IL-17通过NF-κB信号通路参与胃癌发生发展的免疫调控

目的探讨白介素-17(IL-17)通过NF-κB信号通路参与胃癌发生的分子机制。方法选取甘肃省武威肿瘤医院胃癌患者30例及同一时间在医院体检的健康人30名;酶联免疫吸附法检测胃癌患者及健康人血清中IL-17、IL-6和IL-8的表达;用HE染色法观察胃癌患者胃组织病理学变化;免疫组织化学法检测胃癌患者的胃癌组织、癌旁组织及远离癌组织的胃组织中IL-17、NF-κB p65、IKK-β和IL-6的表达。Western blot检测胃癌患者的胃癌组织、癌旁组织及远离癌组织的胃组织IL-17、NF-κBp65、pNF-κB p65、IKK-β和IL-6的表达。结果与对照组相比,IL-17、IL-6和IL-8与在胃癌患者血清中表达上调(P0.05);IL-17、NF-κB p65、IKK-β和IL-6在胃癌组织中的表达明显高于正常及癌旁组织(P0.05)。与正常胃组织相比,胃癌组织中IL-17、NF-κB p65、pNF-κB p65、IKK-β和IL-6表达增加(P0.05);癌旁组织中pNF-κB p65、IKK-β和IL-6表达增加(P0.05)。与癌旁组织相比,胃癌组织中IL-17、NF-κB p65、pNF-κB p65、IKK-β和IL-6表达增加(P0.05)。结论 IL-17可能通过NF-κB信号通路刺激IL-6参与胃癌的免疫调控以及促进胃癌的发生发展,为胃癌发病机制提供新的见解。IL-17可能作为胃癌的临床治疗潜在靶点。     

过表达miR-10b促进肺癌细胞系A549增殖

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者肺癌及癌旁组织中miR-10b(miR-10b)表达水平及miR-10b是否通过调控锌指转录蛋白基因(KLF4)对肺癌细胞系A549恶性化的影响。方法 40例NSCLC患者病理切片,原位杂交检测肺癌及癌旁组织中miR-10b的表达量;对肺癌细胞系A549转染miR-10b mimics后,CCK-8法检测肺癌细胞增殖;real-time PCR及Western blot检测KLF4 mRNA及蛋白水平;软琼脂克隆形成实验检测过表达miR-10b对A549细胞的肿瘤恶性化程度的影响。结果肺癌细胞A549及肺癌组织中miR-10b的表达量分别高于正常肺上皮细胞16HBE及癌旁组织;过表达miR-10b模拟物的A549细胞中,KLF4蛋白水平显著下降(P0.05);过表达的miR-10b可显著增加A549细胞的增殖速度及在软琼脂内的成瘤性。结论 miR-10b在不同类型细胞及组织中具有分布差异性、可能是通过抑制KLF4的表达促进肺癌细胞增殖及恶性化。     

miR-143下调肝癌细胞TLR2的表达并抑制肝癌细胞增殖和侵袭

目的探讨肝癌组织中小RNA-143(miR-143)的表达,并通过瞬时转染肝癌细胞观察对癌细胞生物学行为的影响。方法收集肝癌组织标本及其对应癌旁组织,实时定量PCR检测miR-143在肝癌组织与对应癌旁组织中的表达情况;人工合成寡义核苷酸miR-143 mimics,体外瞬时转染HepG2肝癌细胞,MTT法检测细胞增殖变化,annexinⅤ-FITC/PI染色结合流式细胞仪检测细胞凋亡变化,TranswellTM侵袭实验检测细胞侵袭力变化,Western blot法检测Toll样受体2(TLR2)、核因子κB(NF-κB)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)及MMP-9蛋白表达情况。结果 miR-143在肝癌组织中低表达,通过转染miR-143mimics上调miR-143水平后,可以抑制肝癌细胞增殖、促进肝癌细胞凋亡、抑制肝癌细胞侵袭,并下调TLR2、NF-κB、MMP-2及MMP-9表达。结论 miR-143在肝癌中低表达,肝癌细胞过表达miR-143可下调TLR2、NF-κB、MMP-2及MMP-9表达。     

