大蒜素对人胃癌细胞株SGC-7901和BGC-823生长的影响

目的：研究大蒜素对人胃癌细胞株SGC-7901、BGC-823增殖抑制作用及对细胞周期的影响。方法：传代培养人胃癌细胞，MTT法测定细胞增殖抑制率并测定药物半数抑制率（IC50）；流式细胞仪检测细胞周期的改变。结果：大蒜素对SGC-7901和BGC-823两种细胞的生长均有明显的抑制作用，且呈浓度依赖性，72h IC50分别为20和30μg／mL；以72h IC50浓度大蒜素分别作用于两种胃癌细胞株24、48h后，流式细胞检测与对照组比G0／G1期细胞减少，G2／M期细胞明显增加，P〈0．01。提示两种胃癌细胞株经大蒜素处理后．细胞周期阻滞于G2／M期。结论：大蒜素可使人胃癌细胞株SGC-7901和BGC-823细胞的增殖明显受到抑制；细胞周期被阻滞在G2／M期。     

大蒜素协同抗癌药对肿瘤细胞杀伤作用的研究

目的:探讨大蒜素对人胃癌细胞系MGC-803和SGC-7901细胞周期的影响及其与周期特异性药物联合使用,增强抗癌药物对肿瘤细胞的杀伤作用.方法:苔盼蓝拒染法检测细胞增殖抑制率以观察大蒜素对胃癌细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪及瑞士-姬姆萨染色光镜观察检测细胞周期的改变;3μg/ml大蒜素与周期特异性抗癌药物博莱霉素A5和长春新碱联合使用,观察药物细胞毒活性的改变.结果:大蒜素可抑制MGC-803细胞生长,24h IC50为6.4μg/ml,也可抑制SGC-7901细胞的生长,24h IC50为7.3μg/ml;以3μg/ml、6μg/ml、9μg/ml终浓度大蒜素分别作用两种胃癌细胞系24h后,与对照组比较,G0/G1细胞周期百分率明显减少,而G2/M期明显增加(P＜0.01);6μg/ml大蒜素作用培养细胞24h后,与对照组比较细胞分裂指数明显增加.提示两种细胞系经大蒜素处理后,细胞周期阻滞于M期;大蒜素与两种抗癌药物联合使用,作用于MGC-803细胞,BLM A5和VCR的24h IC50值分别由单独应用的1.210μg/ml和0.125μg/ml下降到0.370μg/ml和0.031μg/ml,作用于SGC-7901细胞,BLM A5和VCR的24h IC50值分别由单独应用的1.760μg/ml和0.287μg/ml下降到0.680μg/ml和0.074μg/ml,显示低剂量大蒜素增强了抗癌药物对肿瘤细胞的杀伤作用.结论:大蒜素可使MGC-803及SGC-7901两种细胞周期阻滞于M期;大蒜素与M期特异作用抗癌药物联合使用,具有协同抗肿瘤作用.     

大蒜素对人胃癌细胞株SGC-7901和BGC-823生长的影响

目的:研究大蒜素对人胃癌细胞株 SGC 7901、BGC 823增殖抑制作用及对细胞周期 的影响。方法:传代培养人胃癌细胞,MTT法测 定细胞增殖抑制率并测定药物半数抑制率 (IC50);流式细胞仪检测细胞周期的改变。结果: 大蒜素对SGC 7901和BGC 823两种细胞的生长 均有明显的抑制作用,且呈浓度依赖性,72hIC50 分别为20和30μg/mL;以72hIC50浓度大蒜素 分别作用于两种胃癌细胞株24、48h后,流式细 胞检测与对照组比G0/G1期细胞减少,G2/M期 细胞明显增加,P<0.01。提示两种胃癌细胞株 经大蒜素处理后,细胞周期阻滞于G2/M期。结 论:大蒜素可使人胃癌细胞株SGC 7901和BGC 823细胞的增殖明显受到抑制;细胞周期被阻滞 在G2/M期。     

