阿托伐他汀通过下调线粒体融合素2表达抑制大鼠心肌缺血再灌注后细胞凋亡

目的研究阿托伐他汀对大鼠心肌缺血再灌注(I/R)损伤后细胞凋亡及线粒体融合素2表达的影响。方法选取雄性SD大鼠32只,随机分为假手术组(sham),缺血再灌注组(I/R),阿托伐他汀1组(statin 1)和阿托伐他汀2组(statin 2),每组8只。Statin 1组术前7 d开始每日给予阿托伐他汀10 mg/(kg·d)灌胃,statin 2组药物剂量为40 mg/(kg·d),I/R组以等体积蒸馏水灌胃,随后制备心肌I/R损伤模型。各组于再灌注3 h后剪取心脏I/R损伤区域,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡,免疫印迹法检测磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)的表达,免疫组化法检测线粒体融合素2的表达。结果与sham组相比,I/R组及statin 1组、statin 2组心肌细胞凋亡显著增加,p-Akt表达显著下降,线粒体融合素2表达显著增加(P0.01);与I/R组相比,statin 1组、statin 2组心肌细胞凋亡和线粒体融合素2表达均显著降低(P0.05),而p-Akt表达显著增高(P0.05),且statin 2组较statin 1组变化更显著(P0.05)。结论阿托伐他汀可抑制大鼠心肌缺血再灌注损伤后的细胞凋亡,其作用可能与抑制线粒体融合素2表达有关。     

阿托伐他汀下调大鼠心肌梗死后线粒体融合素2表达和细胞凋亡

目的研究阿托伐他汀通过下调线粒体融合素2表达抑制大鼠心肌梗死后细胞凋亡。方法雄性SD大鼠48只,随机分为假手术组(sham),心肌梗死组(MI),阿托伐他汀1组(statin 1)和2组(statin 2),每组12只。分别于术前7天开始每日灌胃,给予阿托伐他汀10和40 mg/kg,MI组以蒸馏水灌胃,随后结扎大鼠前降支建立心肌梗死模型。术后24 h用TUNEL法检测心肌细胞凋亡,免疫组化法检测线粒体融合素2表达,免疫印迹法检测磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)表达。结果与sham组相比,MI组心肌细胞凋亡显著增加,线粒体融合素2表达显著增加,p-Akt表达显著下降(P0.01);与MI组相比,statin 1和2组心肌细胞凋亡和线粒体融合素2表达均显著降低(P0.05),而p-Akt表达显著增高(P0.05),且statin 2组较1组变化更显著(P0.05)。结论阿托伐他汀可抑制大鼠心肌梗死后的细胞凋亡,其作用可能与下调线粒体融合素2表达有关。     

PTEN对髓系白血病细胞VEGF及MMP表达的影响简

 目的 探讨在慢性髓系白血病中与张力蛋白同源的10号染色体缺失的磷酸酶基因(PTEN)对血管内皮生长因子(VEGF)及金属基质蛋白酶(MMP)相互影响及其作用机制。方法 1)研究10例慢性髓系白血病慢性期CML-CP、10例急变期CML-BC及10例正常人骨髓单个核细胞内PTEN、VEGF、MMP-2和MMP-9 mRNA表达水平变化。2)将携带有野生型PTEN和绿色荧光蛋白的腺病毒（Ad-PTEN-GFP）及对照载体腺病毒（Ad-GFP）转染人慢性髓系白血病细胞系K562。MTT检测细胞增殖;荧光定量PCR（FQ-PCR）检测PTEN、VEGF、MMP-2和MMP-9 mRNA水平变化,Western blot及明胶酶谱检测PTEN、p-Akt、VEGF、MMP-2和MMP-9蛋白表达。结果 CML-BC患者中PTEN mRNA表达水平低于CML-CP及正常对照组(P<0.05),而VEGF、MMP-2、MMP-9 mRNA在CML-BC患者中均高于CML-CP及正常对照组(P<0.05)。以MOI=200转染K562细胞3d后Ad-PTEN-GFP组K562细胞内VEGF、MMP-2、MMP-9 mRNA表达水平均明显低于Ad-GPF组和未转染组(P<0.05),PTEN与VEGF、MMP-2、MMP-9 mRNA表达水平负相关,转染Ad-PTEN-GFP组与转染Ad-GFP组比较VEGF、MMP-2、MMP-9 mRNA表达水平分别降低4.80、5.88、5.72倍,p-Akt及VEGF、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平分别降低26.0、5.23、2.86、4.76倍。结论 PTEN基因可能通过抑制VEGF、MMP-2、MMP-9表达,抑制髓系白血病细胞血管新生及侵袭。     