miR-125b参与TRAF6影响的人胰腺导管上皮屏障作用

目的探讨肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)对人胰腺导管上皮细胞系HPDE6C7屏障的影响,以及miR-125b与TRAF6的靶向结合关系。方法用重组慢病毒感染上调HPDE6C7细胞的TRAF6表达。Western blot检测核因子κB(NF-κB)通路蛋白和紧密连接蛋白occludin和claudin-1的表达量;Transwell小室法检测单层HPDE6C7细胞的异硫氰酸荧光素-葡聚糖(FITC-D)透过率以评估上皮屏障功能;双荧光素酶报告基因实验检测miR-125b与TRAF6是否存在靶向结合关系。结果经重组慢病毒感染并上调TRAF6基因表达后,HPDE6C7细胞的NF-κB p65、TAK1和TAB1蛋白表达水平上升(P0.05),occludin和claudin-1蛋白表达水平下降(P0.05),单层细胞通透率明显上升(P0.05);双荧光素酶报告基因实验证实TRAF6与miR-125b靶向结合。结论 TRAF6通过调控NF-κB信号通路影响胰腺导管上皮屏障功能;miR-125b可能通过与TRAF6靶向结合抑制该作用。     

miR-107在胃癌中的表达及其对胃癌细胞生物学特性的影响

目的研究miR-107在胃癌组织中的表达及其对胃癌细胞MKN-45增殖、迁移侵袭的影响和作用机制。方法 QPCR和Western blot分别检测正常胃组织、慢性非萎缩性胃炎、萎缩性胃炎和胃癌组织及细胞系中miR-107和LRP1B的表达;TargetScan预测miR-107与LRP1B的靶向关系,双荧光素酶报告基因实验和Western blot进行验证;MTT和Transwell实验检测抑制miR-107及联合抑制LRP1B对MKN-45细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果慢性非萎缩性胃炎、萎缩性胃炎和胃癌组织中miR-107的表达(2.45±0.86、4.63±1.46、5.74±1.67)显著高于正常胃组织(1.00±0.48),差异有统计学意义(F=87.263,P0.05);而LRP1B mRNA(0.63±0.16、0.42±0.12、0.29±0.07)和蛋白表达(0.57±0.18、0.39±0.10、0.19±0.04)均明显低于正常胃组织(1.00±0.37、1.00±0.21),差异有统计学意义(F=82.419、202.484,P0.05)。胃癌细胞系MKN-45、HGC-27、AGS中miR-107表达(4.21±0.43、2.35±0.24、2.61±0.26)明显高于人胃黏膜上皮细胞GES-1(1.00±0.08),差异有统计学意义(F=65.737,P0.05);而LRP1B mRNA(0.24±0.02、0.41±0.04、0.38±0.04)和蛋白表达(0.26±0.03、0.37±0.04、0.35±0.04)均显著低于GES-1细胞(1.00±0.09、1.00±0.09),差异有统计学意义(F=116.197、113.738,P0.05)。TargetScan预测、双荧光素酶报告基因实验和Western blot证实LRP1B是miR-107的靶基因。抑制miR-107可抑制MKN-45细胞增殖、迁移和侵袭(t=3.464、6.015、5.680、4.924,P0.05),而联合抑制LRP1B则可逆转抑制miR-107对MKN-45细胞的抑制作用(t=3.1187、5.524、4.683、5.809,P0.05)。结论 miR-107可通过靶向LRP1B促进胃癌细胞MKN-45增殖、迁移和侵袭,提示miR-107和LRP1B可能成为新的临床诊治胃癌的靶点。     