大蒜素联合长春瑞滨促进胃癌细胞株p21和p27的表达

目的:通过检测大蒜素与细胞周期特异性化疗药联合应用对胃癌细胞周期抑制蛋白（cyclindependent kinase inhibitors, CKI）p21、p27表达的影响,探讨大蒜素对肿瘤细胞周期阻滞及与化疗药协同抗肿瘤作用的可能机制。方法： MTT法测定化疗药长春瑞滨（vinorelbine,NVB)、氟尿嘧啶(fluorouracil,5Fu)、丝裂霉素（mitomycin, MMC)对两种胃癌细胞株BGC823和SGC7901的增殖抑制率,并计算这些药物的半数抑制浓度（IC50）,以此作为检测p21、p27蛋白表达时的给药剂量;流式细胞仪检测单独或联合用药时细胞周期的改变;SP免疫组化法检测胃癌细胞p21、p27蛋白的表达。结果：大蒜素作用24、48 h后两种细胞均出现G0/G1期细胞减少、G2/M期细胞增多。大蒜素作用于两种细胞后p21和p27蛋白的阳性表达率随大蒜素质量浓度（5、10、15、20 μg/ml）的增加而依次升高。大蒜素与细胞周期特异化疗药NVB联合作用后,与单一作用相比,两种细胞的p21、p27蛋白的表达均显著增加（P<0.01）;大蒜素分别与5FU或MMC联合作用后,两种细胞中p21、p27蛋白的表达并没有进一步增加。结论：大蒜素与细胞周期特异化疗药NVB联合应用后通过上调p21、p27蛋白的表达使胃癌细胞阻滞于G2/M期。     

大蒜素诱导人胃癌细胞M期阻滞的研究

目的探讨大蒜素对人胃癌细胞系MGC803和SGC7901细胞周期的影响及其作用机制。方法以台盼蓝拒染法检测人胃癌细胞系MGC803和SGC7901细胞的增殖抑制率;以透射电镜观察两种胃癌细胞的直接损伤改变;以流式细胞仪及瑞士姬姆萨染色光镜观察两种胃癌细胞周期的改变;以SP免疫组化及RTPCR方法检测两种胃癌细胞的p21WAF1和p16INK4基因及蛋白表达的变化。结果大蒜素可抑制MGC803细胞生长,24h药物半数抑制浓度(IC50)为6.4μg/ml;也可抑制SGC7901细胞的生长,24hIC50为7.3μg/ml。12μg/ml的大蒜素作用两种胃癌细胞24h后,细胞出现急性直接损伤,膜系统改变明显。以3μg/ml、6μg/ml、9μg/ml终浓度大蒜素分别作用于两种胃癌细胞系24h后,与对照组比较,G0和G1期细胞周期百分比(%)明显减少,而G2和M期明显增加(P<0.01);6μg/ml大蒜素作用培养两种胃癌细胞24h后,与对照组比较,细胞分裂指数明显增加,提示两种细胞系经大蒜素处理后,细胞周期阻滞于M期。经大蒜素处理后,MGC803细胞的p21WAF1和p16INK4基因及蛋白表达均明显增加;SGC7901细胞的p21WAF1基因及蛋白表达明显增加。结论大蒜素可使MGC803及SGC7901两种细胞周期阻滞于M期;大蒜素的M期阻滞作用可能与其上调细胞的p21WAF1和p16INK4基因表达有关。     

双苓扶正抗癌制剂对人胃癌细胞周期的影响

目的：研究双苓扶正抗癌制剂对人胃癌细胞周期的影响。方法：应用体外培养方法和流式细胞技术，分析双苓扶正抗癌制剂对人胃癌SGC-7901细胞周期的影响。结果：双苓扶正抗癌制剂(160μg／ml和320μg/ml)体外加药48h和72h，可启动人胃癌SGC-7901G0期细胞进入细胞增殖周期，并将其阻滞于S期。结论：双苓扶正抗癌制剂的抗肿瘤作用机制可能涉及细胞增殖周期动力学。     

