与年龄、性别和病程,IgG、IgA、IgM、尿蛋白,24 h蛋白尿,抗dsDNA、抗Clq、抗核小体抗体水平均无相关性(均P＞0.05);但其与SLEDAI评分均存在负相关(P＜0.05).仅CD+ CD25+ GD127low/-T细胞/CD+ CD25+T细胞与补体C4存在明显的负相关(P＜0.01).结论 Treg细胞与活化的CD4+T细胞的相对比例可能在SLE的发病中起到重要作用.     

慢性乙型肝炎患者CD4+ CD25+调节性T细胞免疫抑制功能的研究

目的 探讨慢性乙型肝炎患者CD4+ CD25+调节性T细胞(Treg)免疫抑制功能.方法 收集北京大学人民医院22例慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血单个核细胞(PBMC)以及18名健康对照的PBMC标本,以流式分析对PBMC中CD4+ CD25+ Treg的频率进行分析;5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)掺入法评价CD4+ CD25+ Treg的免疫抑制功能;并同时通过磁珠分选去除CHB患者PBMC中的CD4+ CD25+ Treg,分别以MHC-肽-五聚体法和酶联斑点免疫法(Elispot)检测HBVcore18-27抗原肽刺激对HBV特异性的细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)的频率以及IFN-γ的分泌.结果 CHB患者外周血中CD4+ CD25+ Treg细胞群所占CD4+T细胞群的比例明显高于健康对照(t=3.74,P＜0.01);CHB患者CD4+ CD25+ Treg细胞可非特异抑制自身活化的CD4+ CD25- T细胞,并呈剂量依赖的特点,且抑制能力与健康对照相比无明显差异;在经HBVcore18-27抗原肽诱导条件下,去除CD4+ CD25+ Treg CHB患者,HBVcore18-27特异性CTLs的频率以及CTLs分泌IFN-γ的频数与未去除CD4+ CD25+ Treg组比出现显著上调(t=4.75,t=7.828,P＜0.01).结论 CHB患者循环中CD4+ CD25+ Treg细胞频率升高.在体外去除CHB患者PBMC的CD4+ CD25+ Treg后可显著地增强HBV抗原诱导的抗HBV细胞免疫应答.     

系统性红斑狼疮患者外周血T细胞CTLA-4表达及其临床意义的研究#

目的：研究系统性红斑狼疮（Systemic Lupus Erythematosus, SLE）T细胞中CTLA-4的表达及临床意义。 方法：分离正常人和SLE患者的外周血单个核细胞（PBMCs）,以抗-CD3、抗-CD28刺激培养48h,刺激培养前后收取细胞,以流式细胞术（FCM）检测CD4+和CD8+T细胞中CTLA-4+细胞比例,并分析其与SLE疾病活动性指数（SLE Disease Activity Index,SLEDAI）和肾损害的关系。再以ELISA法检测培养上清中游离的CTLA-4水平。 结果：SLE患者刺激前的CD4+和CD8+T细胞中、主要是CD25+T细胞中CTLA-4+细胞的比例较正常人显著增高,且与SLEDAI呈正相关;而其CD8+CD28- T细胞中CTLA-4+细胞比例也显著高于正常人,但与SLEDAI之间无显著相关性;经抗-CD3、抗-CD28抗体刺激后,其CD4+CD25+T细胞、CD8+CD25+T细胞或CD8+CD28- T细胞中CTLA-4+细胞的比例却显著低于正常人,但与SLEDAI之间无显著相关性,仅在活动性SLE患者中有肾损组的CD8+CD28- T细胞中CTLA-4+细胞的比例显著低于非肾损组;而且经刺激培养后SLE患者PBMC上清中游离的CTLA-4水平也显著低于正常人。结论：SLE患者新鲜分离的T细胞（CD4+及CD8+）中CTLA-4表达异常增高,反映T细胞异常活化和疾病活动;另一方面,SLE患者T细胞又存在CTLA-4诱导性表达障碍,可能与SLE T细胞体外再活化的能力减弱有关。     

Expression of caspase-3 and TRAIL receptors in CD4+ and CD8+ T cells of SLE patients

Objective: To study the expression of caspase-3 and tumor necrosis factor-related apoptosisinducing ligand (TRAIL) receptors in the CD4 and CD8 T cells of systemic lupus enythematosus (SLE) patients. Methods: RT-PCR was used to analyze the expression of caspase-3 and TRAIL receptors in CD4 and CD8 T cells of SLE patients and normal subjects. Results: The death domain-containing TRAIL-R1/R2 as well as “decoy“ TRAIL-R3/R4 were co-expressed in majority of CD4 and CD8 T cells in both SLE patients and normal subjects. The CD8 T cells from SLE patients showed significantly higher expression of caspase-3 and TRAIL-R2 than those from normal subjects,and the expression was correlated with the activity of the disease. Conclusion: The TRAIL-R2 signal pathway might contribute to the apoptosis of T cells in SLE.     

成人隐匿性自身免疫糖尿病CD4+调节性T细胞研究

目的 观察成人隐匿性自身免疫糖尿病(LADA)患者CD4+CD25+T细胞和CD4+ T细胞的FOXP3 mRNA表达,探讨其免疫学的发病机制.方法 LADA患者67例,2型糖尿病30例,正常对照30例,通过流式细胞术检测CD3+、CD4+、CD8+、CD4+ CD25+ T细胞阳性细胞百分率.采用磁珠分离CD4+T细胞,用实时-PCR方法,半定量检测CD4+T细胞的FOXP3 mRNA表达水平.结果 LADA患者比正常对照组,CD4+CD25+T细胞升高(4.1±1.9 vs 2.8±1.5,P＜0.01),CD4+CD25+T细胞占CD4+T细胞的比例升高(11.9±5.0 vs 8.2±3.7,P＜0.01).LADA患者CD4+T细胞FOXP3 mRNA的表达水平明显降低(0.52-fold,P＜0.01,n=10).结论 LADA患者存在调节性T细胞抑制功能缺陷.     