阿托伐他汀干预减轻缺血复合冷应激诱导的大鼠心肌损伤

 摘要：目的 分析缺血复合冷应激对大鼠心肌的影响,探讨阿托伐他汀干预对这种复合应激下心肌的作用及可能机制。方法 以永久性左冠状动脉前降支结扎术+4℃冷刺激（8小时/天,4天）建立心肌缺血复合冷应激大鼠模型,复合应激前3天及后4天给以阿托伐他汀灌胃（20mg.kg-1.d-1）。超声心动图评价心功能,TTC染色法测定心肌梗死面积,western blotting法检测心肌p-PI3K、p-GSK3β、Bim、Caspase3蛋白表达。结果 心肌缺血复合冷应激使心功能恶化、梗死面积增大(P<0.01);阿托伐他汀干预后心功能改善、梗死面积缩小(P<0.01), p-PI3K、p-GSK3β表达上调(P<0.01),Bim、Caspase3表达下降(P<0.01)。结论 心肌缺血复合冷应激加重心肌损伤,阿托伐他汀干预能部分减弱此作用,其机制可能与激活PI3K/Akt/GSK3β通路及下调Bim表达有关。     

YAP蛋白与肿瘤简

 Hippo-YAP 信号通路是新发现的生长控制信号通路, 能够限制调结细胞的生长增殖, 细胞凋亡, 信号通路异常有利于肿瘤的发生。YAP蛋白还参与调控AKT-mTORC、WNT和MAPK等信号通路,进而影响肿瘤细胞的生长和侵润转移。YAP蛋白在多种类型的人类肿瘤中表达异常增加,或许成为肿瘤新的治疗靶点。     

反转录病毒载体介导的P27kip1促HepG2细胞凋亡简

 目的 研究反转录病毒介导的P27kip1基因过表达对HepG2细胞的影响。 方法 构建携带有人P27kip1基因的反转录病毒载体,经脂质体介导转染PA317包装细胞,G418筛选获得稳定产毒细胞株,病毒感染HepG2细胞,筛选出P27kip1阳性克隆,Western blot检测P27kip1在HepG2中的表达,并通过细胞形态学观察、MTT、FCW等方法,检测P27kip1对HepG2细胞的影响。结果 成功构建了含有人P27kip1基因的pLNCX-P27反转录病毒载体并导入包装细胞获得了稳定产毒细胞株,病毒感染HepG2后P27kip1基因可在细胞内高表达,过表达P27kip1基因的细胞生长速度受阻,较多细胞阻滞于G1期,且凋亡增多。结论 构建的pLNCX-P27载体能稳定高效地将P27kip1基因导入HepG2细胞,过表达P27kip1可抑制细胞生长,加速凋亡。     

