妊娠期高血压疾病患者胎盘、胎膜及腹膜组织中水通道蛋白3的表达

目的:检测妊娠期高血压疾病患者胎盘、胎膜及腹膜组织中水通道蛋白3(AQP3)的表达.方法:采用免疫组织化学法检测60例妊娠期高血压疾病患者(包括妊娠期高血压20例,轻度子痫前期20例,重度子痫前期20例)及20例正常孕妇(正常妊娠组)胎盘、胎膜及腹膜组织中AQP3的表达.结果:4组孕妇胎盘、胎膜及腹膜组织中均有AQP3表达,分别位于胎盘组织合体滋养细胞及胎膜组织羊膜上皮细胞、腹膜组织间皮细胞上.重度子痫前期患者胎盘和腹膜中AQP3的表达较妊娠期高血压患者和正常孕妇强,胎膜中AQP3的表达较妊娠期高血压患者和正常孕妇弱,羞异均有统计学意义(H=23.916、22.829及22.627,P均<0.05).结论:AQP3可能与妊娠期高血压疾病的发生发展有关.     

TLR4在妊娠合并梅毒感染的胎盘与胎膜中表达

目的检测TLR4基因在妊娠合并梅毒感染人胎盘与胎膜中表达变化。方法取妊娠合并梅毒感染及正常足月分娩之胎盘与胎膜样本各5例;应用RTPCR技术对妊娠合并梅毒感染胎盘与胎膜组织上TLR4基因的mRNA表达的检测;应用免疫组化技术对妊娠合并梅毒感染胎盘与胎膜组织上TLR4基因的蛋白表达的检测。结果TLR4基因在妊娠合并梅毒感染人胎盘与胎膜中表达水平显著高于正常晚期妊娠胎盘与胎膜。在妊娠合并梅毒感染胎膜组织中TLR4基因表达较正常胎膜组织升高50%,P〈0.05;在妊娠合并梅毒感染胎盘组织中TLR4基因表达较正常胎盘组织升高120%,P〈0.05。TLR4在妊娠合并梅毒感染的胎盘合体滋养细胞、羊膜上皮细胞和胎膜中的平滑绒毛膜细胞滋养细胞上表达增强,与RT-PCR结果一致。结论TLR4基因在妊娠合并梅毒感染人胎盘与胎膜中表达水平显著增加,提示TLR4可能在妊娠合并梅毒感染的胎盘与胎膜分子病理中发挥作用。     

细胞间粘附分子-1在妊高征子宫蜕膜及胎盘中的表达

为探讨细胞间粘附分子-1(ICAM-1)在妊高征子宫蜕膜及胎盘中的表达,在20例正常妊娠及24例中、重度妊高征患者中,以选择性剖宫产取其子宫蜕膜及胎盘,用免疫组织化学方法检测其ICAM-1的表达,发现妊高征子宫蜕膜的血管中可见ICAM-1阳性的滋养细胞侵人,且这些血管周围有淋巴细胞浸润(P<0.05);胎盘合体滋养细胞染色明显强于正常妊娠(P<0.001).结果表明ICAM-1阳性滋养细胞侵入蜕膜血管伴血管周围淋巴细胞浸润,以及胎盘合体滋养细胞ICAM-1表达增强.提示ICAM-1介导的免疫机制在妊高征的发病中可能有重要作用.     