Rh-Apo2L联合长春瑞滨杀伤人肺腺癌A549细胞的作用研究

[目的]探讨重组人凋亡素2配体(Rh-Apo2L)联合长春瑞滨(NVB)对人肺腺癌A549细胞的杀伤作用及机制。[方法]人肺腺癌A549细胞分成4组:对照组、Rh-Apo2L组、NVB组、联合组。用MTT法检测不同浓度Rh-Apo2L和NVB对A549细胞的抑制率,绘制细胞生长曲线,流式细胞仪测定细胞周期分布,RT-PCR方法检测死亡受体DR5基因mRNA的表达。[结果]MTT结果显示不同浓度Rh-Apo2L和NVB对人肺癌A549细胞的体外抑制作用均呈剂量效应关系,Rh-Apo2L处理48h后的IC20为3.48μg/ml、IC50为197.92μg/ml,NVB处理48h后的IC20为0.29μg/ml、IC50为3.44μg/ml。联合组对A549细胞的抑制作用高于单药组(P=0.001)。流式细胞分析显示含NVB药物两组在24hG2/M期比率高于对照组。3个实验组在24h、48h、72h后DR5基因mRNA相对表达量均较对照组多(P<0.05),但各实验组间均无统计学差异(P>0.05)。[结论]Rh-Apo2L与NVB联合应用能协同增强对人肺腺癌细胞株A549的体外抗肿瘤活性,其协同作用机制可能与细胞周期阻滞在G2/M期有关,但与DR5基因mRNA的表达无相关性。     

干涉Cul1蛋白对胃癌细胞增殖抑制机制的探讨

目的:应用siRNA干涉胃癌细胞中Cul1蛋白表达,观察Cul1蛋白沉默对胃癌细胞增殖的影响,并探计其相关机制.方法:将siRNA转染胃癌细胞BGC-823和SGC-7901,设空白对照组和干涉组,采用蛋白质印迹法检测胃癌细胞BGC-823和SGC-7901中Cul1及PCNA蛋白表达差异.采用CCK8法检测胃癌细胞的增殖活性;流式细胞术(FCM)观察胃癌细胞周期变化.结果:利用siRNA干涉Cul1蛋白表达后,胃癌细胞BGC-823和SGC-7901中Cul1表达水平明显降低,与空白对照组比较有统计学意义,P＜0.01;干涉Cul1蛋白后,其下游相关蛋白-增殖细胞核抗原PCNA表达也明显降低,与空白对照组比较有统计学意义,P＜0.01.CCK8法检测胃癌细胞增殖活性显著降低,与空白对照组比较,差异均具有统计学意义,P＜0.01.流式细胞术观察胃癌细胞周期变化,Cul1蛋白干涉后G1期细胞明显增多,S、G2/M期细胞减少,BGC-823细胞增殖指数(PI)31.68±1.57,干涉Cul1蛋白后PI值为23.74±2.14;SGC-7901 PI值36.04士2.75,干涉Cul1蛋白后PI值为27.29±1.25;两组比较均具有统计学意义,P＜0.05.结论:利用siRNA干涉人胃癌细胞BGC-823、SGC-7901中Cul1蛋白后,胃癌细胞增殖受到明显抑制,其机制可能是通过抑制其下游蛋白PCNA表达.     

铂类药物对胃癌细胞生物学行为和MDR1表达的影响

目的 研究顺铂（CDDP）和奥沙利铂（L-OHP）对人胃癌细胞株生长的抑制作用,进而分析两种铂类不同的作用机制。方法 用不同浓度（IC10、IC30、IC50）的CDDP和L-OHP分别作用胃癌细胞株（BGC-823和SGC-7901）24、48、72h,应用MTT比色法检测细胞的增殖抑制率;采用RT-PCR法检测MDR1基因表达量。IC30浓度的两种铂类药物作用于胃癌细胞48h后,用流式细胞术分析细胞凋亡,细胞划痕实验评价细胞迁移能力。结果 两种铂类药物作用后,胃癌细胞BGC-823和SGC-7901的增殖受到抑制,呈时间和剂量依赖,L-OHP的量效变化更明显。两种铂类药物作用后,MDR1呈上升趋势,随着浓度增加和（或）时间的延长,表达增强。BGC-823细胞的凋亡率增加较SGC-7901细胞明显,L-OHP组的细胞凋亡率高于CDDP组;BGC-823细胞的增殖迁移较SGC-7901细胞慢而距离短,CDDP作用后细胞的增殖迁移较L-OHP作用后快而距离长。结论 L-OHP诱导胃癌细胞凋亡及抑制细胞迁移侵袭的能力均强于CDDP。胃癌对两种铂类药的耐药机制可能与其诱导MDR1表达上调有关。     