胃腺癌组织中survivin、NF-κB p65和p27的表达及其相关性

目的 探讨survivin、NF-κB p65和p27在胃腺癌组织中的表达及其相关性研究.方法 用免疫组化SP法检测73例胃腺癌及20例正常胃黏膜组织中survivin、NF-κB p65和 p27的表达情况.结果 (1) survivin 和NF-κB p65在胃腺癌中蛋白表达阳性率分别为46.6%(34/73)和58.9%(43/73),明显高于它们在正常胃黏膜组织中的阳性表达率(0,0/20)和(20%,4/20)(P均＜0.01);p27在胃腺癌中蛋白表达阳性率为41.1%(30/73),明显低于它在正常胃黏膜组织中的阳性表达率(95.0%,19/20)(P＜0.01);(2) survivin与胃腺癌浸润深度、淋巴结转移及临床分期呈正相关(P均＜0.05),而与组织分化程度无明显相关性(P＞0.05);NF-κB p65与胃腺癌分化程度呈负相关(P＜0.05),与胃腺癌浸润深度、淋巴结转移及临床分期呈正相关(P均＜0.05);p27与胃腺癌浸润深度、淋巴结转移及临床分期呈负相关(P均＜0.01),与组织分化程度无关(P＞0.05);(3)胃腺癌中survivin的阳性表达率与NF-κB p65的阳性表达率呈正相关(P＜0.05),而与p27的阳性表达率呈负相关(P＜0.05); NF-κB p65与p27的阳性表达率无相关性(P＞0.05).结论 survivin、NF-κB p65和p27基因在胃腺癌的发生发展中起着不同程度的作用;联合检测survivin、NF-κB p65和p27,有助于对胃腺癌恶性程度的判定及侵袭转移能力的评估,进而为胃腺癌的预后分析和临床治疗提供依据.     

食管鳞癌中Versican、NF-κB和MMP-9的表达及其与临床病理特征的关系

目的:观察食管鳞癌组织中多功能蛋白聚糖(Versican)、核因子-κB(Nuclear factor-kappa B,NF-κB)和基质金属蛋白酶-9(Matrix metalloproteinase-9,MMP-9)蛋白及 mRNA 的表达及其与临床病理特征的关系.方法:采用免疫组化及原位杂交方法检测 47 例食管鳞癌组织及癌旁正常食管黏膜组织中 Versican、NF-κB 和 MMP-9 蛋白及 mRNA 的表达情况,并分析其与临床病理特征的关系及三者的相关性.结果:食管鳞癌组织中 Versican、NF-κB 和 MMP-9 蛋白及 mRNA 表达的阳性率均明显高于癌旁正常食管黏膜组织中的表达(P＜0.05);食管鳞癌组织中 Versican、NF-κB 和 MMP-9 蛋白及 mRNA 的高表达与浸润深度越深、淋巴结有转移、TNM 分期越晚均有关(P＜0.05),与性别、年龄、组织分级均无关;食管鳞癌组织中,Versican、NF-κB 和 MMP-9 三者在蛋白及 mRNA 水平的表达均呈正相关(P＜0.05).结论:Versican、NF-KB 和 MMP-9 在食管鳞癌中的高表达与肿瘤的生成、浸润及转移密切相关,并且三者具有相关性,为我们进一步探索食管鳞癌浸润转移的潜在机制奠定了基础.     

miR-21通过NF-κB信号通路影响血管紧张素Ⅱ诱导的肾小球系膜细胞炎症因子表达

目的探讨miR-21对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导肾小球系膜细胞增殖和炎症因子的影响。方法以AngⅡ诱导体外培养人肾小球系膜细胞HMC,在AngⅡ诱导的HMC细胞中转染miR-21模拟物。采用实时荧光定量PCR检测miR-21表达水平,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,Western blot检测NF-κB信号通路核心分子IκBα和p65蛋白及磷酸化水平,酶联免疫吸附法(ELISA)检测炎症相关因子白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量。采用NF-κB信号通路激活剂PMA处理,检测对炎症因子表达的影响。结果 AngⅡ组HMC细胞中miR-21表达水平较Control组降低(P0.05),细胞增殖能力明显升高(P0.05),炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α的表达升高(P0.05)。进一步在AngⅡ组过表达miR-21后,IκBα和p65蛋白磷酸化水平显著降低(P0.05),细胞增殖能力明显降低(P0.05),IL-6、IL-1β和TNF-α的表达亦降低(P0.05)。NF-κB信号通路激活剂处理后,IL-6、IL-1β和TNF-α的含量较AngⅡ+miR-21组升高(P0.05)。结论过表达miR-21能够通过NF-κB信号通路调控AngⅡ诱导的HMC细胞增殖和炎症因子的表达。     