互联网在外科临床教学中的意义简

 分析在互联网时代,互联网给外科教学带来的影响,通过分析其在外科教学过程中的应用,以便充分合理地利用互联网资源,更好地提高外科教学效果。     

阿托伐他汀对急性心肌梗死大鼠内皮微颗粒及心肌细胞凋亡的影响

目的:探讨阿托伐他汀(atorvastatin,AT)对大鼠急性心肌梗死早期内皮微颗粒(endothial microparticles,EMP)及心肌细胞凋亡的影响。方法:将24只雄性SD大鼠随机分为假手术组(sham组)、心肌梗死组(MI组)和阿托伐他汀心肌梗死组(MI+AT组),每组8只。采用冠状动脉结扎制作急性心肌梗死大鼠模型。分别在造模后2 h和24 h采外周血检测肌酸激酶同工酶(creatine kinase-MB,CK-MB)、心肌肌钙蛋白T(cardiac troponin T,c Tn T)和EMP,其中循环EMP用流式细胞术检测。通过TUNEL检测心肌细胞凋亡情况。结果:造模后2 h,MI组大鼠的CK-MB表达水平较sham组大鼠显著升高(P0.05);MI组及MI+AT组大鼠EMP表达水平及心肌细胞凋亡率上升,显著高于sham组(P0.05)。造模后24 h,MI组大鼠EMP表达水平显著高于sham组(P0.05);MI+AT组大鼠CK-MB、c Tn T、EMP表达水平及心肌细胞凋亡率较MI组显著降低(P0.05)。此外,MI组大鼠的CKMB表达水平在造模后24 h较造模后2 h显著升高(P0.05);MI+AT大鼠CK-MB、c Tn T和EMP表达水平在造模后24 h较2 h显著下降(P0.05)。结论:AT可降低大鼠急性心肌梗死时的EMP水平和心肌细胞凋亡率,提示AT对内皮功能有保护作用。     

调整紫杉醇化疗预处理方案的临床观察简

 目的 观察不同紫杉醇预处理方案化疗的用药安全性和不良反应,探索新的紫杉醇化疗预处理方案 方法 紫杉醇 135~175mg/m2,联合铂类药物,21d/周期,输注紫杉醇前用2种预处理方案,比较应用2种预处理方案化疗的不良反应 结果 77例应用调整预处理方案的患者与78例标准预处理方案患者的急性过敏反应、神经毒性、胃肠道反应发生率比较均无差异 结论 调整后的紫杉醇预处理方案安全、有效,与标准预处理方案比较无差异。     

急性心肌梗死家兔心肌MtATPase表达和心肌细胞凋亡的变化

目的： 研究急性心肌梗死后线粒体能量代谢和心肌细胞凋亡的动态变化,探讨二者在缺血心肌细胞演变中的作用和意义。方法: 结扎家兔左冠状动脉主干建立实验性心肌梗死（AMI）模型,采用酶组织化学染色法和脱氧核苷转移酶介导的缺口末端标记技术检测梗死后0.5、1、2、4、8、12 h左室前壁线粒体腺苷三磷酸酶（MtATPase）和细胞凋亡的变化,结合显微图像分析技术定量测定酶活性平均积分吸光度值（IA）和凋亡指数（AI）。结果: (1)AMI 2 h,MtATPase表达开始下降,4 h显著减低,随着缺血时间延长,表达持续下降, 2、4、8、12 h IA分别为168.09±3.75、159.01±2.62、143.12±3.47和127.65±4.64,与对照组比较有明显差异（P<0.05）;(2)AMI 0.5 h仅见少数凋亡心肌细胞,随缺血时间延长,凋亡细胞数目显著增加,4 h达到高峰,然后开始下降,但12 h仍高于对照组, 0.5、1、2、4、8、12 h AI分别为4.74±0.75、10.96±1.06、17.28±1.75、26.83±2.06、20.41±1.52和8.91±0.74,与对照组比差异显著（P<0.01）。结论: 细胞凋亡是AMI心肌细胞一种重要的死亡形式,梗死心肌细胞的演变和线粒体能量代谢密切相关。     

Effects of High-dose Atorvastatin Pretreatment in Patients with ST-segment Elevation Myocardial Infarction Undergoing Primary Percutaneous Coronary Intervention: A Cardiac Magnetic Resonance Study

It is uncertain that atorvastatin pretreatment can reduce myocardial damage in patients undergoing primary percutaneous coronary intervention (PCI) for ST-segment elevation myocardial infarction (STEMI). The aim of this study was to investigate the effects of atorvastatin pretreatment on infarct size measured by contrast-enhanced magnetic resonance imaging (CE-MRI) in STEMI patients. Patients undergoing primary PCI for STEMI within 12 hr after symptom onset were randomized to an atorvastatin group (n=30, 80 mg before PCI and for 5 days after PCI) or a control group (n=37, 10 mg daily after PCI). The primary end point was infarct size evaluated as the volume of delayed hyperenhancement by CE-MRI within 14 days after the index event. The median infarct size was 19% (IQR 11.1%-31.4%) in the atorvastatin group vs. 16.3% (7.2%-27.2%) in the control group (P=0.27). The myocardial salvage index (37.1% [26.9%-58.7%] vs. 46.9% [39.9-52.4], P=0.46) and area of microvascular obstruction (1.1% [0%-2.0%] vs. 0.7% [0%-1.8%], P=0.37) did not differ significantly between the groups. Frequency of the hemorrhagic and transmural infarctions was not significantly different in the 2 groups. Pretreatment with a high-dose atorvastatin followed by further treatment for 5 days in STEMI patients undergoing primary PCI failed to reduce the extent of myocardial damage or improve myocardial salvage.