洛铂对人胃癌细胞BGC-823的增殖抑制及放疗增敏作用

目的:探讨洛铂对胃癌细胞株BGC-823的增殖抑制及放疗增敏作用。方法:以人胃癌细胞株BGC-823为研究对象,采用洛铂和高能射线作为干预手段,MTT法测定洛铂对胃癌细胞株BGC-823的抑制率,流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡率。结果:MTT显示洛铂和放疗对人胃癌细胞株BGC-823生长有显著的抑制作用,且呈现时间和剂量依赖性。洛铂对胃癌的放疗具有明显增敏作用。药物组G0/G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少。而G2/M期变化无明显意义。照射组G2/M期细胞比例升高。联合组G0/G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少。结论:洛铂能提高人胃癌细胞株BGC-823放疗敏感性作用。其作用可能是通过诱导细胞凋亡、改变细胞周期时相分布等机制来实现的。     

沉默ERK5对胃癌SGC-7901、BGC-823细胞生物学功能的影响

目的 探讨沉默细胞外信号调节激酶5（extracellular signal regulated kinase 5,ERK5）对胃癌细胞SGC-7901、BGC-823生物学功能的影响。方法 实时荧光定量PCR法（qRT-PCR）检测人胃癌细胞株和人胃黏膜上皮细胞株ERK5 mRNA的表达水平。应用短发荚RNA（shRNA）干扰技术沉默胃癌细胞SGC-7901、BGC-823中ERK5的表达。CCK-8法检测ERK5沉默后胃癌细胞的生长能力,平板克隆实验检测细胞克隆形成能力,Transwell 实验检测细胞侵袭和迁移能力,流式细胞仪检测细胞凋亡和周期分布。结果 与胃黏膜上皮细胞GES-1相比,胃癌细胞SGC-7901、BGC-823、AGS、HGC-27中ERK5 mRNA均呈高表达,相对表达量分别为2.696±0.501、1.865±0.185、1.793±0.137和1.530±0.093（P<0.05）。ERK5-shRNA有效沉默胃癌细胞SGC-7901、BGC-823中ERK5的表达水平,沉默效率分别为（74.4±1.5）%和（69.1±3.9）%,差异有统计学意义（P<0.05）。沉默 ERK5的表达能有效抑制胃癌细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力（P<0.05）,而促进胃癌细胞凋亡（P<0.05）,并诱导细胞周期阻滞于G0/G1期。结论 沉默ERK5可显著抑制胃癌细胞SGC-7901、BGC-823的生长侵袭,促进细胞凋亡,ERK5可能是胃癌治疗的潜在靶点。     