STAT3\PCNA在胎盘组织中的表达及与胎盘老化的相关性研究

目的 分析凋亡相关蛋白STAT3及增殖蛋白PCNA在胎盘发育过程中的表达及功能,探讨二者与胎盘老化的相关性.方法 采用免疫组织化学方法分别检测妊娠不同阶段胎盘组织及老化胎盘组织中STAT3和PCNA蛋白的表达.结果 ①STAT3、PCNA在细胞滋养细胞中表达,在合体滋养细胞中不表达;②STAT3的表达强度在早期和晚期妊娠组间差异有极显著性.③PCNA表达强度在妊娠早、晚期组间差异有极显著性;中、晚期组间差异有显著性;④ STAT3及PCNA表达在正常妊娠各组间有显著正相关性;在老化组无相关性.结论 ①PCNA在妊娠早、中期高度表达与滋养细胞的高度增殖状态及旺盛的功能相关;②STAT3在妊娠早、中期表达量较高,可能通过抑制滋养细胞的凋亡而维持滋养细胞功能,进而维持妊娠;③胎盘老化可能与STAT3的表达失活有关;④正常妊娠各组STAT3与PCNA表达呈显著正相关,说明STAT3可能通过抑制滋养细胞的凋亡而影响细胞的增殖,从而使得细胞滋养细胞保持增殖与凋亡的平衡状态,保证胎盘功能的正常运行.     

水通道蛋白-1在人羊水过少胎盘和胎膜组织中的表达

目的 检测水通道蛋白-1 mRNA在人羊水过少临床病例的胎盘和胎膜组织中表达.方法 收集选择性剖宫产羊水过少临床病例以及正常足月分娩的胎盘和胎膜组织样本各5例.运用RT-PCR方法检测羊水过少临床病例及正常晚期妊娠胎盘和胎膜组织中水通道蛋白(AQP-1)-1mRNA的表达.结果 羊水过少临床病例胎盘组织AQPI mRNA表达显著低于正常晚期妊娠胎盘组织(P<0.05);AQPI mRNA在羊水过少临床病例胎膜组织表达显著低于正常晚期妊娠胎膜组织(P<0.05).结论 AQPI mRNA在人羊水过少临床病例胎盘和胎膜组织表达显著减少;提示AQPI在母胎液体交换及羊水膜内吸收途径可能发挥重要作用.     

在人胎盘、胎膜中水通道蛋白8 mRNA的表达

目的 初步探讨水通道蛋白8(AQP8)mRNA在人胎盘、胎膜中的表达.方法 采用RT-PCR检测10例选择性剖宫产的足月单胎正常孕妇胎盘、胎膜中AQP8mRNA的表达.结果 在人胎盘、胎膜中,AQP8 mRNA均有表达.结论 AQP8可能参与人羊水循环及其调节,并且为羊水量异常的治疗提供了新的思路.     

子痫前期产妇胎盘胎膜中水通道蛋白8和水通道蛋白9的表达和意义

目的研究水通道蛋白8(aquaporin 8,AQP8)和水通道蛋白9(AQP9)在妊娠期高血压及子痫前期产妇胎盘胎膜上的表达,探讨其在子痫前期发病中的作用。方法选取2007年1月～2009年1月笔者医院产科足月产妇90例,其中正常妊娠30例,妊娠期高血压30例,子痫前期30例。采用免疫组化SP法,检测各组胎盘胎膜中AQP8和AQP9的表达,分析其与高血压程度、血乳酸脱氢酶水平和24h尿蛋白定量等的相关性。结果在子痫前期组,AQP8在羊膜上皮细胞的表达显著高于绒毛膜滋养细胞和胎盘滋养层细胞,而AQP9在胎盘滋养层细胞的表达显著高于绒毛膜滋养细胞和羊膜上皮细胞。子痫前期组,AQP8在羊膜上表达显著高于正常组,而在胎盘上的表达显著下降;AQP9在胎盘上表达显著高于正常组,在羊膜上表达轻度升高。子痫前期产妇胎盘上AQP8,AQP9的表达与血乳酸脱氢酶水平相关,而与24h尿蛋白水平无关。结论 AQP8、AQP9在子痫前期产妇胎盘胎膜上表达异常,可能参与子痫前期的发生和发展。     

雌激素受体α和β mRNA变异型在胎盘组织的表达及定位

目的 探讨人足月胎盘组织雌激素受体α、β（ERα、ERβ）的mRNA变异型种类及其在胎盘的组织细胞学定位。方法 采用逆转录聚合酶链反应技术和免疫组织化学技术检测正常足月妊娠胎盘组织中ERα、ERβ表达及细胞学定位。结果 人足月胎盘组织中有ERα、ERβmRNA的表达,胎盘组织中ERβmRNA的表达为ERβ5变异型ERα表达定位于滋养层细胞滋养细胞核,ERβ表达定位于滋养层合体滋养细胞胞浆。结果 ERβ5是胎盘组织ERβ的变异型种类,定位于胎盘合体滋养细胞,与胎盘合成和分泌雌激素有关。     