Graphical Abstract

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胶质瘤bcd—2基因表达水平与其细胞增殖和凋亡关系的研究

目的 探讨胶质瘤细胞ｂｃｌ－２基因表达水平与肿瘤恶性程度、细胞增殖活性及凋亡程度的关系。方法 以６９例不同级别的人胶质瘤组织为研究对象,用原位杂交及免疫组化染色ＡＢＣ法分别检测ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ、ｂｃｌ－２蛋白和增殖细胞核抗原（细胞增殖活性标记物）的表达,并用３’末标记法做原位细胞凋亡检测。结果 ６４例（９２．８％）表达ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ,６０例（８７．０％）表达ｂｃｌ－２蛋白,两者的表达水平呈正     

Atorvastatin prevents early apoptosis after thoracic spinal cord contusion injury and promotes locomotion recovery

The systemic administration of atorvastatin has been shown to be neuroprotective after spinal cord injury (SCI), by decreasing the inflammatory response at the lesion site and by reducing neuronal and oligodendrocyte apoptosis. The latter effect spares white matter at the injury site and improves locomotion. The aim of this study was to confirm the neuroprotective efficacy of atorvastatin as well as its early action in limiting apoptosis with its administration post-SCI. Female Sprague-Dawley rats received an intra peritoneal injection of: (1) statin/saline (5 mg/kg) at 2 h after the contusion injury; (2) physiological saline at 2 h post-SCI; or (3) physiological saline without injury. Statin-treated rats showed significant (p < 0.05) improvement in locomotion at week 4 post-SCI compared to vehicle-treated animals. Explaining this outcome, caspase-3 activity decreased by 50% (p < 0.05), and the histological TUNEL method revealed a decrease of approximately 20% in apoptotic cells at the injury site (p < 0.01) at 4 h post-SCI in atorvastatin-treated rats in comparison to vehicle-treated controls. These data demonstrate that atorvastatin is effective after experimental spinal cord contusion injury in preventing early apoptosis at the injury site within 2 h post-administration.     

大鼠急性心肌梗死后的心肌细胞凋亡和凋亡相关基因表达的变化

目的： 观察大鼠急性心肌梗死（AMI）后的心肌细胞凋亡和caspase-3、Bcl-2和Bax表达的变化。 方法: 105只雌性SD大鼠，随机取78只结扎左冠状动脉建立AMI模型，24 h存活43只作为心肌梗死组（MI组）；另27只设为假手术组（S组）；两组再按观察时点随机分为48 h和4周两亚组，即：MI 48 h（n=11）和MI 4周（n=13）组，S48 h（n=10）和S4周（n=10）组。末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导的dUTP切口末端标记技术（TUNEL）和DNA凝胶电泳检测心肌细胞凋亡。免疫组化方法和Western blotting检测caspase-3、Bcl-2和Bax的表达。 结果： MI 48 h组动脉收缩压（SBP）、舒张压（DBP）、平均压（MAP）、左心室收缩压（LVSP）和左心室内压最大上升下降速率（±dp/dt）均显著低于S组（P<0.05, P<0.01），左心室舒张末压（LVEDP）显著高于S组（P<0.05）；MI 4周组除SBP、DBP和MAP无显著差异（均P>0.05）外，上述其它指标的变化与MI 48 h组相同，且LVEDP升高更为显著（P<0.01）；MI 48 h和4周两组梗死/疤痕区、梗死边缘区和非梗死区的心肌细胞凋亡指数均显著升高P<0.05,P<0.01），心肌细胞中“凋亡执行因子”caspase-3和“凋亡促进基因”Bax的表达亦均显著增高（P<0.05,P<0.01），而“凋亡抑制基因”Bcl-2仅在MI 48 h组梗死区心肌细胞中表达增加，“抑制凋亡复合基因”Bcl-2/Bax的比值仅在MI 48 h组降低。 结论： 大鼠AMI后，梗死区及其边缘区和非梗死区均有心肌细胞凋亡发生，伴“凋亡执行因子”caspase-3和“凋亡促进基因”Bax的表达增加；AMI早期，“凋亡抑制基因”Bcl-2在梗死区表达增加，但“抑制凋亡复合基因”Bcl-2/Bax的比值下降。     