NF-κBp65、VEGF-C及受体VEGFR-3在乳腺癌组织中的表达

目的检测乳腺癌组织内NF-κBp65、VEGF-C及受体VEGFR-3的表达水平,并观察它们与临床病理特征的关系,为乳腺癌的早期诊断、治疗提供依据。方法采用免疫组化染色法检测50例乳腺癌组织及10癌旁组织内NF-κBp65、VEGF-C及受体VEGFR-3的表达,并分析与临床病理因素的关系。结果乳腺癌组织内NF-κBp65蛋白表达的阳性率为76.0%,明显高于癌旁对照组织30.0%,二者相比差异显著(P<0.05);乳腺癌组织内VEGF-C蛋白表达的阳性率为84.0%,明显高于癌旁对照组织20.0%,二者相比差异显著(P<0.05);乳腺癌组织内VEGFR-3蛋白表达的阳性率为88.0%,明显高于癌旁对照组VEGFR-3阳性表达率20.0%,两者相比差异显著(P<0.05);乳腺癌组织内NF-κBp65、VEGF-C及受体VEGFR-3三者的表达存在显著相关性(P<0.05),均与肿瘤淋巴转移密切相关(P<0.05),而与病人年龄、肿瘤大小无关(P>0.05)。结论乳腺癌中NF-κBp65的表达可能上调VEGF-C的表达,进而导致肿瘤周围淋巴管增生、扩张,促进肿瘤细胞向区域淋巴结转移。     

膀胱尿路上皮癌组织中miR-133b的表达水平与其化疗敏感性的关系分析

目的 探讨膀胱尿路上皮癌组织中miR-133b的表达水平与其化疗敏感性的关系分析.方法 回顾性分析2011年2月至2012年2月于本院确诊为膀胱尿路上皮癌患者65例,根据癌组织中miR-133b表达水平将其分为高表达组(n=25)和低表达组(n=40),采用茎环实时荧光逆转录聚合酶链反应(stem-loop real-time,RT-PCR)检测膀胱尿路上皮癌组织和癌旁正常组织中 mi R-133b的表达水平,随访5年,统计分析所有患者化疗效果、5年存活情况.结果 膀胱尿路上皮癌组织中miR-133b的表达量(U6标准化后的) 低于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.05);高表达组患者化疗有效率高于低表达组,差异有统计学意义(P<0.05);所有患者随访0.5~5年,平均随访时间3.86年,最终有45例存活5年以上,高表达组患者5年存活率(88.00%)高于低表达组(57.25%),差异有统计学意义(P<0.05);存活组患者膀胱尿路上皮癌组织中miR-133b水平高于死亡组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 与癌旁正常组织比较,膀胱尿路上皮癌组织中miR-133b呈明显低表达,且与术后化疗敏感性、预后有密切关系,有可能作为预测化疗疗效和判断预后的指标之一.     

HMGB1、TLR4和NF-B在子痫前期患者胎盘组织及血浆中升高

目的探讨高迁移率族蛋白(HMGB1)、TOLL受体4(TLR4)和NF-B信号通路在子痫前期中的相关作用。方法轻度子痫前期患者10例、重度子痫前期患者20例和同期正常妊娠者30例。免疫组织化学(SP法)检测胎盘中HMGB1、TLR4和NF-κB P65蛋白的表达变化及在组织中的定性、定位;用ELISA法检测血清中HMGB1、TLR4和NF-κB P65蛋白浓度。结果子痫前期患者胎盘中HMGB1、TLR4、和NF-κB P65蛋白表达高于正常对照组(P0.05);轻度和重度子痫前期患者间无差异。子痫前期患者血清中HMGB1、TLR4和NF-κB P65的含量较正常组明显升高(P0.05);且重度子痫前期患者血清中HMGB1、TLR4、和NF-κB P65蛋白表达高于轻度子痫前期患者(P0.05)。结论 HMGB1、TLR4及NF-κB P65蛋白表达水平在子痫前期患者胎盘及血清中显著升高,可能参与了子痫的发病过程。     