FoxP3+调节性T细胞与慢性阻塞性肺疾病的相关性

目的 研究慢性阻塞性肺疾病(COPD)急性发作期患者体内是否存在FoxP3+调节性T细胞(Treg)及其与COPD的关系.方法 抽取21例COPD患者外周静脉血,用三色标记单抗流式细胞仪法,检测外周血中T细胞亚群CD4+CD25+,CD4+CD25+FoxP3+(CD4+Treg),CD8+CD25+,CD8+CD25+FoxP3+(CD8+Treg)的数量和百分比.用定量酶联免疫吸附法(ELISA)测定外周血中转化生长因子β1(TGF-β1),白细胞介素10(IL-10)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的浓度.取中等程度相关r≥0.3的结果进行分析讨论.结果 在本组患者外周血中,CD4+CD25+为(18±6)%,CD4+Treg为(19±13)%,CD8+CD25+为(5±4)%,CD8+Treg为(12±10)%.直线相关分析结果表明,患者的年龄、病程、吸烟、白细胞总数和血pH都与Treg的数量或百分比呈显著相关,使其与患者的免疫构成复杂的因果关系.TGF-β1和IL-10在整体环境下与Treg无相关性.结论 在COPD急性发作期患者外周血中有一定比例的CD4+Treg和CD8+Treg,对患者的免疫发挥明显的抑制作用,可以成为了解患者免疫状况的一组新指标.     

系统性红斑狼疮患者CD4+、CD8+T淋巴细胞SLAM基因的表达分析

目的探讨系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者CD4 、CD8 T淋巴细胞SLAM基因的表达。方法采用免疫磁珠的方法对20例系统性红斑狼疮患者及10例正常人外周血CD4 、CD8 T淋巴细胞进行分离,RT-PCR对CD4 、CD8 T淋巴细胞SLAM基因表达进行分析。结果SLE患者CD4 、CD8 T淋巴细胞SLAM mRNA表达增加显著高于正常对照。结论SLAM介导的T淋巴信号通路转导异常可能在SLE患者T淋巴细胞激活异常中发挥重要的作用。     

外周血中CD19+ CD5+ B细胞和白细胞介素-10对系统性红斑狼疮患者病情的影响

目的  探讨外周血中CD19+ CD5+ B细胞和白细胞介素-10（IL-10）对系统性红斑狼疮（SLE）患者病情发生、发展的影响，为其临床研究提供参考依据。方法  选择65例稳定期SLE患者及65例活动期SLE患者，同时选择70例健康人群作为对照组，采用流式细胞术检测外周血中CD19+ CD5+ B细胞数量，采用酶联免疫吸附法检测IL-10水平。比较3组的差异，并分析上述指标与SLE活动度评分（SLEDAI）及补体的相关性。结果  活动组及稳定组CD19+ CD5+ B细胞数量、白蛋白、C3、C4均低于对照组，IL-10、红细胞沉降率（ESR）高于对照组，差异有统计学意义（P <0.05），活动组CD19+ CD5+ B细胞数量、白蛋白、C3、C4低于稳定组，SLEDAI评分、IL-10、ESR高于稳定组，差异有统计学意义（P<0.05）。CD19+ CD5+ B细胞数量与SLEDAI评分呈负相关，IL-10与SLEDAI评分呈正相关（P <0.05）。随着SLEDAI评分的增加，CD19+ CD5+ B细胞数量呈下降趋势，而IL-10水平呈上升趋势，差异有统计学意义（P <0.05）。结论  SLE患者外周血CD19+ CD5+ B细胞数量降低，而IL-10水平升高，随着病情活动程度的增加，外周血CD19+ CD5+ B细胞及IL-10水平变化更明显，可以作为评价SLE活动性的指标。

     

SLE患者T细胞亚群及CD4+CD25+T细胞的检测及意义

目的探讨T淋巴细胞亚群及CD4 CD25 T细胞在SLE病人发病中的临床意义。方法采用流式细胞术检测了68例SLE患者(其中活动期病人38例,稳定期病人30例)以及30例健康体检者外周血CD3 CD4 、CD3 CD8 、CD4 CD45RA 、CD8 CD28 、CD8 CD28-T细胞亚群以及CD4 CD25 T细胞水平。结果与正常对照组相比,活动期SLE病人CD3 CD4 、CD4 CD45RA 细胞亚群的百分率明显降低(P=0.000,P=0.001),CD3 CD8 、CD8 CD28-细胞亚群的百分率明显升高(P=0.000,P=0.000)。稳定期患者CD8 CD28 细胞水平明显高于活动期和对照组(P=0.011,P=0.435),CD3 CD4 、CD4 CD45RA 水平高于活动期,但无显著性差异(P=0.067,P=0.081),CD8 CD28-T细胞亚群无明显变化(P=0.997)。活动期病人CD4 CD25 T细胞百分率明显低于正常对照组及稳定期病人(P=0.000,P=0.000),稳定期病人与对照组之间无显著性差异(P=0.572)。结论SLE患者T淋巴细胞亚群的水平是异常的。病人外周血CD8 CD28-T细胞亚群的比例升高与疾病的病程和临床表现相关联,它的升高在疾病的稳定中起重要作用。CD4 CD25 T细胞水平降低可能是导致机体抑制自身免疫反应的功能减弱并引发SLE发生发展的重要因素。