急性心肌梗死晚期再灌注后心肌细胞凋亡与Bcl-2、Bax 蛋白表达的研究

目的:探讨犬急性心肌梗死后晚期再灌注对梗死周边缺血区心肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达的影响。方法:健康成年杂交犬28只,全麻下常规开胸暴露冠状动脉后随机分为3组:假手术组(n=8),急性心肌梗死组(n=10)、晚期再灌注组(n=10)。假手术组仅行左冠状动脉前降支下穿过丝线而不结扎冠状动脉,急性心肌梗死组行左冠状动脉前降支高位永久结扎,晚期再灌注组在高位结扎左冠状动脉前降支6 h后松解结扎线予以再灌注6 h。共有23只犬模型制作成功。各组犬均于术后12 h处死,采集心肌标本。使用TUNEL法检测心肌细胞凋亡,免疫组化染色和Western blotting蛋白印迹分析Bcl-2、Bax在心肌细胞中表达情况。结果:晚期再灌注组心肌细胞凋亡数较急性心肌梗死组明显减少(P<0.05),但两组心肌细胞凋亡数均高于假手术组(P<0.01)。与假手术组相比,急性心肌梗死组和晚期再灌注组Bcl-2蛋白的表达均升高(P<0.01),其中在晚期再灌注组的表达略多于急性心肌梗死组,但无显著差异(P>0.05)。Bax蛋白在晚期再灌注组的表达高于假手术组(P<0.01),但低于急性心肌梗死组(P<0.05)。结论:急性心肌梗死后晚期再灌注可以减少梗死周边缺血区心肌细胞凋亡,其机制可能与心肌细胞表达Bax蛋白减少有关。     

大鼠实验性心肌缺血后Fas、bcl-2的表达与心肌细胞凋亡的关系

目的 探索心肌缺血后Fas、bcl-2的表达与心肌细胞凋亡的关系。方法 结扎大鼠左侧冠状动脉造成心肌缺血,10min—7d后取心脏标本做末端脱氧核酸转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)原位细胞凋亡染色、Fas、bcl-2蛋白的免疫组织化学抗生物素蛋白-生物素复合物法(ABC法)染色。结果 在时间上,心肌细胞凋亡从缺血后3h开始,36h仍较显著,7d时TUNEL法检测不到凋亡细胞;而bcl-2、Fas分别于缺血后10min和3h开始检出,持续到缺血后7d;在组织学关系上,凋亡的心肌细胞和Fas、bcl-2阳性细胞不在心肌同一区域,凋亡的心肌细胞在心肌缺血区,Fas、bcl-2表达在无明显缺血的心肌区域。结论 Fas、bcl-2的表达可能并不直接参与缺血心肌细胞凋亡的调控。     