姜黄素通过上调miR-124抑制牙龈卟啉单胞菌LPS诱导的人牙龈成纤维细胞炎症反应

目的:探究姜黄素(Cur)对牙龈卟啉单胞菌(Pg)脂多糖(LPS)诱导的人牙龈成纤维细胞(HGFs)炎症反应及微小RNA-124(miR-124)的影响。方法:将HGFs分为对照(control)组、LPS组(10 mg/L LPS)及LPS+Cur(20、40和80μmol/L)组(10 mg/L LPS+对应剂量Cur)。各组处理24 h,CCK-8法检测细胞活力;ELISA检测上清液中炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平;RT-qPCR法检测细胞中miR-124的水平;Western blot检测胞浆和胞核中核因子κB(NF-κB)p-p65蛋白水平;激光共聚焦显微镜检测NF-κB p-p65蛋白的入核情况。转染mimic-NC和miR-124 mimic,检测细胞中miR-124及胞浆和胞核中NF-κB p-p65蛋白水平。结果:LPS组细胞活力、miR-124水平和胞浆NF-κB p-p65蛋白水平低于control组(P0.05),上清液IL-1β和TNF-α水平及胞核NF-κB p-p65蛋白水平高于control组(P0.05)。LPS+Cur(40和80μmol/L)组细胞活力、miR-124水平及胞浆NF-κB p-p65蛋白水平高于LPS组(P0.05),上清液TNF-α水平和胞核NF-κB p-p65蛋白水平低于LPS组(P0.05)。LPS+80μmol/L Cur组细胞上清液IL-1β水平低于LPS组(P0.05)。miR-124 mimic组细胞miR-124和胞浆中NF-κB p-p65蛋白水平高于LPS组和mimic-NC组(P0.05),胞核NF-κB p-p65蛋白水平低于LPS组和mimic-NC组(P0.05)。结论:Cur可抑制Pg LPS诱导的HGFs炎症反应,可能是通过上调miR-124进而抑制NF-κB p-p65入核实现的。     

NF-κB/IκB信号通路在乙型肝炎病毒相关性肾炎肾组织中的表达

目的探讨核转录因子-κB(NF-κB)/IκB在乙型肝炎病毒相关性肾炎(HBVGN)肾组织中的表达及其在HBVGN发病机制中的可能作用。方法采用免疫组化染色法,检测42例HBVGN、20例原发性膜性肾病及5例正常肾组织中NF-κBp65、IκB-α蛋白的表达。结果NF-κBp65蛋白在HB-VGN组织中的表达,明显高于在原发性膜性肾病(P<0.01)及正常肾组织(P<0.05)中的表达,且细胞核和细胞质中都可检测到NF-κBp65的表达;相反IκB-α在HBVGN组织中的表达低于原发性膜性肾病肾组织(P<0.05)。结论HBVGN肾组织可能有IκB-α蛋白降解及NF-κB核转移。NF-κB/IκB可能参与了肾组织的病理损害过程。     

脑钠肽联合miR-328基因对缺血再灌注损伤模型大鼠心肌损伤的影响

目的:探讨脑钠肽(BNP)联合miR-328基因对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠心肌损伤的影响。方法:按照随机数字表将50只大鼠分为5组,假手术组(Sham组,开胸后只穿线,不结扎)、MIRI模型组(I/R组,建立MIRI模型)、BNP组(建立MIRI模型前静脉给予BNP 0.01μg/kg)、miR-328组(建立MIRI模型前静脉给予miR-328 antagomir 200μl)和BNP+miR-328组(建立MIRI模型前静脉给予BNP和miR-328 antagomir,量同前),每组各10只。于再灌注结束后,获取心脏穿刺血液及心脏组织。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测Sham组、I/R组和miR-328组心肌组织miR-328 mRNA表达水平;TTC+伊文思蓝双染色法测定各组心肌梗死面积;ELISA法测定血清肌酸激酶MB同工酶(CK-MB)、白细胞介素-10(IL-10)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;硫代巴比妥酸(TBA)法及邻苯三酚法分别测定丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性;末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(TUNEL)法测定心肌细胞凋亡率;Western blotting检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和核因子活化B细胞κ轻链增强子p65(NF-κB p65)蛋白表达水平。结果:I/R组miR-328 mRNA表达显著高于Sham组和miR-328组(P0.05)。I/R组心肌梗死面积、CK-MB水平、TNF-α和MDA含量、细胞凋亡率、Bax和NF-κB p65蛋白表达水平均显著高于Sham组,IL-10含量、SOD活性及Bcl-2蛋白表达均显著低于Sham组(P0.05),而BNP组和miR-328组肌梗死面积、CK-MB水平、TNF-α和MDA含量、细胞凋亡率、Bax和NF-κB p65蛋白表达均显著低于I/R组,高于BNP+miR-328组,IL-10含量、SOD活性及Bcl-2蛋白表达均显著高于I/R组,低于BNP+miR-328组(P0.05)。结论:BNP及miR-328 antagomir均可降低炎症反应、氧化损伤及心肌细胞凋亡率,从而对MIRI起保护作用,而联合使用效果更明显,机制可能与其下调NF-κB p65信号通路有关。     