异隐丹参酮对胃癌细胞增殖、周期和凋亡的影响

目的 探讨异隐丹参酮（ICTS）对胃癌BGC-823和SGC-7901细胞增殖、周期、凋亡的影响及可能机制。方法 体外培养胃癌细胞系BGC-823、SGC-7901,采用0、5、10、20 μmol／L ICTS处理24、48、72 h后, CCK-8法检测细胞的增殖抑制率;确定ICTS抑制BGC-823和SGC-7901细胞的最佳浓度和最佳作用时间后,流式细胞术检测其细胞周期和凋亡率。Western blotting检测ICTS处理后胃癌细胞中Cyclin D1、Bcl-2、p53、p21蛋白的表达。结果 0、5、10、20 μmol／L ICTS处理BGC-823细胞24 h的增殖抑制率分别为（0.789±0.048）％、（16.74±1.55）％、（33.58±2.26）％、（54.62±2.61）％,差异具有统计学意义（P＜0.05）;0、5、10、20 μmol／L ICTS 处理SGC-7901细胞24 h的增殖抑制率分别为（-0.184±0.023）％、（12.76±1.73）％、（32.95±2.47）％、（53.80±2.65）％,差异具有统计学意义（P＜0.05）。20 μmol／L ICTS 处理BGC-823细胞24、48、72 h的增殖抑制率分别为（54.62±2.61）％、（55.08±2.35）％、（59.72±2.53）％,差异无统计学意义（P＞0.05）;20 μmol／L ICTS 处理SGC-7901细胞24、48、72 h的增殖抑制率分别为（53.80±2.65）％、（55.76±2.47）％、（61.83±2.82）％,差异无统计学意义（P＞0.05）。20 μmol／L ICTS处理BGC-823、SGC-7901细胞24 h后G0／G1期细胞比例为（78.34±7.13）％和（79.57±7.34）％,均高于对照组,差异具有统计学意义（P＜0.05）。ICTS处理组BGC-823、SGC-7901凋亡率分别为（24.78±3.42）％和（28.76±4.21）％,均高于对照组,差异具有统计学意义（P＜0.05）。20 μmol／L ICTS处理BGC-823、SGC-7901细胞24 h后Cyclin D1和Bcl-2蛋白表达量均显著低于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）;p53和p21蛋白表达量显著高于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 ICTS通过增加p53、p21表达,降低Cyclin D1和Bcl-2表达,进而抑制细胞增殖,增加细胞G0／G1阻滞和凋亡,发挥抗胃癌的作用。     

重楼复方与氟尿嘧啶对胃癌细胞的体外协同作用研究

目的:探讨重楼复方(Chong Lou Fu Fang, CLFF)与5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil, 5-FU)对胃癌细胞有无体外协同作用及CLFF对胸苷酸合成酶(thymidylate synthase, TS)基因表达和细胞凋亡的影响.方法:MTT法检测细胞增殖能力;基于中位效应原则的联合指数法评估CLFF与5-FU对胃癌细胞系SGC-7901和BGC-823的相互作用;Annexin-Ⅴ-FITC和PI双染色法检测细胞凋亡率;荧光定量RT-PCR法测定TS和β-actin mRNA表达.结果:CLFF在两株细胞中与5-FU均产生较好的协同细胞毒性,两药合用亦以协同方式诱导肿瘤细胞凋亡;CLFF作用24 h后,SGC-7901和BGC-823细胞中TS mRNA表达水平分别为对照组的(0.30±0.03)倍和(0.46±0.03)倍,用药前后两株细胞中TS mRNA表达水平具有统计学差异.结论:CLFF与5-FU有较好的协同抗肿瘤作用,可能与二者协同诱导肿瘤细胞凋亡以及CLFF可下调胸苷酸合成酶基因表达有关.     

长链非编码RNA CASC9在胃癌化疗耐药中的机制研究

目的:观察长链非编码RNA CASC9对胃癌（gastric cancer,GC）细胞增殖、凋亡以及对5-氟尿嘧啶（5-FU）化疗耐药的影响,并探讨其机制。方法:首先采用实时荧光聚合酶链反应法(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)检测永生化胃上皮细胞(GSE-1)和GC细胞(SGC-7901、BGC-823)中CASC9和P-gp的表达水平;在胃癌细胞SGC-7901和BGC-823中抑制CASC9表达后,通过RT-PCR检测P-gp的表达水平;在胃癌细胞SGC-7901中抑制CASC9表达后,再过表达P-gp,应用CCK-8法检测转染后各组光密度值以评价增殖率,应用Annexin V-APC单染色流式细胞术检测各组转染48 h后的细胞凋亡率,在培养基中加入不同浓度的5-FU检测各组细胞存活率。结果:与正常胃黏膜细胞相比,GC细胞中CASC9、P-gp过表达(P＜0.05);抑制CASC9表达后胃癌细胞中P-gp表达下调(P＜0.05);胃癌细胞抑制CASC9表达后细胞增殖转移能力明显减弱（P＜0.05）,凋亡增加（P＜0.05）,化疗耐药减弱（P＜0.05）;而过表达P-gp后恶性表型明显恢复（P＜0.05）。结论:CASC9可通过促进P-gp的表达调节GC细胞的增殖、凋亡和化疗耐药,参与GC的发生发展。     