siRNA沉默COX-2基因对人胰腺癌Capan-2细胞增殖、细胞周期、凋亡和成瘤能力的影响

目的: 研究siRNA沉默环氧合酶-2(COX-2)基因对人胰腺癌Capan-2细胞增殖、细胞周期、凋亡和成瘤能力的影响。方法: 以Lipofectamine 2000(Lipo)为载体转染siRNA-COX-2至Capan-2细胞。应用RT-PCR、realtime PCR检测COX-2-mRNA表达,Western blotting 检测COX-2蛋白的表达。应用细胞直接计数法检测细胞的增殖,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡与周期。应用裸鼠模型评估COX-2-siRNA转染的Capan-2细胞成瘤能力的影响。结果: 在siRNA-COX-2浓度为50 nmol/L、Lipo为5 μL∶ 2 mL转染容积条件下,在Capan-2细胞的转染效率可达96.47%。siRNA-COX-2沉默Capan-2细胞中 COX-2 基因表达的最佳序列为siRNA006,转染24 h以后沉默效率达73%,COX-2蛋白表达水平在转染后48 h和72 h分别被下调了67% 和 61%。转染48 h后,Capan-2细胞生长明显减慢(P<0.05),48 h和72 h抑制细胞增殖率分别为35.48% 和56.32%。细胞凋亡率较对照组高(P<0.05),48 h和72 h细胞凋亡率为2.03%和3.27%。转染24 h、48 h和72 h G₀/G₁期的比例分别是58.03%、63.31%和65.66%,S期的比例分别是30.27%、24.87%和22.2%。siRNA-COX-2转染Capan-2细胞在裸鼠的皮下形成的肿瘤体积和重量明显减少(P<0.05)。结论: siRNA006-COX-2可有效沉默 COX-2 基因的表达,可明显抑制Capan-2细胞的生长并降低其成瘤能力。     

急性心肌梗死晚期再灌注后心肌细胞凋亡与Bcl-2、Bax蛋白表达的研究

目的： 探讨犬急性心肌梗死后晚期再灌注对梗死周边缺血区心肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达的影响。方法: 健康成年杂交犬28只，全麻下常规开胸暴露冠状动脉后随机分为3组：假手术组（n=8）,急性心肌梗死组（n=10）、晚期再灌注组（n=10）。假手术组仅行左冠状动脉前降支下穿过丝线而不结扎冠状动脉，急性心肌梗死组行左冠状动脉前降支高位永久结扎，晚期再灌注组在高位结扎左冠状动脉前降支 6 h 后松解结扎线予以再灌注 6 h。共有23只犬模型制作成功。各组犬均于术后 12 h 处死，采集心肌标本。使用TUNEL法检测心肌细胞凋亡，免疫组化染色和Western blotting蛋白印迹分析Bcl-2、Bax在心肌细胞中表达情况。结果: 晚期再灌注组心肌细胞凋亡数较急性心肌梗死组明显减少（P<0.05），但两组心肌细胞凋亡数均高于假手术组（P<0.01）。与假手术组相比，急性心肌梗死组和晚期再灌注组Bcl-2蛋白的表达均升高（P<0.01），其中在晚期再灌注组的表达略多于急性心肌梗死组，但无显著差异（P＞0.05）。Bax蛋白在晚期再灌注组的表达高于假手术组（P<0.01），但低于急性心肌梗死组（P<0.05）。结论: 急性心肌梗死后晚期再灌注可以减少梗死周边缺血区心肌细胞凋亡，其机制可能与心肌细胞表达Bax蛋白减少有关。     

Jarid2 and PRC2, partners in regulating gene expression

The Polycomb group proteins foster gene repression profiles required for proper development and unimpaired adulthood, and comprise the components of the Polycomb-Repressive Complex 2 (PRC2) including the histone H3 Lys 27 (H3K27) methyltransferase Ezh2. How mammalian PRC2 accesses chromatin is unclear. We found that Jarid2 associates with PRC2 and stimulates its enzymatic activity in vitro. Jarid2 contains a Jumonji C domain, but is devoid of detectable histone demethylase activity. Instead, its artificial recruitment to a promoter in vivo resulted in corecruitment of PRC2 with resultant increased levels of di- and trimethylation of H3K27 (H3K27me2/3). Jarid2 colocalizes with Ezh2 and MTF2, a homolog of Drosophila Pcl, at endogenous genes in embryonic stem (ES) cells. Jarid2 can bind DNA and its recruitment in ES cells is interdependent with that of PRC2, as Jarid2 knockdown reduced PRC2 at its target promoters, and ES cells devoid of the PRC2 component EED are deficient in Jarid2 promoter access. In addition to the well-documented defects in embryonic viability upon down-regulation of Jarid2, ES cell differentiation is impaired, as is Oct4 silencing.