人胎盘滋养细胞凋亡与其调控蛋白Bcl-2及Bax的研究

目的 探讨人妊娠各期胎盘滋养细胞凋亡与其调控蛋白Bcl-2及Bax之间的关系.方法 采用TUNEL法检测人妊娠各期胎盘滋养细胞的凋亡情况,采用免疫组织化学方法检测人妊娠各期胎盘滋养细胞层Bcl-2,Bax的表达情况.结果 细胞凋亡在早、中、足月和过期妊娠4组胎盘滋养层中表达随孕期的增长逐渐增多,差异有显著性(P＜0.01).Bcl-2,Bax在4组胎盘滋养层的表达及Bax/Bcl-2值均随孕期的增长逐渐增强(P＜0.05).结论 在人的整个妊娠时期中,胎盘滋养细胞凋亡与Bax/Bcl-2的比值正相关.此外,Bcl-2和Bax虽单独具有调控细胞凋亡的功能,但其相互间的比例对细胞凋亡的影响更为重要.     

正常妊娠和重度妊高征患者胎盘中MMP-9、TIMP-1的表达及其意义

目的:探讨基质金属蛋白酶9(MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1)在正常妊娠和重度妊娠高血压综合征患者胎盘组织中的表达及其意义。方法:采用免疫组织化学方法检测42例重度妊高征患者(妊高征组)及42例正常妊娠妇女(正常组)胎盘中MMP-9、TIMP-1的表达强度及变化规律,并进行比较分析。结果:MMP-9、TIMP-1表达于滋养叶细胞、血管内皮细胞及绒毛间质细胞。与正常组相比,妊高征组MMP-9表达降低,差异有统计学意义(P<0.01);而TIMP-1表达无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:MMP-9和TIMP-1可能与胎盘滋养叶细胞侵入异常及妊高征的发病有关。     

AQP1和AQP3在子痫前期患者胎盘和胎膜上的表达及意义

目的研究AQP1和AQP3在子痫前期患者胎盘和胎膜上的表达及其与临床资料之间的相关性,探讨其在子痫前期发病中的作用。方法选取2009年3月～2010年3月笔者医院产科收住的孕妇60例,其中子痫前期轻度组20例(实验组1),子痫前期重度组20例(实验组2),正常足月妊娠孕妇20例(对照组)。采用免疫组化SP法,检测两组胎盘、胎膜组织中AQP1和AQP3的分布及表达,同时分析其与24h尿蛋白定量、羊水量、胎儿出生体重等临床资料之间的相关性。结果 AQP1、AQP3在子痫前期组胎盘上的表达较正常妊娠组上调。AQP1、AQP3在子痫前期组羊膜组织上的表达强度弱于对照组。子痫前期组患者胎盘上的AQP1、AQP3表达强度越强,其24h尿蛋白定量越高,呈线性相关。子痫前期组胎盘上的AQP1、AQP3表达强度与胎儿出生体重不呈线性相关。子痫前期组羊膜上的AQP1、AQP3表达强度与羊水量不呈线性相关。结论子痫前期组胎盘上AQP1、AQP3的表达较正常妊娠组明显上调,且与24h尿蛋白定量呈线性相关,提示胎盘组织中AQP1、AQP3表达与子痫前期疾病发生发展及病情轻重程度有关。     

surviving,caspase-3,AQP1与妊娠晚期羊水过少相关性研究

目的:探讨Survivin、caspase-3及水通道蛋白1(Aquaporin 1,AQP1)与妊娠晚期羊水过少中的作用及相关性,为妊娠晚期羊水过少的临床治疗提供新的思路。方法:收集32例选择性剖宫产羊水过少临床病例以及30羊水正常的胎膜组织样本,采用免疫组织化学SP法检测Survivin、caspase-3及AQP1,并对其强度行定量分析。结果:羊水过少患者胎膜组织Survivin、AQP1的表达均低于羊水正常组,而caspase-3表达高于正常组。Survivin与caspase-3表达呈负相关,与AQP1表达呈正相关,caspase-3与AQP1表达呈负相关。结论:妊娠晚期羊水过少可能与Survivin表达减少,caspase-3表达增加引起胎膜组织细胞过度凋亡,AQP1下调,羊水的跨膜运输异常有关。     