miR-125b对过敏原刺激后支气管上皮细胞凋亡和分泌炎症因子的作用北大核心CSCD

目的:探究miR-125b对过敏原刺激后支气管上皮细胞凋亡和分泌炎症因子的作用和机制。方法:支气管上皮细胞分为Control组、Model组(尘螨抗原提取物处理)、miR-NC组(转染mimics control,尘螨抗原提取物处理)、miR-125b组(转染miR-125b mimics,尘螨抗原提取物处理)、miR-125b+PMA组(转染miR-125b mimics,尘螨抗原提取物和NF-κB信号激活剂PMA处理)。qRT-PCR分析miR-125b表达,流式细胞术分析细胞凋亡,ELISA分析细胞培养液上清中IL-6、IL-29水平,Western blot分析Bax、Bcl-2、p65蛋白表达。结果:与Control组相比,Model组支气管上皮细胞中miR-125b水平降低,细胞凋亡率升高,细胞分泌IL-6、IL-29增多,细胞中Bax、p65蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达水平降低。与miR-NC组相比,miR-125b组支气管上皮细胞中miR-125b水平升高,细胞凋亡率降低,细胞分泌IL-6、IL-29减少,细胞中Bax、p65蛋白表达水平降低,Bcl-2蛋白表达水平升高。与miR-125b组相比,miR-125b+PMA组支气管上皮细胞凋亡率升高,细胞分泌IL-6、IL-29增多,细胞中Bax、p65蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达水平降低。结论:miR-125b抑制过敏原刺激后支气管上皮细胞凋亡和分泌炎症因子,其机制可能与抑制NF-κB信号通路有关。     

miR-96与转移抑制因子1是前列腺癌骨转移潜在的生物学标志物

目的探讨miR-96和转移抑制因子1(MTSS1)在前列腺癌(PCa)组织中的表达及其临床意义。方法收集PCa患者标本89例,癌旁组织作为正常对照,分别用原位杂交及免疫组化检测PCa组织及癌旁组织中miR-96和MTSS1的表达水平,并对二者进行相关性分析。结果 89例PCa组织中miR-96阳性表达率为87.64%,显著高于癌旁组织(P0.01);而MTSS1蛋白阳性表达率为16.85%,显著低于癌旁组织(P0.01);miR-96的表达随着Gleason评分和临床分期演进而增加(P0.05),有骨转移的miR-96的表达高于无骨转移组(P0.05);MTSS1的表达随着Gleason评分和临床分期演进而下调,且有骨转移的MTSS1的表达显著低于无骨转移组(P0.01);miR-96表达与MTSS1的表达呈显著负相关(P0.01)。结论 miR-96与MTSS1可能是PCa骨转移的重要生物学标志。     

miR-23a/b在非小细胞肺癌的表达及临床意义

目的研究miR-23a和miR-23b在非小细胞肺癌中的表达特征,并探讨其临床意义。方法收集157例非小细胞肺癌手术切除标本及50例癌旁组织标本,采用Real time PCR方法检测miR-23a和miR-23b在非小细胞肺癌及其癌旁组织中的表达,分析二者表达的相关性,并探讨其表达与临床病理特征及其预后的关系。结果 miR-23a和miR-23b在非小细胞肺癌组织中的表达水平均高于癌旁肺组织,二者在非小细胞肺癌组织中表达呈正相关(r=0.351,P0.001)。miR-23a和miR-23b联合高表达与淋巴结有无转移(P0.001)、远处转移(P=0.001)及临床分期(P=0.002)相关,而与年龄、性别、组织类型及组织分化程度无显著相关性(P0.05)。KaplanMeier分析显示miR-23a和miR-23b联合高表达组患者生存期显著低于单独高表达组或联合低表达组(P=0.009),Cox风险比例模型分析显示miR-23a和miR-23b联合高表达为非小细胞肺癌患者的危险因素。结论 miR-23a和miR-23b在非小细胞肺癌中异常高表达可能是潜在的肺癌预后分子标志物。     