光辉霉素对胃癌细胞周期、凋亡的影响及可能机制

目的 探讨光辉霉素（MTM）对胃癌细胞周期、凋亡的影响及可能的机制。方法 体外培养胃癌BGC-823、SGC-7901、MKN-28、AGS和正常胃黏膜GES-1细胞，采用实时荧光定量（QPCR） 和Western blotting检测SP1 mRNA和蛋白表达。0、25、50、100 nmol／L MTM处理BGC-823细胞24 h，QPCR和Western blotting检测SP1、p53、p21 mRNA和蛋白表达。流式细胞术检测50 nmol／L MTM处理BGC-823细胞周期和凋亡的变化。结果 QPCR检测胃癌BGC-823、 SGC-7901、MKN-28、AGS细胞系中SP1 mRNA表达量为6.12±0.15，5.42±0.24，3.33±0.21，3.01±0.12，均显著高于GES-1细胞（P＜0.05）；Western blotting检测SP1 蛋白表达与mRNA表达一致。0、25、50、100 nmol／L MTM处理BGC-823细胞，SP1 mRNA和蛋白表达逐渐降低， p53、p21 mRNA和蛋白表达逐渐升高。50 nmol／L MTM组SP1表达量最低（mRNA：0.48±0.12；蛋白：0.28±0.09）， p53表达量最高（mRNA：5.37±0.45；蛋白：1.29±0.20）；100 nmol／L MTM组p21表达量最高（mRNA：4.92±0.53；蛋白：0.86±0.15）；与0 nmol／L MTM组比较，差异具有统计学意义（P＜0.05）。流式细胞术结果显示，50 nmol／L MTM组BGC-823细胞G0／G1比例为（63.71±2.14）％和凋亡率为（24.68±1.09）％，均明显高于0 nmol／L MTM组［（57.39±1.83）％和（9.23±0.75）％］，差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论 MTM通过降低SP1、上调p53、p21表达水平来增加胃癌细胞周期阻滞，诱导凋亡。     

miR-106a靶向调控TIMP2对人胃癌细胞增殖、转移及EMT的影响

目的 探讨微小RNA-106a(miR-106a)在人胃癌组织中的表达及其与癌细胞增殖、转移的关系。方法 收集人胃癌和配对癌旁福尔马林固定-石蜡包埋样本共50对,Real-time PCR法检测miR-106a在人胃癌组织中的表达;培养人低分化胃癌细胞系SGC-7901、BGC-823、MKN-45和永生化人胃黏膜上皮细胞GES-1,Real-time PCR法检测miR-106a在人胃癌细胞中的表达;MTT法检测细胞增殖,Transwell法检测细胞迁移和侵袭,生物信息学和双荧光素酶法鉴定miR-106a靶基因,Western blot检测靶蛋白TIMP2、MMP2、MMP9、E-cadherin、N-cadherin表达。结果 Real-time PCR检测显示,与癌旁组织比较,miR-106a在人胃癌组织中高表达,差异有统计学意义(P＜0.001);与GES-1细胞比较,miR-106a在人胃癌细胞SGC-7901、BGC-823、MKN-45中普遍高表达,差异有统计学意义(P＜0.001)。MTT检测显示抑制miR-106a后胃癌细胞SGC-7901、BGC-823增殖能力下降(P＜0.01)。Transwell显示胃癌细胞BGC-823迁移、侵袭能力下降(P＜0.001)。双荧光素酶法显示TIMP2野生型报告基因与miR-106a mimic共转后,其荧光素酶活性较miR-106a NC组明显下降(P＜0.001),但TIMP2突变型报告基因无明显变化。Western blot显示抑制miR-106a后TIMP2表达升高,MMP2、MMP9表达下降,E-cadherin表达升高,N-cadherin表达下降。结论 miR-106a在人胃癌中的高表达可能通过靶向TIMP2而影响癌细胞的增殖、转移和上皮-间质转化。