水通道蛋白8在人羊膜上皮细胞WISH株的表达和定位

目的:研究水通道蛋白8(AQP8)在人羊膜上皮细胞WISH株的表达和定位,羊水膜内吸收的分子机制.方法:培养人羊膜上皮细胞WISH株,采用Western blot技术检测WISH细胞AQP8蛋白表达,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测WISH细胞AQP8 mRNA的表达,免疫荧光组织化学方法检测WISH细胞上 AQP8的分布.结果:WISH细胞能表达较低水平的AQP-8 mRNA,WISH细胞AQP8蛋白在34ku处有一明显的糖基化条带.在细胞内微粒体膜和细胞膜上均检测到标记AQP8的荧光.结论:人羊膜上皮细胞WISH有AQP8的蛋白和mRNA表达,AQP8可能介导了羊水膜内吸收.     

水通道蛋白2在人不同时期子宫内膜中的表达

目的探讨水通道蛋白2(aquaporin 2,AQP2)在人不同时期子宫内膜中的表达特点及其意义。方法采用免疫组织化学技术、W estern印迹方法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)对87例(其中增生期23例,分泌早期30例,分泌中期34例)来自生育年龄妇女不同月经周期的子宫内膜行AQP2的检测。结果AQP2阳性着色主要分布于人子宫内膜腔上皮和腺上皮细胞的胞膜和胞质;W estern印迹证实了AQP2在人子宫内膜中的表达,半定量分析发现增生期内膜AQP2的相对表达量为1.03±0.10,显著低于分泌早期(1.33±0.14,P<0.05)和分泌中期(1.63±0.15,P<0.01);分泌早期和中期相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论AQP2在人子宫内膜中表达,且其表达量随月经周期而变化,表明其可能在性激素作用下的子宫内液体平衡过程中起一定作用。     

水通道蛋白1在胎儿窘迫患者血清及胎盘中的表达及意义

目的探讨急性胎儿窘迫患者血清及胎盘中AQP1的变化水平及其意义。方法 （1）采用免疫组化方法检测急性胎儿窘迫组及正常产妇胎盘中AQP1的蛋白水平。（2）采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定各组孕妇血清中AQP1水平。结果 （1）AQP1在胎盘细胞中有表达,急性胎儿窘迫组AQP1表达比对照组明显升高,差异有统计学意义。（2）对照组孕妇血清AQP1水平与胎盘组织中AQP1蛋白表达水平呈正相关关系。急性胎儿窘迫组孕妇血清AQP1与胎盘中AQP1表达也呈正相关关系。结论胎儿窘迫患者胎盘中AQP1高表达,可引起循环中AQP1水平升高,从而参与胎儿窘迫的病理生理过程。     