结直肠癌组织中NF-κB、Notch-1和SOCS-1的表达及临床意义

目的:探讨结直肠癌组织中NF-κB、Notch-1和SOCS-1的表达及临床意义,为临床治疗结直肠癌提供依据。方法:选取55例手术切除的结直肠癌组织标本作为研究组,同时收集癌旁正常大肠黏膜组织标本30例作为对照组,采用免疫组织化学SP法和Western blot检测研究组和对照组中NF-κB、Notch-1和SOCS-1蛋白的表达,分析其与患者病理因素之间的关系。结果:免疫组织化学SP法检测结果:NF-κB蛋白和Notch-1蛋白在结直肠癌组织中阳性表达率均明显高于正常大肠黏膜组织中阳性表达率(P0. 05),SOCS-1蛋白在正常大肠黏膜组织中的阳性表达率高于结直肠癌组织中的阳性表达率(P0. 05); Western blot检测结果:NF-κB蛋白和Notch-1蛋白在正常大肠黏膜组织中的表达均低于结直肠癌组织中的表达(P0. 05),SOCS-1蛋白在正常大肠黏膜组织中的表达高于结直肠癌组织中的蛋白表达(P0. 05); NF-κB、Notch-1在无淋巴结转移、未浸润浆膜及高中分化的结直肠癌组织中表达明显低于有淋巴结转移、浸润浆膜及低分化的结直肠癌组织的表达,SOCS-1在高中分化结直癌组织的表达明显高于低未分化的结直肠癌中的表达。患者结直肠癌组织中NF-κB与Notch-1表达水平呈正相关性,SOCS-1表达水平与NF-κB、Notch-1呈负相关性。结论:NF-κB、Notch-1和SOCS-1的异常表达与结直肠癌的发生发展有密切联系,其表达参与肿瘤形成、发展、侵袭和转移,可以作为肿瘤预后判断的参考指标。     

miR-125b通过靶向STAT3抑制胃癌细胞SGC-7901的侵袭迁移能力

目的研究miR-125b靶向STAT3对胃癌细胞SGC-7901侵袭迁移能力的影响。方法运用qPCR法检测miR-125b在胃癌及癌旁组织中的表达,运用Western blot法检测STAT3在胃癌组织及癌旁正常组织中的表达,用双荧光素酶报告基因系统检测miR-125b对STAT3转录活性的影响,用Transwell实验检测过表达miR-125b对SGC-7901细胞侵袭迁移能力的影响,用Western blot法检测过表达miR-125b后SGC-7901细胞STAT3的表达变化。结果与癌旁正常组织比较,胃癌组织miR-125b的表达水平明显降低,STAT3蛋白表达水平明显升(P0.01)。双荧光素酶报告基因系统检测结果显示,miR-125b可以直接调控STAT3的转录活性。过表达miR-125b后,SGC-7901细胞的侵袭和转移能力明显降低,STAT3的表达水平下调(P0.01)。结论miR-125b可靶向STAT3的表达调控SGC-7901细胞的侵袭迁移能力。     

结直肠腺瘤-腺癌发展序列中差异表达miRNAs的筛选及初步验证

目的筛选及初步验证结直肠腺瘤-腺癌发展序列中差异表达的miRNA,初步探索其可能机制。方法 MicroRNA芯片检测15例结直肠腺瘤患者、3例结直肠早癌患者和3例健康对照者血清中差异表达的miRNA。在18例结直肠腺瘤,9例结直肠早癌,5例进展期癌及5例正常对照者中用实时荧光定量PCR进行初步验证。结果早癌组与腺瘤组比较,差异表达的miRNA有15个;早癌组与正常组比较,差异表达的miRNA有13个。选择miR-204、miR-193b与miR-150进行初步验证。进展期癌组血清miR-150表达显著低于正常对照组(P0.05);早癌组、进展期癌组血清miR-204表达均显著低于正常对照组(分别为P0.05,P0.01)。腺瘤组、早癌组和进展期癌组血清miR-193b表达均显著低于正常对照组(分别为P0.05、P0.01、P0.05)。miR-193b mimic转染HCT116细胞后显著抑制其增殖(P0.05),促进其凋亡(P0.001)。并可显著抑制K-ras与β-catenin蛋白的表达水平。结论血清miR-204与miR-193b可能成为诊断结直肠癌的生物标志物,miR-193b可能在腺瘤-腺癌序列中发挥抑癌作用。