AQP1在维甲酸诱导红白血病细胞红系分化中的作用

目的建立稳定抑制水通道蛋白1（AQP1）表达的K562细胞株,探讨AQP1在维甲酸（RA）诱导红白血病细胞红系分化中
的作用。方法RA处理K562细胞,通过real-time PCR法检测γ-珠蛋白表达和分光光度法检测血红蛋白的含量研究RA对K562
细胞红系分化的影响。Real-time PCR法、蛋白质印迹法检测RA诱导后K562细胞AQP1转录和蛋白表达水平的变化。设计特
异AQP1shRNA序列,构建pSUPER-retro-puro重组质粒转染K562细胞,筛选建立稳定抑制AQP1基因表达的K562细胞株
（K562-shAQP1）;通过比较K562-shAQP1细胞株与对照组细胞在维甲酸诱导后γ-珠蛋白和血红蛋白的表达,研究AQP1在维甲
酸诱导K562细胞红系分化中的作用。结果RA处理K562细胞后红系分化指标γ-珠蛋白和血红蛋白的表达均明显增加,同时
AQP1mRNA及蛋白表达随RA作用时间显著增加（P<0.01）。pSUPER-retro-puro-shAQP1干扰载体转染K562细胞后AQP1基
因在转录和蛋白水平上的表达均被抑制,差异有统计学意义（P<0.01）;K562-shAQP1细胞与对照K562细胞相比,在RA诱导后
γ-珠蛋白和血红蛋白表达受到不同程度的抑制,差异有统计学意义（P<0.01）。结论RA诱导K562细胞红系分化后AQP1表达
显著增加,而抑制AQP1基因的表达可部分阻断RA诱导红系分化的作用,说明AQP1在RA诱导K562细胞红系分化过程中发
挥重要作用。
     

多囊卵巢综合征患者颗粒细胞AQP9的表达

目的:研究多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)卵巢组织中窦状卵泡和在超促排卵(COH)周期黄素化颗粒细胞AQP9的表达,探讨颗粒细胞AQP9表达水平与COH周期卵泡液中甾体激素水平的关系。方法:行体外受精-胚胎移植的PCOS患者18例,对照组18例。收集卵泡(直径≥1.8 cm)液,测定甾体激素E2、P和T水平;取卵时分别收集大卵泡(直径>1.6 cm)和小卵泡(直径<1.4 cm)的黄素化颗粒细胞。用RT-PCR检测COH周期黄素化颗粒细胞AQP9mRNA的表达,免疫组化定位AQP9在PCOS卵巢内窦状卵泡和COH周期的黄素化颗粒细胞的表达。结果:RT-PCR检测证实黄素化颗粒细胞有AQP9 mRNA表达,PCOS组AQP9 mRNA表达水平与对照组比较差异无显著性(P>0.05),PCOS组大卵泡的颗粒细胞AQP9表达高于小卵泡,但无统计学差异。免疫组化显示PCOS患者卵巢的窦状卵泡内颗粒细胞和COH周期的黄素化颗粒细胞均有AQP9的表达,染色定位于胞浆和胞膜。在COH周期,颗粒细胞AQP9 mRNA表达水平与卵泡液中E2、P和T均无显著性相关。结论:PCOS患者卵巢组织中窦状卵泡的颗粒细胞及在COH周期黄素化颗粒细胞均有AQP9表达,推测AQP9可能通过水转运介导卵泡发育和窦卵泡形成。在COH周期,PCOS的大卵泡AQP9的表达有高于小卵泡的趋势,可能与卵泡发育有关。在COH周期,颗粒细胞AQP9 mRNA表达水平与甾体激素的分泌无相关性。     

RNA干扰抑制胸膜间皮细胞水通道蛋白1表达的实验研究

目的 研究RNA干扰技术对大鼠胸膜间皮细胞水通道蛋白1（AQP1）基因表达的影响,探讨应用该技术治疗胸腔积液的可行性。方法体外培养大鼠胸膜间皮细胞,细胞鉴定后,采用免疫细胞化学、逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测AQP1表达;设计并构建2个靶向大鼠AQP1基因的短发夹RNA（shRNA）重组质粒,脂质体转染大鼠胸膜间皮细胞48h后,采用RT—PCR及Western印迹方法分别在mRNA和蛋白质水平检测AQP1基因表达的抑制效果。结果胸膜间皮细胞存在AQP1表达,所设计的2个AQP1-siRNA重组质粒可不同程度地抑制AQP1在胸膜间皮细胞中的表达,在mRNA水平抑制率分别为83．5％和90．9％;在蛋白质水平抑制率分别为41．2％和67．6％,与空白对照组和阴性对照组比较,其差异有统计学意义（P〈0．01）。结论质粒介导的RNA干扰可明显抑制大鼠胸膜间皮细胞AQP1基因的表达,且抑制率具有序列相关性,是潜在的胸腔积液基因治疗新方法。